METODOS DE RECUENTO DE GLOBULOS

BLANCOS

FROTIS DE SANGRE

Las células de la sangre se estudian comúnmente en el laboratorio mediante preparaciones

denominadas “frotis sanguíneo” o “extendido sanguíneo”. Para ello se prepara una fina
película de células sanguíneas sobre un portaobjeto a fin de obtener una capa delgada de
células. Después de colorear las preparaciones se observa su morfología al microscopio
óptico.

Procedimiento:

1. Lave muy bien tres portaobjetos. Si es necesario límpielos con etanol/éter

utilizando un trozo de gasa.
2. Ubique el sitio de toma de la muestra en la parte lateral del dedo medio o anular de
la mano izquierda donde es menos sensible que en la punta, como lo indica el
esquema.
3. Limpie el sitio donde se tomará la muestra de sangre, utilizando una gasa empapada
con etanol y luego séquelo con gasa.
4. Con una lanceta con un movimiento firme y rápido realizar una pnución en un
pulgar.
5. Limpie la primera gota de sangre con gasa.
6. Con la mano derecha tome un portaobjeto y sosténgalo por los bordes. Con la mano
izquierda presione el dedo y deje fluir una gota pequeña de sangre (2mm de
diámetro). Coloque una gota de sangre sobre el portaobjeto en el centro de uno de
los extremos de la lámina.
7. Coloque un segundo portaobjeto apoyado sobre el otro por delante de la gota de
sangre en ángulo de 45º, y se hace retroceder hasta que el borde coincida con la gota,
que se extenderá por capilaridad por todo el borde. Antes de que la sangre se
extienda por los extremos del porta, se hace deslizar por el porta hacia delante con
movimiento firme y rápido, elevando la mano derecha antes de que el porta que se
desliza llegue al final. Mientras mayor sea el ángulo que forman las dos láminas,
mayor será el espesor de la capa de células.
 Esquema de la disposición de los portaobjetos para realizar el extendido sanguíneo
8. Deje secar la muestra durante 5 minutos. Fije con metanol (1 minuto). Deje secar
nuevamente (10 minutos). Coloree con colorante Giensa (20 minutos).

Valores Normales

Los glóbulos rojos normalmente son iguales en tamaño y color y tienen un área de color
claro en el centro. El frotis de sangre se considera normal si hay:

 Apariencia normal de las células

 Fórmula leucocitaria normal

Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios.
Algunos laboratorios utilizan diferentes mediciones o analizan muestras diferentes. Hable
con el médico acerca del significado de los resultados específicos de su examen.

Resultados Anormales:

Los resultados anormales significan que hay una anomalía en el tamaño, la forma, el color
o el recubrimiento de los glóbulos rojos (GR).

Algunas anomalías se pueden clasificar en una escala de 4 puntos:

 1+: significa que el 25% de las células están afectadas.

 2+: significa que la mitad de células están afectadas.
 3+: significa que el 75% de las células están afectadas.
 4+: significa que todas las células están afectadas.

CAMARA DE NEUBAUER

Para el conteo de leucocitos, se usan métodos sistemáticos que son más rápidos y precisos,
y los métodos manuales.

Todo método manual de recuento celular incluye 3 fases:

- Dilución de la sangre
- Muestreo de la sangre diluida en un volumen
- Recuento de células en ese volumen
Para el recuento de leucos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas, que corresponden a
los campos 1, 3,7 y 9.

Para su dilución, se hace lo mismo que para los hematíes pero empleando la pipeta de
blancos, de modo que la solución que obtenemos es de 1/20. Se utiliza como diluyente el
líquido de Turk. El líquido de Turk es hipotónico de modo que se destruyen los hematíes y
así no entorpecen en el recuento.

El líquido de Turk consta de ácido acético glaciar 2ml, violeta de genciana disolución de 1%
1ml y agua destilada en cantidad suficiente para 1000ml. Deberá filtrarse a menudo para
evitar levaduras y hongos.

En un principio es un poco difícil distinguir los leucocitos de los restos de membranas de los
hematíes hemolizados. Se debe tener en cuenta que los leucocitos son más refringentes
(más brillantes) al moverlo con el microscopio que los restos de hematíes. Se debe observar
la presencia de la membrana citoplasmática y de la membrana nuclear (a veces más) como
líneas finas y brillantes. Esto se observa fácilmente moviendo el microscopio hacia delante
y hacia atrás.

Procedimiento:

1. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción
venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA
2. Colocar el tubo de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta
3. Llenar la pipeta de glóbulos blancos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una
dilución de 1/20. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa
de la marca, se puede absorber con gasa el excedente
4. Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (liquido de Turk)
y absorber hasta la marca 11, no deben quedar burbujas.
5. Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y se coloca en un rotador
automático o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos
6. Montar la laminilla de vidrio en la cámara para recuento. Debe estar limpia y seca.
7. Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequeña
cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente.
8. Dejar 3 minutos que los leucocitos se sedimenten
9. Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. y contar en los
4 cuadrados angulares.
10. En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las
líneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeño de recuento y no se
consideran los que estén en los límites inferior y derecho.

Valores

Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos, se expresan como concentraciones,
que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3
Después de contar los glóbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el total de
ellos y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo:

N° de leucocitos x mm3 = altura x dilución x área

N° de leucocitos x mm3 = 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000
N° de leucocitos x mm3 = 4/200 = 1/50
N° de leucocitos x mm3 = N° de leucocitos contados x 50

En el análisis hecho, los resultados de la cuenta de células quedaron así por casilla:

El número de leucocitos fue de 111, que al multiplicarse por 50 daba como resultado 5
550/mm3, lo que indica un índice normal, sin embargo apenas y supera el mínimo, pues el
paciente era un hombre, de 41 años de edad.

CONTADOR HEMATOLOGICO CELL-DYN 3700 SL

MARCA “ABBOTT”, FABRICACIÓN U.S.A.

El sistema CELL-DYN® 3700, es un Analizador

de Hematología automatizado diseñado para
uso diagnóstico en los laboratorios clínicos.
Ofrece capacidades avanzadas de diagnóstico
para laboratorios de tamaño medio y alto. El
instrumento realiza mediciones óptica e
impedancia simultáneas en los glóbulos blancos
para enumerar con exactitud y diferenciar las
células, así como proporcionar la validación
interna del recuento de leucocitos. Tanto el análisis de glóbulos rojos y plaquetas se realiza
utilizando tecnología de impedancia.

Características Generales
• Información de 28 parámetros hematológicos:
• Hasta 24 parámetros en reporte y en pantalla principal.
• Pantalla adicional para uso del laboratorio, que brinda 4 parámetros de observación
adicionales en pantalla (porcentaje de distribución leucocitaria en 4 regiones de alarma:
bandas, granulocitos inmaduros, blastos y linfocitos atípicos).
• Diferencial Leucocitario de 5 partes.
• Resultados adicionales en 4 regiones de alarma (bandas, granulocitos inmaduros, blastos
y linfocitos atípicos)
• Cuenta con 11 graficados para la mejor comprensión de la distribución celular: 6
diagramas de dispersión y 5 histogramas
• Incrementa la sensibilidad y especificidad de las alarmas de las células blancas.
• Permite eliminar las interferencias de eritrocitos nucleados y eritrocitos resistentes a la
hemólisis del recuento leucocitario.
• Imprime mensajes interpretativos para las tres poblaciones celulares, en el reporte del
paciente.

Cell Dyn 3700 SL:

• Muestreo por cargador automático con capacidad de montar a bordo hasta 100 tubos
simultáneamente.
• Muestreador de tubo cerrado.
• Muestreador de tubo abierto.

El sistema CELL-DYN 3700 es un analizador de hematología automático y multiparamétrico,

diseñado para utilizarse en el diagnóstico in vitro en los laboratorios clínicos. La finalidad
de uso de este equipo es la de efectuar mediciones hematológicas en sangre anticoagulada
con EDTA (Ácido etilendiaminotetraacético). De otra forma, tal y como se comentó en el
capítulo segundo, estos analizadores serán los encargados de realizar los hemogramas.
Las principales mediciones son:
• Recuento absoluto de leucocitos, neutrófilos, linfocitos, monolitos, eosinófilos, basófilos, y
reticulocitos.
• Concentración de hemoglobina.
• Volumen corpuscular medio.
• Recuento de glóbulos rojos o eritrocitos.
• Concentración de hemoglobina.
• Hematocrito.
• Volumen corpuscular medio.
• Hemoglobina corpuscular media.
• Concentración de hemoglobina corpuscular media.
• Amplitud de la distribución del tamaño de los eritrocitos.
• Recuento de plaquetas o trombocitos.
• Volumen plaquetario medio.
• Amplitud de la distribución del tamaño de las plaquetas.
• Porcentaje de reticulocito.

Existen dos versiones del instrumento:

CELL-DYN 3700 Modelo SL, con
muestreador automático de tubos
cerrados.
CELL-DYN 3700 Modelo CS, con
muestreador manual de tubos
cerrados.

El sistema CELL-DYN 3700 Modelo SL

está provisto de un módulo con un
muestreador automático de tubos
cerrados. El muestreador permite el
proceso continuo de muestras, en
modo cerrado, con una capacidad de
hasta 100 tubos simultáneamente. El
rendimiento para muestras que no
generen avisos es de 90
muestras/hora.

CITOMETRIA DE FLUJO
La citometria de flujo (CMF) es una técnica de análisis celular multiparametrico cuyo
fundamento se basa en hacer pasar una suspensión de partículas (generalmente células)
alineadas y de una en una por delante de un haz de láser focalizado. La citometría de flujo
es una tecnología (proceso) que permite la medida simultánea de múltiples características
físicas de una sola célula. Estas medidas son realizadas mientras las células (partículas)
pasan en fila, a una velocidad de 500 a 4000 células por segundo, a través del aparato de
medida en una corriente de fluido.
 EL CITOMETRO NECESITA UN SISTEMA
COMBINADO DE:

 Fluidos, para introducir y restringir las

células para análisis
 Óptica, una fuente de excitación y un sistema
colección para generar y recoger las señales
luminosas. El sistema de excitación consiste en
un láser, lentes y prismas para dirigir el rayo. El
sistema de colección consiste en espejos ópticos
y filtros para encaminar determinadas
longitudes de onda hacia detectores ópticos
determinados.
 Electrónica, para convertir las señales ópticas
en señales electrónicas proporcionales y
digitalizarlas para análisis computacional.

SISTEMA HIDRAULICO: Controles neumático y fluidos para establecer un flujo laminar que
permita a la suspensión celular atravesar la cámara de flujo.

SISTEMA OPTICO: Láser (Argón con luz monocromática de 488nm , filtros , lentes y
detectores.

SISTEMA ELECTROINFORMATICO: Convierte la luz dispersa en señales eléctricas y las

procesa para su análisis.

Sistema óptico

El impacto de cada célula con el rayo de luz produce señales que corresponden a diferentes
parámetros de la célula y que son recogidos por distintos detectores.

PARAMETROS

Características Morfológicas de la célula: tamaño y complejidad del citoplasma

Características antigenicas de la célula : Inmunofenotipo.

PARAMETROS FISICOS
  Su tamaño relativo (forward scatter-FSC)
 Su granularidad relativa o complejidad interna ( side scatter SSC).

FLUORESCENCIA RELATIVA (FL1, FL2, FL3)

 Determinación cuantitativa de características antigénicas,

bioquímicas y biofísicas de células individuales (1,2).

OBJETIVOS PRINCIPALES DE LA CITOMETRIA DE FLUJO

 Identificar y enumerar subpoblaciones celulares únicas y definidas.

 Seleccionar y separar físicamente subpoblaciones de células deseadas (por deflección
electrostática ; esta tecnología de separación se llama "electronic cell sorting")
 Medir capacidad funcional de subpoblaciones celulares definidas

COMO SE DETECTAN ESTAS CARACTERISTICAS

El citómetro de flujo detecta como las células interactúan con un rayo láser en términos de
cómo la célula:

 desvía la luz incidente (parámetros FSC y SSC)

 emite fluorescencia (parámetros FL1. FL2. FL3)

LA CITOMETRIA DE FLUJO ASOCIADA AL RAYO LÁSER.

M.A.P.S.S. (MULTI ANGLE POLARISED SCATTER SEPARATION).

Utilizada para:

-Recuento óptico de glóbulos blancos (WOC)

-Identificación y cuantificación de las subpoblaciones leucocitarias (Fórmula)
-Detección de células atípicas o inmaduras (Alarmas)
-Recuento óptico de reticulocitos (Retlc.)
Al pasar cada célula por el citómetro de flujo, es sometida a la acción de un rayo láser. Cada
tipo de célula genera efectos característicos de dispersión (scatter) que permiten su
diferenciación y cuantificación. En función de los diferentes parámetros medidos, el equipo
confecciona para cada muestra los citogramas de dispersión que se presentan en el informe
y define las alarmas morfológicas si detecta células anormales.

TEST 1

DESCRIPCIÓN GENERAL
El TEST 1 es un analizador automatizado de Velocidad de
Sedimentación Globular. Su función es medir la velocidad con
la que sedimentan los glóbulos rojos o eritrocitos,
provenientes de una muestra sanguínea anticoagulada. Entre
sus ventajas más relevantes destacan el hecho de que trabaje
con tubos de hemograma (EDTA), adaptándose
perfectamente al flujo de trabajo del analizador hematológico
(CELL-DYN 3700 SL). El hecho de que cargue directamente las
gradillas del propio analizador permite una manipulación de
las muestras rápida y sencilla. Además se puede conectar al
sistema informático del laboratorio, lo que proporciona la
capacidad de gestionar previamente las series de muestras a
ensayar. Posee una velocidad de procesamiento de 180
muestras / hora. Pudiendo cargar 60 muestras como máximo
en cada tanda.

PRINCIPIOS DE FUNCIONAMIENTO
Utiliza la técnica de Velocidad de Sedimentación Globular. Para la lectura o medición de los
ml que desciende la sangre hace uso de la fotometría.

LA IMPEDANCIA ELÉCTRICA
Utilizada para:

-Recuento de glóbulos rojos (RBC)

-Recuento de glóbulos blancos por impedancia (WIC)
-Recuento de plaquetas (PTL)

EI sistema consta de un tubo capilar provisto de una apertura calibrada inmerso en un

recipiente que contiene las células a contar, diluidas en un buen conductor de electricidad.
Una corriente eléctrica aplicada a las células entre dos electrodos localizados a ambos lados
de la apertura calibrada genera una diferencia de potencial. Las células al pasar una a una
por la apertura producen un cambio en la corriente eléctrica generando pulsos que son
detectados por un transductor de Van-Behrens. EI número de pulsos generados es
proporcional al número de células que atraviesan la apertura y la amplitud de los mismos a
su tamaño.
REFERENCIAS:

1) Vajpayee N, Graham SS , Berna S. examen básico de la sangre y la médula ósea . En:

McPherson RA, Pincus MR, eds . Diagnóstico Clínico de Henry y Gestión por
métodos de laboratorio. ed 22 . Philadelphia , PA : Saunders Elsevier ; 2011: cap
30.

2) Rodak B. Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas. 2 ed. Rondinone S,

trad. Buenos Aires: Médica Panamericana, 2004. 884p.

3) RODAK, B. y col. (2002). Hematología: Fundamentos y Aplicaciones Clínicas. (2° ed.).

Editorial Médica Panamericana. Argentina. pp: 572-574

4) R. Rengifo Paima.
[http://www.academia.edu/7091504/Informe_Recuento_Leucocitario]. En línea:
[21 𝑑𝑒 𝑀𝑎𝑦𝑜 2016]

5) [http://cdigital.dgb.uanl.mx/la/1080022545/1080022545_07.pdf]. En línea:
[21 𝑑𝑒 𝑀𝑎𝑦𝑜 2016]

6) [http://www.brand.de/fileadmin/user/pdf/GK900/Zaehlkammern/GK900_05_Cli
nical_Lab_Zaehlkammern_s.pdf] ]. En línea: [21 𝑑𝑒 𝑀𝑎𝑦𝑜 2016]

7) Elizabeth Diana. [http://es.slideshare.net/eliciruela/camara-de-recuento-

neubauer]. En línea: [22 𝑑𝑒 𝐽𝑢𝑙𝑖𝑜 2013]

8) Vajpayee N, Graham SS, Bem S. Basic.

[https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003643.htm]. En
línea: [21 𝑑𝑒 𝑀𝑎𝑦𝑜 2016]

9) Martínez Fragoso, Vicente.Manual de Biometría Hemática.CBTis199, México, 2012.

Pp. 22-24

10) Nilda E. Fink. 1990 La Plata, Argentina. Universidad Nacional de La Plata.

[http://www.sah.org.ar/revista/numeros/vol9.n1.4.16.pdf] En línea: [20/04/15]

11) Abbot. [http://www. tecnigen. cl/wp − content/uploads/2013/07/

Especificaciones − T%C3%A9cnicas − CD − 3700. pdf]. En línea:
[17 𝑛𝑜𝑣𝑖𝑒𝑚𝑏𝑟𝑒 2016]

12) Cell Dyn. [ℎ𝑡𝑡𝑝://𝑤𝑤𝑤. 𝑓𝑒𝑟𝑎𝑡𝑜. 𝑐𝑜𝑚/𝑤𝑖𝑘𝑖/𝑖𝑛𝑑𝑒𝑥. 𝑝ℎ𝑝/

𝑃𝑒𝑟𝑓𝑖𝑙_ℎ𝑒𝑚𝑎𝑡𝑜𝑙%𝐶3%𝐵3𝑔𝑖𝑐𝑜_(𝐶𝑒𝑙𝑙_𝐷𝑦𝑛)]. En línea: [17 𝑛𝑜𝑣𝑖𝑒𝑚𝑏𝑟𝑒 2016]

13) Página de la Sociedad Internacional de Citología Analítica. Tiene direcciones de

grupos que trabajan con citometría de flujo en todo el mundo, información de
 congresos, trabajos y otros temas relacionados. [ℎ𝑡𝑡𝑝://𝑝𝑖𝑛𝑔. 𝑠𝑎𝑙𝑘. 𝑒𝑑𝑢/]. En línea:
[17 𝑛𝑜𝑣𝑖𝑒𝑚𝑏𝑟𝑒 2016]

14) Página del laboratorio de citometría de flujo del instituto Salk. Tiene vínculos
interesantes, información sobre los equipos y técnicas utilizadas. http://www-
molceb.rulimburg.nl/%20berts/fcm/html [ℎ𝑡𝑡𝑝://𝑤𝑤𝑤 − 𝑚𝑜𝑙𝑐𝑒𝑏. 𝑟𝑢𝑙𝑖𝑚𝑏𝑢𝑟𝑔. 𝑛𝑙/
%20𝑏𝑒𝑟𝑡𝑠/𝑓𝑐𝑚/ℎ𝑡𝑚𝑙]. En línea: [17 𝑛𝑜𝑣𝑖𝑒𝑚𝑏𝑟𝑒 2016]

15) VIVES, J. y col. (2014). Manual de técnicas de laboratorio en hematología. (4° ed.).
Elsevier. España. pp: 214

16) Baylor Scott & White Health. Central Texas. [ℎ𝑡𝑡𝑝://𝑤𝑤𝑤. 𝑠𝑤. 𝑜𝑟𝑔/
𝐻𝑒𝑎𝑙𝑡ℎ𝐿𝑖𝑏𝑟𝑎𝑟𝑦? 𝑝𝑎𝑔𝑒 = 𝑆𝑝𝑎𝑛𝑖𝑠ℎ/𝐿𝑦𝑚𝑝ℎ𝑜𝑐𝑦𝑡𝑒%20𝐼𝑚𝑚𝑢𝑛𝑜𝑡𝑦𝑝𝑖𝑛𝑔]. En línea:
[17 𝑛𝑜𝑣𝑖𝑒𝑚𝑏𝑟𝑒 2016]

17) ARENY, R. y col. (2006). Instrumentos Electrónicos Básicos. (1° ed.). Escuela
Politécnica Superior de Castelldefels (EPSC). Universidad Politécnica de Cataluña.
(UPC). España.pp:253, 254

18) GARCIA, B. y col. (2015). Técnicas de análisis hematológicos. (1° ed.). Ediciones
Paraninfo, SA. España. pp: 259-262

19) Todd-Sanford-Davidsohn. (2001). Diagnóstico y Tratamiento Clínicos por el

Laboratorio. Salvat. (8°, ed.). Elsevier. España. pp: 115-119