UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MANABÍ.

FACULTAD DE CIENCIAS MATEMÁTICAS,

FÍSICAS Y QUÍMICAS.
ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA.
FUNDAMENTO DE MICROBIOLOGIA BIOQUIMICA II

NOMBRE DEL DOCENTE:

ING. VIRGINIA SANCHES

PRACTICA # 2
PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO Y DETERMINACION DE
AEROBIOIS MESOFILOS EN LOS ALIMENTOS

NOMBRE
ANCHUNDIA SABANDO ORLANDO
.

FECHA DE INICIO Y TERMINO

24/10/2018

PARALELO
B
OBJETIVOS

OBJETIVOS GENERAL
 Comprender la forma correcta para la preparación de muestra ambientales en
superficies además de la determinación y análisis de aerobios que se encuentra
en alimento

OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Determinar las presencias de aerobios mesofilos en las muestras de helado
artesanal y deditos
 Identificar los microorganismos presentes de las muestras con diferentes
factores como el ambiente la superficie y manipulación
 Conocer las normas adecuadas de preparación de medios de cultivos
 MARCO TEORICO
Los microorganismo se encuentran presentes en todos los alimento, en el aire, en el
agua, en la superficie de los objetos e incluso sobre nuestra piel. Un alimineto puede
estar contaminados en su origen o bien puede ser el manipulador quien lo contamine
durante el proceso. La persona que va a manipula un alimento tiene una abudante
carga microbiana en la piel , por lo tanto resulta eviden la necesidad de que el
manipulador matenga una perfecta condición de higiene durante el procesador de los
alimentos
La evaluación de la calidad microbiológica del ambiente nos indica la cantidad de
microorganismos que están presentes en un área determinada. Los microorganismos
generalmente no están flotando en el aire sino que se encuentran sobre partículas
inertes que le sirven como medio de transporte, las cuales pueden depositarse sobre
las superficies,
La esencia de la microbiología la integran dos clases de operaciones: el aislamiento,
que es la separación de un microorganismo determinado de las poblaciones mixtas
que existen en la naturaleza, y el cultivo, que es el crecimiento de poblaciones
microbianas en ambientes artificiales (medios de cultivo) bajo condiciones de
laboratorio
La higiene los alimentos implica una variedad de acciones, entre las cuales, el evitar la
contaminación ocupa lugar relevante. Cada fuente de contaminación que puede actuar
sobre los alimentos presenta sus propias peculiaridades y por ello requiere de
métodos especiales para lograr su control.
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes, los que en conjunto proporcionan los requerimientos nutricionales para
el desarrollo de los microorganismos. La diversidad metabólica de estos
microorganismos es tan grande que la variedad de medios de cultivos es enorme por lo
cual no existe un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos.
Los aerobios mesófilos son aquellas bacterias aerobias, mesófilos capaces de crecer en
agar nutritivo. Se investigan por el método de recuento con siembra en profundidad,
que se basa en contar el número de colonias desarrolladas en una placa de medio de
cultivo sólido (agar para recuento en placa o PCA), donde se ha sembrado un volumen
conocido de la solución madre o sus diluciones (Iml) incubadas a 3TC durante 24 horas.
(Latam News Copyright, 2015)
En el recuento de microorganismos aerobios mesófilos se estima la flora total, pero sin
especificar tipos de gérmenes. Esta determinación refleja la calidad sanitaria de los
productos analizados indicando, además de las condiciones higiénicas de la materia
prima, la forma como fueron manipulados durante su elaboración
La tencina de muestreo depende de la naturaleza del sitio, grado de contaminación y
de la información microbiológica que se pretende obtener. Hay dos categoría de
muestras que habitualmente se toman del entorno donde se fabrica alimentos;
superficie y ambiente
MUESTRAS AMBIENTALES
Las muestras ambientales se toman del aire, el agua, el suelo y los sedimentos, la
vegetación y los alimentos. El banco de muestras ambientales recoge, almacena y
analiza muestras representativas del medio ambiente.

Se analiza una muy amplia variedad de componentes de las muestras. La mayoría de

los métodos de análisis sólo son adecuados para la investigación de pequeñas
cantidades de muestra, incluso si las muestras disponibles son relativamente grandes.
En muchos casos, merece la pena liofilizar material biológico antes de la extracción
para el análisis elemental. Los cambios en la estructura y el contenido de las
sustancias que se van a determinar, tales como los BPC, los HAP y las dioxinas, se
reducen al mínimo.

Almacenamiento de los Medios de cultivo

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las
condiciones que señale el fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar fresco
(entre 15 y 25o), con poca humedad y protegidos de la luz solar directa. Nunca se
deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor.
Los medios de cultivo deshidratados son higroscópicos. Cuando los envases de estos
medios de cultivo deshidratados son abiertos para su uso inicial, se debe tener la
precaución de cerrarlos tan pronto como sea posible y mantenerlos bien cerrados para
prevenir la entrada de humedad. La absorción de agua produce cambios de pH,
formación de grumos, decoloraciones del polvo, etcétera, lo cual indica que deben ser
descartados porque pueden haber sufrido cambios químicos o estar contaminados.
Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede almacenarse a
temperatura ambiente por un periodo máximo de 2 semanas protegido de la luz, o por
periodos mayores a 12–15 oC. Sin embargo, almacenados bajo refrigeración entre 2 y
8 oC se prolonga la vida útil de los mismos, (nunca por debajo de 0oC porque se
destruye la estructura del gel). Los medios de cultivo se deben mantener en
recipientes bien cerrados para evitar su deshidratación y cuando se usa tapón de
algodón, se debe colocar por encima una envoltura de papel (Craft).
Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de cultivo
preparado debe pasar por un riguroso proceso de control de calidad, en donde se
determinan sus propiedades fisicoquímicas (apariencia, pH) y microbiológicas
(esterilidad y promoción de crecimiento) verificando que cumplan con los requisitos de
calidad establecidos y por ende demostrar que son aptos para su uso
 MATERIALES Y METODOS

MATERIALES REACTIVOS EQUIPOS

Matraz Erlenmeyer. Dedito Estufa de incubación,
Caja Petri. Agua Peptonada. Cámaras de seguridad
Pipetas de 25 mi. Agar. biológica.
Termómetro digital. Helado casero Contador de colonias.
Barra de agitación. Autoclave.
Mechero, Plancha de calentamiento
Piola
Tijera
Pastilla agitadora
Balance
Probeta
Algodón
Gasa esteril

PROCEDIMIENTO
SUPERFICIES
- Frotar enérgicamente con un hisopo un área previamente dselimitada de
4x4cm
- Frotar la superficie del agar suavemente sin romper
- Tapar e incubar aproximadamente 27.5 centigrados
- aplicar uno de los agentes esterilizante sobre la misma superficie
- Frotar nuevamente sobre dicha área con un nuevo hisopo, para ser
transferido frotando a la superficie del agar
AMBIENTE
- Destapar las cajas Petri en las áreas por un periodo de 30 minutos, tapar e
incubar

MANIPULADOR
- El manipulador frotara suavemente su dedo medio y anular en forma de
zigzag sobre el agar
- Se lavara las manos y procederá de igual manera, tapar inmediatamente e
incubar
METOLOGIA: AEROBIOS MESOFILOS EN ALIMENTOS
- Retirar las muestras y los materiales del autoclave.
- Desinfectar y asegurarse que los materiales estén limpios, y que el área de
trabajo también se encuentre desinfectada
- Se tritura la muestra y se pesa asépticamente
 - (lOgr o lOml respectivamente si es sólida o liquida) para ser mezclada con
90ml de agua peptonada
- Mantener el agar entre 45 y 52''C, y preparar previamente las muestras
sólidas; y líquidas de ser el caso
- Colocar Iml (solución madre si es sólida o del líquido según el caso) en la
placa
de Petri
- Transferir un volumen aproximado de 15 a 20 mi del agar, hasta completar
aproximadamente las % partes de la altura de la placa
- Agitar suavemente sobre la superficie simulando por 30 segundos
- Tapar y almacenar hasta que el agar solidifique
- Por último llevar a incubar las muestras

CONCLUCIONES
- Se identificó la presencia de microorganismos en las muestras así como
también la influencia que tiene el medio para su crecimiento y desarrollo
- Se determinó la presencia de aerobios mesófilos en los alimentos, en este caso
en el dedito y el helado casero así como el crecimiento de sus colonias a
medida que pasa el tiempo
- Los recuento de microorganismo se basan por el números de colonia que se
desarrolla en la placa previamente inoculada con una cantidad conocidas de
alimentos e incubadas en condiciones ambientales determinadas

ANALISIS
Se puede notar que por las cantidad de colonia que se formaron en la muestra que la
cabina de flujo presenta menos colonias es decir que esta superficie tendríamos
microorganismo que las demás superficies

BIBLIOGRAFIA
Madigan M.T, Martinko J.M., Stahl D and Clark D.P., Brock Biology of microorganisms,
13th edition, UK, Pearson Benjamin Cummings, 2010.
Madigan M.T, Martinko J.M., Dunlap P.V. and Clark D.P., Brock Biología de los
microorganismos, 12a edición, UK, Pearson Education, 2009
MADIGAN, M.T., MARTINKO, J.M. y PARKER, J. (2004): Brock Biología de los
Microorganismos (10ª edición). Pearson Educación S.A.Madrid.
ANEXOS

COLONIAS EN LA MUESTRAS DEl

. DEDITO
COLONIAS EN LA MUESTRA DE
HELADO CASERO