“IDENTIFICACION

DE AMINOACIDOS Y
PROTEINAS”

UNIVERSIDAD NACIONAL
TECNOLOGICA DE LIMA SUR
(UNTELS)
Curso: Bioquímica Ambiental
Profesora: Blga. Carmen Rosa
Terry Bojas
Integrantes:

Cumpa Capcha, Mateos .

Dávila Paucarhuanca, Jeferson
Luyo Arce, Jefferson Luis
Herrera Solís, Issel w

Informe de laboratorio N°4

Martes 7 de junio del 2016

 I. INTRODUCCIÓN

Se sabe que las proteínas están constituidas por un conjunto de aminoácidos, los cuales tienen un
grupo amino y un grupo carboxilo y además que se constituyen mediante enlaces peptídicos.
Diversas fuentes de proteínas las podemos encontrar en diversos alimentos como pescado,
legumbres, carne de res, clara de huevo, entre otros; así también podemos hallar una manera de
observar, a través de combinaciones de compuestos con una proteína, los diversos grupos alcalinos
o alifáticos o los enlaces peptídicos que forman a la proteína. Por la estructura peptídica y la
presencia de determinados grupos (grupos R), las proteínas y los aminoácidos pueden reaccionar
con una variedad de agentes químicos originándose productos coloreados. Estas reacciones son la
base para la determinación cuantitativa y cualitativa de las proteínas y aminoácidos. Por
presentarse variaciones en la composición de los de los aminoácidos de las diferentes proteínas, se
manifiestan diferentes colores y grados de intensidad para una misma reacción, íntimamente
relacionado con la naturaleza de la proteína analizada.
 II. MARCO TEÓRICO

Por la estructura peptídica y la presencia de determinados grupos (grupos R), las proteínas pueden
reaccionar con una variedad de agentes originándose productos coloreados. Estas reacciones son la
base para la determinación cuantitativa y cualitativa de las proteínas. Por presentarse variaciones
en la composición de los aminoácidos de las diferentes proteínas, se manifiestan diferentes colores
y grados de intensidad para una misma reacción, íntimamente relacionado con la naturaleza de la
proteína analizada.

2.1.Fundamentos químicos de las pruebas.

2.1.1. Prueba de la ninhidrina (Hidrato de tricetohidrindeno).

Identifica aminoácidos y proteínas con grupo amino (𝑁𝐻2 ) y uno carboxilo libre,
reaccionaran con la ninhidrina. La positividad se manifiesta por la aparición de un
color violáceo o amarillo. Debido a que las proteínas y los aminoácidos, poseen esta
característica, la reacción sirve para identificarlos. Algunas soluciones de amonio y
aminas, dan la coloración característica, aparentemente debido a una oxidación y
reducción intramolecular de la ninhidrina en presencia de amoníaco. Los aminoácidos
porina e hidroxiprolina, que no poseen grupo amino sino imino (-NH-), dan un color
rojo que pasa rápidamente a amarillo. La reacción se muestra en la figura 1

Figura 1 Reacción de la prueba de la ninhidrina

 Complejo azul-violeta

2.1.2. Prueba de Biuret (𝑪𝒖𝟐 𝑺𝑶𝟒 )

Es una prueba general que identifica desde dipéptidos hasta proteínas ya que sirve para
reconocer las uniones peptídicas. La positividad se manifiesta por la aparición de una
coloración violeta. La formación de un complejo de coordinación entre los cationes
cúpricos en medio alcalino con las uniones peptídicas.
E1 color desarrollado es debido aparentemente al complejo de coordinación formado entre
el átomo de cobre del Reactivo de Biuret, y cuatro átomos de nitrógeno peptídicos
presentes en las cadenas polipeptídicas cono se ejemplifica enseguida:

Figura 2 Reacción de la prueba de Biuret

Complejo colorado azulado

2.1.3. Prueba xantoproteica

Es una reacción que reconoce los aminoácidos aromáticos que poseen el grupo
bencénico (tirosina, fenilalanina, triptófano). Las proteínas que tienen en su
 composición estos aminoácidos también darán la reacción. La positividad se reconoce
por la aparición de un color amarillo o verde debido a la formación de
nitrocompuestos.
Cuando los aminoácidos con la característica estructural ya mencionada, se calientan
en presencia de ácido nítrico concentrado, producen compuestos nitrados de color
amarillo, a los cuales el álcali como el NaOH o NH4OH, se convierten en sus sales
respectivas de color naranja.

Figura 3 Reacción de la Prueba xantoprotica

Forma Nitrocompuestos

2.1.4. Prueba de los grupos SH

 Es una prueba para identificar aminoácidos azufrados como la metionina y

cisteína
 forma el SPb (sulfuro de plomo) generando una coloración negra con el azufre
 se utiliza acetato de plomo de 2 molar

Figura 4. Reacción de la prueba de los grupos SH

2.1.5. Prueba de Millon

Identifica aminoácidos y la reacción es debida a la presencia del radical hidroxifenílico

(-C6H4OH) como tirosina.
El mecanismo de la reacción forma el complejo coloreado rojo ladrillo, se deba a la
formación del complejo oxido de mercurio.

Figura 5. Reacción de la prueba de Millon.

Complejo rojo ladrillo

III. OBJETIVOS

 Estimar químicamente la presencia de algunos aminoácidos, y tratar de determinar si estos

mismos están presentes en las proteínas utilizadas.

 Identificar por métodos colorimétricos los 20 L-α aminoácidos (AA), que forman las
proteínas, basados en las reacciones de los grupos R

IV. METODOLOGIA

4.1. MATERIALES

 Piceta (frasco lavador)

 Mechero

 Pinzas de crisol

 Vaso de precipitación

 Pipeta

 Tubos de ensayo

 Auxiliar de pipeta

 Gotero de plástico

 Mascarilla

 Guantes de nitrilo o látex

4.2.REACTIVOS
 Nihidrina 0.1%
 Biuret
 Millon
 Hidróxido de sodio (𝑁𝑎𝑂𝐻) de 10𝑀
 𝐻𝑁𝑂3
 Acetato de Pb 0.2M
 𝑁𝑎𝑂𝐻 0.2%

4.3.COMPUESTOS
 Ovoalbúmina (Clara de huevo)

4.4. PROCEDIMIENTO

4.4.1. Preparación de la muestra

Separamos la clara de huevo (ovoalbúmina) de la yema

 Prepara una disolución 1/10 de ovoalbúmina

4.4.2. Reacción de ninhidrina

En un tubo de ensayo, coloque 3𝑚𝑙 de la muestra y adicione 0.5𝑚𝑙 de la solución de

ninhidrina el 0.1%.

Mezclar bien y caliente a ebullición directamente a la llama del mechero por un

minuto.
Dejar enfriar, si la prueba es positiva se desarrolla un color azul-violeta. La muestra
debe tener un pH entre 4 y 8.
4.4.3. Prueba de millón

A 2𝑚𝑙 de la muestra añadir 5 gotas del reactivo de Millón

Mezcle bien y caliente cuidadosamente durante 30 segundos sobre una pequeña flama.
 El reactivo produce un precipitado blanco que por la acción del calor se torna un color
rosado o rojo ladrillo.
Un exceso del reactivo produce un calor amarillo que no es prueba positiva.

4.4.4. Prueba xantoproteica

Agregue cuidadosamente 0.5𝑚𝑙 de acido nítrico concentrado a 1.5𝑚𝑙 de la muestra.
Mezcle bien y caliente ligeramente en la llama de un mechero.

Observe el color desarrollado (amarillo).

Enfrié la solución con agua a chorro.

Añada cuidadosamente gota a gota y con agitación 𝑁𝑎𝑂𝐻 10M

 Hasta que el líquido sea fuertemente alcalino observe el color desarrollado
(anaranjado).

4.4.5. Reactivo de Biuret

Añada 0.5𝑚𝑙 del reactivo de Biuret a 2.5𝑚𝑙 de la muestra. Mezcle bien

 Observe el color desarrollado y anote el resultado.

4.4.6. Prueba de los grupos SH

Añadir 2𝑚𝑙 de 𝑁𝑎𝑂𝐻 al 20% a 3𝑚𝑙 de la muestra

En seguidamente agregar 5 gotas de acetato de plomo 0.2M.

Calentar la llama por 4 minutos. Mezclando continuamente y observar.

V. RESULTADOS

Prueba de la ninhidrina
La ninhidrina es un reactivo que emplea calor para reaccionar con las proteínas y los
aminoácidos formando soluciones de tonalidades violetas, la prueba nos dio un color
violeta siendo así la prueba positiva.
Prueba de Millón
El reactivo de Millón solo reacciona con las proteínas. Por lo tanto, este reactivo es
selectivo y se emplea para la identificación de proteínas, ya que con éstas el reactivo
forma precipitados de color rojo ladrillo.

Prueba Xantoproteica
De lo observado deducimos que el reactivo xantoproteica solo reacciona con las
proteínas. Por lo tanto, este reactivo es selectivo y se emplea para la identificación de
proteínas, en primera instancia se torna de color amarillo luego añadiendo gota a gota y
con agitación de NaOH se desarrolló un color anaranjado.
Prueba de Biuret
El reactivo de Biuret reacciona frente a las proteínas y aminoácidos dando a la solución
una coloread0 violeta de las proteínas en medio fuerte alcalino de las sales de Cu

Prueba de los grupos SH

Es una prueba para identificar aminoácidos azufrados y las proteínas que los contienen,
luego de agregar 5 gotas de acetato de plomo y calentarlo por 4 min nos dio una
formación de una coloración negra o gris.
VI. CONCLUSIONES

• Existen diferentes pruebas para la identificación de proteínas y aminoácidos que

permiten establecer un resultado positivo o negativo de acuerdo a las características y
composición de cada una de ellas, evidenciado en coloraciones, presencia de anillos,
etc.
• Aprendimos a diferenciar y reconocer las proteínas y aminoácidos en las distintas
reacciones realizadas.
• Pudimos observar las diferentes reacciones que se realizaron para el tratamiento
específico de las proteínas.
• Las proteínas constituyen una de las moléculas más importantes en el organismo,
ya que cumple muchas funciones.
• Las proteínas están constituidas por aminoácidos, por los cuales los métodos se
basan en el reconocimiento de los aminoácidos.

VII. RECOMENDACIONES

 Tomar nota de los datos, observaciones y sobre todo de los resultados en el momento en el
que se obtiene.
 Se recomienda respetar todas las normas de bioseguridad que se les brinda para un buen
uso de los diferentes equipos que se entran en el laboratorio, así como el cuidado de su
salud y la del personal.
 Todos los materiales utilizados con muestras deben ser descontaminados, la solución
desinfectante utilizada va a depender del tipo de material de que se trate y el grado de
contaminación.
 Consultar con el profesor o asistente en caso de cualquier duda.
 Leer cuidadosamente las etiquetas de los frascos de reactivos y sustancias peligrosas antes
de usarlas y prestar la debida atención en su uso.
 Mantener el área de trabajo limpio y ordenado.
 Utilizar guantes y mascarilla para la manipulación del reactivos peligrosos
VIII. CUESTIONARIO

1. Diga cuáles son los fundamentos químicos de las pruebas estudiadas.

En base a la muestra una solución de Albúmina diluida (1/10= 1ml de albúmina y 9 ml de
H2O), se presenta los siguientes fundamentos químicos para cada prueba:
a. En la prueba de la Ninhidrina, se produce el color Violeta ya que este compuesto
(Hidrato de tricetohidrindeno) reaccionó con el grupo alfa-amino libre (-NH2) de
alguna proteína o cadena polipeptídica de aminoácidos.
b. En la prueba de Biuret (Sulfato de Cobre en una base fuerte), se produce un color
Violeta claro o Lila, ya que reaccionan los iones Cu+2 propios del Biuret con los pares
no compartidos del N que forma parte de los enlaces peptídicos de los aminoácidos,
donde este compuesto (Biuret) reconoce las uniones peptídicas que forman las
proteínas.
c. En la prueba Xantoproteica, se aprecia primero el color Amarillo debido a la formación
de nitrocompuestos producto de las interacciones entre el Ácido nítrico (HNO3) y el
anillo bencénico presente en los aminoácidos aromáticos como la Tirosina,
Fenilalanina y Triptófano. Luego, se agregan ciertas gotas de NaOH 10 M (Base) hasta
obtener un color anaranjado (Formación de ácido picrámico y trinitrofenol).
d. En la prueba de los grupos SH, se apreció un color Negro, ya que el Acetato de Plomo
(Pb(CH3COO)2) reaccionó con aminoácidos azufrados tales como la Metionina y
Cisteína, y también la presencia de Serina junto con Sulfuro de Sodio (SNa2), producto
de la mezcla de Lanteonina con NaOH al 20%.
e. En la prueba de Millón, el color predominante fue Rosado, ya que los compuestos
mercúricos en medio ácido fuerte (HNO3 del reactivo Millón) se condensan con
cadenas polipeptídicas que contienen radicales hidroxibencenos propios del
aminoácido Tirosina.

Recordar que por las características de cada reacción y por el tipo de color que se
apreciaron, las pruebas son positivas.

2. Cuáles son las aplicaciones prácticas de las pruebas.

Las pruebas hechas en el laboratorio nos permiten examinar qué aminoácidos puede
contener la proteína Albúmina, a partir de ello podemos examinar si contiene aminoácidos
esenciales para nosotros y cuáles son los no esenciales, por lo que a partir de ese
conocimiento podemos examinar las proteínas esenciales y así incluir las albúmina y otros
alimentos proteicos en nuestra alimentación diaria. Algunos ejemplos de aminoácidos
esenciales (los cuales el organismo necesita consumir) presentes en la albúmina son la
 Fenilalanina y Triptófano (positivos para la prueba xantoproteica), la Metionina (positiva
para la prueba de los grupos SH y que abunda en las proteínas del pescado y caseína de la
leche) y así otras en general como la Isoleucina, Lisina, Treonina, Valina, Arginina e
Histidina (positivas en la prueba de Biuret y de la Ninhidrina).

3. Para el siguiente pentapéptido, diga cuáles pruebas y por qué son positivas. (ALA-
VAL-GLY-GLU-LYS)

Las pruebas a aplicar para un resultado correcto y positivo es la Prueba de Ninhidrina

(Hidrato de tricetohidrindeno) porque se aprecia la presencia grupos amino libres tanto al
inicio de la cadena como en la lisina (se apreciará un color violeta), y se utilizará la Prueba
de Biuret, ya que sirve para reconocer las uniones peptídicas (muy común en todas las
proteínas), donde aparecerá un color violeta o lila.

4. Defina los siguientes términos: Aminoácidos, proteínas, análisis cualitativo y análisis

cuantitativo.
a. Aminoácido: Molécula que contiene un grupo carboxilo (-COOH) y un grupo amino (-
NH2) libres, además de una cadena lateral (Radical R) y un átomo de H; es la unidad
fundamental de la proteína y posee un carácter anfótero (puede actuar como ácido o
base) y presenta actividad óptica.
b. Proteínas: Biopolímeros constituidos por C, H, O, N y también en proporciones
menores de S y P, son las más abundantes en el organismo, poseen una gran variedad y
cumplen funciones sumamente diversas, participando en todos los procesos biológicos
y constituyendo estructuras fundamentales en los seres vivos.
c. Análisis cualitativo: Revisión sistemática de la información que permite discriminar
componentes, establecer relaciones entre los componentes en estudio, para generar
 modelos interpretativos conceptuales o modelos analíticos que aportan una
interpretación sobre lo que se está estudiando.
d. Análisis cuantitativo: Determinación de la abundancia absoluta o relativa (muchas
veces expresada como concentración en cantidades numéricas) de una, varias o todas
las sustancias químicas o elementos presentes en una muestra. La cuantificación o
medida de la abundancia absoluta o relativa puede ayudar en la determinación de
ciertas propiedades específicas.
5. Dibuje los 20 L-α-AA y clasifíquelos según la polaridad de sus grupos R.
 X. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Química Orgánica G. Devore, Muñoz MENA

Química Orgánica Morrison y Boyd
Bioquímica Stryer, L. 2da. Edición. San Francisco California.
 IX. ANEXOS

Los siguientes materiales utilizados para la práctica de identificación de aminoácidos y proteínas:

a) Piceta (frasco lavador)

b) Mechero

c) Pinzas de crisol

d) Vaso de precipitación

e) Pipeta

f) Tubos de ensayo

g) Auxiliar de pipeta

h) Gotero de plástico

i) Mascarilla

j) Guantes de nitrilo o látex.

k) Huevo

l) Placa Petri
REACTIVOS UTILZADOS EN LA PRACTICA DE LABORATORIO

a) Nihidrina 0.1%
b) Biuret
c) Millon
d) Hidróxido de sodio (𝑁𝑎𝑂𝐻) de 10𝑀
e) 𝐻𝑁𝑂3
f) Acetato de Pb 0.2M
g) 𝑁𝑎𝑂𝐻 0.2%
De derecha a izquierda la ovoalbúmina presento las siguientes reacciones y coloraciones en la siguiente
prueba:

a) Prueba de la ninhidrina
La prueba nos dio un color violeta siendo así la prueba positiva.

b) Prueba de Millón
El reactivo de Millón forma precipitados de color rojo ladrillo.

c) Prueba Xantoproteica
De lo observado deducimos que el reactivo xantoproteica se desarrolló un color anaranjado.

d) Prueba de Biuret
El reactivo de Biuret reacciona frente a las proteínas y aminoácidos dando a la solución una
coloración violeta

e) Prueba de los grupos SH

Esta una prueba nos dio una formación de una coloración negra o gris.