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PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES ESCUELA DE


CIENCIAS QUÍMICAS
Análisis Instrumental I

DATOS INFORMATIVOS
INTEGRANTES: Camila Reinoso
NIVEL: Quinto semestre
DESCRIPCIÓN: Informe de laboratorio #3
PRÁCTICA 3: CUANTIFICACIÓN DE CAFEÍNA EN COMPRIMIDOS FARMACEÚTICOS
FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: Miércoles, 17 de Octubre de 2018

OBJETIVO GENERAL

Determinar la concentración de cafeína en comprimidos farmacéuticos comerciales mediante espectrofotometría


ultravioleta.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

1. Establecer el modo de trabajo adecuado para la cuantificación de un analito por espectrofotometría


ultravioleta-visible.
2. Verificar el cumplimiento de la ley de Beer en la región ultravioleta.

RESUMEN

La presente práctica de laboratorio se realizó con el objetivo de cuantificar la cafeína presente en comprimidos de
Aspirina Advanced mediante el uso de la espectrofotometría ultravioleta-visible. Para esto fue necesario preparar
la muestra por triplicado, en donde se trituraron tres comprimidos de Aspirina Advanced por separado y a cada
uno de ellos se los disolvió en metanol. Adicionalmente, se prepararon las soluciones estándar a partir de la
dilución con metanol de la solución stock de 1000 ppm. A continuación, para la cuantificación de la cafeína se
realizó una curva de calibración con las soluciones estándar y después se procedieron a colocar en las muestras
en sus respectivos compartimentos para obtener la concentración de cafeína en cada una de ellas. Al analizar los
resultados se pudo determinar que la concentración media de cafeína en un gramo de comprimido es 0,67 mg/ 1
gramo comprimido. Finalmente, en base a estos resultados se pudo concluir que la ley de Lambert-Beer se
cumple en la región ultravioleta.

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INTRODUCCIÓN

La cafeína es una sustancia estimulante que forma parte del grupo químico de las xantinas, está presente en una
serie de alimentos y bebidas, dentro del campo farmacéutico la cafeína es utilizada como un componente de los
medicamentos que alivian el dolor, esto dado que actúa como un agente coadyuvante por lo que se agrega a un
medicamento para mejorar su eficiencia. El consumo de cafeína tiene efectos estimulantes sobre el sistema
nervioso autónomo lo que estimula el estado de vigilia y la resistencia al cansancio, sin embargo, el consumo de
esta por encima de 400 mg a 600 mg causa un efecto nocivo sobre el organismo, causando insomnio, crisis de
ansiedad, entre otros (Guarnizo & Martínez, 2009). Por esto, es de suma importancia la determinación de cafeína
en los comprimidos farmacéuticos que la contienen, ya que de esta manera se puede determinar si el
medicamento cumple con los estándares y evitar una serie de efectos adversos en los consumidores.

En la actualidad, las técnicas analíticas más empleadas para la determinación de cafeína se dividen en dos
grupos: técnicas de separación y técnicas espectrofotométricas (Calle, 2011). En las técnicas espectrofotométricas
el análisis cuantitativo se basa en la utilización de energía luminosa de cierta longitud de onda para identificar y
cuantificar analitos de una determinada muestra (Harris, 2001). Por otra parte, dentro de las técnicas de
separación el método más utilizado es la cromatografía liquida de alta resolución (HPLC), en donde el análisis
cuantitativo está basado en la medida de alturas o áreas de picos cromatográficos que se relacionan con la
concentración (Skoog & West, 2001).

En la presente práctica se cuantificará la cafeína contenida en cada comprimido de Aspirina-Advanced mediante


espectrofotometría ultravioleta-visible y además se verificará el cumplimiento de la Ley de Beer en la región
ultravioleta.

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METODOLOGÍA

Materiales y equipos

Los materiales empleados para la presente práctica fueron: papel absorbente, recipientes de vidrio ámbar para
desechar los residuos orgánicos, un recipiente de vidrio para los residuos del lavado de las celdas, 1 pipeta
volumétrica marca Pyrex de 10 mL clase A, 1 pera de succión, varios goteros plásticos, nueve tubos de ensayo de
18 mm marca Pyrex, 5 balones de aforo de 25 mL clase A marca Glassco, una micropipeta de 100-1000 µl marca
TopScien con sus respectivas puntas plásticas, vasos de precipitados de vidrio de 100 mL y 250 mL, un embudo de
vidrio de 120 mm marca Pyrex, papel filtro , un soporte universal, un aro de metal pequeño, un triángulo de
porcelana grande, un mortero y un pistilo de cerámica, un agitador de vidrio de 20 cm y 6 celdas de cuarzo de 10
mm.

Por otra parte, el instrumento utilizado fue un espectrofotómetro uv-visible modelo Cary-60.

Reactivos

Los reactivos utilizados fueron los comprimidos de Aspirina Advanced y el metanol el cual fue usado para disolver
la muestra y para aforar las soluciones estándar; además se empleó una solución de stock de 1000 ppm a partir
de la cual se prepararon las soluciones estándar de 10-50 mg/L empleadas para la obtención de la curva de
calibración.

Procedimiento

Para esta práctica fue necesario preparar la muestra por triplicado por lo que se pesó tres comprimidos de
Aspirina Advanced con la ayuda de la balanza analítica. Posteriormente, estos fueron triturados por separado con
la ayuda del mortero y del pistilo de cerámica. A continuación, se disolvió cada uno de los sólidos obtenidos
después de la trituración con 10 mL de metanol y se agito con la ayuda del agitador de vidrio para lograr que la
mayor cantidad de sólido se solubilice, a pesar de que la agitación fue constante el sólido no se disolvió por
completo, por lo que se armó un equipo de filtrado con la ayuda del soporte universal, el aro metálico y el
triángulo de porcelana y adicionalmente para colocar adecuadamente el papel filtro se lo humedeció con agua
destilada y se lo pegó a las paredes del embudo de cristal y se procedió a filtrar el residuo que no pudo ser
disuelto por el metanol.

Por otra parte, se prepararon las soluciones estándar de 10-50 mg/L, para lo cual se tomaron alícuotas de 0.25,
0.50, 0.75, 1.00 y 1.25 mL de la solución stock de cafeína de 100 ppm respectivamente y se las aforo a 25 mL con
metanol. A continuación, se obtuvo el espectro de la solución estándar de mayor concentración y se determinó la
longitud de onda máxima haciendo uso de la aplicación Scan del software, los datos obtenidos se guardaron en
formato ASCII según las indicaciones dictadas por la docente.

Por último, con la aplicación Cuantitate se obtuvo la curva de calibración para la cuantificación de cafeína en cada
una de las muestras preparadas anteriormente y los datos obtenidos fueron guardados en formato ASCII dentro
de un nuevo directorio.
Cálculo para la preparación de la solución 10 mg/L a partir de la solución stock de cafeína:

10 mg de cafeína 1000 mL

X 25 mL

En donde:

Cálculo del valor de cafeína por 1 gramo de comprimido Aspirina-Advanced

Para el comprimido #1

En donde:

C=concentración de cafeína en mg/1 g de muestra

R=respuesta del equipo en mg/L

FD= factor de dilución

M= peso de la muestra

10=volumen de la solución madre

1= 1 gramo de comprimido

1000=1000 mL (Respuesta del equipo)

Cálculo del valor promedio de cafeína por gramo de comprimido Aspirina-Advanced


̅

Cálculo la desviación estándar de los datos de concentración de cafeína

∑ ̅
√ √

287 palabras
RESULTADOS

10,5

8,5

6,5
ABSORBANCIA

4,5

2,5

0,5

200 300 400 500 600 700 800


-1,5
LONGITUD DE ONDA (nm)

Solución estándar 50 mg/L

Figura 1. Espectro de absorción del estándar de calibración de 50 mg/L en un rango de 190-800 nm

En la Figura 1 se observa que la longitud de onda en la cual se registra la máxima absorbancia por parte de la
solución estándar de cafeína de concentración 50 mg/L es a los 269 nm.

Tabla 1. Máximos de absorción de la cafeína hallados por distintos métodos

Máximo de absorción hallado por Máximo de absorción hallado a Máximo de absorción hallado
simulación computacional partir de las reglas de Woodward- experimental
Fieser
284 nm 269 nm 269 nm

En la Tabla 1 se observa los valores relacionados con los máximos de absorción hallados por simulación
computacional, mediante las reglas de Woodward-Fieser y el máximo de absorción hallado a partir del espectro
de absorción construido a partir de datos experimentales.

3,2
y = 0,0621x - 0,1893
2,7 R² = 0,9747
ABSORBANCIA

2,2

1,7

1,2

0,7

0,2
5 15 25 35 45 55
CONCENTRACIÓN (mg/L)

Figura 2. Relación entre la absorbancia y la concentración de las distintas soluciones estándar


En la Figura 2 se observa que la relación entre la absorbancia y la concentración presenta una tendencia lineal
creciente lo que coincide con lo expuesto en la Ley de Lambert-Beer y se demuestra que la relación existente
entre la absorbancia y la concentración es proporcional. Además, se observa que existen ciertos puntos que se
desvían de la tendencia lineal lo que causa que el factor de correlación se encuentre por debajo de los
parámetros aceptados en el análisis.

Tabla 2. Concentración de cada una de las muestras y valores de absorbancia obtenidos a 269 nm

Concentración Absorbancia a 269 nm


(mg/L)
Muestra #1 66,6 (fuera de rango) 3,9485
Muestra #2 65,0 (fuera de rango) 3,8444
Muestra #3 63,6 (fuera de rango) 3,7604

En la Tabla 2 se evidencia que los valores correspondientes a la concentración de cafeína se encuentran fuera de
rango, sin embargo, estos valores oscilan entre los 63,6 mg/L hasta los 66,6 mg/L por cada comprimido. Además,
se observa que cuando la concentración de cafeína aumenta la absorbancia también lo hace.

Tabla 3. Peso del comprimido y concentración promedio de las tres muestras de Aspirina Advanced y
desviación estándar de los datos obtenidos experimentalmente

Muestra Peso del Concentración Concentración de cafeína Promedio Desviación


comprimido (mg/L) por gramo de comprimido estándar
(g) Aspirina Advanced
Muestra #1 0,8428 ± 0,0001 66,6 0,79 mg/ g comprimido
Muestra #2 0,8495 ± 0,0001 65,0 0,76 mg/g comprimido 0,76 mg/g
0,02
comprimido
Muestra #3 0,8536 ± 0,0001 63,6 0,74 mg/g comprimido

En la Tabla 3 se observa los valores de concentración de cafeína expresados en mg/L y en mg/ 1 gramo de
comprimido cuantificados en cada una de las muestras, en donde el promedio de la concentración de cafeína en
las tres muestras es de 0,76 mg/ 1 g comprimido.
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DISCUSIÓN DE RESULTADOS

En la Figura 1 se observa el espectro de absorción correspondiente a la solución estándar de mayor


concentración, a partir del cual se determinó que la longitud de onda a la cual se produce la máxima absorbancia
es a los 269 nm, el cual es un valor igual al establecido a partir de las reglas de Woodward-Fieser. Por otra parte,
en la Tabla 1 se exponen los valores correspondientes a los máximos de absorción de la cafeína hallados por
distintos métodos, se observa que existe una diferencia notable entre el valor obtenido por simulación
computacional y los valores obtenidos de manera experimental y por las reglas de Woodward-Fieser. La principal
causa de esta diferencia es que el valor obtenido a partir de las reglas de Woodward-Fieser es solo una estimación
ya que al realizar este cálculo se consideró que todos los átomos que conforman los compuestos cíclicos son de
carbono puesto que no se cuentan con las reglas para determinar el valor asociado a compuestos cíclicos que
presentan elementos distintos al carbono.
Es necesario destacar que se debe trabajar con la longitud de onda en la cual se produce la máxima absorbancia
ya que bajo estas condiciones se aumenta la sensibilidad por lo que esta longitud de onda garantiza la obtención
de valores de absorbancia aun cuando se trabaje con soluciones muy diluidas o de concentración muy baja.
Por otra parte, en la Figura 2 se observa que la relación entre la absorbancia y la concentración presenta una
tendencia de tipo lineal creciente con lo que se pudo comprobar el cumplimiento de la Ley de Lambert-Beer ya
que la relación entre la absorbancia y la concentración es proporcional, lo que indica que a medida que aumenta
la concentración aumenta la absorbancia. El factor de correlación de la recta presenta un valor de 0,9747 el cual
es un valor que se encuentra por debajo de los aceptados al momento de realizar un análisis, y en base a este
valor se pudo determinar que la Ley de Lambert-Beer se cumple parcialmente ya que existen varios puntos que se
desvían de la linealidad.
Uno de los factores que influyó de forma directa es que la preparación de las soluciones estándar no se la realizó
con metanol procedente de una sola botella de reactivo e incluso las soluciones estándar de 30-50 mg/L fueron
aforadas con metanol que presentaba una ligera coloración azul, la cual pudo convertirse en una interferencia al
momento de determinar la absorbancia.
En la Tabla 2 se observa que la concentración de cafeína en mg/L presente en cada una de las muestras, la
diferencia entre estos valores está relacionada de manera directa con la variación del peso de cada uno de los
comprimidos. Adicionalmente, se observa que la concentración de cafeína obtenida a partir del análisis
espectrofotométrico se encuentra fuera de rango, lo cual se debe a que las concentraciones de los estándares
utilizados para obtener la curva de calibración presentan una concentración menor a la concentración que
presenta cada una de las muestras preparadas.
En la Tabla 3 se observó que al determinar la concentración en mg/1 gramo de comprimido se obtuvieron valores
que oscilan entre 0,79 y 0,74 mg/1 gramo de comprimido y cuyo promedio fue de 0,76 mg/1 gramo de
comprimido, al comparar la concentración de la cafeína hallada experimentalmente con los valores establecidos
por Bayer se observa que existen mucha diferencia esto ya que la cantidad de cafeína presente en cada uno de los
comprimidos es en promedio de 0,76 mg/1 g comprimido, mientras que el valor establecido por el fabricante es
0,65 mg (Bayer, 2017). Esta diferencia se debe a que no se conoce de manera específica la concentración de la
cafeína ya que no se especifica si los 0,65 mg son por comprimido, por 1 gramo de comprimido o por 100 gramos
de comprimido.
La variación existentes entre los valores de concentración de la cafeína se debe a que dentro de la industria
farmacéutica se determina un rango en el que pueden encontrarse los principios activos, es decir, que no existe
un valor específico para cada comprimido.
Es preciso aclarar que no es posible cambiar el orden del procedimiento empleado para este análisis ya que
cuando se trabaja con una muestra sólida es necesario solubilizarla, en este caso es necesario emplear metanol
dado que de esta manera la cafeína es separada ya que esta es soluble en metanol y se disuelve, mientras que los
demás componentes permanecen insolubles.
Finalmente se debe destacar que se trabajó con celdas de cuarzo ya que este material no absorbe energía en el
espectro la región UV-visible, adicionalmente, las celdas fueron manipuladas por la parte opaca ya que cualquier
marca puede convertirse en una interferencia y esto influirá de manera en el coeficiente de correlación de la
curva de calibración.
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CONCLUSIONES

 Se determinó que la Ley de Lambert-Beer se cumple parcialmente en la región ultravioleta esto dado que
la curva de calibración obtenida presenta una tendencia lineal lo que confirma que la relación entre la
absorbancia y la concentración es proporcional.

 La espectrofotometría UV-visible es una técnica que permite cuantificar la cafeína presente en


comprimidos farmacéuticos y mediante esta se determinó que la concentración promedio de cafeína por
1 gramo de comprimido de Aspirina Advanced fue 0,76 ± 0,02.

 Los resultados obtenidos en la práctica no son confiables ya que se encuentran fuera de rango, lo cual
está estrechamente ligado a la concentración de las soluciones estándar y a la concentración de la cafeína
en cada una de las muestras.
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BIBLIOGRAFÍA

Calle, S. (2011). “Determinación analítica de la cafeína en diferentes productos comerciales” (Tesis de pregrado).
Universitat Politécnica de Catalunya, Barcelona

Guarnizo, A., & Martínez, P. (2009). Experimentos de Química Orgánica. Armenia: Elizcom.

Harris, D. (2001). Análisis Químico Cuantitativo (2nd ed). México: Reverté

Skoog, D., West, D., & Holler, F. (2001). Principios de Análisis Instrumental (5th ed). Madrid: McGraw-Hill.