UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

Nombre: Milton Steeven Chicaiza Ramírez

Paralelo: 2
PRACTICA 4
TÉCNICAS DE TINCIÓN
1. TEORÍA
1.1.Tinción.
Se denomina tinción al proceso y el resultado de teñir (otorgar un color a una cosa). El concepto deriva
del vocablo latino tinctĭo. Es importante destacar que el acto y la consecuencia de teñir también se
conocen como tintura. De este modo, mientras que en el lenguaje coloquial suele emplearse la idea de
tintura, en el campo de la química y de la medicina se prefiere el término tinción. En este sentido, se
llama tinción a una técnica que se emplea en los laboratorios con el objetivo de optimizar la visión de
aquello que se observa a través de un microscopio. La tinción, de este modo, consiste en aplicar un
colorante a una sustancia o un tejido para que resulte más simple detectarlo y analizarlo. Con la tinción,
es posible mejorar la definición de grupos de células o de fragmentos de tejido, por citar algunas
opciones. También, mediante tinturas especiales, se puede medir la presencia de ciertas sustancias o
elementos en un compuesto. (Gardey, 2014)

1.2.Frotis
Se le dice a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de
separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy
difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del
portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al
microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de
una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo
menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.
(s.f)

1.3.Tipos de tinción.
Tinción simple
Se usa un único colorante (siempre es de tipo básico) que proporciona contraste para observar mejor
un organismo completo.
 Se tiñe con un colorante básico (azul de metileno, cristal violeta, o fucsina básica) durante unos
5 minutos.
 Aclarar brevemente con agua.
 Se tiñen casi todas las bacterias; la mayoría de los tejidos no se tiñen.
(Hernández, 2013)
Tinciones diferenciales
Consta de dos etapas: una tinción primaria (siguiendo el mismo método que en una tinción simple) y la
tinción de contraste. Se utiliza otro colorante que tiñe (y por tanto, revela) las células no teñidas por el
primer colorante. Por ejemplo, la tinción de Gram y la tinción de ácido-alcohol resistencia, ambas
aplicadas a bacterias.
(Hernández, 2013)
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La tinción de Gram
Clasifica las bacterias en dos grupos
Gram positivas y Gram negativas. Se tiñe con el primer colorante cristal violeta y después con una
solución de iodo (mordiente), todas las células quedan tenidas de color violeta oscuro, se decolora con
acetona al 95%. Las bacterias Gram positivas permanecen tenidas, pero las negativas pierden el
colorante, se tiñe con safranina (contraste), el color violeta de las Gram positivas se vuelve más oscuro
y las Gram negativas se tiñen de rosa.
Esta tinción sirve para distinguir entre micro bacterias (ácido-alcohol resistentes) y el resto de las
bacterias, tinción primaria con fucsina básica, que tiñe todas las células de rojo. Calentamiento suave
de la preparación, decoloración con una solución de ácido clorhídrico en etanol, este decolorante
elimina la fucsina de todas las células excepto de las mico bacterias, que la retienen debido a su
superficie cérea, coloración de contraste con azul de metileno, se tiñen de azul todas las células
previamente decoloradas, lo que facilita la diferenciación entre las células de mycobacterum, aún
teñidas de rojo, y las células restantes del espécimen.
Mientras las tinciones diferenciales permiten distinguir entre distintos tipos de microorganismos, las
tinciones específicas incrementan el contraste en las células microbianas y revelan estructuras
particulares, entre las que se incluyen las endosporas, los flagelos y las cápsulas.
(Hernández, 2013)

La tinción de esporas de wirtz-conklin

Tiñe selectivamente las endosporas, la tinción con verde de malaquita, comienza con calentamiento a
emisión de vapores durante 60 segundos, para que el colorante penetre a través de las paredes de la
endospora, se lava con agua durante 30 segundos que elimina el colorante verde de todas las partes de
la célula, con excepción de las esporas, se tiñe con el colorante rosa safranina, las endosporas retienen
el color verde; el resto de la célula toma el color rosa.
Permite observar los flagelos, se fija químicamente la suspensión bacteriana, mediante formol, y se
hace la extensión en un portaobjetos, se deja secar al aire, sin calentamiento alguno se cubre la
preparación con una mezcla de ácido tánico y el colorante rosanilina, de preparación extemporánea, el
ácido tánico (mordiente) engruesa los flagelos y la rosanilina(colorante) los tiñe se retira el exceso de
colorante con agua por último, se deja secar al aire, antes de su observación al microscopio.
(Hernández, 2013)

Tinción negativa
Revela la presencia de cápsulas se hace una preparación en fresco del espécimen, se añade tinta china
las partículas de colorante no pueden penetrar en la cápsula, de manera que solo se ennegrece el fondo
al microscopio, se observan las células y sus cápsulas, como zonas claras alrededor de las mismas, se
puede aplicar un colorante para hacer las células más visibles (los colorantes habituales no tiñen las
cápsulas), también se puede usar tirosina, en lugar de tinta china.
(Hernández, 2013)

1.4.Tinción Gram
Clasifica las bacterias en dos grupos
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Gram positivas y Gram negativas. Se tiñe con el primer colorante cristal violeta y después con una
solución de iodo (mordiente), todas las células quedan tenidas de color violeta oscuro, se decolora con
acetona al 95%. Las bacterias Gram positivas permanecen tenidas, pero las negativas pierden el
colorante, se tiñe con safranina (contraste), el color violeta de las Gram positivas se vuelve más oscuro
y las Gram negativas se tiñen de rosa.
(Hernández, 2013)

Esta tinción sirve para distinguir entre micro bacterias (ácido-alcohol resistentes) y el resto de las
bacterias, tinción primaria con fucsina básica, que tiñe todas las células de rojo. Calentamiento suave
de la preparación, decoloración con una solución de ácido clorhídrico en etanol, este decolorante
elimina la fucsina de todas las células excepto de las mico bacterias, que la retienen debido a su
superficie cérea, coloración de contraste con azul de metileno, se tiñen de azul todas las células
previamente decoloradas, lo que facilita la diferenciación entre las células de mycobacterum, aún
teñidas de rojo, y las células restantes del espécimen.
(Hernández, 2013)

Mientras las tinciones diferenciales permiten distinguir entre distintos tipos de microorganismos, las
tinciones específicas incrementan el contraste en las células microbianas y revelan estructuras
particulares, entre las que se incluyen las endosporas, los flagelos y las cápsulas.
(Hernández, 2013)

1.5.Tinción Flagelar
Los flagelos son apéndices filamentosas de la superficie bacteriana, compuestos por proteínas
específicas denominadas flagelinas con peso molecular relativamente bajo, que varía entre 17.000 y
40.000. El aparato flagelar está constituido por tres regiones distintas. La región más externa es el
filamento helicoidal formado por flagelina. Cerca de la superficie celular está unido a un gancho de
diámetro algo mayor, constituido por un tipo diferente de proteína. Este, a su vez, se halla unido a un
cuerpo basal alojado por completo dentro de la envoltura celular, estructura que consta de un pequeño
cilindro central insertado en un sistema de anillos. Las bacterias móviles poseen flagelos con una
ubicación característica y puede utilizarse para diferenciar especies y géneros
(López,1999)
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Figura 1. Mecanismo de Tinción flagelar

Fuente: http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-content/uploads/2017/02/03-
COLORACIONES.pdf

1.6.COLORACIÓN DE AZUL DE METILENO DE LOEFFLER (coloración de gránulos

metacromáticos)
Es una coloración simple y de gran utilidad para el género Corynebacterium. Muchos microorganismos,
tanto procarióticos como eucarióticos, pueden acumular gránulos de volutina, que se tiñen con
colorantes básicos tales como azul de metileno. Estos cuerpos de denominan también gránulos
metacromáticos, porque presentan un efecto metacromático, viéndose rojos cuando se tiñen con un
colorante azul. En las micrografías electrónicas aparecen como cuerpos extraordinariamente densos a
los electrones. Los gránulos deben su comportamiento metacromático a la presencia de grandes
cantidades de polifosfato inorgánico que constituyen una fuente de reserva intracelular de fosfato.
Reactivos:
Azul de metileno 0,3 g
Alcohol Etílico 95º 30 ml
Agua Destilada 100 ml
Técnica:
1.- Efectuar un extendido fino. Fijar a la llama.
2.- Cubrir con colorante durante un minuto.
3.- Lavar el portaobjeto con agua.
(López,1999)

Bibliografía

Julián Pérez Porto y Ana Gardey, (2014), Definición de tinción, disponible en URL:
https://definicion.de/tincion/ (Recuperado el 10-10-2018)

(s.f), Frotis, disponible en URL: https://www.uv.es/~jjmateo/microb/tincionsimple.doc (Recuperado el

10-10-2018)

Barajas Orozco Brenda Athziri, Gómez Cervantes Athziri Fabiola, Trigueros Hernández Verónica
Georgina, (2013), técnicas de Tinción, disponible en URL:
https://es.slideshare.net/athzirycervantess/tincin-de-bacterias (Recuperado el 10-10-2018)

Díaz R Gamazo C y López Goñi I. (1999). Manual práctico de microbiología “técnicas de tinción”
disponible en URL: http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-content/uploads/2017/02/03-
COLORACIONES.pdf (Recuperado el 10-10-2018)