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Grupo: N° 15
Fecha de Entrega: 03/05/11
LIMA – PERÚ
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INDICE
1. OBJETIVOS Pág. 3
5. APENDICE Pág. 12
6. BIBLIORAFIA Pág. 13
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CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA Y DE COLUMNA
1. OBJETIVOS
2. FUNDAMENTO TEORICO
o Cromatografía
El término deriva de “chrôma” (color), ya que los primeros ensayos del método tuvieron por
objeto separar compuestos que eran naturalmente coloreados. En un principio se utilizó la
cromatografía para fraccionar e identificar moléculas pequeñas, como aminoácidos o azúcares.
Es un método utilizado para la separación de los componentes de una muestra, en el cual los
componentes son distribuidos entre dos fases, una de los cuales es estacionaria, mientras que la
otra es móvil; donde la fase estacionaria móvil puede ser solido o líquida.
o Cromatografía en columna
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Figura 2. Cromatografía en columna
Esta técnica comenzó a usarse hacia el año 1950. Esta técnica consiste en que un adsorbente se
va a depositar sobre una placa de vidrio, en el cual con ayuda de un capilar se va colocar una
pequeña cantidad de muestra muy cerca al extremo inferior de la placa, la cual se va a colocar
en un recipiente que contiene un disolvente. La altura de dicho disolvente debe ser tal que no
toque la zona donde se encuentra la pequeña mancha. Los compuestos que avanzan a lo largo
de la placa se ven atraídos por fuerzas electrostáticas sobre la superficie del adsorbente,
interaccionando el disolvente con ambos. Esta interacción competitiva establece las velocidades
relativas con que ascienden por la capa de adsorbente, el frente de disolvente y un determinado
compuesto. Cuanto mayor es la polaridad de los compuestos, más intensamente se ven éstos
atraídos por el adsorbente. Se puede establecer el orden aproximado de polaridad:
ácidos carboxílicos < aminas < alcoholes y tioles < aldehídos, cetonas y ésteres < halogenuros
de alquilo y arilo < hidrocarburos no saturados < hidrocarburos saturados.
La actividad del adsorbente también influye en el grado de emigración del soluto, de manera
análoga a la ya considerada anteriormente. Los adsorbentes más utilizados en cromatografía en
capa fina, son el gel de sílice y la alúmina activada dependiendo su grado de adsorción del
contenido en agua.
Datos teóricos
n- HEXANO
Líquido incoloro no polar con un olor característico
a disolvente
PROPIEDADES Punto de ebullición 9.0°C
FISICAS Y Punto de fusión: 95.0°C
QUIMICAS
Densidad relativa (agua=1) 0.66
Solubilidad en agua insoluble
Presión de vapor, a 20.0°C 16.0 kPa
El n-hexano reacciona con oxidantes fuertes,
también es inflamable. Este compuesto reacciona
PELIGROSIDAD con algunas aminas esenciales para el
Y TOXICIDAD funcionamiento de las células nerviosas. Por lo tanto
es neurotóxico. Además posee un potencial adictivo
y es peligroso.
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Tabla 3. Muestra y sus respectivas fase movil
MUESTRA FASE ESTACIONARIA FASE MÓVIL
1 Silica gel n-hexano
2 Silica gel acetona
3 Silica gel n-hexano+acetona
Datos Experimentales
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3.2. Diagrama de Flujo del Proceso
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3.3. Observaciones
Los portaobjetos a utilizar se deben coger por los costados, ya que el descuido de tocar
la superficie de estos con las yemas de los dedos pueden estropear la experiencia ya que
nuestras manos y/o guantes contienen bacterias.
La fase estacionaria, que en este caso es la sílica gel, debe tener una consistencia
viscosa, en otras palabras, la solución de sílica gel no debe deslizarse rápidamente ni
lentamente por la superficie del vaso de precipitado donde se debe hacer una agitación
intensa para obtener la viscosidad óptima para la experiencia.
Se debe colocar una cantidad aceptable de silica gel en el portaobjetos ya que se desea
tener una capa no muy delgada de esta sustancia para la experiencia. Además se debe
balancear cuidadosamente el portaobjetos para esparcir equitativamente la silica gel por
toda su superficie y si hay una aglomeración de la silica gel se debe desechar con
cuidado.
Luego de haber colocado la silica gel en 3 portaobjetos, se colocan estas en una placa de
vidrio que serán llevadas a la estufa para la activación de estas, en otras palabras, para la
eliminación de agua de la silica gel.
Luego de la activación de las placas, no se debe tocar la silica gel que esta sobre los
portaobjetos ya que se pueden cuartear estropeando la experiencia.
Las gotas de la muestra de pigmentos a colocar debe ser lo más pequeña posible, por lo
que se usa un capilar para la colocación de estas. En nuestro caso colocamos 3 gotas de
muestra para tener una coloración intensa, y entre gota y gota esperar el secado de cada
una en la silica gel.
Los vasos de precipitados que contienen diferentes fases móviles (n-hexano, acetona y
n-hexano/acetona) donde se va a colocar los portaobjetos deben estar cubiertos por
dentro con papel, ya que la luz solar puede decolorar los pigmentos a separar, por lo cual
también se cubre el vaso de precipitados con la luna de reloj.
Con la acetona como fase móvil se obtuvo la separación de la clorofila β de color verde
amarillento. Con el n-hexano como fase móvil se obtuvo la separación de la xantofila de
color amarillo. Con el n-hexano/acetona como fase móvil se obtuvo la separación de la
xantofila, caroteno de color anaranjado y clorofila β.
3.4. Conclusiones
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4. EXPERIMENTO N°2: Cromatografía de columna.
Datos teóricos
n- HEXANO
Líquido incoloro no polar con un olor característico
a disolvente
PROPIEDADES Punto de ebullición 9.0°C
FISICAS Y Punto de fusión: 95.0°C
QUIMICAS
Densidad relativa (agua=1) 0.66
Solubilidad en agua insoluble
Presión de vapor, a 20.0°C 16.0 kPa
El n-hexano reacciona con oxidantes fuertes,
también es inflamable. Este compuesto reacciona
PELIGROSIDAD con algunas aminas esenciales para el
Y TOXICIDAD funcionamiento de las células nerviosas. Por lo tanto
es neurotóxico. Además posee un potencial adictivo
y es peligroso.
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4.2. Diagrama de Flujo del Proceso
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4.3. Observaciones
La columna que es parte del material para realizar la cromatografía de columna debe
estar totalmente seca (sin rastros de agua), por lo que previamente se debe colocar en la
estufa para evaporar los rastros de humedad.
En el fondo de la columna se coloca, con la ayuda de un tubo delgado de vidrio, una
porción pequeña de algodón que va ayudar a la filtración de los pigmentos a separar. La
columna debe estar colocada en el soporte universal.
En el pico de la parte inferior de la columna colocar momentáneamente una manguera
pequeña con una pinza Hoffman para que el solvente a colocar no se escape de la
columna.
Verter una cantidad pequeña de n-hexano por la columna. Se debe observa si el algodón
colocado se mueve de su sitio, si este no es el caso, se sique vertiendo el n-hexano hasta
dos tercios del volumen de dicha columna. Puede suceder que se observen burbujas en
fondo de la columna por lo que se debe aplicar golpes suaves para eliminar dichas
burbujas o apretar la manguera hasta su eliminación de dichas burbujas.
Se llena cuidadosamente la columna con alúmina por donde pasaran los pigmentos.
Algunas porciones de alúmina no llegan a mojarse con el solvente quedando atrapados
por encima de este, por lo cual se da golpes suaves para tener toda la alúmina húmeda
con el solvente y además para uniformizar el empacado de esta.
Luego extraer la manguera con la pinza y se observara que el paso del solvente por el
algodón es demasiado lento, aprovechando esto, colocamos aproximadamente 1cm de
arena en la columna. Sacamos la columna del soporte universal, adjuntamos un tubo de
ensayo que tiene amarrado un pedazo de pabilo y colocamos, con la ayuda de un corcho,
puesto anteriormente, el sistema columna-tubo de ensayo en un kitasato que está
conectado a una bomba de vacío el cual ayudara al flujo rápido del solvente por la
columna.
Cuando el solvente este a 1cm de topar con la arena, se coloca un porción de la muestra
que contiene la mezcla de pigmentos en la columna para su separación por
cromatografía. Luego verter n-hexano y aplicar vacío hasta que el solvente llegue
nuevamente cerca al nivel de la arena por lo que se debe retirar el tubo de ensayo y
colocar otro y repetir la experiencia hasta obtener en el tubo de ensayo una solución
amarillenta que evidencia la presencia de xantofila.
Luego adicionar una mezcla de n-hexano y acetona por la columna. Repetir el proceso
indicado en los epígrafes anteriores y se observara en el empacado de alúmina el
descenso de un pigmento verde que evidencia la presencia de clorofila α.
4.4. Conclusiones
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5. APENDICE
o Cálculos
Donde:
Hallando Rf:
Rf= X1
Y1
o Aplicaciones industriales
También se emplea para saber el porcentaje de reacción de ciertos procesos como son la
eliminación del SH2 y SO2 por obtención de azufre elemental en el que es muy importante saber la
relación entre ambos componentes a la salida de dicho proceso.
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6. BIBLIORAFIA
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