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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS


DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA
CURSO PRÁCTICO DE INGENIERÍA DE FERMENTACIONES

Integrantes: GRUPO: 9IM1


 Blas Villafuerte Jessica
 Cortez Sotelo Pedro Ivan
 Martínez Rossete Paola
 Morales Macías Cesar Alejandro
 Ramírez Flores Cesar David
 Ruíz Fonseca María Fernanda
 Viramontes Bocanegra Roberto Carlos

Laboratorio de Ingeniería de fermentaciones Equipo: 2

Profesora: Dra. Cleotilde Juárez Ramírez

PRÁCTICA 2
Reducción del contenido de ácidos nucleicos en proteína unicelular
Practica 2

Reducción del contenido de ácidos nucleicos en proteína unicelular

1.Introducción

2. Resultados

a) Tabular los resultados de concentración de proteínas y RNA en las células antes y después del
tratamiento térmico y alcalino, así como la concentración celular con la que se trabajó.

Los resultados se muestran en el cuadro 1 y 2 de la sección de resultados.

b) Calcular el porcentaje de reducción de ácidos nucleicos y proteinas después del tratamiento.

a) Para la proteína

Para calcular la concentración de proteína en cada una de las muestras se parte de la absorbancia
del estándar (albumina) utilizado de 5 mg/mL, se consideró la función inversa de la pendiente de
la gráfica que se obtendría al graficar los resultados, para evitar graficar los datos se tomó en
cuenta lo siguiente:
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟
[Proteína] = * Concentración del estándar*
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎

Para la muestra control:


0.61 500 𝑢𝐿
[Proteína] = 0.11 * 5 mg/mL * 250 𝑢𝐿 = 55.45 mg/mL

Por otro lado, para calcular el porcentaje de proteína respecto a la concentración celular inicial de
79.8 g/L se tiene:

79.8 g/L --------- 100%

55.45 mg/mL ---------- 69.48%

Y para obtener el porcentaje de pérdida de proteína con respecto al tratamiento térmico alcalino
se obtiene a partir del siguiente cálculo.

Pérdida = 55.45 mg/mL (Concentración inicial) – 38.63 mg/mL = 16.82 mg/mL

% Pérdida = (16.82 mg/mL / 55.45 mg/mL) * 100 = 30.33% de pérdida


b) Para el RNA

En este caso para el cálculo de la concentración de RNA se toma en cuenta la dilución que se hizo
para medir la absorbancia, la concentración de RNA estándar de 0.5 mg/mL y el volumen que fue
el mismo para ambos.
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
[RNA] = * Concentración del estándar* Dilución
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟

Para la muestra control


0.68
[RNA] = 0.17 * 0.5 mg/mL * 5 = 10 mg/mL

Y para calcular el porcentaje de RNA respecto a la concentración celular inicial de 79.8 g/L y el
porcentaje de pérdida de RNA se tiene:

79.8 g/L --------- 100%

10 mg/mL ---------- 12.53%

Pérdida = 10 mg/mL (Concentración inicial) – 6.17 mg/mL = 3.83 mg/mL

% Pérdida = (3.83 mg/mL / 10 mg/mL) * 100 = 38.3 % de pérdida

c) Elaborar la gráfica de reducción porcentual en función de la concentración de NaOH

Proteína RNA

80

70

60
% de reducción y pérdida

50

40

30

20

10

0
0 1 2 3 4 5 6
Concentración de NaOH (%)

Figura 1. Porcentajes de reducción de RNA y pérdida de proteína en función de la


concentración de NaOH
a) Determinación de la concentración celular

Gramos de levadura de panificación para preparar 500 mL de una suspensión de 70g/L, considerando que la levadura tiene el 70% de humedad

70 g Levadura ----------- 1000 mL L a levadura tiene 70% de humedad, esto es que: Se tomó 1 mL de la suspensión y se diluyó 1:250

35 g levadura < --------- 500 mL 100 g de Levadura ---------- 30 g Levadura se leyó la absorbancia a 600 nm obteniendo A= 0.380

116.6 g de levadura <-------- 35 g de Levadura Sabiendo que 1 Ab ------ 0.84 g/L 0.380 Abs = 0.3192

Y como se diluyó 250; 0.3192*250 = 79.8 g/L

a) Resultados del contenido de proteína en la levadura tratada y sin tratar con NaOH

Muestra Volumen (uL) A (530 nm) A promedio Concentración % % de Pérdida


(530 nm) (mg/mL)
Control 250 0.6,0.62,0.62 0.61 55.45 69.5 -
0 250 0.45,0.4 0.425 38.63 48.4 30.33
2 250 0.3,0.32,0.31 0.31 28.18 35.31 49.17
4 250 0.3,0.31,0.31 0.3068 27.89 34.94 49.70
6 250 0.27,0.28,0.25 0.267 24.27 30.41 56.23
Albumina 500 0.12,0.1 0.11 5 - -

b) Resultados del contenido de RNA en la levadura tratada y sin tratar con NaOH

Muestra Dilución Volumen (uL) A (600 nm) A promedio Concentración % % de Reducción


(mg/mL)
Control 0.66,0.67,0.75 0.68 10 12.56 -
0 - - - - -
2 1:5 200 0.52,0.42,0.32 0.42 6.17 7.73 38.3
4 0.22,0.32,0.28 0.24 3.53 4.42 64.7
6 0.2,0.17,0.22 0.21 3.08 3.87 69.2
RNA 0.16,0.14,0.22 0.17 0.5 - -
3. Discusión

En esta

4. Conclusiones

5. Bibliografía

[1] Apuntes sobre la fermentación alcohólica (Accedido enero


2011) http://www.bedri.es/Libreta_de_apuntes/F/FE/Fermentacion_alcoholica.htm

[2] Jagnow, H y Dawid, W. Biotecnología. Introducción con experimentos modelo. Acribia, S.A.
Zaragoza, 1991.