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AGAR DE HIERRO Y LISINA

(LIA)
USO
Para diferenciar enterobacterias en base a su capacidad de descarboxilar o desaminar la lisina
y la producción de ácido sulfhídrico, especialmente del Género Salmonella (excepto
Salmonella paratyphi A, que es lisina descarboxilasa negativa). Edwarsiella, Klebsiella
pneumoniae, Enterobacter aerogenes, Serratia marcescens, se observa la prueba positiva por
arriba del 80%. Presentan prueba Negativa los Géneros Shigella, Citrobacter, Enterobacter
cloacae y el grupo Proteus – Providencia.
FUNDAMENTO.
En el medio de cultivo la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el
desarrollo bacteriano la glucosa es el hidrato de carbono fermentable y la lisina es el sustrato
utilizado para detectar la presencia de las enzimas de carboxilasa de aminasa. El citrato de
hierro y amonio y el tiosulfato de sodio son los indicadores de producción de ácido
sulfhídrico. El púrpura de bromocresol es el indicador de pH (su color es amarillo a pH igual
a 5.2 y violeta a pH igual o mayor a 6.8) y el agar es el agente solidificante.
Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio y provocan el viraje del
color púrpura al amarillo. El ambiente ácido favorece la actividad enzimática de carboxilasa
y se metaboliza la lisina a cadaverina elevando el pH del medio de cultivo y tomándolo al
color púrpura o violeta.
Los microorganismos fermentadores de glucosa que no tienen actividad lisina
descarboxilasa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al color amarillo. A
las 24 horas de incubación. Se observa al fondo del tubo color amarillo y la superficie de
color violeta debido al consumo de las personas que producen alcalinidad.
La generación de sulfuro de hidrógeno se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido
a la formación de sulfuro de hierro. Las cepas de los géneros Proteus, Providencia y algunas
de Morganella desaminan la lisina. Esto produce un ácido alfa-ceto-carbónico, el cual con la
sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio.
COMPOSICIÓN.
Formula (en gramos por litro)
 Agar 13.5
 L-Lisina 10.0
 Citrato férrico de amonio 0.5
 Peptona de gelatina 5.0
 Dextrosa 1.0
 Púrpura de bromocresol 0.02
 Extracto de levadura 3.0
 Tiosulfato de sodio 0.04
TÉCNICA.
Inocular realizando siembra mixta con doble picadura a partir de una colonia del cultivo del
microorganismo en estudio e incubar 24 horas a 37 grados C°.
PREPARACIÓN
Rehidratar 33 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar
agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo por
completo. Distribuir en tubos de ensayo de 13x100 mm, tapar con algodón o tapón de rosca
flojo. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar en
posición inclinada para obtener un fondo de 1.5 a 2.0 cm. Conservar en refrigeración de 2 a
8ºC.
LECTURA.
Se efectúa después de 18 a 24 horas de incubación (48 horas si es necesario) a 37ºC. Se lee
un quebrado, la reacción ocurrida en la superficie del medio corresponde al numerador (parte
aerobia) y la reacción ocurrida en la profundidad del medio corresponde al denominador
(parte anaerobia).
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS.
Descarboxilación de la lisina:
 Resultado positivo: superficie alcalina/profundidad alcalina (pico violeta/fondo
violeta)
 Resultado negativo: superficie alcalina/profundidad ácida (pico violeta/ fondo
amarillo).
Desaminación de la lisina:
 Resultado positivo: superficie rojiza/profundidad. Esto sucede con el género
Proteus, Providencia y algunas de Morganella spp.
Producción de SH₂:
 Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo (especialmente en el
límite entre la superficie y profundidad).
 Resultado negativo: el medio de cultivo permanece sin cambio de color.
CONTROL DE ACTIVIDAD.