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Hemocultivos

Hemocultivos z Definiciones
z Obtención de muestras
Dr. Alfredo Guillén
z Medios de cultivo
z Procesamiento de laboratorio
z Seguridad en la calidad

1
2

Bacteremia Septicemia
z Transitoria z Evidencia clínica de infección
• Manipulación: infección / colonización z Fiebre (> 38.3°C) o hipotermia (< 35.6°C)
• Temprano en infecciones sistémicas z Taquicardia (> 90 latidos / minuto)
z Intermitente z Taquipnea (> 20 respiraciones / minuto)
• Abscesos no drenados z Uno de los siguientes alteraciones:
• Bacteremias “Breakthrough” • Alteración del estado mental
z Continua • Hipoxemia (PaO2 < 75 mm Hg)
• Endocarditis • Nivel de lactato elevado
• Brucelosis, fiebre tifoidea • Oliguria (< 30 mL / h ó 0.5 mL / kg / h)

3 4

1
Hemocultivo y Mielocultivo Etiología
z Neonatos
E f
Enfermedad
d d P i t
Paciente • Listeria monocytogenes
• Streptococcus grupo B
• Escherichia coli K1
Medio de Obtención de
• Enterobacter sp
cultivo
RESULTADO
la muestra • Otras enterobacterias
z Niños
• Streptococcus pneumoniae
Muestra Observación de
• Haemophilus influenzae
necesaria subcultivos

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Etiología

z Adultos
• Brucella melitensis
• Salmonella tyhi
• Salmonella paratyphi A
• Salmonella paratyphi B
z Ancianos
• Streptococcus pneumoniae
z Infecciones intrahospitalarias
• Enterobacterias
• Bacilos Gram negativos no fermentadores
7 8

2
Indicaciones Indicaciones
z Fiebre alta, si hay
y afectación g
grave del estado z Infecciones localizadas qque p
pueden complicarse
p
general sin causa clara que lo explique con bacteriemia: neumonía, pielonefritis,
z Sospecha de endocarditis meningitis, infecciones intraabdominales,
z En pacientes donde la bacteriemia puede cursar infecciones graves de la piel o tejido celular
sin fiebre (neonatos, ancianos), deterioro de su subcutáneo, etc.
situación ggeneral,, en ocasiones hipotermia.
p z Leucopenia, leucocitosis o trombocitopenia no
z Shock no explicado por causas relacionada con procesos hematológicos.
hemodeinámicas.

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Obtención de la muestra Obtención de la muestra


z Contaminación
z Volumen de sangre
z Tiempo de obtención
z Número de muestras
z Transporte al laboratorio

11 12

3
Contaminación
z Fuente: bacterias que colonizan la piel
• Staphylococcus coagulasa negativo
• Corynebacterium
• Propionibacterium
z Obtención de la sangre
• Alcohol al 70%
Seleccionar Limpiar la
• Iodo Povidona al 10% o Solución de iodo
una vena zona
• Guantes
z Inoculación al medio de hemocultivo
• Evitar tubos de recolección
z Mezcla
• Anticoagulante / hemólisis

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Volumen de sangre necesaria Volumen de sangre por frasco


z Factor importante z Neonatos
z Adultos • 0.5 a 1 mL
• < 1 microorganismo x mL
z Niños menores de 6 años
• Usar cultivos aeróbicos y anaeróbicos
z Niños
• 1 a 3 mL
• > 1 microorganismo x mL z Niños mayores de 6 años
• Usar medio de hemocultivo p
pediátrico • 3 a 5 mL
z Factor de dilución z Adultos
• Diluir sangre en el caldo 1:3 - 1:10
• Dilución de inhibidores naturales
• 5 a 10 mL
• Dilución de antibióticos

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4
Effect of iodophor vs iodine tincture
skin preparation on blood culture
Cuando obtener la muestra contamination rate.
z Antes de la aparición
p de la fiebre y escalofríos z RESULTS--A total of 8467 blood cultures were
• Estos aparecen después del ingreso de bacterias a la collected during the study, and 421 (4.97%) were
sangre classified as contaminated. The contamination
rate for the blood cultures collected using the
z Antes de tomar antibióticos iodophor was 6.25%, and the contamination rate
• Pueden inhibir o demorar el aislamiento for the cultures using iodine tincture was 3.74%;
thi diff
this difference is
i statistically
t ti ti ll significant
i ifi t (P <
.00001).
z Strand CL, et al. JAMA. 1993, 24;269:1004-6

17 18

A randomized trial of povidone-iodine compared


with iodine tincture for venipuncture site Chlorhexidine compared with povidone-
disinfection: effects on rates of blood culture iodine as skin preparation before blood
contamination. culture. A randomized, controlled trial.

z RESULTS: 3,851 blood cultures, 120 (3.1%)


( ) z RESULTS: Of 2041 blood cultures collected in
were contaminated with skin flora. 403 patients, 124 yielded pathogens.
Contamination rate after povidone-iodine was Chlorhexidine reduced the incidence of blood
3.8% (74 of 1,947), compared with a rate of culture contamination more than povidone-iodine
2.4% (46 of 1,904, P = 0.01) after iodine tincture. (14 of 1019 cultures [1.4%] compared with 34 of
z The difference in mean total hospital costs for 1022 cultures [3.3%]; odds ratio, 0.40 [95% CI,
patients with contaminated blood cultures and 0 21 tto 0
0.21 0.75];
75] P = 0
0.004).
004)
those with sterile blood cultures was $4,100. z Mimoz O, et al. Ann Intern Med. 1999 7;131:834-
z Little JR, et al. Am J Med. 1999 ;107:119-25. 7

19 20

5
Número de muestras Correlación entre bacteremia y fiebre
z Evaluar si es patógeno o contaminante
41 T
Temperatura
t Num. Bacterias 800
z Obtener de lugares separados 40.5 (relativo)
700

z No es necesario que las muestras se tomen 40


600
separadas por periodos de tiempo arbitrarios 39.5

• Obtención simultanea 39
500

• Facilitar la administración de antibióticos 38.5

38
400

300
z Nú
Número 37.5

• Infecciones en general 2a3 37


200

• Endocarditis sin Tx. Antib. 3 36.5


100

• Endocarditis con Tx. Antib. 6 36 0

Tiempo
21 22

Transporte al Laboratorio Hemocultivo y Mielocultivo


z Rápido (1-2 horas)
• Disminuye la posibilidad de recuperar cuando el
tiempo de transporte aumenta
z Temperatura ambiente (~22°C)
• Nunca refrigerar
z Proteger del calor y la luz del sol
z Empaque seguro
• Evitar que se rompa
• Evitar que se derrame
• Evitar exposición a agentes infecciosos
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6
MEDIO DE HEMOCULTIVO
Polianetol Sulfonato de Sodio
z Usar medio líquido,
q , enriquecido,
q , multipropósito
p p z Antifagocítico
g
z Volumen para tener una dilución 1:5 a 1:10 z Anticomplementario
z Anticoagulante z Inhibe lisozima sérica
• Polinaetolsulfonato de sodio
• 0.025 a 0.05 % z Neutraliza aminoglicósidos y polimixinas
• Citrato de sodio 0.5% z Puede inhibir Neisseria menigitidis, Neisseria
• Inhibe cocos Gram positivos gonorrhoeae Gardnerella vaginalis
gonorrhoeae, vaginalis,
• EDTA, Heparina, Oxalato
Streptobacillus moniliformis, Peptostreptococcus
• Toxicidad potencial
anaerobius
z Gelatina 1.2% neutraliza el efecto inhibidor

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MEDIO BIFASICO RUIZ


SISTEMAS MANUALES CASTAÑEDA
z Simples
p de usar. z Características
z Solo necesitan incubadora y en algunos casos • Caldo Tripticasa soya
agitador. • Agar tripticasa soya en plano inclinado
z Métodos muy económicos. • Anticoagulante: SPS
z Ideales para laboratorios que realizan pocos z Ventajas
cultivos
cultivos. • Elimina el subcultivo manual
z Ingredientes de los medios.
• Reduce el riesgo de contaminación del personal y del
cultivo
z Control de calidad de los medios. • Ideal para aislamiento de Brucella

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7
PRODUCTOS COMERCIALES LISIS - CENTRIFUGACION

z Frascos al vacío (anaerobiosis)


z Isolator (Wampole Laboratories)
z Atmósfera de CO2
z Adulto (10 mL); pediatrico (1.5 mL)
z Resinas: removedores de antibiótico
z Saponina: sustancia para lisis y
z Control de calidad por fabricante
antiespumante, compuesto fluoro-carbonado
z Métodos de detección y EDTA: anticoagulante.
• Producción metabólica de CO2
• Incremento de presión
z Inoculación directa en medio de agar
g ppara
• Fluorimetría
aerobios y anaerobios
• Cambio de color del indicador z Aumenta aislamiento de hongos y levaduras

29 30

BacT-Alert BacT-Alert
z Indicador qque vira de verde a amarillo
z Relación al aumento de CO2
z Facil de visualizar
z Puede ser automatizado
z Frascos para adultos, pediátricos, anaerobios y
con removedor de antibióticos
z Costo

31 32

8
Frasco bifásico con tapón de
Bactec 9050 algodón

33 34

Control de calidad del frasco de


Etiqueta hemocultivo

z pH
HEMOCULTIVO
Nombre________________________________ z Esterilidad
Edad _____ Diagn o Síntom________________
Tomo Antib_________ Temperatura_________
z Control de crecimiento
Cant sangre______ mL Personal___________ • Streptococcus pneumoniae ATCC 6305
Fecha_____________ Hora _______________
• Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
• Bacteroides
B t id ffragilisili ATCC 25285
• Haemophilus influenzae ATCC 10211
• Brucella melitensis Rev 1

35 36

9
BIOSEGURIDAD Hemocultivo y Mielocultivo
z Cabinas de bioseguridad
• Presión en frascos positivos
z Guantes
z Heridas por agujas
• Al momento de poner protector de plástico de la aguja
• Descartar en envases apropiados
z A
Agentes
t microbianos
i bi
• Brucella
• Hepatitis
• VIH
37 38

PROCESAMIENTO
z Incubación
• 35 - 37°C con 5% de CO2
z Tiempo Presencia de
• 7 - 10 días
colonias en el
• Pacientes con antibióticos: 2 semanas
• Agentes exigentes: 2 a 4 semanas plano
z Búsqueda de crecimiento inclinado
• Colonias en plano inclinado
• Colonias en la interfase sangre / caldo
• Hemólisis o presencia de gas
• Bacterias que no evidencian crecimiento
39 40

10
Presencia de gas en el medio
sólido Crecimiento en el fondo del frasco

41 42

Anticoagulante: inadecuado o
Turbidez falta

43 44

11
SUBCULTIVOS PROCESAMIENTO
z Subcultivo ciego
g z Coloración
• Después de 12 - 24 h. de incubación • Coloración Gram “de rutina” ciega
• En caso de Haemophilus y neumococo • No es útil sin evidencia de crecimiento
• Al recibir un frasco con > de 12 horas de obtención • Coloración de Naranja de Acridina
z Cultivo terminal
z Usar agar sangre carnero y agar chocolate
• No útil
z Incubar 48 h en 5-10%
5 10% CO2 • Contaminación
z Segundo subcultivo a las 48 o 96h. después z Reporte de cultivos positivos
• Resultado Crítico
• Usar teléfono para reportar coloración, identificación y
antibiograma
45 46

Seguridad en la calidad Monitorear


z Incluir todas las partes del proceso z Tasa
asa de co
contaminación:
ta ac ó
• Obtención • Recuperación de >3% contaminantes
• Transporte
• Procedimientos de laboratorio • Entrenamiento en obtención de muestra
• Aislamiento • Tasa de contaminación total (%)
• Identificación • Tasa de contaminación en neonatología (%)
• Pruebas de susceptibilidad
p
• Control de calidad de medios y equipos • Tasa
T de
d contaminación
t i ió por venipunturista
i t i t
• Reporte
• Rapidez
• Exactitud
47 48

12
Cantidad de sangre obtenida en un Hospital
Monitorear de USA - 2001

z Factor de dilución:
• Volumen de sangre en el frasco 50
• Número de frascos con cantidad adecuada de 40
sangre (20 mL por set)
30
z Factor de muestra 20
45%
40%
• Número de cultivos por paciente 10 15%
0
20 mL 10 mL < 5 mL

49 50

Cantidad de sangre Cultivos contaminados


z Cantidad “óptima” vs “adecuada” z Un solo cultivo positivo en una serie de frascos
z No rechazar ningún frasco si no se ha obtenido obtenidos de un paciente
la cantidad suficiente de sangre • Staphylococcus coagulasa negativo
• Micrococcus
z Nota: Los resultados obtenidos pueden ser • Streptococcus alfa hemolítico (viridans)
debido a la cantidad subóptima de sangre • Propionibacterium acnes
inoculada” • Corynebacterium sp. (difteroides)
z Marcar en un frasco cuales son las cantidades • Bacillus sp
en que puede variar z No se hace identificación o antibiograma
z Monitorear las cantidades obtenidas
http://www.cap.org/apps/docs/proficiency_testing/qmt_catalog/2007_qmt_catalog.pdf

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Seguridad en la Calidad
Reporte
z La vía mas rápida
z PMPI
z Gram para orientar la terapia
• Cocos Gram positivos • Performance Measurement / Process Improvement
• Bacilos Gram negativos • Medición del rendimiento / Mejora del proceso
z Reporte telefónico
z Avisar al servicio z Comunicación con enfermera y médico
• Nombre de la persona que recibió el reporte
• Hora de reporte z Personas bien entrenadas producen resultados
• Que repita sobre todo si es información crítica de alta calidad

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El ojo del amo engorda el caballo


z Es muy pesado llevar tantos frascos
z Los frascos no entran en la bandeja
z Se contamina por que ya no me dejan usar el
mechero
z Pierdo mucho tiempo al poner mis iniciales en el
frasco
z Me olvide de llevar el Yodo
z Se me malogran las uñas al sacar la tapita de metal
z Se me acabaron los guantes
z Tenía muchas pruebas y no le pude sacar mucha
sangre

55 56

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