INGENIERÍA QUIMICA 709-A REACTORES QUÍMICOS UNIDAD I. PRÁCTICA DE LAB.

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INDICE

INDICE ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 2
OBJETIVO GENERAL. ---------------------------------------------------------------------------------------------- 3
OBJETIVOS ESPECÍFICOS. ----------------------------------------------------------------------------------------- 3
INTRODUCCIÓN.---------------------------------------------------------------------------------------------------- 4
FUNDAMENTO. ----------------------------------------------------------------------------------------------------- 4
MATERIALES, EQUIPOS, SUSTANCIAS. ------------------------------------------------------------------------ 5
METODOLOGÍA (PROCEDIMIENTO). -------------------------------------------------------------------------- 6
MENCIONA CUALES SERÍAN LOS PUNTOS CRÍTICOS EN LA PREPARACIÓN. ---------------------------------- 8
ACTIVIDAD PROPUESTA POR EL ALUMNO------------------------------------------------------------------- 9
OBSERVACIONES GENERALES ---------------------------------------------------------------------------------- 10
CONCLUSIÓN ------------------------------------------------------------------------------------------------------- 11

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INSTITUTO TECNOLÓGICO SUPERIOR DE ACAYUCAN

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
REACTORES QUÍMICOS
PRÁCTICA DE LABORATORIO NÚMERO 2

“Preparación del material para escalamiento 3 ml, 50 ml, 500 ml.”

OBJETIVO GENERAL.

1. El alumno aprenderá la preparación de los diferentes medios de cultivo.

2. Explicar el concepto de esterilización y su utilidad en microbiología.
3. Preparar correctamente el material que se someterá a esterilización.
4. Aplicar algunas metodologías para esterilizar material y medios de cultivo.
5. Comprobar la efectividad del proceso de esterilización.
6. Explicar el concepto de medio de cultivo en microbiología.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS.
1. Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de los
microorganismos in vitro.

2. Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que imprescindibles, en el laboratorio de

microbiología.

3. Hacer un primer acercamiento a la manipulación de microorganismos. Adquirir la idea de la

importancia del trabajo en condiciones de esterilidad y las técnicas más comunes para realizarlo.

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INTRODUCCIÓN.

Medios de Cultivo.

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento
en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen
los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han
preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de
condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado
correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los
líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de
extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificarte muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licúa
completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas
excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen
en él.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan
su licuación.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos
de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos
fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación
de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover
el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.

FUNDAMENTO.

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los

microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque las
necesidades nutricionales varían considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que
crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan
determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.

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MATERIALES, EQUIPOS, SUSTANCIAS.

 Cajas petri estériles  Cajas Petri
 Tubos de ensaye  Tubos de ensayo medianos
 Buffer pH 4, 7, 10  1 Pipeta graduada de 10ml.
 1 Mecheros  1 Pipeta graduada de 1ml.
 1probeta de 100ml  1 Probeta de 100ml.
 Balanza granataria  Frasco de dilución
 Parrilla  Balanza Granataría
 Espátula  pH metro
 Autoclave  Parrilla electrica con agitador
 Cinta testigo

Sustancias (reactivos)

 Agua destilada

 NaOH

 AI2(SO4)3

 Solución Buffer pH 4, 7, 9
 Agar MIO, TSI

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METODOLOGÍA (PROCEDIMIENTO).

1. Limpiar la campana (esterilizar con alcohol al 90%).

2. Dejar las colonias obtenidas previamente en la campana ya limpia para que tomen una
temperatura ambiente.

3. Colocar el mechero casi aun lado de la nuestras colonias.

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4. Lavar el aza.
5. Preparar los tubos de ensayo con nuestra gradilla.

6. Lavar los Matraces Erlenmeyer de 125ml y los Matraces Erlenmeyer de 1000 ml.
7. Pesar 10 gr de triptona para el medio de cultivo sin agua.
8. Pesar 5 gr de extracto de levadura para el medio de cultivo sin agua.
9. Pesar 10 gr de NaCl.
10. Pesar 10 gr de triptona para el medio de cultivo con agua.
11. Pesar 5 gr de extracto de levadura para el medio con agua.
12. Pesar 10 gr de NaCl.
13. Pesar 10 gr agar.

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MENCIONA CUALES SERÍAN LOS PUNTOS CRÍTICOS EN LA PREPARACIÓN.

 Los principales puntos críticos durante la preparación de los medios de cultivos son:

 La limpieza del material a usar, ya que de presentarse algún residuo en alguno de los frascos este afectaría
las propiedades del medio.
 La determinación de la cantidad adecuada de polvo del medio de cultivo a usar para la cantidad que
requerimos de medio a preparar.
 Disolver el medio de cultivo de forma adecuada, empleando calor para facilitar la disolución y evitar la
formación de grumos.
 Evitar que el medio de cultivo se sobrecaliente y empiece a hervir, ya que esto ocasionaría que las proteínas
y azucares se descompongan y variaría la concentración de la solución preparada.
 Describir cada uno de los componentes de los medios de cultivo.

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ACTIVIDAD PROPUESTA POR EL ALUMNO

1. ¿Qué norma mexicana nos indica el procedimiento para la realización de medios de cultivo?

NOM-065 SSA

2.- ¿Qué pasa si el medio de cultivo se excede en el calentamiento?

Produce una falla cambiando el pH, presenta turbidez ennegramiento, produce un crecimiento
escaso de MIO

3.- ¿Cuántos tipos de medio de cultivo existen menciona un ejemplo de cada uno de ellos? Según su

estado físico en: líquido o caldo, semisólidos o agar blando y solidos o agar.

 Según su clasificación:
 Comunes (Caldo cerebro corazón)
 Enriquecidos (Agar sangre Hemina-Menadiona)
 Selectivos (Agar Mitis-salivarios)
 Diferenciales (Agar sangre para streptococus)
 Transporte (Caldo traglicolato)

4.- ¿Cuál es la diferencia entre un medio líquido y un sólido?

Que el medio de cultivo solido contiene 1.5 - 2% de Agar-Agar mientras que el medio líquido
no contiene Agar-Agar el cual brinda la consistencia.

5.- Usos y cuidados del potenciómetro.

 Sirve para medir el pH de una solución y determina si es alcalina o ácido.

 Cuidados :
 Electrodo humedecido siempre.
 Guardar en una solución 4M de KCl o en un buffer de solución 4 o 7.
 No guardar electrodo en agua destilada.
 Se debe calibrar por soluciones valoradas. 6.-

Investiga la técnica Gram

La tinción de Gram, también conocida como coloración de Gram, es una técnica de laboratorio
que se utiliza rutinariamente en los estudios microbiológicos de las bacterias. Fue diseñada por
Christian Gram, un científico danés, en el año 1884. El objetivo de Gram era conseguir una prueba
con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de bacterias para así poder estudiarlas y
clasificarlas. La prueba resultó todo un éxito y pronto se convirtió en una técnica muy útil no solo
para el estudio de las bacterias, sino también para poder identificarlas rápidamente en una
infección y seleccionar el antibiótico más adecuado para tratarla.

La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen (esputo,
orina, pus, etcétera) que supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los colorantes tiñen la
pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza un lavado del colorante.

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OBSERVACIONES GENERALES

 En la realización de esta práctica pudimos observar que el conocimiento que supuestamente ya

teníamos que tener, fue factor para la realización de esta práctica.

 Otra cosa que pudimos observar, fue que la práctica se atrasó un poco debido a que una autoclave se
encontraba tapada y esto ocasiono que para poder meter todo el material esperamos a que la otra
autoclave estuviera desocupada.

 La práctica es indispensable para nosotros que no estamos forjando como Ingenieros Químicos ya
que debemos de saber cuál es el origen de un problema o que cosa podemos usar como fuente
alternativa para optimizar un proceso, y con los grandes avances de la ciencia podemos ver que la
bacterias pueden ser una fuente muy útil para la realización de procesos.

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CONCLUSIÓN

Los medios de cultivo son sustancias adecuadas para el estudio de los microorganismos ya que
proveen los sustratos adecuados para que se desarrollen y se puedan analizar sus características
bioquímicas de forma fácil, además, al existir diferentes medios de cultivos con cualidades
especializadas, se pueden usar en diferentes ocasiones, dependiendo del tipo de bacteria, el tipo de
estudio o las condiciones que se quieren desarrollar para el análisis.
En esta práctica fue muy importante conocer los cuidados que se deben de llevar a cabo para la
preparación, ya que de no ser llevada a cabo de forma correcta puede afectar la composición del
medio de cultivo y ocasionar problemas durante los análisis de los microorganismos.
Con esto procedimos a determinar las cantidades que debíamos emplear para la cantidad de medio
de cultivo que vamos a preparar, posterior a esto llevamos a cabo la preparación como lo indico
nuestro asesor y analizamos el pH para determinar que cumpliera con lo que requeríamos.
Finalmente llevamos el medio a esterilizar a autoclave en frascos limpios, y etiquetados con cinta
testigo para confirmar que se esterilicen adecuadamente.
Así mismo se necesitó de una solución salina, pesamos y disolvimos en agua destilada, llevamos la
solución a frascos y los tapamos y etiquetamos de forma adecuada con cinta testigo antes de llevar
al autoclave a esterilizar.

El estudio de microorganismos y las condiciones de supervivencia de los mismos es de vital

importancia para la vida humana, puesto que la mayoría de las reacciones químicas son efectuadas
por éstos.

Por medio de la realización de esta práctica se concluyó que se cumplió satisfactoriamente con el
objetivo, el cual era aprender a preparar diferentes medios de cultivo

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