Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
Dewi Arum Sekti, Muhammad Fithrul Mubarok, Inna Armandani, Sendy Junedy dan
Edy Meiyanto*)
Cancer Chemoprevention Reserach Center
Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
ABSTRAK
Alkaloid fenantroindolisidin memiliki aktivitas sitotoksik terhadap beberapa sel kanker. Ekstrak
etanolik daun Awar-awar terbukti mampu meningkatkan aktivitas sitotoksik agen kemoterapi doxorubicin
pada sel MCF-7. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek ekstrak etanolik daun Awar-awar (Ficus
septica Burm. f.) terhadap pemacuan apoptosis sel kanker payudara MCF-7. Serbuk daun Awar-awar
diekstraksi dengan cara maserasi menggunakan etanol 70% kemudian dipekatkan untuk memperoleh
ekstrak etanolik daun Awar-awar. Penelusuran mekanisme molekuler efek sitotoksik ekstrak etanolik daun
Awar-awar dilakukan dengan pengamatan apoptosis dengan metode double staining dan ekspresi protein
Bcl-2 dengan metode imunositokimia. Pengamatan apoptosis dan ekspresi protein Bcl-2 pada aplikasi
tunggal ekstrak daun Awar-awar menunjukkan kemampuan ekstrak menginduksi apoptosis dan
menurunkan ekspresi protein Bcl-2. Hasil penelitian membuktikan bahwa ekstrak etanolik daun Awar-awar
berpotensi untuk sebagai agen ko-kemoterapi.
Kata kunci : Daun Awar-awar (F. septica Burm. f.), sel MCF-7, apoptosis, Bcl-2
ABSTRACT
Alkaloid fenantroindolisidin showed cytotoxic activity against several cancer cells. Ethanolic leaf
extract of Awar-awar proven to increase the cytotoxic activity of chemotherapy agent doxorubicin in MCF-7
cells. This study aims to determine the effect of Ethanolic leaf extract of Awar-awar in apoptosis induction of
breast cancer cells MCF-7.Awar-awar leaf powder was extracted by maceration using 70% ethanol and then
concentrated to obtain concentrated of Awar-awar. Apoptosis induction was examined by double staining
method and the expression of Bcl-2 protein was observed by immunohistochemistry method. Single
treatment of Awar-awar leaf extract showed the ability of extracts to induce apoptosis and downregulated
the expression of Bcl-2 protein. Ethanolic leaf extract of Awar-awar is potential as co-chemotherapeutic
agent.
Key words : Awar-awar (F. septica Burm. f.), MCF-7 cells, apoptosis, Bcl-2
Protein yang termasuk dalam keluarga Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Gadjah
proapoptosis adalah Bax, Bak, dan Bok sedangkan Mada pada bulan Januari 2008 - November 2008.
yang termasuk protein antiapoptosis adalah Bcl-2
dan Bcl-XL (Padanilam, 2003). Protein Bahan Penelitian
proapoptosis (Bax, Bak, Bok) dapat menginduksi Ekstrak etanolik daun Awar-awar (F.
pelepasan sitokrom C yang bersama Apaf-1 septica) yang diperoleh dengan jalan remaserasi
menginduksi apoptosis melalui aktivasi caspase dalam etanol 70% (Merck) serbuk kering daun
(Padanilam, 2003). Pengaturan apoptosis (terjadi yang diperoleh dari daerah Kalasan, Sleman. Sel
induksi atau blok) tergantung rasio relatif dari kanker payudara MCF-7 diperoleh dari koleksi
keluarga Bcl-2 dan dimerisasinya. Homodimer Bcl- Cancer Chemoprevention Research Center, Fakultas
2 akan menghambat apoptosis sedangkan Farmasi Universitas Gadjah Mada. Bahan kimia
homodimer Bax akan menginduksi apoptosis lainnya yang digunakan yakni: media penumbuh
(King, 2000). DMEM (Dulbecco’s modified Eangle’s medium)
Tanaman Awar-awar (Ficus septica Burm. f.) (Gibco) yang mengandung Fetal Bovine Serum
mengandung alkaloid fenantroindolisidin yang (FBS) 10% v/v (Gibco) dan penisillin-streptomisin
berpotensi sebagai agen kemopreventif (Staerk et 1 % v/v (Gibco), PBS (Phosphate buffer Saline),
al., 2002). Aktivitas sitotoksik komponen Tripsin-EDTA 2,5 %, SDS 10%, Pelarut DMSO
fenantroindolisidin menunjukkan nilai poten yang (Sigma), 100X Stock Solution yang mengandung 50
tinggi pada cell lines carcinoma KB-VI (multidrugs mg etidium bromide (Sigma) dan 15 mg akridin
resistance cell) dan KB-3-1(sensitive cell). Salah oranye (Sigma) yang dilarutkan dalam 1 ml etanol
satu komponen fenantroindolisidin berupa 6-O- 70% (Merck) dan selanjutnya ditambah akuades
desmethylantofine dari Tylophora tanakae 49 ml, 1X Working Solution yang mengandung 1 ml
mempunyai IC50 7 ± 3 nM untuk sel KB-3-1 dan 100X Stock solution yang diencerkan menjadi
IC50 10 ± 4 nM untuk sel KB-VI (Staerk et al., 1/100 dalam Phosphat Buffer Saline (PBS),
2002). Ficus septica Burm. f. terbukti mengandung Formalin (Merck), antibodi primer Bcl-2 (Dako),
alkaloid fenantroindolisin yang mempunyai dan aquades.
aktivitas sitotoksik terhadap sel kanker nasofaring
HONE-1 dan sel kanker lambung NUGC (Damu et Prosedur Penelitian
al., 2005). Ekstrak etanolik daun F. septica terbukti Pengamatan Apoptosis
memberikan efek sitotoksik terhadap sel kanker Sel MCF-7 dengan kepadatan 5 x 104
payudara T47D dengan IC 50 58,58 µg/ml sel/sumuran, ditanam pada coverslips dalam plate
(Nurcahya, 2007). Pada penelitian terbaru juga 24 (Nunc) sampai 50-60 % konfluen. Setelah itu,
terbukti bahwa ekstrak etanolik daun Awar-awar plate tersebut diberi perlakuan senyawa uji dan
memiliki efek sitotoksik terhadap sel MCF-7 selanjutnya diinkubasi dalam inkubator pada suhu
dengan nilai IC50 = 6 µg/mL (Mubarok et al., 2008). 37 oC selama 48 jam. Selanjutnya, medium diambil
Selain itu ekstrak etanolik daun Awar-awar juga dan plate yang berisi sel dicuci dengan PBS. Cover
mampu meningkatkan aktivitas sitotoksik slip (Nunc) yang memuat sel diangkat, lalu
doxorubicin terhadap sel MCF-7 (Mubarok et al., diletakkan diatas objek glass. Kemudian, pada
2008). cover slip tersebut ditambahkan 10 l 1X Working
Penelitian ini dilakukan untuk mengamati Solution akridin oranye-etidium bromida (AO - Et-
mekanisme molekuler yang memperantarai Br) (Sigma), dan didiamkan selama 5 menit.
aktivitas sitotoksik ekstrak Awar-awar pada sel Selanjutnya, cover slip segera diamati di bawah
MCF-7 melalui pengamatan induksi apoptosis dan mikroskop flouresensi (Zeiss MC 80) dan
pengaruh terhadap ekspresi protein Bcl-2. Hasil didokumentasikan dengan kamera digital (Canon
penelitian ini diharapkan dapat menjadi dasar Power Shoot A460, 5,0 mega pixels). Sel hidup
pengembangan terapi kombinasi agen kemoterapi akan berfluoresensi hijau (dengan akridin oranye)
dan agen kemopreventif dari bahan alami daun dan sel mati akan berfluoresensi oranye (dengan
Awar-awar. Dengan demikian diharapkan etidium bromida) (Wickenden et al., 2003).
prevalensi kegagalan pengobatan kanker dapat Pengamatan ekspresi protein dengan
menurun dan dapat meningkatkan kualitas hidup immunositokimia
masyarakat. Sel MCF-7 dengan kepadatan 5 x 104
sel/sumuran ditanam pada cover slips (Nunc)
METODOLOGI dalam plate 24 (Nunc) sampai 80 % konfluen.
Tempat dan Waktu Pelaksanaan Setelah itu, plate tersebut diberi perlakuan
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium senyawa uji dan diinkubasi dalam inkubator pada
Parasitologi Fakultas Kedokteran dan suhu 37 oC selama 15 jam. Selanjutnya, medium
Laboratorium Farmakognosi bagian Biologi diambil dan plate yang berisi sel dicuci dengan
Gambar 1. Pengamatan apoptosis pada aplikasi tunggal ekstrak etanolik daun Awar-awar.
Sel MCF-7 dengan kepadatan 5 x 104 sel/sumuran, ditanam pada coverslips dalam plate 24 sampai 50-60 % konfluen.
Setelah itu, plate tersebut diinkubasi dengan senyawa uji IC50 6µg/mL selama 48 jam. Selanjutnya, pengecatan
(double staining) dilakukan dengan AO - Et-Br. (A) Kontrol sel MCF-7, (B) aplikasi tunggal IC50 ekstrak.
Gambar 2. Pengamatan ekspresi protein Bcl-2 pada sel MCF-7 dengan aplikasi tunggal ekstrak etanolik
daun Awar-awar.
Sel MCF-7 dengan kepadatan 5 x 104 sel/sumuran ditanam pada coverslips dalam plate 24 sampai 80 % konfluen.
Setelah itu, plate tersebut diinkubasi dengan senyawa uji selama 15 jam kemudian dilakukan pengecatan
imunositokimia Bcl-2. Hasil pengamatan dibawah mikroskop cahaya. (a). Kontrol sel dengan antibodi spesifik (b).
Kontrol sel tanpa antibodi spesifik (c). Sel dengan inkubasi dengan ekstrak konsentrasi IC50 6µg/mL.
Kerusakan membran akibat terjadinya apoptosis apoptosis. NFκB dari downstream PI3K/Akt
menyebabkan fluoresensi hijau normal menjadi merupakan faktor transkripsi yang penting dalam
pudar dan berwarna oranye kemerahan karena transkripsi protein antiapoptosis seperti Bcl-2,
etidium bromida telah mampu masuk ke dalam IAP dan Bcl-XL (Simstein et al., 2003). Terjadinya
sel. penghambatan jalur PI3K/ Akt/NFκB dapat
Penelusuran jalur apoptosis pada menekan ekspresi protein Bcl-2. Keberadaan
penelitian ini melalui pengamatan ekspresi Bcl-2 ekstrak etanolik daun F. septica dapat
yang didapati menurun akibat perlakuan ekstrak menurunkan ekspresi protein Bcl-2, namun
dengan warna sitoplasma biru. Protein penurunan ekspresi tidak terlihat tajam dibanding
proapoptosis (Bax, Bak, Bok) dapat menginduksi dengan kontrol sel.
pelepasan sitokrom C yang bersama Apaf-1 Adanya aktivitas sitotoksik ekstrak etanolik
menginduksi apoptosis melalui aktivasi caspase, daun F. septica dengan nilai poten yang tinggi
namun keberadaan Bcl-2 sebagai protein serta kemampuan ekstrak etanolik daun F. septica
antiapoptosis beraksi kebalikan (Padanilam, menurunkan overekspresi protein Bcl-2
2003). Hal ini semakin meyakinkan bahwa menunjukkan bahwa sel kanker payudara MCF-7
ekstrak etanolik daun Awar-awar berpotensi tidak resisten terhadap ekstrak etanolik daun F.
sebagai agen ko-kemoterapi yang dapat septica. Penekanan ekspresi protein Bcl-2 dapat
meningkatkan aktivitas sitotoksik sel kanker menyebabkan terjadinya induksi apoptosis karena
payudara terhadap agen kemoterapi melalui pelepasan sitokrom c oleh mitokondria menjadi
pemacuan apoptosis dengan jalur menurunkan tidak terhambat yang selanjutnya dapat
ekspresi protein Bcl-2. mengaktivasi jalur caspase. Adanya delesi gen
Protein Bcl-2 merupakan salah satu jenis CASP-3 menyebabkan MCF-7 mengalami
protein anti apoptosis yang terlibat dalam proses
apoptosis melalui aktivasi sekuen caspase 6 dan 7 proteins are molecular targets for
dan tidak melalui caspase 3 (Liang et al., 2001). chemoprevention of MNNG-induced gastric
Proses apoptosis tetap terlihat ada, carcinogenesis by ethanolic Ocimum
meskipun penekanan ekspresi protein Bcl-2 oleh sanctum leaf extract, Singapore Med J, 48
ekstrak etanolik daun F. septica masih rendah. (7), 645–651.
Apoptosis yang terjadi kemungkinan juga McGahon, A. J., Martin, S. J., Bissonnette, R. P.,
melibatkan adanya peningkatan ekspresi protein Mahboubi, M., Shi, Y., Mogil, R. J., Nishioka,
pro apoptosis seperti Bad, Bax, Bak (Ricci and W. K., and Green, D. R., 1995, The End of the
Zong, 2006). Oleh karena itu, masih (Cell) Line: Methods for the Study of
membutuhkan penelitian lebih lanjut untuk Apoptosis in Vitro, Cell Death, Academic
mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanolik Press, San Diego.
daun F. septica terhadap ekspresi protein pro Mubarok M.F., Sekti Dewi A., and Ainun W., 2008,
apoptosis (Bax dan Bak). Pengembangan Peningkatan Aktivitas Sitotoksik
penelitian diarahkan untuk mengembangkan Doxorubicin terhadap Sel MCF-7
ekstrak etanolik daun F. septica menjadi sediaan menggunakan Ekstrak Etanolik Daun Awar-
fitofarmaka sebagai agen kemopreventif yang awar (Ficus septic Burm. f.), Prosiding
efektif, aman dan aplikatif dimasyarakat. KONGRES ILMIAH XVI ISFI 2008. ISBN : 978-
979-95107-6-2. Penerbit : Ikatan Sarjana
KESIMPULAN Farmasi Indonesia
Berdasarkan hasil penelitian yang telah Nurcahya, B. M., 2007, Efek Antiproliferatif Ekstrak
dilakukan, menunjukkan bahwa ekstrak etanolik Etanolik Daun Awar-Awar (Ficus septica
daun Awar-awar (Ficus septica Burm.f.) mampu Burm. f.) terhadap Sel Kanker Payudara
menginduksi apoptosis pada sel MCF-7 melalui T47D, Skripsi, Fakultas Farmasi UGM,
penekanan ekspresi Bcl-2. Yogyakarta
Padanilam, B.J., 2003, Cell Death Induced by Acute
UCAPAN TERIMA KASIH Renal Injury: A Perspective on the
Ucapan terima kasih disampaikan oleh Contributions of Apoptosis dan Necrosis, Am
penulis kepada DP2M DIKTI 2008 yang telah J Physiol Renal Physiol, 284, F608–F627.
membantu mendanai penelitian ini. Ricci, M.S. and Zhong, W.X., 2006, Chemoterapeutic
Appoaches for Targeting Cell Death
DAFTAR PUSTAKA Pathways, The Oncologist, 11, 342-357.
Damu, Amooru G., Kuo, Ping-Chung, Shi, Lian Shi, Simstein, R., Burow, M., Parker, A., Weldon, C., and
Li, Chia-Ying, Kuoh, Chang-Sheng, Wu, Pei- Beckman, B., 2003, Apoptosis,
Lin, Wu, and Tian-Shung, 2005, Chemoresistance and Breast Cancer :
Phenanthroindolizidine Alkaloids from The Insights from the MCF-7 Cell Model System,
Stems of Ficus septica, J. Nat. Prod., 68, Exp.Biol.Med., 228, 995-1003.
1071-1075. Staerk, D, Lykkeberg,A.K, Christensen, J,
nd Budnik,B.A., Abe, F. and Jaroszewski,J.W.,
King, R.J.B., 2000, Cancer Biologi, 2 edition, 5, 2002, In Vitro Cytotoxic Activity of
Pearson Education Limited, London. Phenanthroindolizidine Alkaloids from
Liang, Y., Yan, C., and Schor, N.F., 2001, Apoptosis Cynanchum vincetoxicum dan Tylophora
in The Absence of Caspase 3, Oncogene, 20, tanakae against Drug-Sensitive dan
6570-6578. Multidrug Resistant Cancer Cells, J. Nat.
Manikdanan P., Vidjaya Letchoumy P., Prathiba D., Prood, 65, 1299-1302.
and Nagini S., 2007, Proliferation,
angiogenesis dan apoptosis-associated