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 Int. J. Morphol., 33(4)
:1269-1272, 2015.
Poros Nucleares y Función Celular en Epitelio Mamario
Nuclear Pores and Cellular Function
R. Cornejo
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; O. Garrido
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; R. Jaramillo
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; E. Vergara
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; P. Lermanda
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 & Y. Gatica
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CORNEJO, R.; GARRIDO, O.; JARAMILLO, R. ; VERGARA, E.; LERMANDA, P. & GATICA, Y.
 Poros nucleares y funcióncelular en epitelio mamario.
 Int. J. Morphol., 33(4)
:1269-1272, 2015.
RESUMEN:
 El presente artículo tiene como objetivo central evidenciar la interesante relación que se establece entre la funcióncelular y el número de poros nucleares, relación que modula el activo intercambio nucleo-citoplasmatico en distintas etapas del ciclocelular de la estirpe HC11.
PALABRAS CLAVE: Poros nucleares; Diferenciación Celular; Células mamarias.
INTRODUCCION
En las células eucarióticas el intrincado mecanismode mantener los organismos en su ciclo vital está determinadopor una activa y continua comunicación entre estructuras y/oemisiones moleculares versus componentes citosólicos, esdecir, una relación directa entre constituyentes nucleares conorganelos citoplasmáticos actuando en directa y estrecha co-laboración (Terry
et al
., 2007).Recordando que en el núcleo eucariótico se encuentradepositada la información genética en forma de ADN respon-sable de codificar las moléculas que regirán los mecanismospropios del ciclo vital celular, el material genético seráenzimáticamente replicado, transcrito a moléculas de RNAoriginando el RNAm, RNAt y el RNAr a expensas de enzimasespecíficas para cada evento molecular (Forero & Urcuqui,2004; Beck
et al
., 2007).Los dos primeros tipos de RNA sintetizados abando-narán el compartimento nuclear hacia el citosol para participarluego en la traducción o síntesis de proteínas, mientras que elRNAr participará en la biogénesis ribosomal abandonando elnúcleo y en el citoplasma adherirse a las membranas de retícu-lo endoplasmático originando el RER o permanecer libres enel citoplasma (Audhya
et al
., 2007) y en ellos donde se sinteti-zarán las proteínas y enzimas para los procesos celulares algu-nas de ellas como la DNA polimerasa, la RNApolimerasa, lashistonas, factores reguladores de la expresión génica, etc. vol-verán al interior del núcleo para realizar una determinada eimportante funcionalidad (Montanaro, 2008).
De igual manera, es necesario recordar que todas lasmoléculas que pertenecen a los distintos organeloscitoplasmáticos poseen información proveniente del com-partimento nuclear.El transporte entre los compartimentos nuclear ycitoplasmático se realiza a través de la envoltura nuclear,membrana nuclear o carioteca, formada por dos unidadesde membrana concéntricas, la externa o citoplasmática queposee ribosomas adheridos y la interna o nuclear con lámi-na nuclear, conjunto de filamentos intermediarios que leconfiere estabilidad a la estructura. Entre ambas membra-nas existe un espacio de 25-40 nm que constituye la cisternaperinuclear, la cual se caracteriza por presentar poros nu-cleares, espacios circulares que dejan las membranas al unir-se e interrumpiendo su continuidad de trecho en trecho conun diámetro de unos 80 nm, estableciéndose comunicacio-nes entre el cito y el nucleoplasma.Las moléculas menores a 50 kDa atraviesan los po-ros mediante simple difusión, en cambio moléculas mayo-res requiere de receptores específicos ubicados en los po-ros, denominados carioferinas, (Antonin, 2009)
Numerosos trabajos al respecto indican que el nú-mero de poros varía, de unas células a otras, entre 2 y 60por
µ
m
2
, y por tanto, sería posible visualizar un equivalen-te hasta 3000-4000 poros por núcleo (Maeshima
et al
.,2011)
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 Depto. de Ciencias Básicas, Facultad de Medicina, Universidad de La Frontera, Temuco, Chile.
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 Instituto de Ciencias Marinas y Limnológicas, Universidad Austral de Chile, Valdivia, Chile.
 
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Además ha sido demostrado que la envoltura nuclear po-see poros o complejos de poro los que se incrementan en medidaque la función celular es más activa (Hoelz
et al
., 2011).
Por otra parte, pero con directa relación a lo planteadoentre los complejos mecanismos mediante los cuales las célulasdarán origen a tejidos diferenciados responsables por diferentesfunciones en los organismos pluricelulares encontramos la espe-cialización, proceso que dirige a una célula hasta un estado dediferenciación morfológica y funcional y donde finaliza con ladiferenciación celular, apareciendo modificaciones celulares pro-fundas relacionadas con alteraciones cualitativa y cuantitativasde organelos y otros componentes celulares y donde, natural-mente, esta célula aumenta la eficiencia para ejecutar una fun-ción específica, mecanismos todos que están caracterizado porla activa expresión de ciertos genes que se traducen en la síntesisde una o más proteínas específicas (Paniagua
et al
., 2007).
Para corroborar los antecedentes expuestos contandola microscopía electrónica de transmisión que permitiómicrografiar células mamarias de rata mantenidas en cultivotanto en estadio de proliferación HC11 GM (activadas por elfactor de crecimiento epidérmico) como en estado de diferen-ciación HC11 IM (estimuladas con hormonas lactogénicas:hidrocortisona, prolactina e insulina) (Cornejo, 2004).
MATERIAL Y METODO
Células pertenecientes a los tipos HC11 GM y HC11IM
ueron obtenidas de sus respectivas cámaras de cultivo,centrifugadas por espacio de 50 segundos a 13.500 g en unasolución de NaCl 150 mM en tampón fosfato 0,1 M y el pelletrecuperado es procesado para microscopía electrónica de trans-misión, donde a las muestras se le adicionó una solución deglutaraldehído 2% en tampón fosfato 0,15 M, pH 7,2 y se man-tuvo a temperatura ambiente por 2 horas. Luego, fueron some-tidas a un lavado en solución de 6 g de NaCl y 73 g de sacaro-sa, disuelto en 1 litro de agua destilada.
La post-fijación se realizó con tetróxido de osmio1% disuelto en la solución antes descrita durante una hora a40 ºC y acetato de uranilo 0,5% por 18 h. Luego de lavadoel material fue deshidratado en concentraciones crecientesde acetona (30 a 100%) e incluido en Araldita 6005. Se ob-tuvieron cortes ultrafinos de aproximadamente 70 nm de gro-sor, los que fueron tratados con acetato de uranilo 2% du-rante 40 minutos y citrato de plomo 0,5% por 10 minutos.Las muestras fueron finalmente estudiadas ymicrofotografiadas en un microscopio electrónico PhillipsEM 300.
A partir de los bloques para microscopia electrónicafueron obtenidos cortes ultrafinos desde los cuales semicrografiaron las células HC11 GM y HC11 IM con un au-mento final de hasta 8.500 X. en un microscopio electrónicoPhillips EM 300, permitiendo realizar un estudio de las carac-terísticas ultraestructurales de las células mediante el uso deun Software análisis de imágenes SIGMA SCAN-PRO 5.0.A partir de las imágenes de los núcleos se procedió arealizar un conteo del número de poros presentes en las imá-genes de cada uno de los dos tipos celulares estudiados para locual se contabilizaron solo aquellos en que fue posible eviden-ciar su conexión tanto con el citoplasma como con el conteni-do nuclear. Adicionalmente se realizó la medición del períme-tro y el diámetro del núcleo con la finalidad de realizar unaestimación mas precisa del número de poros por unidad deárea considerando que se ha demostrado que existiría entre 2 a60 poros por cada mm
2
 para posteriormente, mediante la utili-zación de la ecuación matemática que permite calcular la su-perficie de una esfera (4
π
r
2
) se procedió a realizar una estima-ción teórica del número de poros por núcleo estudiado(Fahrenkrog & Aebi, 2003).
RESULTADOS
En laas primeras mediciones considerando las micro-grafías electrónicas hemos determinado claras diferenciasmorfológicas y en el número de poros nucleares que existenentre ambos tipos celulares situación que se evidencian enlas Figuras 1 y 2, y que se describen en las Tablas I y II.En este contexto, cuantificamos que el número deporos en primera dimensión perteneciente a la célula en pro-ceso de diferenciación es de 55 poros nucleares efectiva-mente mayor que el evaluado en la célula que experimentael mecanismo de proliferación que solamente alcanza a 16poros, existiendo claramente una diferencia significativa enel número de poros nucleares.Basado en los datos anteriores y usando los criteriosdescritos en Material y Método pareció importante determi-nar funcionalidad celular, realizar cálculos tendiente a pre-cisar, aunque aproximadamente, el número de poros nuclea-res que estas células poseen considerando esta vez su es-tructura tridimensional pudiendo cuantificar que HC11 GMcontiene alrededor de 153 poros en su membrana nuclear.De igual manera teniendo como base el método an-teriormente descrito y por el contrario fue calculado el nú-mero de poros nucleares para la célula en estadio de dife-renciación donde se cuantificaron 409.
CORNEJO, R.; GARRIDO, O.; JARAMILLO, R. ; VERGARA, E.; LERMANDA, P. & GATICA, Y.
 Poros nucleares y función celular en epitelio mamario.
 Int. J. Morphol., 33(4)
:169-1272, 2015.
 
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Tipo celularHC11 GMHC11 IM
 Número de poros (1ª D)1655Diámetro nuclear128Radio nuclear64Superficie nuclear (
µ
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)542201Perímetro nuclear (
µ
m)4727 Nº poros/unidad superfic.16/47= 0,34 poros/
µ
m55/27= 2,30 poros/
µ
mPoros/superficie0,34 x 542
µ
2
2,30 x 201
µ
2
Total poros/ célula153409
Fig. 1 Microfotografia electrónica de transmisión perteneciente acélula de glándula mamaria de rata en estadio de proliferación HC11GM (8.500 X).Fig. 2. Microfotografia electrónica de transmisión perteneciente acélula de glándula mamaria de rata en estadio de diferenciaciónHC11 IM (8.500 X).Tabla I. Evaluación deparámetros nucleares pertene-cientes a células mamarias en pro-ceso de proliferación y diferen-ciación.
Componente CelularHC11 GMHC11 IM
Eucromatina90%95%Heterocromatina10%5% Nucleolo11%10%
Tabla II. Fracciones volumétricas expresadas en porcen-taje correspondiente a tipo de cromatina y nucléolo eva-luadas en células mamarias en proceso de proliferacióny diferenciación.
DISCUSION
Estos resultados nos indican que las células en proce-so de diferenciación presentan un mayor número de poros nu-cleares en comparación de aquellas que se encuentran en fasede proliferación y ellos son consistentes con el estado de de-sarrollo en el que se encuentran las células HC11 IM las cua-les tienen activados los mecanismos propios de la diferencia-ción celular, es decir, sintetizando y exportando Beta Caseí-na, la principal proteína de la secreción láctea. y donde estasíntesis y secreción de leche genera, claro está, un evidenteincremento en los volúmenes celulares de ribosomas impli-cando el consiguiente transporte tanto del RNAr como igual-mente del RNAm desde el núcleo al citoplasma, portando lainformación génica para la síntesis de dicha proteína.De igual manera, esta célula en fase de diferenciaciónpresenta mayor volumen tanto de lisosomas como de filamen-tos intermediarios de citoqueratina, constituyente proteico delcitoesqueleto donde para la síntesis de ambos constituyentescitoplasmáticos se deberá trasladar al citosol desde el núcleolos respectivos genes para las correspondientes enzimaslisosomales y de la citoqueratina. De igual modo, pero enmenor escala es necesario también considerar en este trans-porte núcleo-citoplasmático los genes nucleares que codifi-carán en el citosol las distintas proteínas mitocondriales quecomplementaran la dotación proteica del organelo sumadas alas que codifica su propio material genético (Cornejo).A pesar de la información que aquí se proporciona esposible argumentar como conclusión que en relación a la di-námica de la membrana nuclear y sus poros en las etapas del
CORNEJO, R.; GARRIDO, O.; JARAMILLO, R. ; VERGARA, E.; LERMANDA, P. & GATICA, Y.
 Poros nucleares y función celular en epitelio mamario.
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