ACTIVIDAD PRÁCTICA N 4

TRABAJO DE LABORATORIO Y RESOLUCIÓN DE PROBLEMAS

TEMA: METABOLISMO DE HIDRATOS DE CARBONO,

FERMENTACIÓN, OXIDACIÓN COMPLETA.
INTRODUCCIÓN

La producción de energía de un metabolismo depende: a) de la diferencia de salto de potencial

redox entre el par que se oxida y el par que se reduce y b) del número de pasos intermediarios de la
vía metabólica.
Una de las principales fuentes de energía que utilizan los organismos heterótrofos son los
hidratos de carbono. Los hidratos de carbono complejos, como los polisacáridos, deben ser primero
degradados a monosacáridos (como vimos en el TP N° 3) y posteriormente ser metabolizados para
la generación de ATP.
Mediante la Glucólisis glucosa se oxida hasta piruvato con la producción de ATP
(fosforilación a nivel de sustrato) y coenzimas reducidas. Estas últimas en ausencia de Oxígeno
(anaerobiosis) se reoxidan en un proceso denominado Fermentación cuya finalidad es recuperar las
coenzimas oxidadas con el objeto de permitir la continuidad de la Glucólisis y así asegurar el
suministro de la energía requerida por la célula.
En condiciones aeróbicas es factible obtener la oxidación completa de los Hidratos de Carbono
hasta CO2 y H2O. En este caso, el piruvato obtenido por glucolisis se transforma en Acetil Co-A y es
oxidado en el Ciclo de Krebs con la producción de coenzimas reducidas, NADH y FADH2. Estas
coenzimas reducidas, en condiciones aeróbicas, son re-oxidadas en la cadena respiratoria (la cadena
de transporte electrónico) y los electrones cedidos son conducidos a través de una serie de etapas
sucesivas hasta el O2, para formar H2O. En este proceso de transferencia electrónica se libera
energía que es aprovechada para la formación de enlaces de alta energía en forma de ATP.

GLÚCIDOS
AMINOÁCIDOS ÁCIDOS GRASOS

PIRUVATO

Acetil-CoA

CO2
Ciclo de
Krebs
CO2

NADH
2H+ + ½ O2
FADH2
CADENA RESPIRATORIO
FOSFORILACIÓN OXIDATIVA
NAD+
H2 O
FAD
ADP + Pi ATP

33
 Mediante la EXPERIENCIA DE LABORATORIO estudiaremos los procesos de
fermentación que llevan a cabo microorganismos en condiciones anaeróbicas. Posteriormente
resolveremos ejercicios del catabolismo de los hidratos de carbono utilizando mapas metabólicos.

OBJETIVOS

 Comprender el proceso de fermentación y todos los aspectos relacionados.

 Analizar qué factores afectan el proceso de fermentación en cuanto a su rendimiento y duración.
 Conocer la importancia del Ciclo de Krebs y comprender su funcionamiento catabólico en el
metabolismo celular.
 Analizar el proceso de respiración celular.
 Visualizar el intercambio de materia y energía asociado a todo proceso metabólico.
 Desarrollar habilidades para calcular la magnitud de los intercambios de masa y energía.
 Analizar la interrelación del ciclo de Krebs y la cadena respiratoria con el metabolismo general.
 Valorar el trabajo grupal como una manera de construcción del conocimiento.

TRABAJO DE LABORATORIO

Comentarios teóricos sobre la experiencia

El carbohidrato más común es la glucosa que es metabolizada por casi todos los organismos
conocidos y una de las principales fuentes de E de las células. La degradación de la glucosa se lleva
a cabo a través de la glucólisis que es la vía metabólica encargada de oxidar la glucosa hasta 2
moléculas de Piruvato con la finalidad de obtener energía (ATP) para la célula. En esta vía además
de ATP y Piruvato se generan coenzimas reducidas (NADH) que en condiciones aeróbicas (con O 2)
se oxidaran (NAD+) en cadena respiratoria para su reutilización en la glucolisis. Sin embargo, en
ausencia de O2 (anaerobiosis) el piruvato se desvía hacia procesos de fermentación cuya finalidad es
regenerar NAD+ para que pueda continuar la glucólisis, permitiendo que continúe la producción de
ATP. Como consecuencia de la fermentación se obtienen algunos productos como etanol y CO 2
(fermentación alcohólica), ácido láctico (fermentación láctica), ácido butírico (fermentación
butírica), ácido propiónico (fermentación propionica), u otros productos de fermentación. Los
microorganismos como bacterias y levaduras también utilizan esta vía metabólica (glucolisis y
fermentación) cuando se desarrollan en ambientes con baja presión de O 2. Las levaduras llevan a
cabo la fermentación alcohólica (reacción a). El CO2 y el etanol producidos son liberados al medio y
los NAD+ son reutilizados en la glucolisis para la obtención de 2 ATP por cada molécula de glucosa.

a) Fermentación alcohólica

CO2 NADH NAD+

PIRUVATO ACETALDEHIDO ETANOL

34
 b) Fermentación láctica

NADH NAD+

PIRUVATO AC LÁCTICO

EXPERIENCIA DE LABORATORIO

Material biológico
Levadura comercial

Reactivos
Solución de sacarosa 10%

Equipamiento de laboratorio
 Baño termostatizado
 Termómetro
 Balanza

Otros materiales de laboratorio

 Vasos de precipitado
 Jeringas con tapas
 Recipiente cónico de plástico
 Marcadores
 Gradillas

Descripción de la experiencia
a) Numerar los vasos plásticos del 1 al 4 y procede como indica la tabla. Calcula la concentración de
sacarosa

Vaso Sacarosa 10% mL Agua mL Levadura g Concentración Sacarosa

1 0 20 1
2 5 15 1
3 10 10 1
4 20 0 1

b) Después de agregar las levaduras mezclar bien con una varilla hasta obtener suspensión
homogénea
c) Numerar las jeringas del 1 al 4
d) Con la jeringa 1 tomar 4 mL del vaso 1, previamente aspirar y expeler para homogeneizar, y tapar
la punta.
e) Repetir la operación descripta en d con las jeringas 2, 3 y 4.
f) Colocar las jeringas con la punta hacia abajo en la gradilla y llevar al baño termostatizado a 40 °C
g) Controlar el volumen de cada jeringa cada 5 min y anotar en el cuadro. El volumen de cada
jeringa se toma con la posición de la base del émbolo (incluye vol. inicial del líquidomás el gas
producido por levaduras)
35
Jeringa 0 min 5 min 10 min 15 min 20 min 25 min 30 min
1 4
2 4
3 4
4 4

h) Calcular el volumen de CO2 producido por la levadura para cada tiempo de incubación aplicando
la siguiente formula. Completar la tabla

vol. CO2= Vol tf - Vol t0

tf: tiempo final (0,5,10...30 min según corresponda)
t0: volumen inicial de líquido (4 mL)

Volumen de CO2 producido (mL)

Jeringa 0 min 5 min 10 min 15 min 20 min 25 min 30 min
1
2
3
4

j) Realiza un gráfico de producción de CO2 en función del tiempo de incubación para cada
concentración de sacarosa.
k) Comparar los resultados
l) Cual fue la concentración de sacarosa más eficiente para la fermentación? ¿Porque?

GUÍA DE PROBLEMAS

1- Realice la vía metabólica que sigue una molécula de sacarosa para producir energía en una
levadura que crece en ausencia de oxígeno (medio de cultivo con sacarosa como fuente de
carbono). Realice el balance de masa y energía.

2- a) Realice la vía metabólica por la cual una levadura en condiciones aeróbicas oxida
completamente a CO2 y H2O una molécula de sacarosa para la producción de energía. Realice
balance de masa.
b) Los electrones de las moléculas de NADH generadas en la glucólisis deben ingresar a la
mitocondria para poder ser incorporados a la cadena respiratoria. Sin embargo, la membrana
interna de la mitocondria es impermeable al NADH y al NAD+. Indique que mecanismo se
utiliza para que los electrones del NADH citosólico sean cedidos a la cadena respiratoria.
c) Calcule la producción de ATP de este ejercicio. Compare este resultado con la del Ejercicio 1.

36