Métodos:(Experimento)  Reactivo biuret

Materiales:

 Espectrofotómetro

Procedimiento:
 Gradilla para tubo de
ensayo Realización de una curva patrón:
como se desconoce el coeficiente
de extinción molar© de las
proteínas coloreadas con el
reactivo biuret, se procederá a
construir una curva de patrón,
midiendo la absorbancia de
soluciones con concentraciones
conocidas de proteínas, para sobre
ella interpolar el valor de Abs de
 Tubos de ensayo
la solución problemas y
 Vasos de precipitado
determinar su concentración
 Probetas, pipetas
gráficamente y también por
regresión lineal. Para ello se
dispone de una solución de 10
mg/ml de proteína (extracto de
levadura) a partir de ella se
realizan diluciones conocidas
aplicando la fórmula:

C1 * V1 = C2 * V2

 Extracto de levadura
Donde.

C1: concentración de la solución

Volumen Volume Abs.
inicial Agua n 570
Rx Nm.
V2: volumen de la solución inicial
.biuret
C2: concentración de la solución ml ml -
final 8,0 8,0 0
V2: volumen de la concentración 1,8 8,0 0,017
final 1,6 8,0 0,027
1,4 8,0 0,036
En 8 tubos se preparan, a partir de
la solución madre (C1= 10 mg/ml) 1,2 8,0 0,047
las soluciones de la tabla: 1,0 8,0 0,061
0,8 8,0 0,072
Al añadir el reactivo biuret deja
0,6 8,0 0,084
Reposar 10 minutos y leer la 0,4 8,0 0,095
absorbancia.
0,2 8,0 0,104
Conc.fina Volumen
0,0 8,0 0,113
l Sol,
Sol. a Madre
preparar Inicial
Tubo Mg/ml ml Medición de la absorbancia en el
Blanco 0 0,0 espectrofotómetro.
1 0,2 0,2 a) Seleccionar la longitud de
2 0,4 0,4 onda, 570 nm (longitud de
3 0,6 0,6 máxima absorbancia para la
4 0,8 0,8 reacción de biuret)
b) Poner en la cubeta del
5 1,0 1,0
espectrofotómetro el
6 1,2 1,2 contenido del tubo blanco,
7 1,4 1,4 secarla y limpiarla bien por
8 1,6 1,6 afuera e introducirla en el
9 1,8 1,8 espectrofotómetro.
c) Ajustar la lectura a 100 de
10 2,0 2,0 transmitancia y 0 de
absorbancia
d) Se devuelve el contenido al pueden despejar
tubo original y se mide la concentración que en este
absorbancia de las caso es de la muestra
soluciones de los otros desconocida.
tubos, comenzando por el
de menor concentración.
absorbancia vs
e) Limpiar con agua la cubeta, concentracion absorbancia
secarla por fuera y medir la 0.15
Abs del tubo muestra.

absorbancia
0.1 Linear
(absorbancia)
0.05
f) Con las medidas obtenidas y = 0.0552x + 0.0049
0 R² = 0.9977
de los tubos 1 al 8 y el 0 1 2 3
blanco (Abs= 0), se concentracion

construye una recta en

papel milimetrado,
representando las Conclusiones:
concentraciones en el eje de
 A mayor absorbancia,
abscisas y las Abs en las
mayor concentración de la
ordenadas.
proteína
 Violeta + intenso  mayor
g) Interpolar la Abs de la
[] y alta absorbancia
proteína problema en la
gráfica y calcular su  Violeta – intenso  menor
concentración. [] y baja absorbancia
 Se realizó del método de
curva patrón, tomando 10
h) Considerando que la puntos la gráfica
absorbancia es directamente absorbancia vs
proporcional a la concentración.
concentración y que la
relación es lineal: Y= a + b
X (Y = A + B x conc.).
Utilizando regresión lineal
se obtiene el valor de los
coeficientes A y B y se