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CUESTIONARIO

1.Describir el fundamento de la técnica de HPLC

En la cromatografía líquida, la fase móvil es un líquido que fluye a través de una columna que
contiene a la fase fija. La separación cromatográfica en HPLC es el resultado de las interacciones
específicas entre las moléculas de la muestra en ambas fases, móvil y estacionaria.
A diferencia de la cromatografía de gases, la cromatografía de líquidos de alto rendimiento (HPLC,
de high-performance liquid chromatography) no está limitada por la volatilidad o la estabilidad
térmica de la muestra.
La HPLC es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, productos naturales lábiles,
materiales poliméricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular.
Con una fase móvil líquida interactiva, otro parámetro se encuentra disponible para la selectividad,
en adición a una fase estacionaria activa.
La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que permite una mayor gama de estas
interacciones selectivas y más posibilidades para la separación.

HPLC es ideal para muestras con:

• Presión de vapor baja

• Compuestos iónicos

• Compuestos de peso molecular elevado

• Compuestos Termolábiles
Es incuestionable que la cromatografía de líquidos de alta resolución es la técnica de separación más
ampliamente utilizada. Las razones de la popularidad de esta técnica son su sensibilidad, su fácil
adaptación a las determinaciones cuantitativas exactas, su idoneidad para la separación de especies
no volátiles o termolábiles y, sobre todo, su gran aplicabilidad a sustancias que son de primordial
interés en la industria, en muchos campos de la ciencia y para la sociedad en general. Algunos
ejemplos de estos materiales incluyen los aminoácidos, proteínas, ácidos nucleicos, hidrocarburos,
carbohidratos, drogas, terpenoides, plaguicidas, antibióticos esteroides, especies organometálicas y
una cierta variedad de sustancias inorgánicas.

2. ¿Por qué se tienen que secar las plantas para usarla en la cromatografía?

En realidad se pueden usar secas como frescas dependiendo de lo que queramos obtener, pero en
el caso de nuestra practica como lo que queremos obtener es el Rf es decir la relación del movimiento
de soluto con respecto al movimiento del solvente, es necesario que tanto las flores como las hojas
estén secas ya que estas al estar frescas contienen gran cantidad de agua que también seria
arrastrado junto con los pigmentos y habría q restarle esa cantidad de agua por lo que es
recomendable secar las muestras previamente.
DIAGRAMA DE FLUJO

CROMATOGRAFIA DE PAPEL

Triturar las muestras Pesamos 1 o 2 gramos del


Las flores deben estar
(hojas, pétalos de flores) material triturado y
secas si es necesario
en un mortero hasta añadimos 5ml de ácido
ponerlos a la estufa
obtener polvo fino clorhídrico metanolico al
1%

Trazar con un lápiz una línea Cortar tiras de papel filtro


de 1.5 cm del borde inferior de tamaño: para colocarlo al
del papel y otra a 3.0 cm del vaso de precipitado q sirva
borde superior como cámara cromatografía

Insertar un punto donde se


aplicara la muestra debe ser
un punto central situada
sobre la línea inferior

Colocar un volumen de la fase


móvil en el fondo de la cámara
con la ayuda de una pipeta y
tapar con una luna de reloj
Aplicar la muestra con un capilar
delgado de forma que se
produzca una mancha y dejamos
secar

Introducir el papel en la cámara


asegurándose de que la línea inferior
sobrepase el nivel de la fase móvil

Dejar correr el cromatograma


hasta q el frente del solvente
alcance la línea superior

Retirar el papel y dejar secar.


Finalmente calcular Rf

NO Repetir
¿Se obtuvo una
proceso
distribución
adecuada?

SI

FIN
CROMATOGRAFIA EN
CAPA FINA

Trazar una línea inferior de Marcar un punto donde


Disponer de la muestra y de 1.0cm y una superior de 3.0 se aplicara la muestra.
un cromatófolio cortado con cm, evitar hacer que la capa Debe ser un punto
una medida de: adsorbente se interrumpa central situado sobre la
por esta acción línea inferior

Introducir la placa en la fase Aplicar con un capilar


móvil sin que la mancha delgado la muestra y
llegue a introducirse en él y dejar secar mientras
tapamos el frasco tanto Colocar la fase
móvil en la camara

Dejar correr el
cromatograma hasta q
el frente del solvente
alcance la línea
superior

Retirar el papel y dejar secar.


Finalmente calcular Rf

¿Se obtuvo una


distribución
adecuada?

FIN