UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA SANITARIA

DISTRIBUCIÓN UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

PRIMER LABORATORIO DEL CURSO
MICROBIOLOGÍA SANITARIA I – SA323
ARISTA VILLARRUEL MARTIN HIPOLITO– 20170613H
DOCENTE: ING. JORGE TELLO CABREROS

Lima, Perú
2018
 ÍNDICE

pág.
RESUMEN……………………………………………………………………… 3

INTRODUCCIÓN………………………………………………………………. 4

OBJETIVOS……………………………………………………………………. 5

MARCO TEÓRICO……………………………………………………………. 6

RESULTADOS………………………………………………………………… 16

DISCUSIÓN DE RESULTADOS…………………………………………….. 24

CONCLUSIONES……………………………………………………………… 26

RECOMENDACIONES……………………………………………………….. 27

CUESTIONARIO..……………………………………………………………... 28

FUENTES DE INFORMACIÓN………………………………………………. 29

ANEXOS………………………………………………………………………... 30

APÉNDICE……………………………………………………………………… 31

2
 RESUMEN

El poder de resolución del ojo humano, es decir, su capacidad para distinguir entre
dos objetos puntuales que se encuentran muy próximos, es de alrededor de 0,2 mm
en el mejor de los casos. Debido a ello, una parte muy sustancial de la gran
diversidad de seres vivos que constituyen nuestra biosfera escapó a la observación
humana hasta épocas muy recientes: se trata del grupo de seres vivos que hoy
denominamos microorganismos.

Los microorganismos constituyen un grupo de seres vivos sumamente heterogéneo

cuya única característica común es su reducido tamaño: todos son lo suficientemente
pequeños como para pasar inadvertidos al ojo humano, siendo preciso el uso de
dispositivos de aumento como el microscopio óptico o, en algunos casos, el
microscopio electrónico para poder observarlos. La gran mayoría de los
microorganismos son unicelulares, aunque una parte significativa de ellos tienen
organización subcelular y unos pocos forman agrupaciones de células de tipo
colonial sin llegar a constituir verdaderos organismos pluricelulares.

En esta práctica se llevó a cabo el cultivo y el aislamiento de diferentes bacterias,

para ello se empleó distintos medios de cultivo cada uno de ellos con propiedades
desiguales, por otra parte para llevar a fin dicha siembra se realizaron diferentes
métodos de cultivo en este caso en agar nutritivo y agar sabouraud. Todo esto se
realizó con la finalidad de identificar las particularidades de crecimiento de algunos
microorganismos dependiendo del medio de cultivo, los medios de cultivo se
dividen dependiendo del propósito, en este caso era para observar que bacterias
pueden crecer en los diferentes agares. Todo esto con el fin poder llevar a cabo
las distintas comparaciones de medios de cultivo y de esta manera poder
corroborarlo con la teoría.

3
 INTRODUCCIÓN

Los microorganismos son seres vivos invisibles a nuestra simple percepción que
todos nosotros tenemos. Pueden ser parte de distintas clases, abarcado hongos,
bacterias, algas, etc. Puede decirse que algunos de ellos son los primeros seres
vivos en aparecer sobre la faz de la tierra y hay algunas teorías que incluso
estipulan el origen de la vida fuera de ésta, con microorganismos provenientes del
exterior de la misma. Este tipo de formas de vida en general se componen de una
sola célula, aunque también existen organismos con más de una.

Algunos microorganismos son patógenos y causan enfermedades a personas,

animales y plantas, algunas de las cuales han sido un azote para
la humanidad desde tiempos inmemoriales. No obstante, la inmensa mayoría de
los microbios no son en absoluto perjudiciales y bastantes juegan un papel clave
en la biosfera al proporcionar oxígeno (algas y cianobacterias), y, otros,
descomponer la materia orgánica, mineralizarla y hacerla de nuevo accesible a
los productores, cerrando el ciclo de la materia.

Los microbios tienen múltiples formas y tamaños. Si un virus de tamaño promedio

tuviera el tamaño de una pelota de tenis, una bacteria sería del tamaño de media
cancha de tenis y una célula eucariota sería como un estadio entero de fútbol.

4
 OBJETIVOS

 Aprender a utilizar los equipos y materiales necesarios en el laboratorio

de microbiología para la preparación de medios de cultivo y conteo.

 Probar la formación de microorganismos expuestos en la naturaleza, con

requerimientos especiales de cultivo, tales como el agar nutritivo, agar
saboureud y caldo nutritivo.

 Conocer, aprender como preparas los medios de cultivos para el

crecimiento de microorganismos.

 Realizar un recuento de bacterias mediante la unidad formadora de

colonias (U.F.C)

 Según las muestras determinar el grado de contaminación y el tipo de

contaminante en los diferentes sectores de la facultad.

5
 MARCO TEÓRICO

CULTIVO DE BACTERIAS

Un cultivo es la forma en la que se hacen crecer los microorganismos (colonias) en

una superficie solida (agar) o en medio líquido (caldo) e incluso en células (línea
celular) y es utilizado como el método principal para poder estudiar a los agentes
causales de enfermedades, y saber si se trata de bacterias, hongos, virus, parásitos
o algas. (Murray, 2012) Ver FIG.1

FIG.1 CULTIVO DE
BACTERIAS

CARACTERISTICAS

Según Restrepo (2002) Menciona que:

1) Un microorganismo se puede sembrar en un medio líquido o en la

superficie de un medio sólido de agar.
2) Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde
azúcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto
de caldo de carne.
3) La principal diferencia entre un medio de cultivo sólido y uno líquido es que
el medio de cultivo sólido contiene un 1,5% - 2% de agar-agar, mientras
que el medio líquido no contiene agar-agar.
4) A la izquierda, placas de Petri con cultivos bacterianos en medio sólido. A
la derecha, tubos con cultivos en medio líquido inoculados con puntas de
micro-pipeta.

6
INDICACIONES

Si hablamos de cómo se cultivan las bacterias tenemos que hacerlo también de

unas condiciones generales que deben darse:

Nutrientes adecuados disponibles. Un cultivo de bacterias adecuado para

investigar ha de contener como mínimo carbono, nitrógeno, azufre, fósforos y
sales inorgánicas. Actualmente, la forma más extendida de aportar estas
sustancias a los medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente
fácilmente asequible de nitrógeno y carbón. A menudo se añaden al medio de
cultivo ciertos colorantes.

Consistencia del medio. Partiendo de un medio líquido podemos modificar su

consistencia añadiendo productos como la albúmina, gelatina o agar.

Luz ambiental. La mayoría de los microorganismos de un cultivo de bacterias

crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar.

Temperatura. En líneas generales los patógenos humanos crecen en rangos de

temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC.

Humedad y pH. Un mínimo de humedad en medio y atmosfera es necesario para

el desarrollo, así como un pH neutro.

Esterilidad. Fundamental recordar que todos los medios de cultivo han de estar
perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan
alterar, enmascara o impedir el crecimiento.

Especies bacterianas.

Son tan parecidas morfológicamente que es

imposible diferenciarlas sólo con el uso del
microscopio.

En este caso, para identificar cada tipo de

bacteria, se estudian sus características
bioquímicas sembrándolas en medios de
cultivo especiales. Ver FIG.2

FIG. 2: MUESTRAS EN
EL LABORATORIO

7
MEDIOS DE CULTIVOS:

Son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en

condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Son
esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su
fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y
reproducibilidad de los resultados obtenidos.

Un medio de cultivo es una técnica de laboratorio (véase microbiología) que consta

de un gel o una solución que contiene los nutrientes necesarios para permitir, en
condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento
de virus, microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso pequeñas plantas.
Según lo que se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones.

Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes

de ser preparados; ya preparados pueden encontrarse en estado sólido,
semisólido o líquido. El objetivo último del cultivo es variado: antibiograma,
identificación, multiplicación.

Una placa de agar, un ejemplo de crecimiento medio bacteriano. Las líneas y los
puntos naranjas son colonias bacterianas. Ver FIG. 3

FIG.3: MEDIO
DE CULTIVO

8
CLASIFICACIÓN

SEGÚN SU ORIGEN

 Naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen

animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya
composición química no se conoce exactamente.

 Sintéticos: son los medios que contienen una composición química

definida cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para obtener
resultados reproducibles.

 Semisintéticos: son los sintéticos a los que se les añaden factores de

crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por
ejemplo extracto de levadura.

SEGÚN SU ESTADO FISICO (CONSITENCIA)

 Líquidos: Se utilizan preferentemente para favorecer el desarrollo

bacteriano de células estresadas. En determinadas ocasiones no se
pueden sustituir por los medios sólidos, por ejemplo en la síntesis de
exotoxinas, pigmentos, enzimas, etc. - Ejemplo: Agua peptonada, Caldo
común, Caldo Saboread, etc.

 Semisólidos: Se utilizan para obtener bacterias aisladas por la formación

de colonias sobre la superficie del medio de cultivo y para el estudio de la
morfología de las colonias, lo que no permiten los medios líquidos. Se
diferencian porque tienen una sustancia de sostén, que puede ser agar-
agar. - Ejemplo: Agar Común, Agar SS, Agar Cerebro Corazón, Agar
Saboureaud, etc.

 sólidos: Se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias. Tienen un

menor porcentaje de agar, por lo que no solidifican totalmente a la
temperatura ambiente. - Ejemplo: Agar MIO, Agar SIM

Difco y BBL. (2003). Manual de Medios de Cultivo Microbiológicos.

9
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

Hay 3 tipos de medios de cultivo

 Agar nutritivo:
El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina
para todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece sólido incluso a
relativamente altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en
este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las
colonias pequeñas. Ver FIG.4
En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece como
una sustancia espesa, con colonias difícilmente observables.
El agar nutritivo contiene normalmente:
0,5% de peptona;
0,3% de extracto de carne/extracto de levadura;
1,5% de agar;
Su almacenamiento es a 2°C - 30°C
Es muy higroscópico y PH casi neutro (6,8 ± 0,2) a 25 °C.

FIG.4 BIOXON

10
 Caldo nutritivo:

Es un medio líquido compuesto por una infusión de carne, ClNa, peptona,

extracto de levadura y también fosfato disódico. Es usado como base para
otros caldos que puedan contener más nutrientes. Ver FIG.5

El caldo nutritivo contiene:

0,5% de peptona;
0.3% de extracto de carne

PH final: 6,9 ± 0,2

Si es necesario se puede calentar hasta disolver.

Distribuir en tubos y luego esterilizar. Ver FIG.6
Reacciona de 118°C hasta 121°C durante 15 minutos.

Es un producto muy higroscópico.

Conservar el envase completamente cerrado al abrigo de la luz en un lugar
frio y seco.

FIG.5 CALDO FIG.6 ESTERILIZADO

NUTRITIVO

11
 Agar sabouraud:

Medio utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de

hongos patógenos y saprófitos. También es útil para el cultivo de
levaduras.
Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos,
particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel, pelo, etc.).
En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para
el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la
presencia de cloranfenicol y el pH ácido, favorecen el crecimiento de
hongos por sobre el de bacterias. Además, al medio de cultivo, pueden
agregarse otros agentes selectivos de crecimiento. Ver FIG.7

El agar sabouraud contiene:

15% de agar
40% de dextrosa
10% de peptona

- Su pH final es de 5,6 ± 0.2 a

25°C
- Almacenamiento de 2°C – 30°C
- Muy higroscópico
- Autoclave a 121°C por 15 minutos. FIG.7 AGAR
SABOURAUD

Referencia:
American Public Health Association, American Chemical Society,
Association of Official Agricultural Chemists (1920).

12
PREPARACION DE LAS PLACAS PETRI

Las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y estéril dentro de ellas
y en un ambiente aséptico (por ejemplo en la proximidad de la llama de un
mechero Bunsen) es conveniente homogenizar el medio en el transcurso de la
operación para evitar que el agar sedimente en el fondo del recipiente y no se
distribuya por igual en todas las placas.

1) Preparación del agar

El agar es una sustancia gelatinosa que se usa para cultivar bacterias. Está hecho
de un tipo de alga roja que proporciona una superficie de crecimiento ideal para
muchos tipos distintos de bacterias. Algunos tipos de agar contienen nutrientes
añadidos (como la sangre de oveja), lo cual ayuda a promover un crecimiento
bacteriano más sólido. Ver FIG.8

 Necesitamos 1,2 g (aproximadamente 1/2 cucharadita) de polvo de agar

para cada placa de Petri de 10 cm (4 pulgadas) que deseas usar.
 En un plato o bol resistente al calor, mezcla 1/2 cucharadita de agar
nutritivo en polvo con 60 ml (aproximadamente 1/4 taza) de agua caliente.
Multiplica estas cantidades por la cantidad de placas de Petri que planeas
usar.
 Coloca el bol o plato en el microondas y ponlo a hervir durante 1 minuto,
vigilándolo para asegurarte de que la solución de agar no hierva en exceso.
 Una vez que la solución esté lista, el polvo de agar debe estar disuelto por
completo y el líquido debe ser claro.
 Deja enfriar la solución de agar durante varios minutos antes de proseguir.

FIG.8 PLACA
PETRI

13
2) Preparación de las placas Petri

 Las placas de Petri deben estar bien esterilizadas antes de usarlas para
cultivar bacterias; de otro modo, los resultados del experimento podrían
verse afectados. Las placas de Petri recién compradas deben venir
esterilizadas y selladas en empaques de plástico.

 Saca la placa de Petri de su paquete y separa las dos mitades. Con mucho
cuidado, vierte la solución de agar caliente en la mitad inferior de la placa
de Petri, solo lo suficiente para formar una capa por encima del fondo de
la placa.
 Vuelve a colocar rápido la mitad superior de la placa de Petri para evitar
que las bacterias transmitidas por el aire contaminen el experimento.
Reserva la placa de Petri durante 30 minutos a 2 horas, hasta que la
solución de agar se enfríe y se endurezca (cuando esté lista, se parecerá
a gelatina cuajada).

3) Refrigera las placas de Petri hasta que estén listas para su uso.

Las placas de Petri llenas de agar, debes almacenarlas en el refrigerador hasta

que estés listo para continuar con el experimento.

 Al momento de guardar las placas de Petri en el refrigerador, debes

colocarlas boca abajo. Esto ayudará a evitar que cualquier condensación
de agua en la tapa gotee sobre el agar e interrumpa la superficie en
crecimiento.
 Las placas de Petri llenas de agar se conservarán el refrigerador
hasta un par de meses. Cuando estés listo para usarlas, retíralas del
refrigerador y deja que alcancen la temperatura ambiente antes de
introducir tus muestras.

14
4) Coloca las placas de Petri en un lugar oscuro y cálido.

Este viene a ser el último proceso de la preparación de placas Petri, ya que por
último se debe colocar en un lugar donde los rayos uv o simplemente la luz natural
puedan cambiar el estado alterando la placa Petri.
Deja las placas de Petri en un lugar oscuro y cálido donde las bacterias puedan
desarrollarse sin perturbaciones, durante varios días. No olvides almacenarlas
boca abajo, de modo que las gotas de agua no interrumpan el crecimiento de las
bacterias. Ver FIG.9

 La temperatura ideal para el crecimiento de las bacterias es entre 20 y 37

°C. Si es necesario, puedes colocar las placas de Petri en un lugar frío,
pero las bacterias crecerán con mayor lentitud.

 Deja que las bacterias se desarrollen durante 4 a 6 días, ya que eso les
dará a los cultivos suficiente tiempo para crecer. Una vez que las bacterias
empiecen a crecer, podrías notar un olor particular que proviene de las
placas.

FIG.9 PLACA PETRI

DESPUES DEL PROCESO

Referencias:

http://www.stevespanglerscience.com/lab/experiments/growing-bacteria

15
 RESULTADOS

 Datos del Grupo N° 1:

Procedimiento B: Crecimiento de Bacterias en Caldo de Cultivo

Pipeta estéril Pipeta estéril Pipeta no estéril

Grupo N°1
Tubo estéril Tubo no estéril Tubo estéril

Cantidad de
Ninguno Moderado Abundante
crecimiento

Distribución de
Trasparente Turbidez Película
crecimiento
Olor Imperceptible Imperceptible Pútrido

Grupo N° 1
Ambiente Baño de varones 2° piso
N° de hongo 4
- Penicillium (3)
- Aspergillus (4)
Tipo de hongo
- Candida spp (1)
- Levadura (2)
- Penicillium: forma circular oscura con
bordes bancos.
Algunas características - Aspergillus: de un color verde oscuro.
- Candida spp: de un color blanco circular.
- Levadura: de color rojizo y blanco.

Día de exposición 28/08/18

Tiempo de exposición / 15 minutos / 6 días

días de reproducción

Hora / temperatura 1:49 pm – 2:04 pm / 18°C

Condiciones Poca luz solar

16
  Datos del grupo N°2:

Procedimiento A: Colonias de Bacterias desarrolladas en placas en medio Agar

Nutritivo

Placa N°1 Placa N°2 Placa N°3 Placa N°4

Estéril Estéril Estéril NO Estéril
Grupo
Ambiente: Sector C Sector D
2 biblioteca primer
Sector A Sector B
I. Estéril I. NO NO abrir NO abrir
Pelo Huella
piso estéril

N° de Colonias 23 20 13 1 3 4 42

X1=2mm
X2=3mm X1=0.5mm
X1=3mm X22=1mm
X3=3mm X2=0.5mm
X2=1mm X23=1mm
X4=1mm X3=0.5mm
X3=0.5mm X24=1mm
X5=2mm X4=1mm
X4=4mm X1=3mm X25=1mm
X6=3mm X5=1mm
X5=Irregu. X2=2.5mm X26=1mm
X7=4mm X6=1mm
X6=4mm X3=Irregular X27=1mm
X8=4mm X7=1mm
X7=2mm X4=2mm X28=1mm
X9=2mm X8=1mm
X8=1mm X5=1mm X29=1mm
X10=3mm X1=3mm X9=1mm
X9=1mm X6=2mm X1=3mm X30=1mm
X11=5mm X2=1mm X10=1mm
X10=1mm X7=1mm X2=4mm X31=1mm
Tamaño X12=1mm
X11=1mm X8=4mm
X1=3mm
X3=4mm
X3=1mm X11=1mm
X13=7mm X4=2mm X32=1.5mm
X12=1mm
X12=1mm X9=1mm X33=1.5mm
X14=2mm X13=1mm
X13=1mm X10=1mm X34=1.5mm
X15=2mm X14=1mm
X14=1mm X11=1mm X35=1.5mm
X16=8mm X15=1mm
X15=1mm X12=1mm X36=2mm
X17=3mm X16=1mm
X16=1mm X13=2.5mm X37=2mm
X18=2mm X17=1mm
X17=1mm X38=2mm
X19=1mm X18=1mm
X18=1mm X39=2mm
X20=4mm X19=1mm
X19=1mm X40=3mm
X21=2mm X20=1mm
X22=3mm X41=3mm
X21=1mm
X23=4mm X42=4mm

Lisos: x1, x2, x3, x4, x9,

Lisos: x1, x2,
x10, x11, x12, x13, x14,
Lisos: x1, x3, x11, x3, x8, x9, x10,
Liso: x1, x8 x15, x16, x17, x18, x19, x20,
x20, x23, x22, x21, x19 x11, x12, x13, Liso: x2,
Ondulantes: x30, x31, x32, x33, x34,
Margen o lobular:x7, x2, x5, x14, x15, x16, x3 Lisos: x1, x2,
x2, x4, x5, x6, Liso:x1 x35, x36, x37, x38, x39,
borde x6, x10, x12, x15, x16 x17, x18, x19, Ondulante x3, x4
x7, x9, x10, x40, x41, x42.
ondulante:x8, x13, x20 s:x1
x11, x12, x3 Ondulantes: x5, x6, x7,
x4, x9, x14, x17, x18 Ondulantes:
x8, x21, x22, x23, x24, x25,
x4, x6, x7
x26, x27, x28, x29.
Plano: x1, x2, x3, x4, x9,
x10, x11, x12, x13, x14,
Plano: x7, x1, x2, Plano: x1, x2,
x15, x16, x17, x18, x19, x20,
x3, x4, x5, x6, x9, x3, x4, x8 Plano: x1, x2,
x5, x6, x7, x8, x21, x22,
x10, x14, x15, x17, Cóncavo: x6, x4, x5, x6, x7, Plano: x3
Plano: x23, x24, x25, x30, x31,
Elevación x18, x19, x22 x7, x9, x10, x11, x8, x9, x10, Plano:x1
x1, x2, x3
Cóncavo: x1,
x32, x33, x34, x35, x36,
Cóncavo: x8, x23, x12, x13, x14, x11, x12, x13 x2, x4
x37, x38, x39, x40, x41,
x20, x8, x13, x12, x16, x15, x16, x17,
x42.
x21 x18, x19, x20
Cóncavo: x26, x27, x28,
x29.
Crema: x1, Crema: x1, x2, x3, x4,
Crema: x1, x3, x4,
x5, x6, x7, x11, x9, x10, x11, x12, x13, x14,
x5, x10, x14, x15, x17,
x12, x13, x14 x15, x16, x17, x18, x19, x20,
x18, x19, x20, x21,
x15. x16, x17, Todas x5, x6, x7, x8, x21, x22,
x22, x23. Todas son Crema: Todas son
Pigmentación Anaranjado: x6, x7,
x18, x19, x20.
cremas x1
son
crema
x23, x24, x25, x28, x29, x30,
Anaranjado: cremas x31, x32, x33, x34, x35,
x8, x9.
x2, x3, x4. x36, x37, x38, x39, x40,
Amarillo: x2, x11,
Amarillo: x8, x41, x42.
x12, x13, x16.
x9, x10. Amarillo: x26, x27.
Todas Todas
Todas son Todas son Todas son
C. Óptico Todas son opacas
opacas opacas
son son
opacas
Todas son opacas
opacas opacas

17
 Ambiente Biblioteca

La placa se colocó al fondo, con

Características
pocas personas a su alrededor.

Día de exposición 28 de Agosto 2018

Hora 13:30-13:45 pm
Tiempo de exposición/Días
15minutos
expuestos

Tiempo del crecimiento micro

7 días
bacteriano

Tipo de Agar Agar nutritivo

Cantidad de personas 1 (el encargado de la muestra)

Temperatura 19°C (Temperatura de ambiente)

 Grupo 2: Agar Sabouraud

Procedimiento C:

Grupo 2

Ambiente Laboratorio de Fisicoquímica

Tiempo de exposición: 15 minutos

Fecha de exposición 28/08/18
Numero de hondos observados 8 hongos

Tipos de hongos Penicillium spp (3), levaduras (5)

 Levaduras: Son de forma circular, de

color blancos y de tamaño pequeño a
mediano.
 Penicillium spp: Forma circular, de
Características
contextura algodonosa, con bordes
blancos y centro gris verdoso

Nota: Los resultados se vieron 7 días después de la preparación.

18
 Ambiente Laboratorio de Fisicoquímica

La placa se colocó al medio. El

Características
lugar estaba ventilado y sin polvo.
Día de exposición 28 de agosto 2018
Hora 13:30-13:45 pm
Tiempo de exposición/Días
15minutos
expuestos
Tiempo del crecimiento micro
7 días
bacteriano
Tipo de Agar Agar Sabouraud
Cantidad de personas 1 (el encargado de la muestra)
Temperatura 21°C (Temperatura de ambiente)

 Datos del grupo N° 3

Procedimiento B: Crecimiento de Bacterias en Caldo de Cultivo

N° 1 N° 2 N° 3

Grupo N°3
Tubo estéril Tubo no estéril Tubo estéril
Pipeta estéril Pipeta estéril Pipeta no estéril

Cantidad de Moderado Escaso Abundante

crecimiento

Distribución de Sedimento Turbidez Película

crecimiento

Olor Pútrido Imperceptible Imperceptible

Tabla : Crecimiento de bacterias en caldo nutritivo (Grupo N°3)

19
  Grupo N° 3

Procedimiento C

Ambiente Aula vacía 2 piso

Número de hongos 2

Tipos de hongos Aspergillus (1), Candida (1)

 Aspergillus: Tiene forma

concéntrica, núcleo verde oscuro.
Características
 Cándida: Colonia pequeña de
color blanco sin forma definida.

Factores de crecimiento

Ambiente Aula vacía 2 piso (161)

Día de exposición 28/08/18

Hora 1:50 pm – 2:05 pm

Tiempo de exposición/días de
15 minutos / 6 dias
reproducción

Cantidad de personas 0 personas

Características del lugar donde Puerta a medio abrir, había 1 ventana

se dejó la muestra. abierta.

FIG.10 CRECIMIENTO DE
BACTERIAS

20
  Datos del Grupo N°4:

Procedimiento A: Colonia de bacterias en placas de medio agar nutritivo.Ver

(FIG.11)

Placa Placa
Placa N1º Placa N°2
N°3 N°4 No
Estéril Estéril
estéril estéril
Sector
Grupo Laboratorio D:
Sector
de Fisico Inocu-
Sector A: Sector C: Inocu-
2 Quimica lador
Pelo B: Huella lador
no
estéril
estéril

Número
de 35 3 5 1 1 3 -
colonias
X1=6.5 X19=6
X2=9 X20=3
X3 =6 X21=13
X4=1
X22=1.4
X5=8
X23=1.2
X6=3
X24=1.9
X1=4.5
X7=2 X25=4 X1=3
X1=3 X2=2.5
Tamaño X8=4.5 X26=1 X1=6 X1=6.5 X2=3.5
X2=3.5 X3=2 -
(mm) X9=2.3 X27=2,2 X3=2.5
X3=3 X4=3
X10=5 X28=25
X5=2.7
X11=2 X29=2
X12=3 X30=4.2
X13=1.8 X31=2
X14=3 X32=7
X15=1
X33=1.1
X16=2.3 X34=3
X17=2.9 X35=1
X18=4.5
Liso
x1,x3,x4,x6,x10,
x13,x14,x15,x17,
x20,x23,x24, x25,
X1=liso
x29, x30, x31, X1=liso
X1=liso X2=liso
x33, x34 X1=liso X1=liso X2=liso
Margen X2=liso X3=liso -
Lobular X3=liso
X3=liso X4=liso
x2, x8, x19, x21,
X5=liso
x27, x32
Ondular
x5, x7, x9, x11,
x12, x16, x18,

21
 Todas
X1=pla Todas
Todas son Todas son son X1=plano
Elevación no son -
lanas planas planas
planas
x22, x26, x28,
Crema
x35
x1, x8, x9, x16,
x18, x19, x22,
X1=Amari
x24, x26, x28,
llo
x32, x33, x35
X2=Amari
Amarillo X1=Anar
llo
x2, x6, x10, x11, anjado
X1=Amarillo X3=Amari
Pigmenta- x12, x14, x17, X1=amaril X1=am X2=Anar
X2=Crema llo -
ción x20, x25, x29, lo arillo anjado
X3=Crema X4=
x31, x34 X3=Crem
Anaranja
Anaranjado a
do
x5, x13, x21, x27,
X5=Crem
x30
a
Blanco
x3, x4, x7, x15,
x23
Todas son
Todas
Caracterís- opacas Todas son Es Es Son
son -
ticas excepto x22 y opacas opaca opaca opacas
opacas
x28

Factores de crecimiento

Procedimiento C:

Observación: estuvo expuesto al

Ambiente durante: 15min Ambiente: Laboratorio de
Microbiología
Tiempo de cultivo: 168 horas
Hora de exposición : 2:04 pm--2:19pm
Temperatura 20°C
Fecha de exposición 27/08/18
Numero de hondos observados 14
penicillium spp(5), penicillium
Tipos de hongos cándida (2) levadura(7)

5 hongos de color negro

2 hongos de color blanco
Características
6 levaduras de color crema
1 levadura de color naranja

22
 Tabla de datos del Grupo 5:

Procedimiento B: Crecimiento de Bacterias en Caldo de Cultivo.

Pipeta estéril Pipeta estéril Pipeta no estéril

Grupo N°5
Tubo estéril Tubo no estéril Tubo estéril
Cantidad de crecimiento escaso abundante moderado
Distribución de
sedimento película Turbidez fina uniforme
crecimiento
Olor aromático pútrido Ligeramente pútrido

Factores de crecimiento

Procedimiento C: Ver FIG.12

Grupo N° 5
Ambiente Sala de tesis
N° de hongo 1
Tipo de hongo Aspergillus-niger
Forma: filamentosa
Superficie: umbilicada
Algunas caracteristicas Levaduras: verde opaco
Colonias blancas con micelio aéreo de
color negro

FIG.11 FIG.12

23
 DISCUSIÓN DE RESULTADOS

En el grupo N°1:

 En el grupo 2 se observó que la placa Petri estéril N°1, Baño de varones

2° piso, se demoró en la exposición, unos 15 minutos, con una cantidad de
15 personas.
 También se observó que corría un viento moderado en un cubículo, sobre
iluminación.
 En una pipeta estéril de tubo estéril con pipeta estéril, da como resultado
abundante, con una distribución de película y un olor imperceptible.
 En una pipeta no estéril de tubo estéril con pipeta estéril, da como resultado
abundante, con una distribución de sedimento y un olor pútrido.
 En una pipeta estéril de tubo estéril con pipeta estéril, da como resultado
abundante, con una distribución de turbidez y un olor pútrido.

En el Grupo N°2:

 En la biblioteca del primer piso se posaba un ambiente calido.

 En la biblioteca había un Flujo constante de personas, específicamente
25 personas mientras estuvo la placa.

 También se encontró en el aula vacía, 9 tipos de hongos como los

Penicillium (2), Aspergillus (3), alternarías (2), levadura (2), a una
temperatura de ambiente.

 En esta muestra del aula vacía, se encontraba con la puerta abierta y con
2 ventanas abiertas y 2 no cerradas.

En el Grupo N°3:

 En este grupo, plantearemos que la cantidad de crecimiento de la pipeta

estéril, con tubo estéril, es escaso, con una distribución de crecimiento
formando sedimento, de olor pútrido.
 También comentaremos que cantidad de crecimiento de la pipeta no
estéril, con tubo estéril, es escaso, con una distribución de crecimiento
formando sedimento, de olor imperceptible.

24
  Luego, fomentaremos que la cantidad de crecimiento de la pipeta estéril,
con tubo no estéril, es moderado, con una distribución de crecimiento
formando sedimento, de olor imperceptible.

En el Grupo N° 4:

 En este grupo, se puede notar que en la placa N°1 se puede ver que
existen 35 colonias de márgenes lisos, lobular, ondulantes con elevaciones
planas, de colores opacos translucidos.
 Por otra parte, en la placa N° 2, en la sección A (pelo) de 10 colonias. se
sabe que las 5 son lisas y planas, de una pigmentación blancas humo de
color opacas translucidas.
 En la placa N°2 de la sección B (alrededor de la huella), de colonias de
márgenes de lisos ondulante irregular, planas de color blancas humo y
opacas.
 Por consiguiente, En la placa N°2 de la sección C (I. Estéril), de 2 colonias
ondulantes y plana, de color blanco tenue opaca translucida.

En el Grupo N° 5:

 En este procedimiento daremos a conocer que en el ambiente de aquel

experimento se realizó en la sala de tesis, en un tiempo a aproximado de
15 minutos de observación y con los tiempos de crecimiento micro
bacteriano de 6 días.

 También se dio a conocer tipos de hongos como: Aspergillus-niger.

 En el lugar de dicho experimento, había mucha ventilación con poca

iluminación en el ambiente.

25
 CONCLUSIONES

 En el salón vacío, la gran cantidad de microorganismos localizados en el

laboratorio se debe en mayor parte a la temperatura con respecto al medio
ambiente

 Con respecto al baño de la FIA, se puede comentar que gran cantidad de

humedad que se posa en ese ambiente puede originar más fácilmente la
reproducción de los hongos.

 En cuanto al agar nutritivo, así como la peptona, son de fuente principal de

nitrógeno orgánico del extracto de carne que contiene sustancias solubles
en agua de tejidos de animales; bajo determinados medios bacteriológicos
como es la temperatura, presión, etc.

 Por último, mencionaremos la gran cantidad de colonias por parte del

análisis del ambiente de la Sala de Tesis, esto se debe que con mayor
presencia diaria de alumnos con lo que se da un aumento por la mala
ventilación en la sala de tesis.

26
 RECOMENDACIONES

1.- Deben emplearse, preferiblemente, de manera preventiva y no “curativa”, ya

que una de las principales estrategias que emplean estos microorganismos, es el
de la competencia por el medio en el que se desarrollan. Por ejemplo, resulta
más fácil para Trichoderma o Bacillus colonizar toda la rizosfera sin tener que
competir con otro microorganismo por este espacio.
2.- Deben aplicarse preferiblemente en horas de la tarde, cuando el sol comienza
a ocultarse.
3.- Si desafortunadamente, la incidencia de la enfermedad es muy elevada, lo
más recomendable es alternar con algún fungicida, y posteriormente, aplicar el
controlador biológico.
4.- A pesar que algunas casa comerciales indican que estos pueden ser
combinados con otros productos, incluyendo algunos fungicidas, lo más
recomendable es realizar las aspersiones de manera individual.

5.- Debemos tener una aspiradora exclusivamente para la aplicación de

controladores biológicos, ya que, la mayoría de los ingredientes activos de los
productos químicos podrían quedar adheridos a las paredes de las aspiradoras.

6.- El uso de estos de estos microorganismos, no solamente ayuda al manejo de

enfermedades, también se han reportado efectos como estimulantes en la
germinación de semillas y promotor del crecimiento de las raíces y del follaje.

27
CUESTIONARIO

28
 FUENTES DE INFORMACIÓN

 Murray, P. (2012). Microbiología Médica. España. Recuperado de:

http://www.medicomicrobiologo.com/home.html

 Restrepo, A (2002). Enfermedades Infecciosas. Ed 6. Recuperado de:

https://books.google.com/books?id=67FIJx2qfU8C&pg=PA14

 Difco y BBL. (2003). Manual de Medios de Cultivo Microbiológicos.

 Recuperado de:
http://hongos-alergénicos.reviberoammicol.com/files/019.PDF

 Bacterias. (2007). En Manual de la Microbiología de los Alimentos. (págs.

19-30). Recuperado de:
https://www.semicrobiologia.org/storage/secciones/publicaciones/semafor
o/52/sem-52.pdf
 French, E., & Heber, T. (1980). Métodos de Investigación Fitopatológica.
Managua.
 Olivas, E. (2012). Manual de Prácticas: Laboratorio de Microbiología.

 PELCZAR, M. (1998). Microbiología. México. 4ta edición. Recuperado de:

https://es.scribd.com/doc/28738204/Microbiologia

 Recuperado de:
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.%20Cultivo%20de
%20microorganismos.pdf

 Recuperado de: http://bilbo.edu.uy/-microbio/indol.html

29
 ANEXOS

FIG. A FIG. B

FIG. C FIG. C

30
 APENDICE

MATERIALES QUE SE USARON

 Balanza Calibrada
 Papel Kraft
 Espátula
 Probeta
 Vaso
 Vagueta
 Mechero Bunsen
 Trípode
 Rejilla
 2 guantes de asbesto
 Algodón

1. DIAGRAMA DE FLUJO

Mezclar 8 gr de peptona y extracto

de carne (5 y 3 gr respectivamente)

CALDO NUTRITIVO Diluir con 1 lt de agua destilada.

Distribuir y esterilizar al Se calienta para que la solución sea

Autoclave a 118-121 °C, más efectiva.
durante 15 minutos.

31
 Mezclar 23 gr de peptona, extracto
de carne y agar (5, 3 y 15grms
respectivamente)

AGAR NUTRITIVO

Diluir con 1 lt de agua ionizada. Si es

posible se calienta hasta diluir.

Distribuir y esterilizar al Autoclave a

118-121 °C, durante 15 minutos.

Mezclar 65 gr de peptona, dextrosa

y agar (10, 40 y 15gr
respectivamente)

AGAR SABOURAUD

Diluir con 1 lt de agua ionizada. Si es

posible se calienta hasta diluir.

Distribuir y esterilizar al Autoclave a

118-121 °C, durante 15 minutos.

32
 Vaciar el tubo de ensayo en cada uno
de los tres Petri esterilizados y 1 no
esterilizado.

Tomar 4 tubos de ensayo de agar Exponer al ambiente

fundido.

PROCEDIMIENTO “A”
1

Dividir en 4 zonas: No abrir esta

Zona A: Pelo placa

Zona B: Huella 3
digital

Zona C: Inoculador
estéril
No abrir esta
Zona D: Inoculador placa
no estéril

33
 PROCEDIMIENTO “B”

Pipeta Pipeta Pipeta no

estéril estéril estéril

N°1 N°2 N°3

TUBO ESTERIL TUBO NO TUBO ESTERIL

ESTERIL

Exponemos 15 minutos en un
determinado ambiente de la facultad

Ubicar el contenido del tubo de Invertir los Petri e incubarlos a 37°C,

ensayo 5(agar saboraud) en el Petri. durante 48 horas.

PROCEDIMIENTO “C”

34