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Lima, Perú
2017
UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA
Facultad de Ingeniería Ambiental
Índice
1. Resumen.………………..…………………………………………………......……7
2. Introducción………………………………………………………………..….……..8
3. Objetivos…………………………………………………………………...………...9
4. Marco Teórico………………………………………………………………..…….10
4.1. Cultivo de bacterias…………………………………………………………..10
4.1.1. Necesidades nutricionales………………………………………...…10
4.1.2. Condiciones físicas necesarias para el cultivo de
microorganismos………………………………………………….…….12
4.2. Medios bacteriológicos……………………………………………………....14
4.2.1. Preparación de medios bacteriológicos…………………………….15
4.3. Medios de cultivo utilizados…………………………………………………16
4.3.1. Agar nutritivo……………………………………………………..……16
4.3.2. Caldo nutritivo…………………………………………………………16
4.3.3. Agar saboraud………………………………………………………...17
4.4. Morfología de las colonias en la superficie de un medio solido…………18
4.4.1. Forma de la colonia…………………………………………………..18
4.4.2. Borde o margen de la colonia……………………………………….18
4.4.3. Elevación de la colonia……………………………………………….18
4.4.4. Superficie de la colonia………………………………………………19
4.4.5. Cromogenesis o pigmentación…………………………………..….19
4.4.6. Características ópticas…………………………………………….…19
5. Metodología………………………………………………………………………..20
5.1. Materiales…………………………………………………………………..…20
5.2. Procedimiento………………………………………………………………...20
5.2.1. Procedimiento A……………………………………………………....20
5.2.2. Procedimiento C……………………………………………………....23
6. Resultados………………………………………………………………………….24
6.1. Procedimiento A………………………………………………………………24
6.1.1. Resultados del grupo 1……………………………………………....24
6.1.2. Resultados del grupo 2……………………………………………....27
6.1.3. Resultados del grupo 3…………………………………………...….29
6.1.4. Resultados del grupo 4…………………………………………...….31
6.2. Procedimiento C…………………………………………………………...…34
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6.2.1. Resultados del grupo 1……………………………………………....34
6.2.2. Resultados del grupo 2…………………………………………...….35
6.2.3. Resultados del grupo 3………………………………………………36
6.2.4. Resultados del grupo 4………………………………………...…….37
6.2.5. Resultados del grupo 5…………………………………………...….38
7. Discusión de resultados……………………………………………....................39
8. Conclusiones…………………………………………………………………..…..40
9. Recomendaciones…………………………………………………………….…..41
10. Cuestionario…………………………………………………………………..……42
10.1. ¿Qué factores influyen en la flora microbiana del aire?..........................42
10.2. ¿Qué grupos de agentes causa la mayor incidencia de enfermedades
respiratorias?...........................................................................................42
10.3. Explicar cuatro enfermedades que son transmitidas por el aire….…....43
10.4. Mencionar las principales características de: Rhizopus nigricans,
Alternaria, Sacharomyces cerevisae………………………………….……43
10.5. ¿Cuáles son los ingredientes del caldo nutritivo y agar nutritivo? ¿Qué
clase de nutrientes proporciona cada uno de los ingredientes?..............46
11. Fuentes de información…………………………………………………………...47
12. Anexos……………………………………………………………………………...48
12.1. Material brindado por el docente…………………………………………..49
13. Apéndice……………………………………………………………………………52
13.1. Diagrama de flujo…………………………………………………………...52
13.2. Datos originales……………………………………………………………..53
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Índice de tablas
Tabla 6.3: Resultados de la tercera y cuarta placa de Petri del grupo 1……......25
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Índice de figuras
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Figura 6.12: Placa 4 (Grupo 3)……………………………………………………….30
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1. Resumen
Sin embargo el día 4 de abril se pudo trabajar con las muestras, y se revisó e
identifico las colonias en placas con agar nutritivo, mientras que fueron
hongos en la placa con agar saboraud. La indicación del docente fue
contabilizar y tipificar según un cuadro teórico que él nos proporcionó, las
colonias para comparar y discutir posteriormente nuestros resultados.
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2. Introducción
- Alternaria
- Aspergillus
- Levaduras
- Rhizopus
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3. Objetivos
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4. Marco teórico
Desde los hombres hasta los microorganismos, todas las formas de vida,
tienen en común determinadas necesidades nutricionales en términos de
necesidad químicas para llevar a cabo su crecimiento y sus funciones
normales. Las siguientes observaciones confirman lo anterior:
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4.1.2. Condiciones físicas necesarias para el cultivo de microorganismos
Temperatura
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Necesidad o ausencia de gases
Luz ambiental
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Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar
la aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso
impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especímenes
inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de
cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como agente
esterilizante)
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4.2.1. Preparación de medios bacteriológicos
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3. El medio se pondra en recipientes adeciados, como tubos, matraces,
botellas, cuyas bocas se cierran con tapones de algodón, pasltico o cubiertas
de metal.
4. Los medios se esterilizan generalmente en el autoclave.
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Peptona......................................................................................................5.0g
Tripteína.....................................................................................................5.0g
Glucosa....................................................................................................40.0g
Cloranfenicol............................................................................................0.05g
Agar.........................................................................................................15.0g
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4.4. Morfologia de las colonias en la superficie de un medio sólido
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4.4.4. Superficie de las colonias
a) Lisa
b) Rugosa
c) Plegado
a) Crema
b) Amarilla
c) Anaranjado
d) Blanca
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5. Metodología
5.1. Materiales
a) 4 tubos de ensayo
b) 4 placas Petri ( 3 estériles y 1 no estéril )
c) 2 inoculadores ( 1 estéril y 1 no estéril)
d) Incubadora
e) Refrigeradora
f) Agar nutritivo
g) Agar saboraud
5.2. Procedimiento
5.2.1. Procedimiento A
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Placa N° 1:
Placa N° 2:
A) Pelo
B) Huella Digital
C) Inoculador Estéril
D) Inoculador no Estéril
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Placa N° 3 y N° 4:
No se deben abrir.
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5.2.2. Procedimiento C
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6. Resultados
6.1.1. Grupo 1
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Tabla 6.3: Resultados de la tercera y cuarta placa de Petri del grupo 1.
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6.1.2. Grupo 2
Tabla 6.4: Resultados de las placas del grupo 2.
X7=lobular
X1=plana
X2=plana
X3=plana X1=plana
X1= plana X2=plana Todos son Todos son
Elevación
X4=plana X2=plana X3=plana planos planos
X4=plana
X5=convexa (1)
X6=plana
X7=plana
Pigmentació amarillo=4 X1=rojo
X1,X2,X3,X4 Todos son Todos son
n crema=23 X2=blanco =blanco crema crema
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6.1.3. Grupo 3
Tabla 6.5: Resultados de las placas del grupo 3.
Placa
Placa N°4 No
Placa N°1 Estéril Placa N°2Esteril N°3
Estéril
Estéril
Grupo 3
Centro de No
Sector A Sector B Sector C Sector D No abrir
Estudiantes(FIA) abrir
(PELO) (HUELLA) (I.ESTERIL) (I.NO.ESTERIL)
N° De
colonias 20 0 2 1 2 0 10
X1mm=3
X1=1mm X1=0.5mm X2mm=2
X1mm=11 X1=1mm X2=1mm
Tamaño X2=1mm X3mm=1
X1.5mm=2
X4mm=2
X2mm=6
X6.5mm=1
X3mm=1
X8.5mm=1
Liso=1 Ondula
Margen Liso=18 todos Liso=9
Ondulado do
Ondulado=2 lisos rizoide =1
=1
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6.1.4. Grupo 4
Tabla 6.6: Resultado de la primera placa del grupo 4.
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Tabla 6.7: Resultados de las placas 2,3 y 4 del grupo 4.
PLACA N 3 PLACA N 4 NO
PLACA N 2 ESTÉRIL
ESTÉRIL ESTÉRIL
GRUPO 4 Sector C Sector D
sector B
sector A (pelo) (inoculador (inoculador no No abrir No abrir
(Huella)
estéril) estéril)
NÚMERO DE
4 - 1 7 - 6
COLONIAS
X1 = 3 mm X1 = 2 mm X1 = 3 mm X1 = 3 mm
X2 = 1.5 mm X2 = 4 mm X2 = 2 mm
X3 = 1 mm X3 = 2 mm X3 = 5 mm
TAMAÑO X4 = 1 mm X4 = 1 mm X4 = 3 mm
X5 = 2 mm X5 = 2 mm
X6 = 1.5 mm X6 = 1 mm
X7 = 2 mm
X1 = ondulado X1 = liso X1 = lobular X1 = liso
X2 = ondulado X2 = lobular X2 = liso
X3 =
X3 = ondulado X3 = liso
ondulado
MARGEN O BORDE X4 =
X4 = ondulado X4 = liso
ondulado
X5 = ondulado X5 = lobular
X6 = lobular X6 = liso
X7 = ondulado
X1 = convexa
X1 = plana X1 = Plana X1 = plana
con botón
X2 = convexa
X2 = plana X2 = plana
con botón
X3 = plana X3 = plana X3 = plana
X4 = convexa
ELEVACIÓN X4 = plana X4 = plana
con botón
convexa
X5 = convexa
X5 = con
con botón
botón
X6 = plana X6 = plana
X7 = plana
X1 Y X2 =
6 BLANCAS, 1 AMARILLAS
PIGMENTACIÓN 4 BLANCAS 1 BLANCA
AMARILLA (X5) LAS DEMÁS
BLANCAS
4 OPACAS Y 2
CARÁCTER ÓPTICO TRANSLÚCIDO
TRASLÚCIDAS
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6.2. Procedimiento C
6.2.1. Grupo 1
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6.2.2. Grupo 2
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6.2.3. Grupo 3
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6.2.4. Grupo 4
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6.2.5. Grupo 5
Tabla 6.12: Resultados de la quinta placa del grupo 5.
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7. Discusión de resultados
En el procedimiento A respecto a la placa 1 se observa en todos los grupos
que realizaron el procedimiento que la cantidad y características de las
colonias es similar para todos varia de 20 a 32 y de por lo que podemos
afirmar que todos los ambientes de la facultad tienen la misma distribución de
bacterias.
Respecto a la placa 2 en el sector A, los grupos 2 y 3 tienen nulo desarrollo
de bacterias a comparación del grupo 4 que posee 4 colonias y el grupo 1 que
posee una colonia, por lo que es razonable decir que la higiene de los alumnos
marcó la diferencia en este sector; en el sector B, el grupo 1 observo 7
colonias, de esto podemos deducir que la mano del alumno estuvo con
considerable suciedad, los grupos 2 y 4 no tuvieron desarrollo por lo que es
probable que los alumnos se lavaron las manos previamente y el grupo 3 con
2 colonias se lo considera como normal. En el sector C todos los grupos tienen
entre 1 o 2 colonias en dicho sector lo que indica que tuvieron un leve
descuido y contaminaron sus inoculadores. Finalmente en el sector D las 25
colonias del grupo 1 nos indican que los alumnos contaminaron de manera
considerable su inoculador.
En la placa 3 los grupos 1 y 2 presentan algunas colonias, mínimas pero
aceptables teniendo en cuenta que el ambiente presenta algún tipo de
contaminación o que la placa tuvo un mínimo de contaminación a pesar de la
esterilización; y que los grupos 3 y 4 vertieron sus agares y cerraron la placa
correctamente y en el momento preciso, eso explicaría que no hubo
crecimiento en sus placas.
La placa 4 los grupos 2, 3 y 4 presentaron 5, 10 y 6 colonias respectivamente,
mientras que el grupo 1 tuvo 26 colonias; quiere decir que el grupo 1 demoro
y por el largo tiempo de exposición de su placa se contamino mucho más.
En el procedimiento C, los 4 grupos colocaron sus placas al mismo tiempo y
las retiraron todos juntos, los resultados fueron los esperados ya que se
encontraron una gran cantidad de hongos los cuales se podían identificar y
especificar de qué tipo de hongo se trataba. Cada placa tenía algún tipo de
hongo propio del ambiente al cual fue expuesto. Sin embargo cabe destacar
que en el salón de tesis y el centro de estudiantes se obtuvo una cantidad
preocupante de hongos lo cual nos indica una falta de higiene constante en
dichos ambiente. Resaltar también que la poca cantidad de hongos en el baño
de las damas indica que la higiene es la adecuada y constante en lo que
corresponde a los conserjes de la facultad.
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8. Conclusiones
Se aprendió a usar los materiales necesarios para preparar los medios de
cultivos para el desarrollo de bacterias y hongos, evitando que los materiales
se contaminen se pudo obtener unos resultados más precisos.
Se comprendió como se debe manejar los equipos del laboratorio de
microbiología y así se pudo evitar algún accidente durante el trabajo realizado.
A pesar de que los materiales de cultivos se encontraban vencidos, se pudo
demostrar la presencia de hongos y bacterias en algunos ambientes de la
Facultad de Ingeniería Ambiental.
Se concluye que a pesar de que las placas hayan sido expuestas a diferentes
ambientes de la facultad, tienen muchos hongos en común y otros propios de
ese lugar. Salvo excepciones como el centro de facultad y el salón de tesis.
El ambiente más contaminado de la facultad es el salón de tesis, ya que la
cantidad de hongos que se encontró fue superior a los demás ambientes, de
esto se podría concluir que la limpieza de ese ambiente es deficiente, a la vez
la menor cantidad de hongos se encontró en el baño de mujeres, lo cual nos
indica que el mantenimiento y el uso por parte de las damas es correcto y
eficiente.
Es muy importante no contaminar los materiales ya que en los resultados se
hace difícil identificar y reconocer el tipo de hongo o bacterias que se
encuentran dentro del tubo o la placa Petri.
Se logró identificar diferentes tipos de hongos: Aspergillus, Alternarias,
levaduras y rhizopus. Se pudieron reconocer gracias a su morfología (forma,
color, elevación, etc.)
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9. Recomendaciones
Es necesario tener en disposición los guantes ya que se trabaja a altas
temperaturas en caso se solidifique un medio de cultivo.
No se realizó el procedimiento B debido a que el caldo nutritivo no estuvo en
condiciones de ser utilizado, por ello pedimos que se renueve el insumo de
laboratorio.
Una mejor organización de los grupos y rapidez en sus trabajos puedo mejorar
el trabajo de laboratorio en su conjunto.
Al colocar las placas Petri en la incubadora, se deben colocar invertidas.
Se recomienda poner todas las placas al mismo tiempo que contienen el Agar
Saboraud encima de la incubadora.
Lavar bien los materiales que se usaran en el trabajo ya que éstas podrían
contaminarse y así hacer variar un resultado esperado.
Siempre trabajar cerca del mechero para evitar la contaminación de los
materiales estériles.
Por ningún motivo abrir por completo las placas Petri que están estériles, solo
se levanta un poco y se ingresa el agar.
Esterilizar todo los materiales que se usaran para los medios de cultivo.
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10. Cuestionario
a) Temperatura
b) Humedad
c) Partículas en suspensión
d) Ventilación
e) Radiación
Lesión por Irritantes Respiratorios: Los irritantes causan una lesión aguda del
epitelio respiratorio y pueden desencadenar procesos de oxidación celular
que generan lesiones definitivas. También las sustancias causticas como
álcalis, los humos metálicos y los vapores de polímeros pueden
desencadenar episodios agudos de compromiso general (fiebre) y dificultad
respiratoria.
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progresivas y cancerígenas (asbesto, sílice en discusión). Otros cuadros
respiratorios importantes son la enfermedad bronquial obstructiva crónica y
cuadros infecciosos, virales y bacterianos.
Características de la Aspergillus
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Características de la Penicillium
Características de la Rhizobium
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d) Crece casi en cualquier temperatura, pero su desarrollo es más óptimo
a una temperatura de 25 °C (77 °F),
e) Sus dimensiones son de 0.5-0.9 x 1.2-3.0 µm, y cuenta con flagelos.
Sacharomyze cervicae
Conocida desde la antigüedad, la levadura del pan, del vino y de la cerveza,
Saccharomyces cerevisiae, se ha convertido en un organismo de estudio
común en el laboratorio. La investigación biotecnológica ha mantenido el uso
tradicional que se ha hecho de esta levadura, mejorando e innovando los
procesos de panificación y de producción de bebidas alcohólicas. A la vez,
este organismo ha ganado protagonismo en el laboratorio al convertirse en un
potente modelo biológico de organismos eucariotas. Sus características son
las siguientes:
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10.5. ¿Cuáles son los ingredientes del caldo nutritivo y agar nutritivo? ¿Qué
clase de nutrientes proporciona cada uno de los ingredientes?
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11. Fuentes de información
http://hongos-alergenicos.reviberoammicol.com/files/019.PDF (Visualizado el
10/04/2017)
Pelczar M., Reid R. y E. Chan., 1969, Microbiología, Segunda edición, pág.
88, Mexico, Editorial Mc Graw Hill
http://www.enfermedadesrespiratorias.org/ (Visualizado el 10/04/2017)
http://candidiasisweb.com/que-es/aspergillus.php (Visualizado el 10/04/2017)
https://global.britannica.com/science/Rhizopus (Visualizado el 10/04/2017)
http://www.insht.es/RiesgosBiologicos/Contenidos/Fichas%20de%20agentes
%20biologicos/Fichas/Alter%20spp.pdf (Visualizado el 10/04/2017)
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12. Anexos
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13. Apéndice
13.1. Diagrama de flujo
Preparación de los
medios de cultivo.
Se vierte en una
placa de Petri.
¿Se
solidifico
el medio?
Se expone a un
NO SI determinado ambiente
por 15 minutos.
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13.2. Datos originales
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