MÉTODO DE HPLC DE GRADIENTE RÁPIDO PARA DETERMINAR LOS COMPUESTOS QUE SE UNEN A
LA ALBÚMINA DE SUERO HUMANO. RELACIONES CON OCTANOL / AGUA Y LIPOFILICIDAD DE
MEMBRANA ARTIFICIAL INMOVILIZADA
KLARA VALKO, SHENAZ NUNHUCK, CHRIS BEVAN, MICHAEL H.
ABRAHAM, DEREK P.REYNOLDS
RESUMEN: Se ha desarrollado
un método de HPLC de gradiente
rápido (tiempo de ciclo de 15
minutos) para determinar la
unión a albúmina sérica humana
(HSA) de los compuestos de
descubrimiento usando fases
estacionarias de proteínas unidas
químicamente.
El método ha sido validado
utilizando datos de unión de
proteína plasmática de la
literatura de 68 moléculas de
fármaco conocidas. El método
está completamente
automatizado y se ha utilizado
para la optimización de clientes
potenciales en más de 20
proyectos de empresas.
La selectividad de la lipofilicidad
"basal" que gobierna la unión a
HSA, la interacción de la
membrana y la partición de
octanol / agua son muy similares.
El efecto de la presencia de
cargas positivas o negativas tiene
efectos muy diferentes. Se
encontró que negativamente los
compuestos cargados se unen más
fuertemente a HSA de lo que se
esperaría de la lipofilia de la
RESULTADOS:
CONCLUSIÓN:
JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES, VOL. 92, NO. 11, NOVEMBER
2003
INTRODUCCIÓN: La albúmina sérica y la glicoproteína ácida son los dos principales aglutinantes de las moléculas
ácidas y básicas de los fármacos en el plasma respectivamente.
Se han realizado varios intentos para establecer relaciones cuantitativas de unión a la estructura para la unión a HSA, y han
revelado las contribuciones positivas de la lipofilia, la presencia de sustituyentes aromáticos y la presencia de ácidos
carboxílicos en una fuerte unión a HSA.
Varias aplicaciones de albúmina de suero unida químicamente en soportes de sílice de alta calidad se han reportado desde 1990.
El factor de retención cromatográfico está directamente relacionado con la proporción del número de moléculas en la fase estacionaria
y la fase móvil.
Los métodos basados en HPLC para medir la unión a HSA son más rápidos y más precisos en clasificar compuestos, sin embargo,
los compuestos fuertemente unidos pueden tener tiempos de retención muy largos (más de 30 min).
El tiempo de retención absoluto de los compuestos disminuye progresivamente a medida que la columna envejece; la aplicación
de tiempos de retención relativa puede dar una medida más precisa de la unión. Como la unión de HSA afecta principalmente a la
actividad / distribución del compuesto solo por encima del 95% de unión, es importante que los compuestos fuertemente unidos se
eluyan en un tiempo razonable desde la columna cromatográfica en orden reproducible.
EXPERIMENTACIÓN
* Equipo HPLC
* Columna HPLC HSA inmovilizada
* Fase móvil
Fase A: Solución de acetato de amonio pH 7.4
Fase B: 2-Propanol
La velocidad de flujo de la fase móvil fue de 1,8 ml / min.
La temperatura de la columna se mantuvo a 30ºC.
Detección: Los cromatogramas se registraron a 230 y 254 nm mediante un detector de absorción UV de matriz de diodos a
temperatura ambiente.
En un sistema cromatográfico, la retención es proporcional a la relación del número de moléculas en las fases
estacionaria y móvil. De esta relación podemos derivar el% de las moléculas unidas a la fase estacionaria.
DISCUSIÓN:
Para revelar la contribución de la lipofilia al enlace de HSA, se investigó la correlación entre los
valores de logK (HSA) y el logP.
Los compuestos se han diferenciado según su carga a pH 7,4. Se les llamaba ácidos si tenían
carga negativa y llamaban bases si tenían carga positiva. La clasificación se basó en los valores
de lipofilicidad CHI22 obtenidos por HPLC de gradiente de fase inversa a tres pH.
Se puede observar que, en
general, los compuestos con carga
negativa se unen más
fuertemente a HSA que los
cargados positivamente. Los
valores logK HSA se
representaron en función de los
valores CHI IAM ( Los valores de
índices de hidrofobicidad
Cuando trazamos los valores logK HSA como una función decromatográfica)
los valores CHI IAM para los 480
compuestos de investigación, se pudo observar una "separación" muy similar de ácidos, bases
y compuestos neutros.
Aunque la presencia de carga negativa generalmente aumenta la unión a la albúmina,
generalmente reduce la afinidad de la membrana y, a la inversa, la presencia de carga positiva
aumenta la afinidad de la membrana mientras que tiene muy poco efecto sobre la unión a la
albúmina.
El gráfico de los datos logK HSA y CHI IAM para 480 compuestos de 10 proyectos diferentes.
BIBLIOGRAFÍAS:
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propiedad: optimización de la absorción del fármaco y la farmacocinética. J Med Chem 44:
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2. TAG Noctor, Díaz-Pérez MJ, Wainer IW. 1993. Uso de una fase estacionaria a base de
albúmina de suero humano para cromatografía líquida de alto rendimiento como herramienta
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3. Tiller PR, Mutton IM, Lane SJ, Bevan CD. 1995. Albúmina sérica humana inmovilizada:
cromatografía líquida / masa espectrometría como método de determinando la unión
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