Cuantificacion de Vitamina C

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FORENSES PROCEDIMIENTO DE
ORGANISMO DE INVESTIGACION JUDICIAL (OIJ) OPERACIÓN NORMADO

PODER JUDICIAL, COSTA RICA ESPECIFICO
PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION P-DCF-ECT-QUI-08

CUANTITATIVA DE COCAÍNA POR
CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTO
RENDIMIENTO
VERSION: 03 Rige desde: 05/04/2017 PAGINA: 1 de 20
Elaborado o modificado por: Revisado por Líder Técnico:
Licda. Giselle Gutiérrez Soto Lic. Ronald Castro Esquivel
A
Perito Judicial 2, Líder Técnico de Sección de Química Analítica
D
Sección de Química Analítica
LA
Visto Bueno Encargado de Calidad: Aprobado por:
O
TR
Lic. Jorge Cartín Elizondo Licda. Patricia Fallas Meléndez
Encargado de Calidad de Sección de Jefatura,
N
Química Analítica Sección de Química Analítica
O
C
CONTROL DE CAMBIOS A LA DOCUMENTACIÓN

O
Fecha de Fecha de Descripción del Cambio SCD Solicitado

N
Versión Aprobación Revisión por

01 30/09/2008 23/02/2016 Versión Inicial del Procedimiento - PFM
A
Cambio de redacción, cambio en la

PI
lista de materiales y reactivos, , se

reportan los parámetros de
O
02 23/02/2016 05/04/2017 validación de la metodología, - PFM

C
cambios en los criterios de

aceptación y rechazo, se incluye
nuevo estudio de validación y
presupuesto de incertidumbre.
Cambio de formato, cambio
unidades de medida.
Punto 3: se incluye una referencia
Punto 8: Cambio en el CVm. 06-17 PFM
03 05/04/2017 Punto 7.8.3 se modifica el número
de blancos a inyectar.
Nota 9 se modifica el número de
blancos a inyectar.
Se incluye anexo Número 05.
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FORENSES PROCEDIMIENTO DE
ORGANISMO DE INVESTIGACION JUDICIAL (OIJ) OPERACIÓN NORMADO
PODER JUDICIAL, COSTA RICA ESPECIFICO

CUANTITATIVA DE COCAÍNA POR
CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTO
RENDIMIENTO
VERSION: 03 Rige desde: 05/04/2017 PAGINA: 2 de 20
ESTE PROCEDIMIENTO ES UN DOCUMENTO CONFIDENCIAL

PARA USO INTERNO DEL DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FORENSES
SE PROHÍBE CUALQUIER REPRODUCCIÓN QUE NO SEA PARA ESTE FIN
La versión oficial digital es la que se mantiene en la ubicación que la Unidad
A
de Gestión de Calidad defina. La versión oficial impresa es la que se encuentra
D
en la Unidad de Gestión de Calidad. Cualquier otro documento impreso o
LA
digital será considerado como copia no controlada
O
TR
N
O
C
O
N
A
PI
O
C
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FORENSES VERSIÓN 03 PAGINA: 3 de 20

CUANTITATIVA DE COCAÍNA POR CROMATOGRAFIA
LIQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO
1 Objetivo:
El objetivo de este PON es describir en forma detallada el procedimiento para la determinación
del porcentaje de pureza de las muestras de clorhidrato de cocaína, de masa igual o superior a
los 100 gramos (o menores a 100 gramos cuando la autoridad judicial lo justifique) que se
reciben en el Área de Drogas de la Sección de Química Analítica, utilizando la técnica de
Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento.
2 Alcance:
Este procedimiento es de acatamiento obligatorio para el personal que labora en la Sección de
Química Analítica involucrado en el análisis cuantitativo de muestras de drogas.
A
D
Este PON se aplica en la Sección de Química Analítica para el análisis de muestras de
clorhidrato de cocaína de masa igual o superior a los 100 gramos (o menores a 100 gramos
LA
cuando la autoridad judicial lo justifique) que ingresan al Área de Drogas en forma de material
pulverizado o en forma compacta (principalmente bloques).
O
Los parámetros de validación son los siguientes:
TR
Especificidad: el método es específico para clorhidrato de cocaína según se ha evaluado a lo
N
largo de los años en que el mismo ha sido utilizado.
O
Linealidad: la curva es lineal en el ámbito analizado de 10 mg/ a 80 mg/L.

C
Selectividad: la cocaína es separada de los cortantes comúnmente utilizados (procaína,

O
lidocaína, benzocaína, entre otros) en todos los casos con factores de resolución mayores a 2.
N
Límite de detección: es de 1 mg/L estimado por corredores de errores, el cual se encuentra por
A
debajo del ámbito de trabajo.

PI
Límite de cuantificación: es de 6 mg/L estimado por corredores de errores, el cual se encuentra

por debajo del ámbito de trabajo.
O
C
Los coeficientes de variación (CV) obtenidos para los patrones son los siguientes:
20,06 mg/L: 0,50 %

40,12 mg/L: 0,29 %
60,17 mg/L: 0,22%
Los porcentajes de sesgo obtenidos con una muestra real enriquecida son los siguientes:
25,43 mg/L: -0,46%

35,86 mg/L: 1,61%
51,10 mg/L: 1,69%
No hay diferencias significativas entre las pendientes o entre los interceptos de las curvas de
calibración de diferentes analistas, ni diferencia significativa entre las pendientes y los
interceptos de las curvas de diferentes días de un mismo analista, ni en las desviaciones, esto
de acuerdo con la prueba t y la prueba F.

Optimización: las muestras se preparan utilizando únicamente el buffer de pH 2,2. La

composición de la fase móvil es de 20 % de acetonitrilo y 80 % de buffer de pH 2,2.
3 Referencias:
Day, R.A. y Underwood, A.L., Química Analítica Cuantitativa, Quinta edición, Prentice-Hall
Hispanoamericana, México ,1989, p 188.
Estudio de validación de la estabilidad madre cocaína – informe de validación, realizada por el
Lic. Ronald Castro Esquivel en el año 2017 (002-QUI-VAL-(2)-2017).
Estudio de validación el parámetro de desempeño de la reproducibilidad de la metodología (CV
como RMS), realizado por el Lic. Ronald Castro Esquivel en el año 2017 (001-QUI-VAL-(2)-
A
2017).
D
Estudio de validación realizado por la Licda. Ana Lucrecia Montero Aguilar en los años 2000 a
LA
2003.
Estudio de validación realizado por la Licda. Giselle Gutiérrez Soto, el Lic. Guillermo Rosales
O
Mora y la Licda. Elisa Barrantes Oconitrillo, en el año 2013 (006-QUI-VAL-(1)-2013).
TR
Naciones Unidas. División de estupefacientes, Viena. Métodos para el Ensayo Inmediato de
Drogas de Uso Indebido. Austria, 1987.
N
Naciones Unidas. División de estupefacientes, Viena. Métodos Recomendados para el Ensayo de
Cocaína. Austria, 1987.
O
Presupuesto de incertidumbre del Procedimiento para la determinación cuantitativa de cocaína

C
por cromatografía líquida de alto rendimiento.

O
Skoog, D.A. y Leary, J.J. Análisis Instrumental, Cuarta Edición, McGraw Hill, México, 1996,
p.730-731.
N
A
4 Equipos y Materiales:
PI
Agitador de vidrio.
O
Agitador magnético.
Balanza analítica , 0 g a 220 g, resolución de ± 0,0001 g (o similar).
C
Balanza granataria, 0 g a 1200 g, resolución de ± 0,02 g (o similar).

Balones aforados de 100,00 mL, 50,00 mL y 25,00 mL (calibrados o tipo A con certificado de
calibración).
Beaker de plástico de al menos 1L de capacidad o superior.
Beaker de vidrio de 50 mL, 400 mL y 600 mL o similares.
Bisturí.
Bolsas de plástico para testigo.
Botellas de plástico con tapa.
Botellas de vidrio con tapa para almacenar reactivos.
Botellas de vidrio para los solventes del cromatógrafo.
Capilla extractora de gases.
Colador de plástico.
Copas de pesada (pueden ser nuevas o lavadas).
Cortador.
Cromatógrafo Líquido de Alto Rendimiento: Thermo Scientific/Accela, con detector de arreglo
de diodos, o similar.

Desecadora.
Desecante tipo silica gel con indicador de humedad.
Diatomita.
Embudos de plástico.
Equipo de filtración al vacío.
Espátulas.
Esponjas.
Filtros nuevos para el equipo de filtración (Alltech, de 47 mm, de acetato de celulosa para
agua y disoluciones acuosas y de nylon 66 para disolventes orgánicos, o similares).
Filtros nuevos para jeringas (Acrodisc, de 13 mm, 0,45 m, o similar).
Gabacha.
Goteros plásticos nuevos (para aforar).
Gradillas para viales.
A
Guantes desechables.
D
Hisopos.
LA
Hojas para bisturí (desechables).
Jeringas plásticas de 3 mL (nuevas, sin aguja).
Lentes de seguridad.
O
Libro control de equipo del Cromatógrafo Líquido de Alto Rendimiento.
TR
Marcador de tinta indeleble para vidrio.
Mascarilla.
Morteros y pistilos de porcelana.
N
Papel toalla.
O
Pastilla magnética.
pH-metro, resolución de ± 0,01 (o similar).
C
Pipeta automática de 10 µL a 100 µL (calibrada).

O
Pipeta automática de 5 mL.

Pipetas pasteur (para aforar).
N
Plato de pesada.
Probetas de vidrio de 10 mL, 100 mL y 1000 mL o similar.
A
Puntas para pipetas automáticas (nuevas).

PI
Recipiente plástico para desechos.

Sobres de manila.
O
Tubos de ensayo.
C
Viales de vidrio de 2 mL nuevos (para uso en el automuestreador).
Para el lavado de cristalería, prepare una disolución de detergente no iónico (neutro) o similar,
siguiendo las instrucciones del fabricante. Vacíe el contenido de la cristalería volumétrica y
enjuáguela con agua de grifo. Sumerja la cristalería en la disolución de detergente por al
menos dos horas. Lave con esponja y/o hisopo los beakers y probetas y agite los balones con
el jabón. Enjuague varias veces con agua de grifo y por último enjuague con agua desionizada.
Escurra y deje secar al aire libre.
Para el lavado del equipo de filtración y de las botellas de solventes del equipo HPLC.
Lave utilizando jabón líquido para cristalería, hisopo y agua de grifo las botellas de solventes y
el equipo de filtración al vacío. Por último enjuague con agua destilada.

5 Reactivos y Materiales de Referencia:

Acetonitrilo calidad HPLC.
Acido ortofosfórico concentrado para análisis.
Acido ortofosfórico 25 % para análisis (Ver Anexo Número 01).
Agua desionizada.
Agua de grifo.
Detergente neutro, o similar.
Disolución amortiguadora pH 2,2.
Disolución madre de clorhidrato de cocaína (2000 mg/mL)
Hexilamina (calidad para análisis).
Hidróxido de sodio (sólido, calidad para análisis).
Hidróxido de sodio 3 mol/L (Ver Anexo Número 01).
A
Metanol calidad HPLC.
D
Patrón certificado de clorhidrato de cocaína.
Sílica gel con indicador de humedad (desecante).
LA
O
6 Condiciones Ambientales:
TR
No. Condición ambiental Valor Valor Otras características
N
mínimo máximo
O
Ver punto 2.5 del

C
1 N/A N/A N/A

Procedimiento para el Uso y
Manejo del Cromatógrafo
O
Líquido de Alto Rendimiento.

N
A
7 Procedimiento:
PI
O
7.1 Obtención de la muestra

C
7.1.1 Proceda a seleccionar el número de unidades que formarán la muestra para análisis, de
acuerdo al Procedimiento para el muestreo de indicios.
Nota No. 1: Comúnmente la presentación de los indicios en los casos de narcotráfico es de
paquetes rectangulares con material sólido compacto o pulverizado.
7.1.2 Exponga una de las caras del contenido, cortando con bisturí o cortador (cutter) las
capas de envoltorios o embalajes del paquete.
7.1.3 Tome la cantidad suficiente de sólido para realizar las pruebas de color y las pruebas
cromatográficas y deposítelo en un tubo de ensayo (aproximadamente 0,01 gramo).
7.1.4 Tome cierta cantidad de sólido (procurando que la cantidad sea similar para cada toma)
y deposítela en una bolsa de plástico pequeña, con cierre de cremallera (bolsa para
testigos), y rotulada con el número de caso.
7.1.5 Mezcle con una espátula el contenido de la bolsa y determine la masa del contenido. La
cantidad de muestra total debe estar entre los 2,00 y los 2,20 gramos.

Nota No. 2: Si la cantidad de muestra tomada es inferior a los 2,00 gramos, repita los pasos
3.2.3 y 3.2.4, hasta obtener la cantidad apropiada. Si la cantidad de muestra tomada es
mayor a los 2,20 gramos, deposite el exceso en la bolsa donde se colocan los bloques de la
muestra ya sin envoltorios o embalajes.
Nota No. 3: Para otro tipo de envoltorios, que puedan dar origen a un peso total de droga
mayor a 100 gramos, tome para cada unidad la cantidad necesaria de material, procurando
obtener una cantidad final de aproximadamente 2,20 gramos.
7.1.6 Mezcle y homogenice el material obtenido para el análisis utilizando un mortero y un
pistilo limpios.
7.1.7 Proceda a pasar la muestra a través de un colador limpio y seco, a un plato de pesada u
a otro mortero y vuelva a mezclar y homogeneizar la muestra.
A
7.1.8 Repita los puntos 7.1.6 y 7.1.7 al menos tres veces, o hasta que se considere que la
D
muestra está totalmente homogénea.
LA
7.1.9 Guarde la muestra en una bolsa de plástico transparente (bolsa para testigos) y guarde
esta bolsa en un sobre de manila rotulado con el número de caso (número interno) y el
O
número de indicio correspondiente. La etiqueta del SADCF cumple la misma función.
TR
7.2 Preparación de un litro de disolución amortiguadora de pH 2,2 para la
N
disolución y dilución de muestras
O
C
7.2.1 Pese 2 gramos de hidróxido de sodio en un beaker y utilizando una balanza granataria.
7.2.2 Disuelva el sólido en 200 mL de agua desionizada (con ayuda de un agitador magnético
O
o manual) y viértalo en un beaker de plástico de la capacidad que permita contener el

N
volumen a preparar.
A
7.2.3 Utilice una probeta, mida 10 mL de ácido ortofosfórico concentrado y viértalo en el

beaker de plástico.
PI
7.2.4 Utilice una probeta, mida 790 mL de agua desionizada, viértala en el beaker de plástico
O
y agite (Utilice un agitador magnético o manual).

C
7.2.5 Utilice una pipeta automática, agregue 3 mL de hexilamina en el beaker de plástico.

Realice esta operación en la capilla.
7.2.6 Utilice el pH-metro para medir el pH de la disolución anterior y ajústelo al valor de pH
2,2. Para esto utilice disoluciones de ácido orto fosfórico al 25 % o de hidróxido de
sodio 3 mol/L, según sea necesario. Se prepara cada vez que se realice el análisis.
7.3 Preparación de un litro de disolución amortiguadora de pH 2,2 para el

cromatógrafo líquido
7.3.1 Repita los puntos 7.2.1 a 7.2.6, para preparar un litro de disolución para el equipo.
7.3.2 Filtre la disolución de acuerdo al punto 7.7 del presente PON.
Nota No. 4: La disolución amortiguadora se prepara cada vez que se realice el análisis.
Además, es posible preparar el buffer de 7.2 y el de 7.3 de forma conjunta, siempre que se

recuerde que la porción que se utiliza en el equipo tiene el paso adicional de filtración de forma
obligatoria.
7.4 Preparación de la disolución madre de clorhidrato de cocaína (2000mg/L)
Nota No. 5: Esta disolución se puede preparar y almacenar en la refrigeradora, por hasta un
plazo de 6 meses, de acuerdo con estudio de validación de la estabilidad.
7.4.1 Utilice la balanza analítica y un plato de pesada; pese con exactitud aproximadamente
0,1000 gramo del patrón de clorhidrato de cocaína (considere el valor de porcentaje de
pureza del patrón en la determinación de las concentraciones de calibración).
A
7.4.2 Traslade cuantitativamente el contenido del plato de pesada a un beaker de 50 mL,
D
utilice la disolución de pH 2,2 preparada en el punto 7.4.1 (como procedimiento
LA
opcional, pese por diferencia directamente en el beaker de vidrio o en una copa de
pesada y vea siguiente paso).
O
7.4.3 Transvase cuantitativamente el contenido del beaker a un balón aforado de 50,00 mL,
con la ayuda de un embudo y la disolución de pH 2,2 preparada en el punto 7.4.2.
TR
Como procedimiento opcional, utilice para pesar una copa de pesada, la cual se coloca
en la boca del balón de 50,00 mL y con la ayuda de la disolución de pH 2,2; transvase
N
cuantitativamente el contenido de la copa al balón.
O
7.4.4 Afore utilizando la misma disolución (con una pipeta pasteur o un gotero plástico), agite
manualmente y rotule el balón (identidad, concentración y fecha).Se recuerda lo
C
establecido en la Nota No. 5 como estabilidad para esta disolución.

O
N
7.5 Preparación de patrones para la curva de calibración y blancos

A
PI
7.5.1 Utilice una pipeta automática, mida una alícuota de 0,25 mL de la disolución madre
preparada en el punto 7.4 y viértala en un balón aforado de 25,00 mL.
O
7.5.2 Afore utilizando la disolución de pH 2,2 preparada en el punto 7.3 (utilice una pipeta
C
pasteur o un gotero plástico). Afore y rotule el balón (identidad y concentración).

7.5.3 Filtre sobre un vial de 2 mL, y utilizando una jeringa con su respectivo filtro, la cantidad
necesaria (aproximadamente 1,5 mL) del contenido del balón de 25,00 mL.
7.5.4 Repita los puntos 7.5.1 a 7.5.3 y obtenga así dos patrones de clorhidrato de cocaína de
20 mg/L. Rotule los viales (identidad y concentración).
7.5.5 Repita tres veces los pasos 7.5.1 a 7.5.3 pero mida una alícuota de 0,50 mL y obtenga
así tres patrones de clorhidrato de cocaína de 40 mg/L. Rotule los viales (identidad y
concentración).
7.5.6 Repita dos veces los pasos 7.5.1 a 7.5.3 pero mida una alícuota de 0,75 mL y obtenga
así dos patrones de clorhidrato de cocaína de 60 mg/L. Rotule los viales (identidad y
concentración).
7.5.7 Filtre en un vial de 2 mL y utilizando una jeringa con su respectivo filtro, la cantidad
necesaria (aproximadamente 1,5 mL) de la disolución de pH 2,2 preparada en el punto

7.1.1 y obtenga varios blancos los cuales se utilizan de manera alternada durante la
inyección de toda la secuencia. Rotule los viales (identidad de blanco).
Nota No. 6: Los patrones de calibración y blancos se preparan cada vez que se realice el
análisis.
7.6 Preparación de muestras
7.6.1 Utilice la balanza analítica y un plato de pesada y pese con exactitud aproximadamente
0,2000 gramo de la muestra homogeneizada según el punto 7.1 del presente PON. Para
el caso del análisis de las incógnitas de los estudios interlaboratoriales, en los cuales no
A
se dispone de 0,2000 gramos de muestra ver el Anexo Número 5.
D
Nota No. 7: Para casos no rutinarios, se debe preparar la muestra de manera que su
LA
concentración se encuentre siempre en la parte media de la recta de calibración. En estos
casos, el informe del equipo que se entregará, solamente brindará el valor de la concentración
interpolada (en mg/L). En estos casos el cálculo del % de pureza lo debe realizar cada perito
O
responsable (Ver Anexo Número 05). TR
7.6.2 Traslade cuantitativamente el contenido del plato de pesada a un beaker de 50 mL,
utilizando la disolución de pH 2,2 preparada en el punto 7.2 (como procedimiento
N
opcional, pese por diferencia directamente en el beaker de vidrio o copa de pesada).
O
7.6.3 Transvase cuantitativamente el contenido del beaker a un balón aforado de 100,00 mL,
con la ayuda de un embudo y la disolución de pH 2,2 preparada en el punto 7.2. Como
C
procedimiento opcional, utilice para pesar una copa de pesada, la cual se coloca en la
boca del balón de 100,00 mL y con la ayuda de la disolución de pH 2,2; transvase
O
cuantitativamente el contenido de la copa al balón.

N
7.6.4 Afore utilizando la misma disolución, agite manualmente, y rotule el balón (identidad de
A
muestra).
PI
7.6.5 Utilice una pipeta automática, mida una alícuota de 0,50 mL de la disolución del balón
de 100,00 mL y viértala en un balón aforado de 25,00 mL.
O
7.6.6 Afore con la disolución de pH 2,2 preparada en el punto 7.2, agite manualmente y rotule
C
el balón (identidad de muestra).

7.6.7 Filtre sobre un vial de 2 mL, y utilizando una jeringa con su respectivo filtro, la cantidad
necesaria (aproximadamente 1,5 mL) del contenido del balón de 25,00 mL.
7.6.8 Repita los pasos 7.6.1 a 7.6.7 y obtenga así dos repeticiones de la muestra para su
medición. Rotule los viales (identidad de muestra).
7.7 Filtrado de las disoluciones
Nota No. 8: Este procedimiento se utiliza para filtrar el agua desionizada, la disolución de pH
2,2; el acetonitrilo y el metanol que se utilizan en el cromatógrafo líquido.
7.7.1 Utilice el equipo de filtración al vacío y el filtro adecuado (ya sea para disolventes
orgánicos o para disoluciones acuosas) y filtre al vacío la disolución o disolvente
respectivo.

7.7.2 Enjuague el kitasato del equipo de filtración con los primeros mililitros del filtrado.
7.7.3 Continúe filtrando hasta obtener una cantidad de filtrado ligeramente superior a la
cantidad requerida para el equipo (generalmente un litro de cada disolución y de cada
disolvente).
7.7.4 Retire el recipiente respectivo del cromatógrafo y enjuáguelo dos veces con unos
mililitros del filtrado obtenido en el punto anterior. Vierta el resto del líquido filtrado y
coloque de nuevo el recipiente en el equipo.
7.8 Lectura de patrones y muestras
A
7.8.1 Utilice el Procedimiento para el Uso y Manejo del Cromatógrafo Líquido de Alto
D
Rendimiento, para el encendido del equipo y del automuestreador, la desgasificación de los
LA
disolventes y disoluciones, la purga de las líneas, la estabilización de las condiciones de
análisis, la realización de las secuencias de inyección, el monitoreo de señales, limpieza del
equipo y apagado del mismo. Utilice los métodos establecidos para el análisis de cocaína.
O
TR
7.8.2 Utilice, para la lectura de patrones y muestras de clorhidrato de cocaína, las siguientes:
N
Flujo: 1,2 mL/minuto.
Porcentajes: 20 % acetonitrilo y 80 % de la disolución de pH 2,2.
O
Tiempo de corrida: 6 minutos para la lectura de patrones.

C
7.8.3 Coloque en el carrusel del automuestreador del equipo y en el siguiente orden, los viales
correspondientes a: los dos blancos, seguidos de los siete patrones (utilizados como controles
O
positivos) en orden ascendente, de menor a mayor concentración, y luego las dos repeticiones
N
de cada muestra, inyectando al menos un blanco entre cada par de repeticiones.

Nota No. 9: Como controles positivos, en cada medición inyecte siete patrones de clorhidrato
A
de cocaína (con tres concentraciones diferentes) con los cuales se elabora la curva de
PI
calibración. Los patrones se preparan como se indica en el apartado 7.5 del presente PON,
hasta el paso 7.5.6.
O
Nota No. 10: Como controles negativos, inyecte al menos un blanco antes de inyectar los
C
patrones e inyecte al menos un blanco antes de inyectar las dos repeticiones de cada muestra.
Los blancos se preparan como se indica en el paso 7.5.7 del presente PON.
7.8.4 Inicie la secuencia de inyección.

7.8.5 Anote en el libro de control del equipo, los datos correspondientes y cualquier
observación que se considere importante sobre el estado en que encuentre el equipo.

8 Criterios de Aceptación o Rechazo de Resultados:
No. Criterio de aceptación Valor límite Corrección aplicable

Examine el cromatograma de la
muestra para observar si el área de
la misma excede la del patrón de
mayor concentración, en cuyo caso
Tiempo de retención de las Tr = ± 0,2 se diluye la muestra para que la
muestras bajo control con minutos concentración sea cercana al punto
1 respecto a los patrones de medio del ámbito de trabajo de la
cocaína. curva y re-inyecte esta dilución.
A
Si el cromatograma de la muestra ya
D
era correcto, puede ser necesario
volver a realizar el apartado 7.8 de
LA
este procedimiento.
Cuando la concentración de la
O
TR muestra es > 60mg/L, se debe
preparar más diluida la muestra, ya
sea porque se pesa menos cantidad
La concentración de las 20mg/L < de muestra en la madre o se toma
N
muestras debe encontrarse Concentración de una alícuota de menor volumen para
O
dentro del ámbito de trabajo, la muestra la dilución.

C
2 preferiblemente cerca de la o Cuando la concentración de la

parte media. Concentración de muestra es < 20mg/L, se debe
O
la muestra < preparar más concentrada la

60mg/L muestra, ya sea porque se pesa más
N
cantidad de muestra en la madre o

se toma una alícuota de mayor
A
volumen para la dilución.

PI
O
El coeficiente de variación de Se debe repetir el proceso de

la media (CVm) para las dos dilución (de 100 mL a 25 mL) y si
C
repeticiones de una muestra continúa el problema, se debe repetir

es reproducible (salvo casos CVm < 3,16% todo el procedimiento completo de
3 especiales, en matrices poco preparación para la muestra, es
comunes o muestras no decir, pesar y preparar de nuevo
homogéneas, con previa ambas repeticiones (salvo los casos
autorización de la Jefatura de especiales autorizados por la Jefatura
Sección). de Sección).
El pico del cromatograma

(señal de la cocaína) no debe
estar deformado ni presentar Picos resueltos y Consultar al Líder Técnico
4 signos de contaminación con Blancos limpios
otras sustancias. Los blancos
no deben presentar señales
correspondientes al analito.

9 Cálculos y evaluación de la incertidumbre:

9.1 El porcentaje de clorhidrato de cocaína se calcula a partir de la ecuación de la curva de
calibración (y = mx+b) obtenida del reporte de calibración (Ver anexo Número 02) donde “y”
es el área, “m” es la pendiente de la curva y “b” es el intercepto; con estos valores se despeja
el valor de “x” que corresponde a la concentración, de la cual se obtiene el valor de porcentaje.
9.2 Por lo tanto para el cálculo del porcentaje (%):
% = Cantidad en muestra (g) / masa muestra (g) * 100
Concentración (mg/L) = (Valor) mg/L (corresponde al valor de “x” del ajuste)
A
D
Cantidad en muestra = Cn (mg/L) * F dilución * F conversión * V preparación
LA
= (Valor) mg/L * 25,00 mL/0,500 mL * 1 g/1000 mg * 0,10000 L
O
donde
F = factor; TR
V = volumen en litros;
Cn = concentración (en mg/L; miligramos entre litro). O simplemente el Valor de concentración
N
en esas unidades.
O
Por lo tanto el porcentaje de pureza está determinado por:

C
% = (Valor) * 25/0,5 *1/1000 * 0,100 *100 % / m

O
N
donde m = masa muestra (expresado en g; gramos).

A
Este cálculo del porcentaje se realiza en forma automática; y aparece en el reporte de

resultados de las muestras (Ver Anexo Número 03).
PI
O
9.3 Para el reporte de la incertidumbre, esta se calculó utilizando una muestra real con un
valor de porcentaje de pureza de 85 %, obteniéndose el siguiente resultado:
C
Porcentaje de pureza: 85,3 %.

Incertidumbre combinada (u): 1,4 %.
Incertidumbre expandida (U): 2,8 %
(que es el resultado de multiplicar el valor de la incertidumbre combinada: 1,4%; por el factor
de cobertura k=2,0).
Dicho cálculo se realizó utilizando una hoja electrónica denominada cocaína validación.

10 Reporte de Análisis y Resultados
10.1 Para la impresión de los resultados (en formato digital PDF), se debe incluir para cada
muestra el reporte del blanco y el reporte de los resultados para cada una de las dos
repeticiones, el cual incluye el cromatograma y el resultado del porcentaje de clorhidrato de
cocaína. El reporte de la muestra se debe incorporar a la carpeta digital de cada caso.
Además se debe imprimir (en formato digital PDF) la curva de calibración, archivarla en la
Unidad Z, en la carpeta de resultados instrumentales o bien en el Sistema Automatizado del
Departamento de Ciencias Forenses (SADCF) cuando se encuentre habilitado el módulo
respectivo.
10.2 Para la impresión de resultados, ver el Procedimiento para el Uso y Manejo del
A
Cromatógrafo Líquido de Alto Rendimiento.
D
10.3 Se reporta el promedio de las dos repeticiones para cada muestra en términos del
LA
porcentaje de clorhidrato de cocaína, sin decimales. La incertidumbre expandida para el
método (± 2,8 %) estará incluida en el reporte de las muestras.
O
11 Medidas de Seguridad y Salud Ocupacional
TR
N
11.1 Utilice guantes desechables, lentes de seguridad, gabacha y mascarilla (esta última para
O
el proceso de homogeneización de las muestras).

C
11.2 Realice la preparación de las diferentes disoluciones en la capilla extractora de gases,

utilizando gabacha, guantes desechables y lentes de seguridad.
O
11.3 En caso que el ácido ortofosfórico, el hidróxido de sodio o cualquier otro reactivo de
N
peligro entre en contacto con la piel y/u ojos:

A
11.3.1 Remueva inmediatamente la ropa contaminada.

PI
11.3.2 Lave inmediatamente con agua abundante (del grifo) y obtenga ayuda médica.
11.4 Para el desecho de los residuos, proceda a verter el contenido de los balones en un
O
recipiente plástico que contiene una bolsa plástica con diatomita y que se destina para el
C
desecho de residuos acuosos.
12 Simbología:
CAL: Nomenclatura de la Supervisión para el Aseguramiento de la Calidad.
DCF: Departamento de Laboratorios de Ciencias Forenses.
HPLC: Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento.
CV: Coeficiente de variación, desviación relativa expresada como porcentaje.
N/A: No aplica.
PON: Procedimiento de Operación Normado.
Rs: Factor de Resolución.
SCD: Solicitud de Cambio Documental.
UGC: Unidad de Gestión de Calidad.
UV-Vis: Ultravioleta visible.
ANAB: National Accreditation Board (Ente Nacional de Acreditación de los Estados Unidos)

13 Terminología:
Disolución amortiguadora (buffer): es una disolución que se opone a grandes cambios en el pH

cuando se le adicionan iones hidronio o hidróxido, o cuando se le diluye.
pH: es el logaritmo negativo de la concentración del ión hidronio en una disolución

(formalmente pH = – log10 ([H+]) ).
A
14 Anexos
D
LA
No. de Anexo Nombre del Anexo
01 Anexo Número 01: Preparación de reactivos.
O
02
TR
Anexo Número 02: Reporte de la curva de calibración.
N
03 Anexo Número 03: Cromatogramas de un patrón de clorhidrato de cocaína.
O
Anexo Número 04: Cromatogramas de un blanco y una muestra con

04
C
clorhidrato de cocaína.
O
Anexo Número 05: Tratamiento de los resultados del análisis de purezas

05
(Comunicado 31-QUI-2016).
N
A
PI
O
C

Anexo Número 01
Preparación de Reactivos
Acido fósforico 25% p.a.: en un beaker de 400 mL, agregue 75 mL de agua desionizada y
agregue 25 mL de ácido ortofosfórico concentrado. Almacene en botella de vidrio rotulada
(identidad y fecha de preparación). Prepare la mínima cantidad posible cada vez que se
necesite.
Hidróxido de sodio 3 mol/L: en un beaker de 600 mL, pese 40 gramos de hidróxido de sodio.
Agregue 500 mL de agua desionizada y agite (utilizando un agitador magnético o manual)
hasta disolver el sólido. Almacene en botella de vidrio rotulada (F-28 Requisito de ANAB).
A
Prepare la mínima cantidad posible cada vez que se necesite.
D
LA
O
TR
N
O
C
O
N
A
PI
O
C

Anexo Número 02:
Reporte de la curva de calibración
A
D
LA
O
TR
N
O
C
O
N
A
PI
O
C

Anexo Número 03:
Cromatograma de un patrón de clorhidrato de cocaína
A
D
LA
O
TR
N
O
C
O
N
A
PI
O
C

Anexo Número 04
Cromatogramas de un blanco y una muestra con clorhidrato de cocaína
A
D
LA
O
TR
N
O
C
O
N
A
PI
O
C

A
D
LA
O
TR
N
O
C
O
N
A
PI
O
C

Anexo Número 05
Tratamiento de los resultados del análisis de purezas

(Comunicado 31-QUI-2016)
1) Casos de rutina (siempre que se pese 0,2 g de muestra en un balón de 100 mL y se afore,
de éste se tome 0,5 mL, se depositen en un balón de 25 mL y se afore el mismo); para estas
muestras se les dará directamente el reporte con el % de pureza, pero cada perito debe
realizar el cálculo para verificar el resultado que aparece en el informe del equipo.
2) Casos no rutinarios, se debe preparar la muestra de manera que su concentración se

encuentre siempre en la parte media de la recta de calibración. En estos casos, el informe del
A
equipo que se entregará, solamente brindará el valor de la concentración interpolada (en
D
mg/L). En estos casos el cálculo del % de pureza lo debe realizar cada perito responsable.
LA
Ejemplo: Se pesa 0,0512 g (51,2 mg) de una prueba interlaboratorial en un balón de 25 mL
para que la concentración de la disolución madre sea de aproximadamente 2000 mg/L. De la
O
disolución madre, se toma una alícuota de 0,5 mL y se lleva a un volumen de 25 mL. El
TR
informe del equipo indicará que la concentración interpolada de la muestra es 29,95 mg/L.
Entonces como:
N
% pureza = ((cantidad de muestra (mg) ÷ masa de muestra (mg) )) x 100%
O
Se calcula la cantidad de clorhidrato de cocaína en la muestra (en mg):

C
O
mg = Cn x "fd" x fc
N
Donde:
Cn = Concentración de muestra en en mg/L.
A
"fd" = factor de dilución = ( Volumen de dilución final ÷ Volumen de alícuota de la Madre ) x

PI
Volumen de disolución Madre = ( 25 mL ÷ 0,5 mL) x 25 mL = 1250 mL.

fc = factor de conversión = 1 L ÷ 1000 mL = 0,001 L / mL.
O
C
mg = 29,95 mg/L x 1250 mL x 0,001 L/mL = 37,44 mg.
Por lo tanto:
% pureza = ( cantidad de muestra (mg) ÷ masa de muestra (mg) ) x 100%
= (37,44 mg ÷ 51,2 mg) x 100% = 73%
Nota: El tratamiento de los resultados para los casos no rutinarios no esta incluido en el
alcance de la validación.

Cuantificacion de Vitamina C

Загружено:

Сведения о документе

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

Cuantificacion de Vitamina C

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FORENSES PROCEDIMIENTO DE

ORGANISMO DE INVESTIGACION JUDICIAL (OIJ) OPERACIÓN NORMADO

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION P-DCF-ECT-QUI-08

VERSION: 03 Rige desde: 05/04/2017 PAGINA: 1 de 20

Elaborado o modificado por: Revisado por Líder Técnico:

Licda. Giselle Gutiérrez Soto Lic. Ronald Castro Esquivel

CONTROL DE CAMBIOS A LA DOCUMENTACIÓN

Fecha de Fecha de Descripción del Cambio SCD Solicitado

Versión Aprobación Revisión por

Cambio de redacción, cambio en la

lista de materiales y reactivos, , se

02 23/02/2016 05/04/2017 validación de la metodología, - PFM

cambios en los criterios de

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION P-DCF-ECT-QUI-08

VERSION: 03 Rige desde: 05/04/2017 PAGINA: 2 de 20

ESTE PROCEDIMIENTO ES UN DOCUMENTO CONFIDENCIAL

La versión oficial digital es la que se mantiene en la ubicación que la Unidad

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION P-DCF-ECT-QUI-08

Linealidad: la curva es lineal en el ámbito analizado de 10 mg/ a 80 mg/L.

Selectividad: la cocaína es separada de los cortantes comúnmente utilizados (procaína,

debajo del ámbito de trabajo.

Límite de cuantificación: es de 6 mg/L estimado por corredores de errores, el cual se encuentra

20,06 mg/L: 0,50 %

25,43 mg/L: -0,46%

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION P-DCF-ECT-QUI-08

Optimización: las muestras se preparan utilizando únicamente el buffer de pH 2,2. La

Presupuesto de incertidumbre del Procedimiento para la determinación cuantitativa de cocaína

por cromatografía líquida de alto rendimiento.

Balanza granataria, 0 g a 1200 g, resolución de ± 0,02 g (o similar).

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION P-DCF-ECT-QUI-08

Pipeta automática de 10 µL a 100 µL (calibrada).

Pipeta automática de 5 mL.

Puntas para pipetas automáticas (nuevas).

Recipiente plástico para desechos.

Viales de vidrio de 2 mL nuevos (para uso en el automuestreador).

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION P-DCF-ECT-QUI-08

5 Reactivos y Materiales de Referencia:

Ver punto 2.5 del

1 N/A N/A N/A

Líquido de Alto Rendimiento.

7.1 Obtención de la muestra

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION P-DCF-ECT-QUI-08

o manual) y viértalo en un beaker de plástico de la capacidad que permita contener el

7.2.3 Utilice una probeta, mida 10 mL de ácido ortofosfórico concentrado y viértalo en el

y agite (Utilice un agitador magnético o manual).

7.2.5 Utilice una pipeta automática, agregue 3 mL de hexilamina en el beaker de plástico.

7.3 Preparación de un litro de disolución amortiguadora de pH 2,2 para el

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION P-DCF-ECT-QUI-08

7.4 Preparación de la disolución madre de clorhidrato de cocaína (2000mg/L)

establecido en la Nota No. 5 como estabilidad para esta disolución.

7.5 Preparación de patrones para la curva de calibración y blancos

pasteur o un gotero plástico). Afore y rotule el balón (identidad y concentración).

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION P-DCF-ECT-QUI-08

7.6 Preparación de muestras

cuantitativamente el contenido de la copa al balón.

el balón (identidad de muestra).

7.7 Filtrado de las disoluciones

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION P-DCF-ECT-QUI-08

7.8 Lectura de patrones y muestras

Tiempo de corrida: 6 minutos para la lectura de patrones.

de cada muestra, inyectando al menos un blanco entre cada par de repeticiones.

7.8.4 Inicie la secuencia de inyección.

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION P-DCF-ECT-QUI-08

8 Criterios de Aceptación o Rechazo de Resultados:

% = (Valor) * 25/0,5 1/1000 0,100 *100 % / m