Microscopia

El microscopio que data de finales del siglo XVI, es un instrumento óptico destinado a
observar de cerca objetos extremadamente diminutos, la combinación de sus lentes produce
el efecto de lo que se mira, aparezca con dimensiones extraordinariamente aumentadas
haciéndose perceptible lo que no lo es a simple vista.
 Objetivos
Determinar el estudio de la microscopia
Conocer las diferentes clases de microscopio
Determinar las partes del microscopio
Microscopia óptica:

 Microscopio óptico compuesto.-

Sistema óptico
OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
Sistema mecánico
SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular,
REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.
TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que
consigue el enfoque correcto, nítido

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Manejo y uso del Microscopio Óptico
Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina
completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería
estar en esas condiciones.
 Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
 Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10
aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.
 Para realizar el enfoque:
 Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo
macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se
corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o
ambos.
 Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el
micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
 Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de
objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo
anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca
distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances:
incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con
aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de
inmersión.
 Empleo del objetivo de inmersión:
 Bajar totalmente la platina.
 Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la
zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
 Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el
de x40.
 Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
 Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
 Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la
gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.

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 Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de
inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de
accidente es muy grande.
 Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a
usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar
otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
 Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el
objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la
preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de
observación.
 Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.
Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.
 Microscopio de campo claro.-
Consiste en una fuente luminosa, un condensador que enfoca los rayos de luz sobre la
muestra una platina sobre la cual se coloca la muestra, un objetivo y un ocular a través del
cual se puede observar directamente el espécimen.
La utilidad del microscopio óptico reside en su capacidad de magnificación y lo que es más
importante, su capacidad de resolver detalles estructurales. El poder de resolución es la
capacidad de una lente o sistema óptico de producir imágenes separadas de objetos que se
encuentran muy próximos.
 Microscopio de contraste de fase.-
Permite observar células y tejidos sin colorear y por eso resulta especialmente útil para el
examen de células vivas y cortes gruesos de material plástico no coloreados.
Existen pequeñas diferencias del índice de refracción en diferentes partes de la célula y en
distintas partes de una muestra de tejido. La luz que pasa por regiones de mayor índice de
refracción experimenta una deflexión y queda fuera de fase con respecto al haz principal de
las ondas de luz.
Modificaciones del microscopio de contraste de fase son:
_Microscopio de interferencia: Permite también la cuantificación de la masa de un tejido
_Microscopio de interferencia diferencial: Útil especialmente para estudiar las
propiedades de superficie de las células y otros elementos biológicos
 Microscopio de fluorescencia.-
Permite detectar moléculas que fluoresceina, es decir, que emiten luz de longitud de onda,
que se encuentra dentro del espectro visible, cuando son expuestas a la luz ultravioleta. Se
usa este microscopio para revelar moléculas fluorescentes naturales como la vitamina A,
pero como este tipo de moléculas no es numeroso, su aplicación más difundida es para
revelar una fluorescencia agregada a sustancia, como en el caso de la detección de
antígenos o anticuerpos en procedimientos de coloración inmunecito química.
 Microscopio de barrido con focal.-
Es un sistema relativamente nuevo se usa para estudiar la estructura de sustancias
biológicas.
En este microscopio se utiliza un rayo láser de iluminación que es fuertemente convergente
y por lo tanto produce un punto de barrido muy poco profundo. La luz que emerge del
punto es dirigida a un tubo foto multiplicado, donde es analizada. Se utiliza un sistema de
espejos para mover el rayo láser a través del espécimen iluminando un solo punto por vez.

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Se registren los datos de cada punto y se guardan en una computadora, luego se puede
llevar la información a un monitor de alta resolución para crear una imagen visual. Su
ventaja es su capacidad de tomar imágenes de la muestra en cortes ópticos muy finos.
 Microscopio de luz ultravioleta.-
Se utiliza una fuente de luz ultravioleta y depende de la absorción de esa luz por las
moléculas de la muestra. Sus resultados se registran fotográficamente.
No es posible examinar en forma directa el espécimen en el ocular, ya que la luz
ultravioleta daña la retina.
Este método sirve para detectar ácidos nucleicos, específicamente bases puricas y
pirimidicas del nucleótido.
También es útil para detectar proteínas que contienen ciertos aminoácidos.
 Microscopio de polarización.-
Es una simple modificación del microscopio óptico, pero el espécimen es atravesado por
luz paralizada y se usa otro polarizador que se hace rotar para detectar la orientación
molecular en muestra de tejidos.
Microscopía Electrónica:
 Microscopio electrónico de transmisión (MET).-
Se utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz visible para producir una imagen.
Los electrones deben pasar a través de la muestra y chocar luego con la placa fotográfica.
La formación de la imagen en el microscopio electrónico depende del hecho de que algunos
electrones no atraviesan el espécimen y en consecuencia, no llegan a la placa fotográfica,
sino que experimentan una deflexión provocada por sustancias de alta densidad que
encuentran normalmente en la muestra o han sido agregadas a ellas durante el proceso de
fijación y tinción.
 Microscopio electrónico de barrido.-
En este los electrones no atraviesan la muestra en el proceso de formación de imágenes. En
cambio, se explora la superficie de la muestra desplazando un haz de electrones, estos, al
reflejarse de la superficie son recogidos por un detector y procesados de manera tal que
puede verse en imagen tridimensional en una pantalla de televisión.
Partes de un microscopio:
1.- Pie o base; da estabilidad
2.- Columna; sirve para sostener las diferentes partes
3.- Platina; allí se coloca el objeto que se quiere estudiar
4.- Carro; colocado sobre la platina permite desplazar la preparación
5.- Brazo; sirve para tomar el microscopio y se encuentran dos tornillos reguladores
6.- El tornillo macrométrico; para efectuar movimientos verticales grandes que permiten
un enfoque rápido
7.- El tornillo micrométrico; permite movimientos lentos para afinar y precisar el enfoque
8.- El tubo; esta unido al brazo, en su parte superior hay un orificio donde se coloca el
ocular y en la parte inferior se encuentra el revolver
9.- Revólver; donde van enroscados los objetivos
10.- Ocular, está en la parte superior del tubo, cumple la función de aumentar la imagen
11.- Objetivos; son una serie de lentes montados sobre cilíndricos de diferentes tamaños
que se enroscan en el revólver
12.- Espejo; permite dirigir la luz ya sea natural o artificial
13.- Condensador; es un sistema de lentes situado debajo de la platina que permite variar
la iluminación del campo y concentrar la luz sobre el objeto en observación
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14.- Diafragma o iris; es un disco situado en la parte inferior del condensador que regula la
cantidad de luz
Mantenimiento y precauciones
 Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de
observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la
misma y dejarlo cubierto con su funda.
 Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda
para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se
debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
 Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente
con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
 No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
 Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el
objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable).
En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el
aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de
alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se
aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.
 No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico,
platina, revólver y condensador).
 El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo
agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del
ocular.
 Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido,
secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.
 Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica
y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.
AUMENTO TOTAL DEL MICROSCOPIO:
Valor del objetivo por el valor del ocular Ej Objetivo 40X Ocular 10X Total: 400
ACEITE DE INMERSIÓN
Aceite de cedro: Concentra el haz de luz

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 Anticoagulantes

Sangre total, plasma y suero

Para empezar debemos distinguir los distintos tipos de muestras de sangre.
Tenemos: Sangre entera o total, plasma y suero.
Sangre entera: Es sangre a la que se le ha adicionado un anticoagulante y no se
ha centrifugado.
Plasma: Es sangre a la que se le ha adicionado un anticoagulante y se ha
centrifugado, reservándose la capa superior amarillenta (sobrenadante),
denominada plasma.
Suero: Es sangre sin anticoagulante que se ha centrifugado, reservándose la capa
superior amarillenta (sobrenadante), denominada suero.

Anticoagulantes
Son sustancias, generalmente sales, que contribuyen a inhibir la hemostasia, es
decir a evitar la coagulación de la sangre.

OXALATO, forma de sal sódica, potásica o amónica, actúan precipitando los iones
calcio. El oxalato altera las concentraciones de los componentes del plasma y
mientras más concentrado se utilice, mayor es la alteración, por ello no debe
utilizarse por encima de los 3 mg/ml de sangre,

EDTA (C10H16N2O8) o sal disódica, dipotásica o tripotásica del ácido

etilendiaminotetraacético. Actúa por efecto quelante sobre el ión calcio (Ca2+) lo
que impide la formación de los complejos procoagulantes. Util para recuentos
celulares, sobre todo en autoanalizador, tiene la ventaja de permitir la realización
del hematocrito y de frotis sanguíneo hasta dos horas después de la extracción de
la muestra, también impide la aglutinación de las plaquetas. Se utiliza, en dilución
1:50 Ejemplo 0,05 ml (1 Gota) EDTA + 2,50 ml a 5 ml de sangre para las
siguientes determinaciones: Hemograma, Hematocrito, Reticulocitos, Hemoglobina
total y glicosilada, Grupo y Rh

CITRATO TRISÓDICO (C6H5O7Na3) impide que el calcio se ionice, forma

complejos con el calcio evitando la coagulación. Se utiliza para las siguientes
determinaciones:
VSG, dilución 1:4 Ejemplo: 0,50 ml de citrato+2,0 ml sangre
Pruebas relacionadas con la coagulación: ya sea, Tiempo de Protrombina, KPTT –
Tiempo parcial de tromboplastina, fibrinógeno y factores de coagulación, dímero
D. Dilución 1:9 Ejemplo 0,5 ml de citrato +4,5 ml sangre ó 2 gts + 1,5 ml de
sangre

HEPARINA SÓDICA. HEPARINA DE LITIO, puede ser potásica ó de amonio evita

que la protrombina se transforme en trombina. Estructuralmente es un
mucopolisacárido ácido con grupos sulfato, no adecuada para muestras a ser
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examinadas al microscopio luego de tinción, ya que altera notablemente las
coloraciónes obtenidas.

Se emplea en gasometría arterial Puede ser usada para las determinaciones

químicas: Glucemia, urea, ácido urico, calcemia fosfatemia, magnesio, sideremia
y otros.

FLUORURO: Inhibe enzimas, evitando el metabolismo de algunas sustancias

sanguíneas. Se usa en algunos laboratorios para glucemias que van a tardar en
procesarse, ya que los glóbulos rojos consumen glucosa, variando los resultados.

ACD, mezcla de compuestos (Ácido citrico Citrato y Dextrosa en una proporción

de 0.9, 2 y 2 g respectivamente en 120 ml de agua destilada) se usa en bancos de
sangre para conservar las unidades de sangre y estudios metabólicos
eritrocitarios. Puede resultar muy útil en inmunologia para
preservar antígenos de glóbulos rojos, cuando se requieren estudiar. Preserva
sangre hasta por 21 días
A.P.D.A (Citrato - Fosfato - Dextrosa - Adenina)
Anticoagulante en transfusiones sanguíneas, llega a preservar la sangre por 35
días, tiene aditivos que permiten mejor la conservación de células sanguíneas

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