7 DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGÍA

1. OBJETIVOS

1. Realizar un modelo de ADN de la molécula de insulina.

2. Reconocer las etapas de la expresión génica de la insulina.

2. INTRODUCCIÓN

El Dogma Central de la Biología Molecular explica el flujo o procesamiento de la información genética en la

mayoría de los organismos conocidos. En el Dogma se distinguen tres etapas:
1. La replicación del ADN, en la cual se copia el ADN progenitor en moléculas hijas idénticas al ADN
progenitor.
2. La transcripción, que es el proceso mediante el cual se transcribe la información genética del ADN al
ARNtm, para ser llevado al lugar de síntesis de las proteínas; los ribosomas.
3. La traducción, es el proceso mediante el cual el mensaje cifrado en el idioma de los tripletes de bases
(código genético) es descifrado por los ARNt , sintetizándose una proteína
Ciertos virus, como el de la inmunodeficiencia humana (VIH), guardan su información genética en forma de
ARN y la duplican utilizando ADN (con la ayuda de enzimas transcriptasas reversas). Cuando estos virus se
introducen en una célula huésped convierten su ARN, de cadena simple, en ADN, de cadena doble, y este
segmento se inserta en el genoma de la célula. El ADN modificado es transcripto por enzimas celulares y luego
es traducido. Las proteínas generadas junto con el ARN viral, se ensamblan y forman una nueva partícula viral
capaz de infectar nuevas células.

REPLICACIÓN DEL ADN

La replicación del ADN es un proceso semiconservativo en el que cada cadena parental sirve como molde
para síntesis de una nueva cadena hija complementaria. La replicación de una molécula de ADN comienza en
sitios especiales llamados orígenes de replicación. El cromosoma bacteriano, que es circular, tiene un único
origen de replicación (monofocal). Las proteínas que inician la replicación del ADN reconocen ésta secuencia y
se fijan al ADN separando las dos cadenas, formando una “burbuja” de replicación. La replicación del ADN
avanza entonces en ambas direcciones (bidireccional) hasta que se replique la molécula entera. En cambio el
cromosoma eucariótico tiene cientos o miles de orígenes de replicación (multifocal).
En cada extremo de una burbuja de replicación hay una horquilla de replicación, una región en forma de
“Y” donde están creciendo nuevas cadenas de ADN. La helicasa es la enzima que desenrolla la doble hélice en
la horquilla de replicación y separa las dos cadenas parentales para que estén disponibles como cadena
molde. La elongación de la cadena nueva de ADN en la horquilla de replicación se cataliza por enzimas
denominadas ADN polimerasas. A medida que los nucleótidos individuales se alinean con nucleótidos
complementarios a lo largo de la cadena molde de ADN, la ADN polimerasa los añade, uno a uno, al extremo
en crecimiento de la nueva cadena de ADN.
Cada nucleótido que se añade a una cadena de ADN en crecimiento es un nucleótido trifosfato, que al
momento de la unión se separan dos grupos fosfato de manera que cada nucleótido del ADN posee un solo
grupo fosfato. La ADN polimerasa agrega nucleótidos solo al extremo 3’ libre de una cadena de ADN en
crecimiento, nunca al extremo 5’. De este modo una cadena de ADN nueva se puede alargar solo en la
dirección 5’→3’.
En bacterias la ADN polimerasa III (ADN Pol III) agrega nucleótidos de forma continua a la cadena
complementaria a medida que la horquilla progresa. La cadena de ADN sintetizada por medio de ese
1 Actividades de Práctica P.C.
mecanismo se llama cadena líder. Para elongar la otra cadena nueva de ADN en la dirección 5’→3’, la ADN
Pol III debe actuar a lo largo de otra cadena molde en dirección contraria a la horquilla de replicación. La
cadena de ADN sintetizada en esta dirección se denomina cadena retrasada, esta cadena se sintetiza con una
serie de segmentos llamados fragmentos de Okazaki, que tienen de 1000 a 2000 nucleótidos de longitud en E.
coli y de 100 a 200 en eucariotas. Otra enzima, la ADN ligasa, finalmente une o liga los fragmentos de Okazaki
y forma una cadena de ADN nueva.
Las ADN polimerasas no pueden iniciar la síntesis de un polinucleótido; solo puede añadir nucleótidos al
extremo 3’ de una cadena ya existente. La cadena de nucleótidos inicial es un segmento corto llamado
cebador o primer, que es un segmento corto de ARN con un extremo 3’ disponible sintetizada por la primasa.
Una vez formado el cebador la ADN pol III añade un nucleótido de ADN al extremo 3’ y continúa agregando
nucleótidos a la cadena de ADN en crecimiento de acuerdo con las reglas del apareamiento de bases
Otra enzima llamada la ADNPol I, sustituye los nucleótidos de ARN de los cebadores con versiones de ADN
añadiendo uno a uno sobre el extremo 3’ del fragmento de Okasaki adyacente; posteriormente la ADN ligasa
une los esqueletos de azúcar-fosfato de todos los fragmentos de Okazaki en una cadena continua de ADN.

TRANSCRIPCIÓN
La transcripción es el proceso mediante el cual se copia en el ARN la información contenida en el DNA. El
ARNm es sintetizado tendrá una secuencia de nucleótidos complementaria a una de las cadenas de ADN (3’ →
5’). Las enzimas denominados ARN polimerasas son las principales responsables del proceso.
Las células procariotas tiene solo una polimerasa, mientras que las eucariotas tiene tres tipos de
polimerasas (I, II y III) que transcriben distintos tipos de RNA; la RNA pol II es la única que transcribe genes que
codifican proteínas. Se trata de complejos proteicos con varios centros catalíticos. En procariotas la RNA pol
tiene cuatro subunidades catalíticas (núcleo enzimático) y una reguladora (sigma) que puede separarse del
complejo.
Las ARN polimerasas funcionan de una forma semejante a las DNA polimerasas y son capaces de unir
nucleótidos exclusivamente en el extremo 3' (dirección de transcripción 5'→ 3'), pero, a diferencia de ellas, no
requieren de un cebador. Para realizar el proceso, la polimerasa requiere la presencia de nucleótidos activados
(trifosfatos) y diversos factores proteicos. También es necesaria la unión del cofactor enzimático Mg 2+
En las eucariotas la ARN polimerasa responsable de la síntesis del ARNm es la ARN Pol II. Las moléculas de
ARNm sintetizadas por la ARN polimerasa en el interior del núcleo de la célula se denominan transcritos
primarios o inmaduros. Estos transcritos primarios sufren dos modificaciones antes de salir del núcleo celular.
La primera modificación de la etapa de maduración consiste en la adición de un nucleótido uracilo modificado
en el extremo 5’ (cap), seguido de la unión de una cola de poliadeninas (poli A) en el extremo 3’. Estos
cambios aportan estabilidad estructural al ARNm inmaduro.
Posteriormente, las hebras de ARNm inmaduras sufrirán un proceso de eliminación (“splicing”) de las
regiones no codificantes (intrones) y empalme de las regiones codificantes (exones), mediante un complejo
proteico denominado espliceosoma(ayustosoma). El splicing da forma al transcrito maduro, que saldrá al
citoplasma, donde generará una proteína a través del proceso de traducción.

TRADUCCIÓN
La traducción es el paso final de la expresión génica, por el que la información contenida en el ARNm se
traduce a proteína. Para la traducción proteica se requiere del código genético.
El código genético está constituido únicamente por las cuatro bases presentes en el ARN: A, U, G y C. Las
palabras de este código sólo pueden contener tres letras que se le denomina codon. Por tanto, el numero de
tripletes o codones totales posibles únicamente puede ser de 64. De estos 64 codones, 3 de ellos se
corresponden con señales de finalización de la traducción o señal stop (UAA, UAG y UGA) y los otros 61
tripletes o codones se corresponden con 1 de los 20 aminoácidos esenciales que componen las proteínas.
Obviamente hay tripletes redundantes, es decir, existen diferentes tripletes que codifican para el mismo

2 Actividades de Práctica P.C.

 aminoácido.
Por esta característica, se dice que el código genético es degenerado. La traducción la llevan a cabo los
ribosomas presentes en el citoplasma celular. El proceso consiste en la lectura de los tripletes o codones de la
secuencia de ribonucleótidos que componen el ARNm y en la unión ordenada de los diferentes aminoácidos
que se corresponden con la lectura de los tripletes. El proceso de la traducción se inicia con la señal de inicio
de traducción (triplete AUG, codificante para el aminoácido metionina) y finaliza cuando el ribosoma identifica
cualquiera de los tres tripletes stop. El resultado final de la traducción es una secuencia lineal de aminoácidos
que siempre comienza con una metionina, y es esta secuencia de aminoácidos la que aporta la funcionalidad
específica de cada proteína.
La síntesis de una proteína (cadena polipeptídica), sin embargo, no significa que la proteína sea funcional.
Para ser activos, las proteínas deben plegarse en conformaciones tridimensionales características y, en
muchos casos, varias cadenas polipeptídicas se agregan para dar lugar a un complejo funcional. Además,
muchas proteínas experimentan modificaciones adicionales, incluyendo escisión y la unión covalente de
carbohidratos y lípidos, que son necesarios para la correcta función y localización de las proteínas en la célula.
La insulina es una hormona polipeptídica que es secretada por las células β de los islotes pancreáticos. Se
sintetiza como una sola cadena polipeptídica en el retículo endoplásmico rugoso: la preproinsulina. Esta
proteína en el retículo endoplásmico rugoso sufre algunas modificaciones en su estructura, como la pérdida
del péptido señal, el plegamiento de la cadena y la formación de puentes disulfuro. Se forma así la molécula
de proinsulina que mediante transporte evsicular se transporta al aparato de Golgi, donde se empaqueta en
gránulos de secreción.
Durante la maduración de estos gránulos, la proinsulina es escindida por enzimas proteolíticas que liberan la
molécula de insulina y el péptido C. Estos gránulos que contienen cantidades equimolares de insulina y
péptido C, además de una pequeña proporción de proinsulina sin modificar, son expulsados hacia la periferia
de las células β. Cuando se fusiona la membrana del gránulo con la membrana celular se produce la exocitosis
del contenido del gránulo.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Biológico y No biológico Laboratorio Reactivos y soluciones

Cartulina, papel de colores *
Tijera *
Pegamento *
Con (*) material a traer por el estudiante el día del TP.

3 Actividades de Práctica P.C.

4. PROCEDIMIENTO

1. Se presenta la secuencia de las cadenas A y B del gen de: insulina humana ( Homo sapiens),
chimpancé (Pan troglodytes), orangután (Pongo pygmaeus) y perro (Canis familiaris).
2. Por grupos de trabajo conformado por dos estudiantes, deberán escoger una de las secuencias, y en
la hoja en blanco realizar la replicación, transcripción y traducción de la secuencia de ADN elegida.
 Péptido A: desde Glicina 1 hasta Asparragina 21
 Péptido B: desde Fenilalanina 1 hasta Treonina 30
3. Represente la secuencia de ADN ARN de la cadena A de insulina elegida. Use cartulinas de colores. Para
hacer las cadenas de ADN puede utilizar los moldes de nucleótidos del anexo 1 o 2.
Corte los nucleótidos que son necesarios (21 de la cadena A) y los va uniendo según indica la figura.
Primero forma la cadena del lado derecho y luego completa la del lado izquierdo apareando los
nucleótidos respetando la complementaridad de bases hasta obtener la secuencia completa.
El color de los nucleótidos se indican debajo:
o Adenina = naranja Timina = azul Citosina = amarilla
o Guanina = verde Acido fosfórico = púrpura Deoxyribose = blanco

4. Represente la secuencia de ARN de la cadena A de insulina elegida. Use cartulinas de colores. Para hacer las
cadenas de ADN puede utilizar los moldes de nucleótidos del anexo 3 o 4. Corte los nucleótidos que son
necesarios (21 de la cadena A) y los va uniendo hasta obtener la secuencia completa.

Aminoácidos

Símbolo Abreviatura
Aminoácido primario Codones
1 letra 3 letras
A Ala Alanine Alanina GCA, GCC, GCG, GCU
C Cys Cysteine Cisteina UGC, UGU
D Asp Aspartic acid Acido aspártico GAC, GAU
E Glu Glutamic acid Acido glutámico GAA, GAG
F Phe Phenylalanine Fenilalanina UUC, UUU
G Gly Glycine Glicina GGA, GGC, GGG, GGU
H His Histidine Histidina CAC, CAU
I IIe Isoleucine Isoleucina AUA, AUC, AUU
K Lys Lysine Lisina AAA, AAG
L Leu Leucine Leucina UUA, UUG, CUA, CUC, CUG; CUU
M Met Methionine Metionina AUG
N Asn Asparagine Asparagina AAC, AAU
P Pro Proline Prolina CCA, CCC, CCG, CCU
Q Gln Glutamine Glutamina CAA, CAG
R Arg Arginine Arginina AGA, AGG, CGA, CGC, CGG, CGU
S Ser Serine Serina AGC, AGU, UCA, UCC, UCG, UCU
T Thr Threonine Treonina ACA, ACC, ACG, ACU
V Val Valine Valina GUA. GUC, GUG, GUU
W Trp Tyrosine Tirosina UAC, UAU
Y Tyr Tryptophan Triptófano UGG

4 Actividades de Práctica P.C.

 ANEXO 1 : SECUENCIAS DE INSULINA

Secuencia de ADN de Insulina Humana (Homo sapiens)

Cadena A: GGC ATT GTG GAA CAA TGC TGT ACC AGC ATC TGC TCC CTC TAC CAG CTG GAG AAC TAC TGC AAC
Cadena B: TTT GTG AAC CAA CAC CTG TGC GGC TCA CAC CTG GTG GAA GCT CTC TAC CTA GTG TGC GGG GAA CGA
GGC TTC TTC TAC ACA CCC AAG ACC

Molécula 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
5’
ADN
3´
ARN 5’
aa NH2

11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
3´
5’
3´
COOH

Secuencia de ADN de Pan troglodytes (Chimpancé)

Cadena A: GGT ATC GTG GAA CAA TGC TGT ACC AGC ATC TGC TCC CTC TAC CAG CTG GAG AAC TAC TGC AAC
Cadena B: TTT GTG AAC CAA CAC CTG TGC GGC TCC CAC CTG GTG GAA GCT CTC TAC CTA GTG TGC GGG GAA CGA
GGC TTC TTC TAC ACA CCC AAG ACC

Molécula 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
5’
ADN
3´
ARN 5’
aa NH2

11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
3´
5’
3´
COOH

Secuencia de ADN de Pongo pygmaeus (orangutan)

Cadena A: GGT ATC GTG GAA CAA TGC TGT ACC AGC ATC TGC TCC CTC TAC CAG CTG GAG AAC TAC TGC AAC
Cadena B: TTT GTG AAC CAG CAC CTG TGC GGC TCC CAC CTG GTG GAA GCT CTC TAC CTA GTG TGC GGG GAA CGA
GGC TTC TTCTAC ACA CCC AAG ACC

Molécula 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
5’
ADN
3´
ARN 5’
aa NH2

11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
3´
5’
3´
COOH

Canis familiaris (perro)

5 Actividades de Práctica P.C.

Cadena A: GGC ATC GTG GAG CAG TGC TGC ACC AGC ATC TGC TCC CTC TAC CAG CTG GAG AAT TAC TGC AAC

Cadena B: TTCG TTA ACC AGC ACC TGT GTG GCT CCC ACC TGG TAG AGG CTC TG TAC CTG GTG TGC GGG GAG CGC
GGC TTC TTC TAC ACG CCT AAG GCC

Molécula 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
5’
ADN
3´
ARN 5’
aa NH2

11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
3´
5’
3´
COOH

CADENAS DE ADN

MOLDE 1 ELEMENTOS DEL ADN

6 Actividades de Práctica P.C.

7 Actividades de Práctica P.C.
MOLDE 2 ELEMENTOS DEL ADN
MOLDE 3 ELEMENTOS DEL ARN
MOLDE 4 ELEMENTOS DEL ARN
5. RESULTADOS
 BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

14 Actividades de Práctica
P.C.