FRAGILIDAD OSMÓTICA DE LOS ERITROCITOS

I. INTRODUCCIÓN

Los eritrocitos son células anucleadas que contienen proteínas transportadoras de

oxígeno, conservan las enzimas de la glicólisis y generalmente mantienen una forma
de disco bicóncavo que facilita su función de intercambio, por presentar una amplia
superficie de exposición, para un volumen determinado. Los eritrocitos tienden a
agruparse en pilas de discos, o rollos, los cuales pueden observarse cuando la
concentración de los mismos es elevada. La forma y el volumen de los eritrocitos
cambia cuando varía la cantidad de agua contenida dentro de su membrana, pudiendo
tomar una forma estrellada o espinosa (crenación) o bien inflándose hasta adquirir la
forma de una esfera (esferocitos). Cuando la célula no puede resistir la carga de agua
que recibe, la membrana se rompe (hemólisis) y se libera la hemoglobina. La hemólisis
es un proceso que ocurre en una población mixta de células por lo que no ocurre en
un solo punto y a la misma velocidad en todos los casos. Como el punto final es un
tanto difícil de apreciar, debido a que la hemólisis ocurre en forma que se hace
asintótica al 100 %.

El estudio de la fragilidad osmótica de los eritrocitos valora la resistencia de los

eritrocitos a soluciones de presión osmótica decreciente, en condiciones constantes
de pH y de temperatura. Para ello, se enfrentan los eritrocitos problema a soluciones
tamponadas de cloruro sódico cuya concentración es decreciente a partir de 9
gramos por mil (soluciones hipotónicas).

En condiciones normales, un eritrocito puede aceptar sin hemolizarse una entrada de

agua que incremente su volumen en un 70% como máximo.

Esta prueba evalúa por tanto la capacidad que tienen los glóbulos rojos de soportar un
incremento tenido acuoso (resistencia osmótica eritrocitaria o ROE). Dentro de una
misma sangre la ROE de los eritrocitos varia de unos a otros (Laboratorio CyB, 2017).

II. OBJETIVOS
 Determinar el grado de resistencia de los eritrocitos a la acción hemolizante de
soluciones hipotónicas.
 Evaluar la capacidad que tiene los eritrocitos de soportar un aumento de su
contenido acuoso (resistencia osmótica eritrocitaria o ROE).

III. MATERIALES Y REACTIVOS

 Solución de NaCl Q.P. al 1%
 Agua destilada
 24 tubos de ensayo 13x100 mm.
  Sangre heparinizada (5ml.)
 Pipetas serológicas de 5 ml. 1/10
 Vortex
 Gradilla
 Bolsa plástica

IV. PROCEDIMIENTO
 Colocar los 24 tubos de ensayo en una gradilla y enumerar del 1 al 24.
 Colocar 3.5 ml. de solución de NaCl al 1% en el primer tubo, 3.4 en el segundo
tubo, 3.3 en tercer tubo y así sucesivamente, en cantidades correspondientes a
los números que llevan los tubos.

 Añadir a cada tubo la cantidad de agua destilada necesaria para que el

volumen total alcance a 5ml.
 Obtener 5 ml de sangre venosa y mezclar en un frasco con anticoagulante en
condiciones estériles. La sangre se mezcla bien y se airea antes de su empleo.
 Agregar 3 gotas de sangre heparinizada para cada tubo e invertir con mucho
cuidado para asegurar su mezcla.

 Dejar en reposo durante 60 minutos.

 Examinar los tubos observando en qué punto comienza la hemólisis, y en qué
punto es completa. El menor indicio de color rojo en el líquido que sobrenada
 indica destrucción de los glóbulos rojos resistentes. La hemólisis completa
queda indicada por una solución rojo claro y ausencia de residuo en el fondo
del tubo o de endurecimiento al agitar ligeramente el tubo.

CUADRO DE DILUCIONES
Tubo NaCl 1% Agua [] Tubo NaCl 1% Agua []
N° ml. destilada NaCl N° ml. destilada NaCl
ml. ml.
1 3.5 1.5 0.70 13 2.3 2.7 0.46
2 3.4 1.6 0.68 14 2.2 2.8 0.44
3 3.3 1.7 0.66 15 2.1 2.9 0.42
4 3.2 1.8 0.64 16 2.0 3.0 0.40
5 3.1 1.9 0.62 17 1.9 3.1 0.38
6 3.0 2.0 0.60 18 1.8 3.2 0.36
7 2.9 2.1 0.58 19 1.7 3.3 0.34
8 2.8 2.2 0.56 20 1.6 3.4 0.32
9 2.7 2.3 0.54 21 1.5 3.5 0.30
10 2.6 2.4 0.52 22 1.4 3.6 0.28
11 2.5 2.5 0.50 23 1.3 3.7 0.26
12 2.4 2.6 0.48 24 1.2 3.8 0.24

V. LECTURA
La prueba de la fragilidad de eritrocitos es expresada sobre una curva en papel
milimétrico lineal, indicando las concentraciones salinas a las cuales: a) No hay
hemólisis; b) Hay hemólisis incipiente; c) Ocurrió el 50% de hemólisis; d)
Hemolisis completa.

VI. CUESTIONARIO
1. Si las concentraciones salinas de los tubos corresponden a soluciones
hipotónicas. ¿Qué proceso físico se observó y de qué manera lo
evidenció?
El proceso físico que se observó fue la osmosis y se pudo evidenciar porque en
los últimos tubos se observó una solución más uniforme que en los primeros
tubos que no hubo una fractura osmótica.

2. ¿Qué entiende por hemólisis y qué relación existe entre la concentración

salina y la actividad hemolítica?
 Se entiende por hemólisis que es el fenómeno de la desintegración o rotura de
los eritrocitos (glóbulos rojos o hematíes). El eritrocito carece
de núcleo y orgánulos, por lo que no puede repararse y muere cuando se
“desgasta”. Este proceso está muy influido por la tonicidad del medio en el que
se encuentran los eritrocitos.
El plasma sanguíneo contiene un 10% de sales minerales y el agregado de
un agua con sólo 3% de sales provocaría la entrada de agua en los
eritrocitos, que se hincharían aumentando el riesgo de romperse.

3. ¿Por qué en los primeros tubos no se manifiesta la hemólisis, como en

los últimos?
Porque en los primeros tubos la concentración es igual en el medio externo que
en el eritrocito en cambio en los últimos tubos la concentración es mayor fuera
que dentro del eritrocito, por lo que el agua tiende a salir del eritrocito
produciendo la hemólisis (Martinez, 2016).

VII. RESULTADOS
En los primeros tubos no hubo hemolisis sin embargo en los últimos tubos si
hubo hemolisis observándose que mientras más rojo es la solución más
eritrocitos se han roto.

VIII. DISCUSIONES

 La prueba de fragilidad osmótica indica la resistencia de los eritrocitos a la

ruptura por acción de la presión osmótica, ejercida sobre la membrana
eritrocitaria, al colocarlos en soluciones salinas hipotónicas; es un indicador
de la razón volumen/superficie celular (Yamirka Alonso-Geli, 2015)

 La habilidad de los glóbulos rojos normales para resistir la hipotonicidad

proviene de su forma bicóncava, lo cual permite que la célula aumente su
volumen hasta un 70% antes de que la membrana se estire; una vez
 superado este límite ocurre la lisis (Stella Lazarte, Leri de Nofal, Jiménez,
Cecilia Haro, Burgos, & Issé, 2012)

 Cuando los eritrocitos se colocan en una solución hipotónica, se incrementa el

flujo de agua hacia el interior para lograr el equilibrio de concentraciones de
solutos entre el interior y el exterior celular, los eritrocitos se hinchan hasta
alcanzar el punto crítico, donde la membrana pierde su integridad y ocurre la
hemólisis (Yamirka Alonso-Geli, 2015)

 La habilidad de los eritrocitos normales para resistir la hipotonicidad proviene

de su forma bicóncava y las propiedades elásticas de las membranas, las que
permiten que la célula aumente su volumen hasta un 70 % antes de que la
membrana se estire; una vez superado este límite ocurre la hemólisis
(Yamirka Alonso-Geli, 2015)

 La membrana celular de los eritrocitos es flexible, pero prácticamente carece

de elasticidad, lo que significa que la célula se rompe si le entra agua hasta
exceder un volumen crítico. La susceptibilidad de los eritrocitos a hemólilis en
solución hipotónica guarda una relación inversa con su tamaño, por otra parte,
la resistencia de los eritrocitos a la hemólisis puede aumentar o disminuir en
estados de enfermedad (Zúñiga, 2010)

 Fragilidad de los eritrocitos se refiere a la propensión de los eritrocitos a

hemolisis bajo estrés. Puede ser pensado como el grado o porcentaje de
hemólisis que se produce cuando una muestra de las células rojas de la
sangre se someten a estrés. Dependiendo de la aplicación, así como el tipo
de fragilidad implicado, la cantidad de tensión aplicada y/o el significado de
la hemólisis resultante pueden variar (veracruzana, 2015)

IX. CONCLUSIONES

 La fragilidad de la membrana en los eritrocitos es visible al añadirle un

medio hipotónico, pues acumular agua hasta estallar. Esto indica que
mientras más volumen adquiere, más frágil es.
 La fragilidad osmótica de eritrocitos normales es de 0,45 %-0,32 % de
NaCl; para eritrocitos drepanocíticos presenta valores de 0,36 %-0,1 %
de NaCl.

X. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Laboratorio CyB. (2017). Fragilidad osmótica eritrocitaria (ROE o FOE). Obtenido de
http://practicaslaboratoriocyb.blogspot.es/1488884014/practica-10-fragilidad-
osmotica-eritrocitaria-roe-o-foe-/

Martinez. (2016). Estudio de la fragilidad osmótica de los hematíes. Obtenido de

http://deliamm96cuadernopracticashema14.blogspot.pe/2015/03/practica-
estudio-de-la-fragilidad.html

Stella Lazarte, S., Leri de Nofal, M., Jiménez, C., Cecilia Haro, A., Burgos, M., & Issé,
B. (2012). Resistencia osmótica eritrocitaria en el diagnóstico de anemias
hereditarias en Tucumán, Argentina. SCielo.

veracruzana, U. (2015). scrib. Obtenido de Fragilidad osmotica de los eritrocitos:

https://es.scribd.com/document/245231439/Practica-8-Fragilidad-Osmotica-de-
Los-Eritrocitos

Yamirka Alonso-Geli, M. Y.-M. (2015). Caracterización de la fragilidad osmótica de

eritrocitos humanos. Revista Cubana de Quimica, 110 - 118.

Zúñiga, J. G. (2010). FRAGILIDAD OSMOTICA DE LOS ERITROCITOS DE

CARNERO.