BAB III

METODE PERCOBAAN

3.1 Bahan Percobaan

Bahan-bahan yang digunakan pada percobaan ini adalah n-butanol,

asam asetat, akuades, larutan ninhidrin 2 %, plat silika, tissue roll, plastik wrap,

aseton, glisin, asam aspartat, alanin, dan sampel X.

3.2 Alat Percobaan

Alat-alat yang digunakan pada percobaan ini adalah chamber, pipa kapiler,

pensil, penggaris, oven, pinset, botol semprot, gelas ukur, pipet tetes dan cawan petri.

3.3 Prosedur Percobaan

3.3.1 Pembuatan Eluen

Larutan eluen dibuat dengan mencampurkan larutan n-butanol, asam asetat,

dan akuades dengan perbandingan 2,5: 0,6 : 2,6 mL dalam gelas ukur. Kemudian

eluen dimasukkan ke dalam chamber, dikocok sebentar, kemudian ditutup dan

dibungkus dengan plastik wrap lalu didiamkan sampai jenuh (± 30 menit).

3.3.2 Penotolan Sampel

Plat KLT yang telah disiapkan, kemudian dibuat garis batas bawah selebar

1 cm dan batas atas selebar 1 cm dari tepi plat. Kemudian dibuat titik-titik pada garis

batas bawah yang merupakan tempat penotolan larutan asam amino glisin, alanin,

sistein, dan sampel X lalu dikeringkan dalam oven. Setelah itu, semua larutan asam

amino dan larutan sampel ditotolkan pada garis batas bawah dengan menggunakan
pipa kapiler yang telah dimasukkan dalam aseton. Selanjutnya, plat KLT dikeringkan

pada suhu kamar.

3.3.3 Proses Elusi

Jika eluen telah jenuh, Plat KLT dielusi ke dalam chamber dengan hati-hati

agar garis batas bawah tidak tercelup ke dalam eluen. Elusi dihentikan jika eluen

telah menempuh garis batas atas. Kemudian plat dikeluarkan dari chamber

dan dikeringkan pada suhu kamar.

3.3.4 Identifikasi Asam Amino

Kromatogram disemprot dengan larutan ninhidrin 2%, kemudian dikeringkan

dalam oven selama 10 menit. Setelah kering diberi garis lingkaran pada noda yang

timbul dengan menggunakan pensil. Diukur jarak eluen dan jarak noda yang

terbentuk lalu dihitung nilai Rf dari masing-masing noda pada kromatogram. Data

yang dihasilkan dari proses elusi dimasukkan ke dalam rumus Rf kemudian dilihat

pada tabel nilai Rf untuk asam amino, nilai yang mendekati nilai Rf standar maka

itulah nilai Rf sampel X.