Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Químicas

Carrera: Química y Farmacia
Guía de Prácticas de Laboratorio
Práctica # 17 PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUÍNEA

Objetivos de la práctica de laboratorio

Que el estudiante desarrolle las destrezas para reconocer una aglutinación, hemólisis y una suspensión
homogénea

Instrucciones o consideraciones previas

Se basa en la ausencia de aglutinación o hemólisis IN VITRO, al mezclar el suero del Receptor y los
glóbulos rojos del Dador, así como el suero del Dador y los glóbulos rojos del Receptor.
Constituyendo la Prueba cruzada Mayor y Prueba cruzada Menor respectivamente.

Materiales de laboratorio y Reactivos

 Sangre del paciente y donante sin anticoagulante.
 Tubos de ensayo de 100x13(75x12), pipetas de 1ml, 5 ml, centrífuga, Baño de María a 37C. Lápiz
graso. Placas portaobjetos, palillos de dientes. Microscopio. Reloj de laboratorio.
 Solución salina fisiológica. Albúmina bovina al 30%. Suero de Coombs. Kit de grupo sanguíneo y
Rh.
 Suero del Receptor y una suspensión de hematíes al 5% del Receptor.
 Suero del Dador y una suspensión de hematíes al 5% del Dador.
 Determinar el grupo sanguíneo y el factor Rh del receptor y del donante.
 Nota: El suero deberá estar libre de hemólisis.

Actividades a desarrollar/ técnica operatoria

TÉCNICA DE ÁLVAREZ Y COLABORADORES

1º ETAPA Prueba Cruzada Mayor y Menor

 Rotular un tubo de 100x13 con la letra R para la prueba cruzada Mayor y otro con la letra D para la
prueba cruzada Menor.
 Depositar en el tubo marcado R, 2 gotas de la suspensión de hematíes al 5% del DADOR.
 En el tubo marcado D, 2 gotas de la suspensión de hematíes al 5% del RECEPTOR.
 Agregar 2 gotas del suero del RECEPTOR en el tubo marcado R y 2 gotas del suero del DADOR
en turbo marcado D.
 Mezclar por rotación y centrifugar ambos tubos a 1.500 rpm. durante 1 minuto. Leer el resultado
observando el sobrenadante de ambos tubos para HEMOLISIS y luego para AGLUTINACIÓN
(Tratar de disolver el precipitado en los tubos con movimientos de inclinación, suavemente haciendo
vibrar los dos tubos con movimientos de la muñeca de la su mano; no agitar)
 Si hubiera hemólisis o aglutinación en uno de los tubos o ambos, se descartará al donante y se
ensayará con otro donante.
 Nota: Si aparece aglutinación en alguno de los tubos puede ser por error en la tipificación sanguínea
o por anticuerpos Anti M, Anti N, Anti P, Anti Kell, aglutininas frías, o anticuerpos atípicos.
  Si no se observa hemólisis ni aglutinación en los dos tubos se procede como se indica a
continuación.

2º Etapa. Fase Proteica

 Agregar a cada tubo(R y D) 2 gotas de Albúmina Bovina al 30 %. Mezclar, centrifugar 1 minuto a

1.500 rpm. Leer para Hemólisis o Aglutinación.
 En esta fase se potencia la reacción y aumenta la aglutinación cuando existen anticuerpos Anti-Hr,
Anti-Lee.
 Si no se observa Hemólisis ni aglutinación, proceder como sigue.

3º Etapa Fase Térmica

 Incubar los dos tubos (R, D) a 37C en el Baño de María entre 15 – 30 minutos, luego centrifugar 1
minuto a 1.500 rpm. Leer para hemólisis o aglutinación.

Nota: Es importante que en esta fase térmica, usar suero fresco del receptor y dador, para
proporcionar complemento en excelentes condiciones y así detectar la presencia de Anticuerpos
Gamaglobulínicos.
De no observarse hemólisis ni aglutinación, pasar a la siguiente etapa.

4º Etapa Prueba de Coombs

 Lavar los glóbulos rojos de los tubos R y D con 2ml de solución salina fisiológica.
 Agregar 2 ml de SSF a cada tubo, mezclar y centrifugar 1 minutos a 1.500 rpm. Decantar el
sobrenadante por inversión.
 Repetir el proceso tres veces. Finalmente decantar el sobrenadante y en el precipitado (glóbulos
rojos), proceder como sigue.
 Agregar 2 gotas del suero de Coombs a los tubos R y D. Mezclar y centrifugar 1 minuto a 1.500 rpm.
y leer para hemólisis y aglutinación.

Resultados obtenidos
La muestra sanguínea del paciente “NN” y la muestra sanguínea del donante “MM” manifiestan o
demuestran compatibilidad en todas sus fases.

Caso contrario se indicará que manifiesta incompatibilidad en la Prueba cruzada…? y en la fase……?

Conclusiones
Recomendaciones
Bibliografía

Rodríguez J. (2012). Guía de Prácticas de Hematología y Atlas Editorial EduQuil

Kodak, B. (2015) Hematología Fundamentos y aplicaciones clínicas.