INGENIERIA AMBIENTAL

I. INTRODUCCIÓN

El aislamientos de cultivos puros ha sido el fundamento de la práctica microbiológica --

--------para examinar y cultivar muestras en busca de microorganismos ya sea en
agua, suelos, alimentos, ambiente y en el hombre. Identificar con certeza las especies
involucradas y llevar a cabo la prueba.
Gracias el metabolismo bacteriano pudieron entenderse mejor que requerimientos
nutricionales de las bacterias, obteniéndose medios de cultivo que permitan el
crecimiento rápido y abundante de las bacterias.
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es
observar su crecimiento en aguas residuales. La muestra de agua en el que crecen los
microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el
Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las
bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una
serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno
adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo
debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento
de todo microorganismo contaminante. La mayoría de las bacterias patógenas
requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del
cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de
extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. El agar es un
elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se
licua completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a
40grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las
bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.

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II. OBJETIVOS:
- Deterinacion de coliformes totales y fecales en la planta de tratamiento de
EPSASA.
- Describir el método de ensayo para la numeración de Coliformes totales por
técnica de Filtración de membrana
- Identificar el uso de medios de cultivo de acuerdo al microorganismo a
estudiar.
- Interiorizar en el reconocimiento de los materiales empleados en la siembra
de microorganismos.
- Determinar si en las aguas se encuentran coliformes totales o fecales.
III. FUNDAMENTO TEÓRICO:

3.1. COLIFORMES TOTALES Y FECALES

La denominación genérica coliformes designa a un grupo de especies
bacterianas que tienen ciertas características bioquímicas en común e
importancia relevante como indicadores de contaminación del agua y
los alimentos.
Coliforme significa con forma de coli, refiriéndose a la bacteria
principal del grupo, la Escherichia coli, descubierta por el bacteriólogo
alemán Theodor von Escherich en 1860. Von Escherich la bautizó como
bacterium coli ("bacteria del intestino", del griego κολον, kolon,
"intestino"). Con posterioridad, la microbiología sistemática nombraría el
género Escherichia en honor a su descubridor
Los coliformes totales son las Enterobacteriaceae lactosa-
positivas y constituyen un grupo de bacterias que se definen más por
las pruebas usadas para su aislamiento que por criterios taxonómicos.
Pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y se caracterizan por su
capacidad para fermentar la lactosa con producción de ácido y gas, más
o menos rápidamente, en un periodo de 48 horas y con una
temperatura de incubación comprendida entre 30-37ºC. Son bacilos
gramnegativos, aerobios y anaerobios facultativos, no esporulados.
Del grupo coliforme forman parte de varios géneros:
Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter, etc. Se encuentran en
el intestino del hombre y de los animales, pero también en otros
ambientes: agua, suelo, plantas, cáscara de huevo, etc.

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Dentro del grupo de los coliformes totales existe un subgrupo que es el

de los Coliformes fecales. Los coliformes fecales son coliformes totales
que además fermentan la lactosa con producción de ácido y gas en 24-
48 horas a temperaturas comprendidas entre 44 y 45ºC en presencia de
sales biliares. Los coliformes fecales comprenden principalmente
Escherichia coli y algunas cepas de Enterobacter y Klebsiella.
Su origen es principalmente fecal y por esos se consideran
índices de contaminación fecal. Pero el verdadero índice de
contaminación fecal es Escherichia coli tipo I ya que su origen fecal es
seguro.

3.2. CARACTERISTICAS ESTRUCTURALES

Las bacterias coliformes son células procariotas. A diferencia de las
células de organismos más complejos, las células procarióticas carecen
de un núcleo verdadero y otros orgánulos unidos a la membrana. A
nivel interno, los coliformes consisten en el citoplasma, ADN, ARN y usa
ribosomas para fabricar proteínas. Una envoltura celular rodea a las
estructuras internas y consta de una membrana celular interna, una
pared celular y una cápsula exterior. Los coliformes tienen flagelos que
utilizan para desplazarse. Algunas cepas tienen una superficie con
cerdas llamadas fimbrias que les permiten adherirse a las células y las
superficies de otros.

3.3. CARACTERISCTICAS BIOQUIMICAS

Las coliformes fermentan la lactosa y producen gas durante el proceso.
Son organismos anaerobios facultativos, lo que significa que tienen la
capacidad de prosperar con ejercicios aeróbicos o de respiración
anaerobia. Cuando el ambiente carece del oxígeno necesario para la
respiración aeróbica, obtienen energía mediante la transición a la
respiración anaerobia. Todos los coliformes producen sustancias
tóxicas, llamadas endotoxinas, que se liberan cuando se desintegra el
organismo
El grupo contempla a todas las bacterias entéricas que se caracterizan
por tener las siguientes propiedades bioquímicas:

 Ser aerobias o anaerobias facultativas.

 Ser bacilos Gram negativos.

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 No ser esporógenas
 Fermentadoras de lactosa
 Productoras de gas

3.4. HABITAD DEL GRUPO COLIFORME

Las bacterias de este género se encuentran principalmente en el
intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, es decir,
homeotermos, pero también ampliamente distribuidas en la naturaleza,
especialmente en suelos, semillas y vegetales.
Los coliformes se introducen en gran número al medio ambiente por las
heces de humanos y animales. Por tal motivo suele deducirse la
mayoría de los coliformes que se encuentran en el ambiente son de
origen fecal. Sin embargo, aún existen muchos coliformes de vida libre.

3.5. COLIFORMES COMO INDICADORES

Tradicionalmente se los ha considerado como indicadores de
contaminación fecal en el control de calidad del agua destinada al
consumo humano en razón de que, en los medios acuáticos, los
coliformes son más resistentes que las bacterias patógenas intestinales
y porque su origen es principalmente fecal. Por tanto, su ausencia
indica que el agua es bacteriológicamente segura.
Asimismo, su número en el agua es directamente e inversamente
proporcional al grado de contaminación fecal; mientras más coliformes
se aislan del agua, mayor es la gravedad de la descarga de heces.

3.6. BACTERIAS QUE INTEGRAN EL GRUPO

El grupo de los coliformes incluye bacterias en forma de bacilo, gram
negativos, con las siguientes propiedades bioquímicas: oxidasa
negativo y capacidad de fermentar lactosa, con producción de gas en
48 horas a una temperatura de 37 °C.

El grupo coliforme está formado por los siguientes géneros:

 Escherichia
 Klebsiella
 Enterobacter

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3.7. COLIFORMES FECALES

Las bacterias coliformes fecales forman parte del total del grupo
coliforme. Son definidas como bacilos gram-negativos, no esporulados
que fermentan la lactosa con producción de ácido y gas a 44 °C dentro
de las 24 Y 48 horas. La mayor especie en el grupo de coliforme fecal
es el Escherichia coli.
La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de
que el suministro de agua puede estar contaminado con aguas negras u
otro tipo de desechos en descomposición. Generalmente, las bacterias
coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial
del agua o en los sedimentos del fondo.
Los niveles recomendados de bacterias coliformes fecales son:

 Agua potable: 0 colonias por 100 ml de la muestra de agua.

 Natación: menos de 200 colonias por 100 ml de la muestra de agua.
 Navegar/Pescar: menos de 1,000 colonias por 100 ml de la muestra
de agua.

IV. ESCHERICHIA COLI

La Escherichia coli, también conocida por la abreviación de su nombre, E. coli,
es quizás el organismo procariota más estudiado por el ser humano. Se trata
de una enterobacteria que se encuentra generalmente en los intestinos
animales, y por ende en las aguas negras, pero se puede encontrar en todos
lados, dado que es un organismo ubicuo. Fue descrita por primera vez en 1885
por Theodore von Escherich, bacteriólogo alemán, quien la denominó
Bacterium coli. Posteriormente la taxonomía le adjudicó el nombre de
Escherichia coli, en honor a su descubridor.
Esta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del
proceso digestivo, además de producir las vitaminas B y K. Es un bacilo que
reacciona negativamente a la tinción de Gram es anaerobio facultativo, móvil
por flagelos peritricos no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la
lactosa y su prueba de IMVIC es ++--.

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Es una bacteria utilizada frecuentemente en experimentos de genética y

biología molecular.

4.1. FUNCION NORMAL

La Escherichia coli, en su hábitat natural, vive en los intestinos de la
mayor parte de los mamíferos sanos. Es el principal organismo
anaerobio facultativo del sistema digestivo. En individuos sanos, es
decir, si la bacteria no adquiere elementos genéticos que codifican
factores virulentos, la bacteria actúa como un comensal formando parte
de la flora intestinal y ayudando así a la absorción de nutrientes. En
humanos, la Escherichia coli coloniza el tracto gastrointestinal de un
neonato adhiriéndose a las mucosidades del intestino grueso en el
plazo de 48 horas después de la primera comida. Tiene un ancho
variable.

4.2. PATOGENIA
La Escherichia coli puede causar infecciones intestinales y extra
intestinales generalmente graves, tales como infecciones del aparato
excretor, vías urinarias, cistitis, Uretritis, meningitis, peritonitis, mastitis,
septicemia y neumonía Gram-negativa.

4.2.1 VIRULENCIA
La Escherichia coli está dividida por sus propiedades virulentas,
pudiendo causar diarrea en humanos y otros animales. Otras
cepas causan diarreas hemorrágicas por virtud de su
agresividad, patogenicidad y toxicidad. En muchos países ya
hubo casos de muerte por esta bacteria. Generalmente pasa en
niños entre 1 año y 8 años. Causado generalmente por la

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contaminación de alimentos, y posterior mala cocción de los

mismos, es decir, a temperaturas internas y externas menores
de 70 °C.

4.2.2 INFECCIONES URINARIAS

Son más comunes en mujeres por la corta longitud de la uretra
(25 a 50 mm), en comparación con los hombres (unos 15 cm).
Entre los ancianos, las infecciones urinarias tienden a ser de la
misma proporción entre hombres y mujeres. Debido a que la
bacteria invariablemente entra al tracto urinario por la uretra los
malos hábitos sanitarios pueden predisponer a una infección, sin
embargo, otros factores cobran importancia, como el embarazo,
hipertrofia benigna o maligna de próstata, y en muchos casos el
evento iniciante de la infección es desconocido. Aunque las
infecciones ascendentes son las causantes de infecciones del
tracto urinario bajo y cistitis, no es necesariamente esta la causa
de infecciones superiores como la pielonefritis, que puede tener
origen hematógeno.

4.3. TRATAMIENTO
El uso de antibióticos es poco eficaz y casi no se prescribe. Para la
diarrea se sugiere el consumo de abundante líquido y evitar la
deshidratación. Cuando una persona presenta diarrea no debe ir a
trabajar o asistir a lugares públicos para evitar el contagio masivo.
En algunas patologías como la pielonefritis hay que considerar el uso de
alguna cefalosporina endovenosa.

4.4. CALSIFICACION
Se distinguen seis cepas según su capacidad patógena, -también se les
puede llamar virotipos-: Escherichia coli enteropatogénica (ECEP),
enterotoxigénica (ECET), enteroinvasiva (ECEI), enterohemorrágica
(ECEH), enteroagregativa (ECEA) y de adherencia difusa (ECAD).
4.4.1. Escherichia coli enteropatogénica (ECEP) Esta cepa causa
diarrea en humanos, conejos, perros y caballos, al igual que la
enterotoxigénica, pero la etiología y los mecanismos moleculares
de colonización son diferentes. Carece de fimbrias y no produce
las toxinas ST y LT, pero utilizan la proteína intimina, una

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adhesina, para adherirse a las células intestinales. Este virotipo

posee una serie de factores de virulencia que son similares a los
que se encuentran en Shigella, como la toxina shiga. La
adherencia a la mucosa intestinal causa una reordenación de la
actina en la célula hospedante, que induce una deformación
significativa. Estas bacterias son moderadamente invasivas:
penetran en las células hospedadoras provocando una
respuesta inflamatoria. La causa principal de diarrea en los
afectados por esta cepa son seguramente los cambios
provocados en la estructura de las células intestinales.
4.4.2. Escherichia coli enterotoxigénica (ECET) Se parece mucho a
Vibrio cholerae, se adhiere a la mucosa del intestino delgado, no
la invade, y elabora toxinas que producen diarrea. No hay
cambios histológicos en las células de la mucosa y muy poca
inflamación. Produce diarrea no sanguinolenta en niños y
adultos, sobre todo en países en vías de desarrollo, aunque los
desarrollados también se ven afectados. Emplea varias toxinas,
incluyendo la enterotoxina resistente al calor y la enterotoxina
termolábil.
4.4.3. Escherichia coli enteroinvasiva (ECEI) Es inmóvil, no fermenta
la lactosa. Invade el epitelio intestinal causando diarrea
sanguinolenta en niños y adultos. Libera el calcio en grandes
cantidades impidiendo la solidificación ósea, produciendo artritis
y en algunos casos arterioesclerosis. Es una de las E. coli que
causa más daño debido a la invasión que produce en el epitelio
intestinal.
4.4.4. Escherichia coli enterohemorragica (ECEH) La convención
internacional de nomenclatura de patógenos ha recomendado el
uso de STEC (Shiga Toxin Escherichia coli) para este grupo,
debido a que estas bacterias producen una toxina citotóxica para
células Vero de cultivo de similaridad estructural a la toxina
producida por Shigella dysenteriae. Las STEC producen
verotoxinas que actúan en el colon. Sus síntomas son: primero
colitis hemorrágica, luego síndrome urémico hemolítico (lo
anterior más afección del riñón, posible entrada en coma y
muerte), y por último, púrpura trombocitopénica trombótica (lo de
antes más afección del sistema nervioso central). Esta cepa no

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fermenta el sorbitol y posee un fago, donde se encuentran

codificadas las verotoxinas, también llamadas "Toxinas Shiga",
no posee una fimbria formadora de mechones, en vez de esto
posee una fimbria polar larga que usa para adherencia.
4.4.5. Escherichia coli enteroagregativa (ECEA) Sólo encontrada en
humanos. Son llamadas enteroagregativas porque tienen
fimbrias con las que aglutinan células en los cultivos de tejidos.
Se unen a la mucosa intestinal causando diarrea acuosa sin
fiebre. No son invasivas. Producen hemolisina y una
enterotoxina ST similar a la de las enterotoxigénicas. se le
asocian dos toxinas:
 toxina termoestable enteroagregante (EAST)
 toxina codificada por plasmidos (PET)
4.4.6. Escrerichia coli adherencia difusa (ECAD) Se adhiere a la
totalidad de la superficie de las células epiteliales y
habitualmente causa enfermedad en niños inmunológicamente
no desarrollados o malnutridos. No se ha demostrado que pueda
causar diarrea en niños mayores de un año de edad, ni en
adultos y ancianos.

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V. MATERIALES A UTILIZARSE EN LA TÉCNICA O MÉTODO ESTANDAR

FILTRO DE MEMBRANA

 MUESTRA

 MICROPIPETA

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 PLACAS PETRI

 UNIDAD DE FILTRACION

 FILTROS MEMBRANA

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 ALMOHADILLAS ABSORBENTES

 PINZAS DE PUNTA PLANA

 MEDIO M ENDO

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 MEDIO MFC

5.1. MEDIOS DE CULTIVO

5.1.1. Agar M ENDO LES

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad,
está dada por las sales biliares y el verde brillante, que inhiben el
desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los
coliformes y el desarrollo invasor de proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentación de lactosa, y a la
formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio.
Pocos organismos fermentadores de lactosa capaces de
desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador
de PH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo
rojizo.
Salmonella shigella y otros microorganismos no fermentadores
de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen
colonias transparentes la producción de ácido sulfhídrico se
evidencia como colonias con centro negro debido a la formación
de sulfuro de hierro.
5.1.2. Agar MFC
El agar mFC contiene agentes selectivos y diferenciales. Ácido
rosólico inhibe el crecimiento bacteriano en general, excepto
para coliformes fecales. Las sales biliares inhiben las bacterias
no entéricas. Azul de anilina indica la capacidad de coliformes
fecales de fermentar la lactosa a ácido que causa un cambio de
pH en el medio.

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La utilización de lactosa (color azul) es la base para la

identificación de coliformes fecales.
VI. PROCEDIMIENTO EN EL LABORATORIO:

1. PREPARACION DE LA MUESTRA
 Seleccionar el tamaño (volumen) de la muestra, el cual
dependerá de la densidad bacteriana que se desee esperar, en
el caso de las muestras de agua potable, estará limitada por el
grado de turbidez o por el crecimiento de no Coliformes en el
medio.
 El volumen ideal de muestra, es aquel que nos proporciona un
recuento de 20 a 80 colonias de Coliformes y no más de 200
colonias de todos los tipos. En el caso de agua potable se
recomienda filtrar volúmenes de 100 - 500 mL o muestras
duplicadas de volúmenes pequeños (50 ó 25 mL). Para otros
tipos de agua se procede a realizar las respectivas diluciones.
 Las muestras deben recolectarse en frascos estériles de 500
mL, de boca ancha con tapa rosca. En el caso que es agua
tratada y tiene cloro residual, los frascos deben contener tío
sulfato de sodio al 3% (0,25 mL por cada 250 mL de muestra).
 En el caso que se filtre volúmenes de 20 mL se debe añadir 10
mL de agua de dilución estéril al embudo antes de la filtración,
permitiendo de esta manera aumentar el volumen de la muestra
y una mejor dispersión uniforme de la muestra en la superficie
de la membrana.
 Las placas de agar Endo Les, deben atemperarse (colocar las
placas a 35ºC), antes de iniciar el proceso de análisis, así
mismo, marcar cada placa con el código de la muestra, fecha y
dilución.
 Preparar las diluciones correspondientes de la muestra, se debe
agitar vigorosamente aproximadamente 25 veces, para asegurar
una buena homogenización, transferir con una pipeta estéril un
volumen de 10 mL de la muestra a un frasco con 90 ± 2 mL de
agua de dilución. De esta manera se tiene la primera dilución
(10-1).
 Homogenizar el frasco que contiene la dilución (10-1), con una
nueva pipeta estéril transferir 10 mL a un nuevo frasco de

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dilución, teniendo así la segunda dilución (10-2). Continuar con

este proceso hasta realizar todas las diluciones del caso,
dependiendo del grado de contaminación de la muestra.
 Ordenar los frascos conteniendo las diluciones, en secuencia
decreciente de concentración (de mayor a menor dilución),
cuando se trabaja con diluciones se empieza con la mas diluida.

2. PREPARACION DEL MEDIO

 Agar M ENDO LES (coliformes totales) Suspender 45.5g de

del polvo deshidratado en un litro de agua destilada, mezclar
vigorosamente. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir
durante 1 minuto para disolver completamente los ingredientes.
Esterilizar a 121°c durante 15 min.

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 AGAR MFC (coliformes fecales) Disolver 37 gr del medio

deshidratado (dependiendo de la marca) en un litro de agua
destilada (estéril), que contiene 10 mL de ácido rosólico al 1% en
solución 0,2N de NaOH. Calentar evitando la ebullición y el
sobrecalentamiento. El pH final debe ser de 7,4 ± 0,2. No
autoclavar el medio. Si se usa agar, distribuir de 5 a 7 mL en las
placas petri y dejar solidificar. Guardar el medio de líquido a 4 ºC
dentro de bolsa plástica o dentro de un envase para reducir la
pérdida de humedad, descartar después de 4 días, en el caso
del agar, después de 2 semanas.
 ACIDOROSOLICO: Disolver 1,0 g de ácido rosólico en 100 mL
de solución de NaOH 0,2 N. El ácido rosólico se descompone
con la esterilización. Guardar la solución en oscuridad y entre 2
ºC y 10 ºC, descartar después de 2 semanas o antes si se
observa que el color cambia de rojo a marrón.

3. BACIADO DE LOS MEDIOS EN LAS PLACAS

Dejar enfriar y suspender el precipitado por agitación antes de su uso.

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4. SOLIDIFICACION DE LOS MEDIOS

5. FILTRACON DE MEMBRANA
 Al comienzo de cada serie de filtraciones, utilízar unidades de
filtración estériles (UV, autoclave). considerar una interrupción
de una serie de filtración cuando transcurre un intervalo de 30 o
más minutos entre la filtración de dos muestras. Debe tratarse
como una nueva serie y esterilizar los soportes de los filtros de
membrana que están utilizando.
 Descontaminar los filtros entre filtraciones sucesivas, mediante
rayos ultravioleta (UV), se exponen unos 2 minutos. Se
recomienda llevar protección ocular. Debe limpiarse
regularmente los tubos UV y comprobar en forma periódica, si se

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produce una eliminación bacteriana del 99% en una exposición

de 2 minutos.
 Colocar con pinzas estériles un filtro de membrana estéril (con la
trama hacia arriba) sobre la placa porosa del receptáculo. Situar
con cuidado la unidad del embudo correspondiente sobre el
receptáculo y fijar.
 Llevar a cabo la filtración bajo un vació parcial. Terminado el
proceso, se procede a retirar el embudo y la membrana con
unas pinzas estériles, colocándola en el medio seleccionado
Agar Endo Les, evitando que quede aire atrapado debajo de la
membrana.

6. COLOCADO DEL FILTRO EN LA PLACA Una vez filtrada la muestra

se retira se retira con una pinza el filtro membrana y se coloca en las
placas tipo Petri con el medio

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7. INCUBACION DE LAS MUESTRAS

 En caso del medio M ENDO, La placa se lleva a la incubadora en
forma invertida, por un tiempo de 22 a 24 hrs. A una temperatura de
35± 0,5ºC.
 En caso del medio MFC, las placas de cultivo sembradas, deben
sellarse o envolverse, para luego ser colocas en bolsas de plástico
impermeables, para sumergirlas en un baño de agua, donde se
incuban a 44,5 ± 0,2 ºC durante 24 ± 2 hrs.

8. RECUENTO

 EN EL MEDIO M ENDO LES Observación en el medio M-Endo,

los coliformes fermentadores de lactosa producen colonias
rosadas a rojas, mientras que las colonias de los
microorganismos que no pueden fermentar este carbohidrato
son incoloras. Las colonias típicas de E. coli son rosadas con un
brillo verde metálico característico, debido a la elevada
producción de ácidos y aldehídos como producto de la
fermentación de la lactosa

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INGENIERIA AMBIENTAL

 EN EL MEDIO MFC Las colonias típicas de Coliformes fecales,

tienen las siguientes características, presentan distintos matices
del color azul.
Contar todas las colonias de diferentes matices de color azul con
ayuda de una lupa estereoscópica de 10 a 15 aumentos, o
simplemente otro instrumento óptico.
Las colonias de Coliformes no fecales son de tonos grises a
cremosas. En condiciones normales, se observan pocas colonias
de Coliformes no fecales en el medio M-FC, debido a la acción
selectiva de la elevada temperatura y a la adición de la sal del
ácido rosólico.

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Recuento de colonias.
Inmediatamente después de la incubación, contar todas las colonias de las
placas seleccionadas haciendo uso del contador de colonias. Cuando no se
disponga de este tipo de instrumento, utilizar cualquier otro contador,
siempre que proporcione aumento e iluminación equivalente.
Registrar en el reporte de los resultados los controles realizados por cada
lote de muestra.
Considerar solo las placas que tienen entre 30 y 300 colonias. Calcular el
recuento bacteriano por mililitro, multiplicando el número promedio de
colonias de las dos placas seleccionadas Perteneciente a la misma dilución
por el inverso de la dilución utilizada. Reportar en UFC/ mL.
Si ninguna de las placas de una muestra tiene colonias, reportar un
recuento inferior a una vez elrecíproco de la dilución mas baja (<1).
Cuando el número de colonias por placa supere ampliamente las 300, no
reportar resultados del tipo “Demasiados numerosas para el recuento”
(DNPR). Para menos de 10 colonias /cm2, contar las que existen en 13
cuadrados (del contador de colonias) representativos de la distribución de
las colonias. Si es posible seleccionar 7 cuadrados consecutivos
horizontales a través de la placa y 6 cuadrados consecutivos verticales, con
la precaución de no contar más de una vez un mismo cuadrante. Multiplicar
la suma del número de colonias de los 13 cm2 representativos por 5, para
Calcular el número de colonias por placa, cuando el área de esta sea de 65
cm2.
Si hay más de 10 colonias/ cm2, contar 4 cuadrados significativos, calcular
el promedio por cm2 y multiplicar por el factor adecuado para obtener el
número de colonias por placa. El factor es de 57 para las placas
desechables de plástico y de 65 para las de vidrio. Cuando los recuentos
bacterianos superen las 100 colonias reporte el resultado mayor de (>)
6500 veces el inverso de la dilución más alta, en el caso de placas de
vidrio, y mayor de 5,700 veces el recíproco, en el de las placas de plástico.
Reportar como recuento estimado de UFC/mL.
Cuando aparezcan colonias expansivas en la placa seleccionada, contar
como una unidad cada uno de los siguientes tipos: cadenas de colonias
que parezcan ser consecuencia de la desintegración de un grupo de
bacterias al mezclar el agar y la muestra; expansiones que se desarrollen
como placas de crecimiento entre el agar y la base de la placa petri. Contar

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como colonias individuales aquellas que posean aspecto de colonias y

crezcan muy cerca unas de otras, aunque sin tocarse, siempre que la
distancia entre ellas sea al menos igual al diámetro de la colonia más
pequeña. También se contaran como colonias individuales las adyacentes
con aspecto distinto en lo que se refiere a forma color etc.
Si hay exceso de crecimiento expansivo en una placa, considerar como
“diseminantes”. En caso de que las placas resulten incontables por que se
haya perdido el factor de dilución, se hayan caído accidentalmente; estén
contaminadas o las placas de control indiquen que el medio, otros
Materiales o el instrumental estén contaminados, se referirán en el reporte
como “accidente de Laboratorio

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VII. CONCLUSIONES

Con este trabajo se logró tener el conocimiento de que si las aguas de las cuales
nosotros adquirimos puedan estar contaminadas o libres de coliformes para el
consumo humano.

Estos estudios que se realizaron fueron en la planta de tratamiento de EPSASA.

Las muestras que se tomaron para la determinación de coliformes fueron de dos

puntos la zona de almacenamiento de agua de Quicapata y las aguas ya tratadas en la
planta de EPSASA. Se logró determinar en que en la zona de almacenamiento de
aguas se encuentran con coliformes y mientras en las aguas ya tratadas no hubo
crecimiento de estos coliformes de las cuales se deduce que están siendo muy bien
tratadas.

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