I.

INTRODUCCION

La fotosíntesis es un proceso de suma importancia para la biosfera porque

convierte la energía de la radiación solar en energía química que puede ser
usada por todas las formas de vida. Para la fotosíntesis la planta utiliza la
radiación fotosintéticamente activa (PAR) que está en el rango entre 400 a
700nm. Puede seguir tres caminos:

 Ser usada para dirigir la fotosíntesis (procesos fotoquímicos),

 Disipada como calor
 Reemitida en pequeñas pero detectables cantidades de radiación de
longitud de onda más larga (rojo/rojo lejano) (procesos no fotoquímicos).

Esta emisión de luz es llamada fluorescencia de la clorofila a. Los tres procesos

se dan en competencia, así que incrementos en la eficiencia de alguno puede
inducir decrecimiento en los otros dos. De esta manera midiendo el rendimiento
de la fluorescencia de la clorofila a se proporciona información sobre cambios en
la eficiencia de la fotoquímica y la disipación de calor. (Tato et al 2002)

La luz es una forma de radiación electromagnética, un tipo de energía que viaja

en ondas. Otros tipos de radiación electromagnética que encontramos en
nuestra vida diaria incluyen las ondas de radio, microondas y rayos X. En
conjunto, todos los tipos de radiación electromagnética conforman el espectro
electromagnético. (López et al 2005)

Sin embargo, en la fotosíntesis no se usan de igual manera todas las distintas

longitudes de onda en la luz del sol ya que los organismos fotosintéticos
contienen moléculas llamadas pigmentos que absorben solo longitudes de onda
específicas de la luz visible, mientras que reflejan otras.

El conjunto de longitudes de onda que absorbe un pigmento se conoce como su

espectro de absorción. En el siguiente diagrama, puedes ver los espectros de
absorción de tres pigmentos importantes en la fotosíntesis: clorofila a, clorofila b
y β-caroteno. El conjunto de longitudes de onda que un pigmento no absorbe, se
refleja, y la luz reflejada es lo que vemos como color. Por ejemplo, percibimos
las plantas de color verde por su gran contenido de moléculas de clorofila a y b,
que reflejan luz verde. (López et al 2005)
Clorofila hay cinco tipos principales de clorofila: a, b, c y d, más una molécula
relacionada que se encuentra en procariontes llamada bacterioclorofila. En las
plantas, la clorofila a y clorofila b son los principales pigmentos fotosintéticos.
Las moléculas de clorofila absorben longitudes de onda azules y rojas, como se
demuestra con los picos en los espectros de absorción anteriores. (Báez 2007)

Carotenoides los carotenoides son otro grupo clave de pigmentos que absorben
la luz violeta y verde azulada (ve la gráfica del espectro anterior). Los brillantes
carotenoides encontrados en frutos, como el rojo del tomate (licopeno), el
amarillo de las semillas de maíz (zeaxantina) o el naranja de una cáscara de esta
fruta (β-caroteno) se utilizan como avisos para atraer animales, que pueden
ayudar a dispersar las semillas de plantas. (Monje et al 1984)

Las xantofilas, son compuestos químicos parecidos a los carotenos, y a

diferencia de estos últimos además de contener carbono e hidrógeno contienen
uno o más átomos de oxígeno dentro de la molécula, pero al igual que los
carotenos, presentan colores llamativos (rojo, naranja y amarillo). Vegetales
como el pimiento amarillo y rojo representan una fuente importante de xantofilas.
(Báez 2007)

La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar

la concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas
absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz
absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para hacer este tipo de
medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma. (Abril et al sf)
El estudio de los pigmentos es importante desde el punto de vista eco fisiológico
ya que aporta información sobre productividad y eventos de estrés, entre otros.
Las alteraciones en la composición de pigmentos fotosintéticos pueden estar
relacionados con la foto aclimatación. (Abril et al sf)

II. OBJETIVOS

 Preparar la solución blanca para determinar su absorbancia como uno de

los componentes para diferenciar con la disolución.
 Determinar el espectro de absorbancia de los pigmentos de clorofila,
caroteno y xantofilas como muestra en en el estudio.
III. MATERIALES Y METODOS

3.1 Materiales

 Extracto de mango, espinaca y beterraga.

 Solución de pigmentos mediante disolventes químicos.
 Espectrofotómetro y cubetas de vidrio.
 Pipeta de 1 y 5 ml.
 Probeta.
 Gradilla.
 Tubos de ensayo.
 Agua destilada.
 Éter etílico.
 Éter de petróleo.
 Solución de KHO (Hidróxido de Potasio).

3.2 Método

Para obtener la medida de los espectros de absorción de clorofila, caroteno y

xantofila en el espectrofotómetro primero se prepara las soluciones para cada
uno de los pigmentos con la siguiente composición:

Clorofílicas (extracto de espinaca)

  Blanco: En un tubo de ensayo se mezclan 1ml de solución de KOH
(Hidróxido de Potasio) al 30% en metanol y 2 ml de agua destilada y se
agita hasta que se mezclen bien.
 Disolución: En un tubo de ensayo se mezclan 2 ml de extracto de vegetal
en este caso de la espinaca + 1 ml de KHO

Carotenos (extracto de beterraga)

 Blanco: En un tubo de ensayo se mezclan 1 ml de éter de petróleo + 2 ml

de agua destilada luego agitamos asta poderlo mezclar.
 Disolución: En un tubo de ensayo mezclamos 2 ml de extracto de
beterraga + 1 ml de éter de petróleo.

Xantofilas (extracto de mango)

 Blanco: En un tubo de ensayo mezclamos 1.5 ml de éter de petróleo + 2

ml de agua destilada agitamos el tubo de ensayo asta mezclarlo.
 Disolución: En un tubo de ensayo mezclamos 1 ml de éter etílico + 2 ml
de extracto de mango.

En la práctica se medirá la absorbancia de cada uno de los pigmentos entre 350

y 700 nm, en primer lugar, se mide la absorbancia de la solución de pigmento y
se procede del siguiente modo:

 Se selecciona la longitud de onda.

 Se introduce la cubeta con la solución de pigmento y se
toma la lectura de absorbancia.
 Se selecciona una nueva longitud de onda y así
sucesivamente.
IV. RESULTADOS

Clorofílicas

-disolución -blanco
Extracto de KOH +
espinaca + metanol +
KOH agua
destilada
Carotenos

-disolución -blanco
Extracto de Éter de
betarraga + petróleo +
éter de agua
petróleo destilada

Xantofilas

-disolución -blanco
Extracto de Éter de
mango + petróleo +
éter etílico agua
destilada

Medición del pigmento

La solución Se toma
introducida lectura de
en la cubeta y absorbancia
esta va en el seleccionando
espectrómetr nueva
o longitud de
onda

Las lecturas tomadas, longitud de ondas de 450 a 700 nm tuvieron como

resultado los siguientes datos tanto para la disolución y blanco, por ello para
obtener el resultado de absorbancia del pigmento se saca la diferencia de,
absorbancia de la disolución menos absorbancia del blanco. En el caroteno
podemos decir que el nivel de absorbancia del pigmento es menor porque
presento una correlación negativa en su columna, la similitud al resto de clorofila
y xantofila los pigmentos se asemejan y las variables se mantiene de 3.011 a
3.208.
Datos que se obtuvieron del espectrómetro:

Clorofila Xantofila Caroteno

Longitud Dis. Blco. Pig. Dis. Blco. Pig. Dis. Blco. Pig.
de onda
350
400
450 3.214 0.023 3.191 3.214 0.006 3.208 0.006 3.010 -
3.004
500 3.214 0.006 3.208 3.214 0.003 3.211 0.003 3.010 -
3.007
550 3.214 - 3.215 3.214 - 3.215 0.001 3.010 -
0.001 0.001 3.009
600 3.214 0.002 3.212 3.010 - 3.011 -0.001 3.214 -
0.001 3.215
650 3.214 0.003 3.211 3.010 0.002 3.008 -0.001 3.010 -
3.011
700 3.010 - 3.011 -0.001 2.139 -2.14
0.001

V. DISCUSION

Según Tato (2002) Para la fotosíntesis la planta utiliza la radiación

fotosintéticamente activa (PAR) que está en el rango entre 400 a 700nm. Este
concepto fue mencionando en la práctica de laboratorio y concuerda lo dicho

VI. CONCLUSIONES

Al comparar los resultados obtenidos del espectrómetro de la solución

blanca y la disolución las variables son diferentes donde la clorofila y la
xantofila el nivel de disolución es mayor que la solución blanca,
determinamos la absorbancia del pigmento donde la clorofila y xantofila es
mayor que el espectro de absorbancia de caroteno
VII. REFERENCIAS

 Abril DN, Bárcena RA, Fernando RE, Galván CA, Jorrin NJ. Sf.
Espectrometría. Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica de
biomoléculas.

 Báez EJ. 2007. Generadores de colores naturales. Carotenos y

Xantofilas. Enlace químico.

 López GM, Burgos PJ, Barrio RI. 2005. Los colores de las plantas. Hay
más de lo que parece ¿Dónde están los colores?

 Tato L, Kent V, Ardoz T. 2002. Ciencia Naturales. Extracción y separación

de pigmentos fotosintéticos. Disponible en:
http://centros5.pntic.mec.es/ies.victoria.kent/RinconC/Practica/PR-
25/PR-25.htm