Pharmacogn J.

2018; 10(4): 663-671

A Multifaceted Journal in the field of Natural Products and Pharmacognosy Original Article
www.phcogj.com | www.journalonweb.com/pj | www.phcog.net

Efek Antihipertensi Akut dan Sub-Akut dari Ekstrak Daun

Syzygium polyanthum dengan Penentuan Asam Galat menggunakan
Analisis HPLC

Azlini Ismail1*, Nurul Syahida Ramli2, Mahaneem Mohamed3, Wan Amir Nizam Wan Ahmad2

ABSTRACT
Rebusan air dari ekstrak daun Syzygium polyanthum (ADSP) adalah salah satu pengobatan
tradisional melayu untuk mengatasi hipertensi. Secara intravena ADSP dapat menurunkan
tekanan darah pada tikus Wistar Kyoto (WKY) dan Tikus spontan-hipertensi (SHR). namun,
efek akut dan sub-akut dari ADSP oral pada tikus yang sadar dan senyawa bioaktifnya tidak
Azlini Ismail1*, dipelajari secara komprehensif. Penelitian ini bertujuan untuk menguji efek akut dan sub-akut
Nurul Syahida Ramli2, ADSP dibandingkan dengan ekstrak metanol (MESP) pada tekanan darah sistolik (SBP) dari
Mahaneem Mohamed3, tikus WKY dan SHR yang sadar, serta untuk mengidentifikasi senyawa utama mereka
Wan Amir Nizam Wan menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT Metodologi: Untuk studi akut, tikus
Ahmad2 SHR dan WKY diberikan dosis tunggal dari ADSP atau MESP (2,00, 2,50 atau 3,00 g / kg),
pembawa, atau losartan (0,01 g / kg). SBP diukur setelah 1, 3, 5, 6 dan 24 jam pemberian.
1Department of Fundamental Dental Untuk percobaan sub-akut, SHR tikusdiberikan sekali sehari ADSP atau MESP (2,50 g / kg /
and Medical Sciences, Kulliyyah of hari), pembawa, atau losartan (0,01 g / kg / hari) selama 3 minggu. SBP tikus diukur setiap
Dentistry, International Islamic University
minggu . senyawa fenolik disaring menggunakan uji besi-klorida, kemudia asam galat
Malaysia, Kuantan Campus, Indera
Mahkota, Kuantan, Pahang, MALAYSIA. ditentukan dengan menggunakan KCKT.
2Biomedicine Program, School of Health
Hasil: Pada studi akut pemberian ADSP (2,50-3,00 g / kg) dan MESP (2,00-3,00 g / kg) secara
Sciences, Health Campus, University signifikan mengurangi SBP dari SHR, tapi tidak pada tikus WKY. Pemberian MESP dalam dosis
Sains Malaysia, Kubang Kerian, Kelantan, berulang (2,5 g / kg / hari) secara signifikan mengurangi SBP SHR setelah 2 minggu dan
MALAYSIA. bertahan hingga 3 minggu, sementara ADSP (2,5 g / kg / hari) secara signifikan mengurangi
3Department of Physiology, School of SBP hanya setelah 3 -minggu. asam galat adalah senyawa utama fenolik dalam ADSP (157,09
Medical Sciences, Health Campus, ± 4,18 ppm) dan MESP (134,04 ± 10,30 ppm). Kesimpulan: Pemberian oral ADSP dan MESP
University Sains Malaysia, Kubang
Kerian, Kelantan, MALAYSIA.
yang mengandung asam galat memiliki efek antihipertensi akut dan sub-akut dalam SHR,
tetapi efek MESP lebih menonjol daripada ADSP.
Correspondence Kata kunci : Antihipertensi, Asam Galat, KCKT, Hipertensi, Syzygium polyanthum
Azlini Ismail
Department of Fundamental Dental and
Medical Sciences, Kulliyyah of Dentistry,
International Islamic University Malaysia,
Kuantan Campus, Indera Mahkota,
Kuantan, Pahang, MALAYSIA. PENDAHULUAN
Phone no : +60-14-5010081 E- hipertensi. Angka kejadian hipertensi diseluruh dunia
Syzygium polyanthum (Wight) Walp atau mungkin mencapai satu milyar dan kira-kira 7,1 juta
mail: dr_azlini@iium.edu.my
sinonimnya, Eugenia polyantha adalah tanaman di kematian akibat hipertensi setiap tahun
History bawah famili Myrtaceae. Daun tanaman ini umumnya (WHO,2003). Kebanyakan orang merasa sehat dan
•  Submission Date: 01-03-2018; dikonsumsi sebagai salad segar dan kadang-kadang energik walaupun hipertensi (Ethical Digest, 2009).
•  Revised Date: 14-03-2018; digunakan sebagai tambahan kuliner dalam masakan Hipertensi selalu terkait dengan risiko penyakit
•  Accepted Date: 19-04-2018 Melayu. Orang-orang Malaysia biasanya kardiovaskuler yang kejadiannya konsisten dan tidak
mengkonsumsi tunas muda segar atau daun dewasa tergantung faktor risiko lain. Serangan jantung, gagal
DOI : 10.5530/pj.2018.4.109 dalam bentuk mentah atau sebagai ramuan untuk jantung, stroke, dan juga penyakit ginjal (Cobanian,
mengobati hipertensi. Hipertensi adalah penyakit 2003). Daun Salam telah diteliti mengandung flavonoid
Article Available online kardiovaskuler degeneratif kronis. Hipertensi dan menunjukkan aktivitas antioksidan (Lelono et al.,
http://www.phcogj.com/v10/i4
diperkirakan telah menyebabkan 4,5% dari beban 2009) dan mampu mengontrol HDL kolesterol pada
Copyright
penyakit secara global. Prevalensi penyakit hipertensi tikus Wistar. Flavonoid merupakan senyawa yang
© 2018 Phcog.Net. This is an open- hampir sama di negara berkembang dan negara maju. umum terdapat pada tumbuhan. Penelitian terkait
access article distributed under the Hipertensi menjadi permasalahan kesehatan yang flavonoid telah banyak dilakukan. Penelitian dengan
terms of the Creative Commons sangat umum terjadi. Data dari The National Health uji klinik terhadap 632 pasien di New Haven bahwa
Attribution 4.0 International license. and Nutrition Examination Survey (NHANES) konsumsi ekstrak buah dan sayur yang tinggi
menunjukkan bahwa 50 juta, bahkan lebih penduduk kandungan flavonoidnya memberikan efek
Amerika mengalami perlindungan terhadap fungsi endotel.
Cite this article: Ismail A, Ramli NS, Mohamed M, Ahmad WANW. Acute and Sub-Acute
Antihy-pertensive Effects of Syzygium polyanthumLeaf Extracts with Determination of Gallic
Acid using HPLC Analysis. Pharmacog J. 2018;10(4):663-71.

Pharmacognosy Journal, Vol 10, Issue 4, Jul-Aug, 2018 663

 Ismail, et al.: Acute and Sub-Acute Antihypertensive Effects of Syzygium polyanthum Leaf Extracts
Flavonoid mampu memperbaiki fungsi endotel dan menghambat
agregasi pletelet manusia, efek ini merupakan keuntungan flavonoid
pada resiko penyakit kardiovaskuler Selain itu, senyawa yang mungkin
bertanggung jawab untuk aktivitas antihipertensi belum dijelaskan
Penelitian sebelumnya melaporkan adanya beberapa kelompok fitokimia
seperti tanin, flavonoid, glikosida, alkaloid, karbohidrat, steroid,
triterpenoid dan flavonoid dalam ekstrak metanol maserated mentah daun
S. polyanthum.
Dalam pandangan ini, penelitian bertujuan untuk menguji efek
akut dan sub-akut dari ADSP oral pada SBP dari tikus WKY dan SHR
secara sadar; dan kemudian membandingkan efeknya dengan MESP; dan
terakhir, untuk menentukan dan mengukur jumlah asam galat pada kedua
ekstrak menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT).
Bahan dan Metode
Bahan Kimia
Metanol, besi klorida, asam format, asetonitril, asam galat dan natrium
karboksimetilselulosa (CMC) dibeli dari Merck, Jerman. Semua bahan
kimia merupakan analytical grades. Losartan potasium (50 mg) dibeli dari
Abio Marketing Sdn. Bhd., Malaysia.
Bahan Tanaman
Daun dewasa S. polyanthum (1 kg) dikumpulkan dari Kabupaten Bachok,
Kelantan, Malaysia pada bulan Juli 2013. Pabrik ini dikonfirmasi oleh
seorang ahli botani dari Forest Research Institute Malaysia sebagai
Syzygium polyanthum (Wight) Walp var. Polyanthum. Spesimen daun
kering diendapkan ke herbarium mereka (Nomor sampel: PID-171011-10).
Daun S. polyanthum diekstraksi menggunakan protokol yang sama seperti
yang dilaporkan oleh Ismail et al. (2013). Air rebusan dan ekstrak metanol
daun S. polyanthum masing-masing ditetapkan sebagai ADSP dan MESP,.
Hasil dari 1 kg daun S. polyanthum segar adalah 36,90 gram ADSP dan
6,20 gram MESP. Kedua ekstrak disimpan dalam -20 ºC freezer sampai
digunakan.
Persiapan Ekstrak dan Larutan Obat
Larutan stok ADSP dan MESP (100 mg / ml) dan losartan potassium (5
mg / ml) disiapkan sekali setiap hari secara bergantian dan disimpan dalam
lemari pembeku dengan suhu 4 ° C. Pada dasarnya, ADSP dan losartan
potassium tersuspensi dalam air suling, tetapi MESP disuspensi dalam air
suling dan ditambahkan dengan CMC-Na yang telah dipanaskan
sebelumnya, yaitu 1,0% (b / v). CMC-Na ditambahkan untuk mengemulsi
MESP yang sangat kental dengan air suling. Ekstrak dan larutan obat
kemudian dihomogenisasi menggunakan homogenizer IKA Ultra-Turrax®
T25 Basic (IKA-Werke GmbH dan Co, Darmstadt, Jerman) pada 24.000
rpm / menit selama 3 menit. Dari larutan stok, dosis serial ADSP dan
MESP dari 2,00, 2,50 hingga 3,00 g / kg, dan losartan potassium dengan
dosis 0,01 g / kg larutan disiapkan setiap hari.
Hewan
Tikus WKY dan SHR jantan dewasa normotensif berusia 3 bulan, dengan
kisaran berat 280 hingga 350 g dipasok Animal Research dan pusat
pelayan, Kampus Kesehatan, Universitas Sains Malaysia (USM).
Kemampuan tikus jantan lebih besar dari tikus betina untuk menghindari
664
dampak potensi estrogen pada hasil penelitian karena tekanan darah tikus
betina dapat dipengaruhi oleh tingkat estrogen.. Estrogen dapat
mengaktifkan jalur vasodilator yang dimediasi oleh nitrit oksida dan
prostasiklin, dan juga dapat menghambat jalur vasokonstriktor yang
dimediasi oleh sistem saraf simpatik dan angiotensin. Metodologi
penelitian telah disetujui oleh Komite Etika Hewan, USM dengan nomor
persetujuan, USM / Animal Eth-ics Approval / 2013 / (89) (485). Tikus-
tikus ditempatkan dalam kandang tikus standar dan diberi pelet tikus
standar (Chipsi Classic Heimtierbett, Jerman) dan air keran (opsional)
selama 7 hari. Suhu kamar diatur pada 24 ° C pada siklus gelap-terang 12-
jam. Selama periode aklimatisasi ini, tabung restrainer fisik tikus (Ukuran
81, IITC Inc. Life Science, Califor-nia) tanpa tutup hidung dan ekor
(uncapped) ditempatkan secara permanen di dalam setiap kandang untuk
membiasakan tikus dengan tabung penahan air sebelum percobaan dimulai.
Karena restrainer dibuka, tikus dapat bergerak bebas masuk dan keluar dari
restrainer.
Persiapan Hewan
Setiap tikus ditempatkan dengan hati-hati di dalam alat pengendali fisik
tikus (ditutup) dan dibiarkan rileks selama 5 sampai 10 menit. Kemudian
ditempatkan ke dalam ruang pra-pemanasan (32 ºC). Ekor tikus yang
ditahan dengan hati-hati ditempatkan ke dalam cuff tail yang dilengkapi
dengan sensor foto. Tikus terkendali (tertutup) bisa tenang selama 5 sampai
10 menit sebelum pengukuran. SBP tikus diukur setelah tikus itu santai.
Rekaman SBP diulang sampai tiga pembacaan yang paling stabil diperoleh.
Nilai-nilai rangkap tiga SBP ini kemudian dirata-ratakan.
Studi akut: Pengaruh Pengobatan Dosis Tunggal dengan ADSP dan
MESP pada Tikus Wistar-Kyoto dan Spontaneously Hypertensive
Normotensif.
Penelitian ini dirancang untuk mengukur besarnya pengurangan tekanan
darah dan untuk mengevaluasi pemeliharan dan pemulihannya dalam 24
jam sesuai dengan protokol yang dijelaskan dalam penelitian sebelumnya.
Tiga puluh enam tikus WKY dibagi menjadi 9 kelompok sementara 36
tikus SHR adalah juga dibagi menjadi 9 kelompok lainnya. Setiap
kelompok terdiri dari 4 tikus. Kelompok 1 menerima air yang disuling
(kendaraan untuk membubarkan ADSP), sehingga berfungsi sebagai
kontrol negatif untuk kelompok yang dirawat ADSP. Kelompok 2
menerima air suling ditambah 1% (w / v) natrium CMC (kendaraan untuk
MESP), sehingga berfungsi sebagai kontrol negatif untuk kelompok yang
diperlakukan dengan MESP. Grup 3 menerima losartan potassium dengan
dosis 0,01 g / kg untuk melayani sebagai kontrol positif dalam penelitian
ini. Kelompok 4, 5 dan 6 menerima ADSP pada dosis 2,00, 2,50 dan 3,00
g / kg, masing-masing sementara Grup 7, 8 dan 9 menerima MESP pada
dosis 2,00, 2,50 dan 3,00 g / kg.
Jarum makan melengkung (18G, ujung 2,25 mm, panjang 50 mm)
digunakan untuk pengumpanan mulut. SBP tikus diukur sebelum setiap
perlakuan dan setelah 1, 3, 5, 6, dan 24 jam pasca perawatan sesuai dengan
protokol yang dijelaskan oleh Ichimura et al.6 dengan sedikit modifikasi.
Penelitian ini mencatat SBP setelah 6 jam pasca perawatan, bukan 7 jam
sebagaimana diuraikan dalam proto-cols oleh Ichimura et al.6 SBP
rekaman dicatat setelah satu jam posttreatment untuk memungkinkan
proses alami pencernaan dan penyerapan berlangsung.
Pharmacognosy Journal, Vol 10, Issue 4, Jul-Aug, 2018
 Ismail, et al.: Acute and Sub-Acute Antihypertensive Effects of Syzygium polyanthum Leaf Extracts
Interval dua jam berikutnya pada 3 dan 5 jam pasca perawatan dicatat
untuk meniru pengukuran tekanan darah akut pada manusia. Tekanan darah
dicatat setelah 6 jam setelah pengobatan karena obat kontrol positif
(losartan potassium) yang digunakan dalam penelitian ini
memanifestasikan efeknya setelah 6 jam pasca perawatan. Rekaman SBP
akhir setelah 24 jam administrasi digunakan untuk memantau pemulihan
tikus setelah diobati dengan ekstrak atau obat. Setelah tiga rekaman stabil
SBP untuk setiap interval diperoleh, tikus-tikus itu segera dilepaskan dari
yang terkendali dan kemudian ditempatkan kembali di dalam kandang
bersama dengan restrainer (uncapped). Tikus dapat bergerak bebas masuk
dan keluar dari restrainer di dalam kandang dengan air dan pellet ad libitum
sampai interval pengukuran tekanan darah berikutnya. Setelah pengukuran
SBP akhir, semua tikus dikeringkan menggunakan natrium pentobarbital
pada 100 mg / kg melalui injeksi intraperitoneal. Dosis terbaik untuk
ekstrak dalam mengurangi SBP digunakan untuk fase studi selanjutnya.
Studi Sub-Akut: Pengaruh Pemberian Ekstrak Dosis Harian selama 3
minggu pada Tikus Hipertensi Spontan.
Penelitian ini dilakukan untuk menentukan besarnya efek pada pemberian
harian ekstrak pada tekanan darah tikus SHR, dan untuk mengamati
ketahanan pengurangan tekanan darah dengan admin-istrasi berulang dan
dari waktu ke waktu untuk jangka waktu 3 minggu sesuai dengan
sebelumnya studies.19,20 SHR tikus dibagi menjadi lima kelompok
dimana setiap kelompok terdiri dari empat tikus. Kelompok 1 menerima air
suling, Grup 2 menerima air suling ditambah 1% (w / v) sodium CMC,
Grup 3 menerima losartan potassium (0,01 g / kg / hari), Grup 4 menerima
ADSP (2,5 g / kg / hari), dan Grup 5 menerima MESP (2,5 g / kg / hari).
Losartan yang dipilih sebagai obat referensi standar untuk penelitian ini
adalah obat anti-hipertensi komersial, prototipe kelompok reseptor
angiotensin tipe II dengan efektivitas antihipertensi terbukti dan profil efek
samping yang lebih sedikit.22 Dosis spesifik 2,5 g / kg / hari dipilih
berdasarkan temuan signifikan untuk dosis ini selama studi efek dosis
tunggal akut kami. SBP dicatat sebelum pengobatan dan dilambangkan
sebagai pengukuran pada minggu ke-0. Gavaging dilakukan dari 10 pagi
sampai 12 siang setiap hari untuk menghindari tekanan darah vari-
kemampuan yang disebabkan oleh ritme sirkadian. 23 SBP kemudian
diukur setiap minggu pada hari ke 8 (minggu 1), hari ke 15 (minggu 2), dan
hari ke 22 (minggu 3). Setelah pengukuran SBP akhir pada hari ke 22
(minggu 3), semua tikus dikorbankan menggunakan natrium pentobarbital
pada dosis anestesi terminal 100 mg / kg melalui injeksi intraperi-toneal.
Screening kualitatif untuk fenolik menggunakan Ferric Chloride Test
Skrining senyawa fenolik dalam ADSP dan MESP dilakukan menggunakan
uji klorida besi sesuai dengan protokol yang dijelaskan oleh Raaman.24
Secara singkat, 50 mg ADSP dilarutkan dalam 5 ml air suling, sementara
50 mg MESP dilarutkan dalam 5 ml 95,0% ( v / v) metanol. Larutan ini
kemudian ditambahkan dengan dua tetes besi klorida netral 5,0% (b / v).
Dalam setiap tes, air suling dan 95,0% (v / v) metanol digunakan sebagai
kontrol negatif. Setiap perubahan warna ekstrak dan solusi kontrol negatif
diamati karena munculnya warna hijau, ungu, biru-hitam yang intens akan
menunjukkan adanya fenol.
Kuantifikasi Asam Galat menggunakan Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi
Senyawa fenolik di kedua ekstrak diidentifikasi menggunakan (HPLC)
analisis. 10 mg ADSP dan MESP dilarutkan dalam 1 ml metanol dan
larutan yang dihasilkan disaring sebelum analisis. ADSP dan MESP
dianalisis menggunakan sistem HPLC (Waters Delta 600 dengan 600
Controller) dengan detektor array fotodioda (Waters 996). Sebuah kolom
phe-nomenex-Luna (5 μm) digunakan (4,6 mm x 200 mm) sebagai fase
stareksioner,
Pharmacognosy Journal, Vol 10, Issue 4, Jul-Aug, 2018
dan untuk elusi gradien dari konstituen, dua pelarut dilambangkan sebagai
"A" dan "B" digunakan. Pelarut "A" adalah 0,1% asam format berair,
sedangkan pelarut "B" adalah asetonitril. Sistem elusi gradien yang
digunakan dalam penelitian ini ditetapkan sesuai Tabel 1. Laju alir
ditetapkan pada 1 ml / menit dengan volume injeksi 10 μl. Puncak utama
dianalisis pada panjang gelombang yang berbeda dari 210, 254, 280 dan
300 nm dalam hal waktu retensi dan daerah puncaknya. Dalam pengujian
berikutnya, asam galat (100 ppm) dijalankan sebagai standar bersama
dengan ADSP dan MESP, dan kemudian dianalisis pada panjang
gelombang tertentu 280 nm. Untuk kuantifikasi asam galat, asam galat
dengan konsentrasi seri 40, 60, 80, 100, 120, dan 140 ppm dijalankan.
Sebuah kurva standar asam galat diplot di mana sumbu y melambangkan
absorbansi sementara sumbu x mewakili konsentrasi asam galat (ppm).
Konsentrasi asam galat dalam ADSP dan MESP kemudian dihitung
berdasarkan area puncak ADSP dan MESP dalam kromatogram dan
persamaan linier yang berasal dari kurva standar.
Analisis Statistik
Data dinyatakan sebagai mean ± standard error mean (S.E.M). Analisis
statistik dilakukan menggunakan Graph Pad® PRISM Versi 6 (Grafik Pad,
San Diego, CA, USA). Uji t tidak berpasangan digunakan untuk
membandingkan mean SBP antara tikus WKY dan SHR. Two-way ANOVA
dilakukan untuk menentukan efek keseluruhan, dan kemudian diikuti oleh
Bonferroni pasca-hoc untuk beberapa perbandingan. Semua tes dua-tailed
dan nilai P kurang dari 0,05 (P <0,05) dianggap signifikan secara statistik.
HASIL
Studi Akut: Pengaruh Pengobatan Dosis Tunggal dengan Ekstrak pada
Tikus Wistar-Kyoto dan Spontaneously Hypertensive Normotensif.
Mean SBP dari tikus WKY dan SHR yang digunakan dalam penelitian ini
adalah 153,07 ± 1,02 (n = 36) dan 182,42 ± 0,98 mmHg (n = 36), masing-
masing. Rata-rata awal SBP tikus WKY (n = 36) secara signifikan lebih
rendah daripada SBP rata-rata tikus SHR (P <0,001) (n = 36).
Perubahan waktu-kursus dalam SBP rata-rata tikus WKY normotensif (n =
4) sebelum dan sesudah menerima perawatan masing-masing ditunjukkan
pada Tabel 2. Tidak ada perbedaan yang signifikan antara sarana SBP dari
dua kelompok kontrol negatif (air suling dan air suling ditambah kelompok
yang diobati dengan CMC natrium) pada tikus WKY pada setiap interval
waktu tertentu yang digunakan dalam penelitian ini. SBP rata-rata untuk
semua kelompok yang diobati dengan WKY tidak berbeda secara
signifikan dibandingkan nilai awal pra-perawatan pada setiap interval
waktu tertentu kecuali untuk losartan (0,01 g / kg) kelompok yang diobati
setelah 6 jam pemberiannya (P <0,001). Pengurangan SBP dalam kelompok
yang diobati dengan losar-tan pada titik waktu ini (t = 6) berbeda secara
signifikan (P <0,001) dibandingkan dengan SBP rata-rata dari kelompok
kontrol yang diobati negatif. SBP rata-rata sepenuhnya pulih dalam
kelompok yang diobati losartan setelah 24 jam pemberian
pengobatan.Tabel 3 menunjukkan perubahan waktu-kursus pada SBP rata-
rata tikus SHR sebelum dan sesudah menerima perawatan masing-masing.
Demikian pula, tidak ada perbedaan yang signifikan antara SBP rata-rata
dari dua kelompok kontrol negatif (air suling dan air suling ditambah
kelompok yang diobati dengan CMC natrium)
Table 1: Composition of mobile phase for elution of constituents.
Time (min) Flow rate (ml/min) %A %B
0.00 1.0 85 15
12.00 1.0 75 25
22.00 1.0 75 25
25.00 1.0 85 15
35.00 1.0 85 15
Note: A: 0.1 % aqueous formic acid, and B: acetonitrile.
665
 Ismail, et al.: Acute and Sub-Acute Antihypertensive Effects of Syzygium polyanthum Leaf Extracts

Table 2: Time-course changes in SBP of WKY rats (n=4) treated with vehicle, losartan potassium (0.01 g/kg), and increasing doses of
ADSP or MESP (2.00, 2.50 and 3.00 g/kg) at specified time intervals within 24 hrs.
Systolic Blood Pressures of WKY Rats at Specific Time (hours)
t=0 hr t=1 hr t=3 hrs t=5 hrs t=6 hrs t=24 hrs
Group
Initial SBP in SBP in mmHg SBP in mmHg SBP in mmHg SBP in mmHg SBP in mmHg
mmHg [% changes] [% changes] [% changes] [% changes] [% changes]
Distilled water 156.00 ± 1.04 154.50 ± 2.75 163.67 ± 2.52 151.17 ± 3.88 148.00 ± 6.03 149.22 ± 4.92
(Negative control for ADSP-and [1.14 ± 1.04] [-4.21 ± 1.21] [1.82 ± 1.89] [4.29 ± 2.50] [5.80 ± 2.43]
losartan-treated groups)
Distilled water +
1 % sodium CMC 154.25 ± 0.95 153.46 ± 1.34 151.25 ± 0.75 154.17 ± 1.04 154.75± 1.45
152.50 ± 0.87
(Negative control for MESP- [1.15 ± 0.16] [-0.63 ± 0.57] [0.80 ± 1.03] [-1.09 ± 0.38] [-1.48 ± 0.81]
treated groups)
Losartan potassium, 150.39 ± 2.84 145.33 ± 2.03 148.22 ± 2.75 147.56 ± 3.76 133.72 ± 5.61 *** δ 158.94 ± 3.72
0.01 g/kg (Positive control) [3.27 ± 2.80] [1.32 ± 3.37] [1.72 ± 4.32] [11.03 ± 3.99] ** γ [-5.85 ± 4.38]
ADSP, 2.00 g/kg 152.08 ± 4.49 154.08 ± 4.45 153.50 ± 2.57 154.75 ± 1.49 151.88 ± 2.29 b 150.50 ± 4.52
[-2.28 ± 4.18] [-1.26± 4.05] [-2.08 ± 3.81] [-0.02 ± 1.93] a [0.99 ± 1.94]
ADSP, 2.50 g/kg 154.75 ± 3.17 158.83 ± 1.88 153.00 ± 2.07 158.00 ± 0.79 154.58 ± 4.64 c 152.04 ± 2.44
[-1.13 ± 3.76] [0.94± 3.19] [-2.22 ± 1.98] [0.15 ± 1.51] a [1.69 ± 1.52]
ADSP, 3.00 g/kg 157.46 ± 1.11 151.75 ± 4.25 153.29 ± 1.90 156.25 ± 1.70 155.29 ± 1.40 c 156.25 ± 0.85
[3.64 ± 2.47] [2.64± 1.04] [0.76 ± 1.22] [1.37 ± 0.90] [0.76 ± 0.62]
151.50 ± 1.21 151.13 ± 1.21 157.96 ± 3.60 154.38 ± 1.57 c 159.38 ± 2.01
MESP, 2.00 g/kg 161.50 ± 2.40
[6.12 ± 1.81] [6.39 ± 1.00] [2.04 ± 3.55] [4.34 ± 1.95] [1.28 ± 1.42]

158.83 ± 1.24 157.42 ± 1.64 154.38 ± 1.28 153.13 ± 2.70 c 156.04 ± 3.32
MESP, 2.50 g/kg 158.75 ± 5.42
[0.39 ± 3.34] [0.53 ± 3.19] [2.51 ± 2.44] [3.35 ± 2.21)] [1.57 ± 1.59]

153.63 ± 2.49 155.67 ± 2.81 152.75 ± 3.68 152.88 ± 3.60 c 151.67 ± 1.69
MESP, 3.00 g/kg 156.29 ± 0.83
[-1.72 ± 1.16] [0.41 ± 1.47] [2.28 ± 2.04] [2.19 ± 2.23] [2.96 ± 0.90]
Note: Results were expressed as mean ± S.E.M. “-” sign: Increment, ADSP: Aqueous decoction of S. polyanthum leaves, MESP: Methanolic extract of S. polyanthum
leaves, mmHg: Millimetres mercury, SBP: Systolic blood pressure,% Changes: Percent changes from pre-treatment mean SBP values,g/kg: Gram per kilogram,WKY:
Wistar-Kyoto rats. **: P<0.01 and ***: P<0.001, all vs. pre-treatment baseline mean SBP (t=0). γ: P<0.01 and δ: P<0.001, all vs. mean SBP value for negative control
group at the same time interval. a: P<0.05, b: P<0.01 and c: P<0.001, all vs. mean SBP value for positive control group at the same time interval.

pada tikus SHR pada setiap interval waktu tertentu yang digunakan dalam
penelitian ini. Mean SBP untuk losartan (0,01 g / kg) kelompok yang
dianiaya setelah 6 jam pemberian berbeda secara signifikan (P <0,001)
dibandingkan dengan nilai awal pra-perawatan. Pengurangan SBP pada
titik waktu ini (t = 6) berbeda secara signifikan (P <0,001) dibandingkan
dengan perubahan SBP untuk kelompok kontrol negatif yang diobati.
Selain losartan, kedua ekstrak juga menunjukkan penurunan SBP yang
signifikan pada titik waktu interval tertentu seperti yang ditunjukkan pada
Tabel 3. Secara khusus, SBP rata-rata dalam ADSP (2,50 g / kg) - dan
ADSP (3,00 g / kg) - kelompok yang diobati adalah secara signifikan
berbeda dari nilai awal pra-perawatan mereka pada berbagai waktu pasca
perawatan seperti yang digambarkan pada Tabel 3. Namun, hanya
pengurangan SBP oleh ADSP (3,00 g / kg) setelah 1 (P <0,05), 3 (P <0,01),
5 (P <0,05) dan 6 (P <0,05) jam pemberian secara signifikan berbeda
dibandingkan dengan perubahan SBP rata-rata pada kelompok kontrol yang
diobati negatif (Tabel 3). Dalam hal tren pengurangan SBP, efek oleh
ADSP (3,00 g / kg) diamati sedini setelah 1 jam administrasi, dan efek
maksimum tercapai dan kemudian tetap dataran tinggi dalam 3 sampai 5
jam administrasi dan kemudian mulai untuk pulih setelah 6 jam
administrasi. SBP rata-rata dalam kelompok ini sepenuhnya pulih setelah
24 jam pemberian pengobatan. Mean SBP untuk kelompok SHR, diobati
dengan MESP pada dosis 2,00 g / kg, 2,50 g / kg dan 3,00 g / kg secara
signifikan berbeda dari nilai awal pra-perawatan mereka pada berbagai
waktu pasca perawatan (Tabel 3). Dibandingkan dengan perubahan SBP
rata-rata untuk kelompok kontrol negatif yang diobati pada setiap waktu
pasca perawatan, pengurangan SBP rata-rata oleh MESP dengan dosis 2,00
g / kg berbeda secara signifikan (P <0,001)
setelah 3 jam pemberian ekstrak, dimana pengurangan SBP rata-rata oleh
MESP dengan dosis 2,50 g / kg berbeda secara signifikan setelah 1 (P
<0,01), 3 (P <0,01), 5 (P <0,001) dan 6 (P <0,001) jam pemberian ekstrak ,
dan akhirnya pengurangan SBP oleh MESP pada dosis tertinggi 3,00 g / kg
berbeda secara signifikan setelah 3 (P <0,001) dan 5 (P <0,01) jam setelah
pemberian ekstrak. Pengurangan SBP oleh MESP pada tikus SHR tidak
tergantung dosis karena pengurangan SBP rata-rata maksimum oleh MESP
dicapai pada dosis 2,50 g / kg sebesar 36,17 ± 6,12 mmHg, yang setara
dengan 20,08 ± 3,53% pengurangan; dan kemudian, dengan dosis 3,00 g /
kg pada 19,08 ± 1,40 mmHg, yang setara dengan 9,96 ± 0,70%
pengurangan; sedangkan pengurangan yang paling sedikit diamati pada
dosis 2,00 g / kg sebesar 11,08 ± 0,63 mmHg, yang setara dengan 6,23 ±
0,36% pengurangan. Semua pengurangan SBP ini oleh kelompok yang
ditangani MESP sepenuhnya pulih setelah 24 jam pemberian. Juga penting
untuk dicatat bahwa pengurangan SBP rata-rata oleh MESP dengan dosis
2,50 g / kg (36,17 ± 6,12 mmHg, yang setara dengan 20,08 ± 3,53%
pengurangan) secara signifikan lebih tinggi (P <0,01) daripada
pengurangan SBP rata-rata oleh losartan (17,92 ± 4,80 mmHg, yang setara
dengan pengurangan 9,90 ± 2,78%) setelah 6 jam pemberian.
Selain itu, Tabel 3 juga menunjukkan perbandingan antara dua ekstrak pada
dosis yang sama dan pada interval waktu yang sama. Diamati bahwa
pengurangan SBP rata-rata oleh MESP (36,17 ± 6,12 mmHg, yang setara
dengan 20,08 ± 3,53% pengurangan) secara signifikan lebih tinggi (P
<0,01) daripada pengurangan SBP oleh ADSP pada dosis yang sama 2,50 g
/ kg (10,00). ± 5,54 mmHg, yang setara dengan 5,15 ± 2,90% pengurangan)
setelah 6 jam pemberian ekstrak.

666 Pharmacognosy Journal, Vol 10, Issue 4, Jul-Aug, 2018

 Ismail, et al.: Acute and Sub-Acute Antihypertensive Effects of Syzygium polyanthum Leaf Extracts

Table 3: Time-course changes in SBP of SHR rats (n=4) treated with vehicle, losartan potassium (0.01 g/kg), and increasing doses of
ADSP or MESP (2.00, 2.50 and 3.00 g/kg) at specified time intervals within 24 h.
Systolic Blood Pressures of SHR Rats at Specific Time (hours)
t=0 hr t=1 hr t=3 hrs t=5 hrs t=6 hrs t=24 hrs
No Group Initial SBP in SBP in mmHg SBP in mmHg SBP in mmHg SBP in mmHg SBP in mmHg
mmHg [% changes] [% changes] [% changes] [% changes] [% changes]
Distilled water
(Negative control 179.33 ± 1.81 178.17 ± 4.43 174.96 ± 7.81 173.50 ± 4.46 172.04 ± 2.67 179.33 ± 4.68
1. for ADSP-and
[0.65 ± 2.20] [2.45 ± 4.17] [3.28 ± 1.92] [4.04 ± 1.65] [0.01 ± 2.29]
losartan-treated
groups)
Distilled water +
1 % sodium CMC 189.54 ± 1.28 191.42 ± 2.16 186.42 ± 2.12 183.50 ± 2.25 185.71 ± 1.84
2. (Negative control 188.92 ± 2.23
[-0.36 ± 1.05] [-1.33 ± 0.19] [1.32 ± 0.42] [2.85 ± 1.07] [1.67 ± 1.24]
for MESP-treated
groups)
Losartan 163.92 ± 6.80 *** χ
potassium, 178.38 ± 3.02 177.96 ± 4.94 171.83 ± 5.53 177.88 ± 5.08
3. 181.83 ± 3.91 [9.90 ± 2.78] ** γ
0.01 g/kg [1.85 ± 1.31] [2.16 ± 0.98] [5.46 ± 2.77] [2.22 ± 0.82]
(Positive control)

ADSP, 183.88 ± 4.51 186.00 ± 3.94 184.96 ± 3.19 182.46 ± 3.58 a 184.13 ± 2.20
4. 183.50 ± 4.56
2.00 g/kg [-0.22 ± 0.79] [-1.41 ± 1.11] [-0.87 ± 1.26] [0.50 ± 1.39] [-0.44 ± 1.43]

ADSP, 180.71 ± 3.01 174.67 ± 7.50 * 172.83 ± 7.68 ** 179.42 ± 3.19 a 188.50 ± 2.47
5. 189.42 ± 3.15
2.50 g/kg [4.59 ± 0.82] [7.90 ± 2.67] * [8.84 ± 3.07] ** [5.15 ± 2.90] [0.46 ± 0.76]

ADSP, 175.71 ± 4.85 * 167.79 ± 2.75** 168.50 ± 3.35 *** 169.25 ± 3.27 *** 190.88 ± 0.92
6. 190.50 ± 1.66
3.00 g/kg [7.77 ± 2.36] * χ [11.92 ± 1.31]** γ b [11.51 ± 2.24] *** χ [11.16 ± 1.39] *** χ [-0.22 ± 0.85]

MESP, 174.63 ± 4.01 166.92 ± 2.73 * δ 167.75 ± 1.93 * χ 171.75 ± 1.11 178.29 ± 3.46
7. 178.00 ± 2.70
2.00 g/kg [1.86 ± 2.20] [6.23 ± 0.36] * γ [5.73 ± 0.92)] * [3.47 ± 1.09] [-0.25 ± 2.78]

MESP, 163.54 ± 6.71 *** δ 164.92 ± 5.18 *** δ 156.88 ± 1.90 *** δ 144.46 ± 7.35 *** δ a 180.00 ± 3.11
8. 180.63 ± 2.49
2.50 g/kg [9.55 ± 2.60] *** γ [8.74 ± 2.01] *** γ [13.12 ± 1.19] *** δ b [20.08 ± 3.53] *** δ b [0.36 ± 0.57]

MESP, 183.38 ± 5.60 172.42 ± 1.05 *** δ 175.33 ± 1.41 *** 173.75 ± 2.78 *** 192.25 ± 1.05
9. 191.50 ± 0.61
3.00 g/kg [5.14 ± 2.77] [9.96 ± 0.70] *** δ [8.44 ± 0.80] *** γ [9.26 ± 1.57] *** [-0.39 ± 0.48]

Note: Results were expressed as mean ± S.E.M. “-” sign: Increment, ADSP: Aqueous decoction of S. polyanthum leaves, MESP: Methanolic extract of S. polyanthum
leaves, mmHg: Millimetres mercury, SBP: Systolic blood pressure, % Changes: Percent changes from pre-treatment mean SBP values, g/kg: Gram per kilogram, SHR:
Spontaneously Hypertensive rats. *: P<0.05, **: P<0.01 and ***: P<0.001, all vs. pre-treatment baseline mean SBP (t=0). χ: P<0.05, γ: P<0.01 and δ: P<0.001, all vs.
mean SBP value for negative control group at the same time interval. a: P<0.05, b: P<0.01 and c: P<0.001, all vs. mean SBP value for positive control group at the same
time interval. ≠: P<0.05 and #: P<0.001, mean SBP values for ADSP- vs. mean SBP value for MESP-treated group at the same dose and at the same time interval.

Perawatan harian dengan obat kontrol positif, losartan potassium

Diamati bahwa pengurangan SBP rata-rata oleh MESP (36,17 ± 6,12
mmHg, yang setara dengan 20,08 ± 3,53% pengurangan) secara signifikan
lebih tinggi (P <0,01) daripada pengurangan SBP oleh ADSP pada dosis
yang sama 2,50 g / kg (10,00). ± 5,54 mmHg, yang setara dengan 5,15 ±
2,90% pengurangan) setelah 6 jam pemberian ekstrak.
Studi Sub-Akut: Efek Pengobatan Harian dengan ADSP dan MESP
pada Tikus Hipertensi Spontan selama 3-Minggu.
Dalam penelitian ini, rerata SBP tikus SHR adalah 183,46 ± 1,12 mmHg (n
= 20). Percobaan pada tikus WKY dihilangkan dalam fase penelitian ini
karena studi efek dosis tunggal akut kami telah menunjukkan bahwa kedua
ekstrak tidak menyebabkan perubahan signifikan pada SBP tikus WKY
(Tabel 2). Gambar 1 menunjukkan perubahan SBP mingguan, waktu kursus
pada tikus SHR selama periode perawatan 3 minggu. Perawatan harian
dengan kedua kendaraan yang berfungsi sebagai kontrol negatif selama 3
minggu tidak menyebabkan pengurangan yang signifikan pada SBP tikus
SHR dibandingkan dengan nilai SBP pra-perlakuan (Gambar 1).
(0,01 g / kg / hari) secara signifikan mengurangi SBP tikus SHR
setelah 2 minggu dengan 13,96 ± 3,45 mmHg (8,37 ± 1,51%) (P
<0,001), dan kemudian setelah 3 minggu, penurunan SBP
ditemukan pada 12,75 ± 2,98 mmHg (6,87 ± 1,64%) (P <0,001)
(Gambar 1). Tidak ada perbedaan yang signifikan antara efek
setelah 2 minggu dengan efek setelah 3 minggu (Gambar 1).
Untuk kelompok yang diekstraksi ekstrak, SBPs tikus SHR yang
menerima pengobatan harian dengan ADSP (2,50 g / kg / hari)
secara signifikan berkurang hanya setelah 3 minggu sebesar 8,63
± 4,07 mmHg (4,59 ± 2,18%) (P <0,05 ) (Gambar 1). Di sisi lain,
perawatan harian dengan MESP (2,50 g / kg / hari) menunjukkan
respon yang lebih cepat, dimana SBP tikus SHR berkurang
secara signifikan setelah 2 minggu oleh 15,25 ± 4,36 mmHg
(8,29 ± 2,25%) (P <0,001) dan efeknya dipertahankan setelah 3
minggu pada 16,46 ± 3,52 mmHg (8,95 ± 1,84%)

Pharmacognosy Journal, Vol 10, Issue 4, Jul-Aug, 2018 667

 Ismail, et al.: Acute and Sub-Acute Antihypertensive Effects of Syzygium polyanthum Leaf Extracts
(P <0,001) (Gambar 1). Seperti losartan, tidak ada perbedaan yang
signifikan antara efek yang diukur setelah 2 minggu dengan 3 minggu
(Gambar 1).
Penelitian ini juga menunjukkan bahwa pengurangan SBP oleh MESP
(2,50 g / kg / hari) selalu jauh lebih tinggi daripada ADSP (2,50 g / kg /
hari) setelah 2 minggu (P <0,05) dan 3-minggu (P <0,05) pengobatan.
Selain itu, pengurangan SBP yang diukur oleh MESP adalah serupa dengan
efek yang ditunjukkan oleh obat kontrol positive, losartan potassium (0,01
g / kg / hari) setelah 2 minggu dan setelah 3 minggu pengobatan (Gambar
1).
Skrining kualitatif untuk fenolik menggunakan Ferric Chloride
Test
Senyawa Fenol terdeteksi pada kedua ADSP dan MESP seperti yang
ditunjukkan oleh munculnya warna biru-hitam yang intens dari campuran
tersebut setelah penambahan dengan besi klorida. Tidak ada perubahan
warna yang diamati untuk solusi kontrol negatif.
Kuantifikasi Asam Galat dalam ADSP dan MESP menggunakan
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
Kromatogram HPLC dari ADSP (Gambar 2) dan MESP (Gambar 3)
menunjukkan adanya beberapa puncak yang terdeteksi pada panjang
gelombang 210, 254, 280 dan 300 nm. Telah dicatat bahwa ada satu puncak
utama (ditunjukkan oleh puncak tertinggi dalam kromatogram HPLC)
dalam ADSP yang dielusi dengan waktu retensi 4,068, 4,072, 4,073, dan
4,073 pada panjang gelombang 210 nm, 254 nm, 280 nm, dan 300 nm,
masing-masing (Gambar 2). Seperti ADSP, ada satu puncak utama yang
diidentifikasi dalam kromatogram MESP yang dielusi dengan waktu retensi
4,068, 4,071, 4,072, dan 4,072 pada panjang gelombang 210 nm, 254 nm,
280 nm dan 300 nm, masing-masing (Gambar 3). Senyawa utama ini
diidentifikasi sebagai asam galat karena analisis HPLC pada kedua ekstrak
pada panjang gelombang tertentu 280 nm telah menunjukkan waktu retensi
yang sama dengan asam galat yang digunakan sebagai senyawa referensi
(Gambar 4). Kurva kalibrasi standar untuk asam galat ditunjukkan pada
Gambar 5. Persamaan kalibrasi yang diperoleh dari kurva standar asam
galat adalah y = 38590x-240357 (R2 = 0,9992). Berdasarkan area puncak
pada kromatogram dan kurva standar asam galat, konsentrasi asam galat
dalam ADSP dan MESP disajikan pada Tabel 4.
DISKUSI
Penelitian akut kami telah menunjukkan bahwa baik air rebusan (ADSP)
dan ekstrak metanol (MESP) dari daun S. polyanthum menyebabkan
pengurangan yang signifikan pada SBP tikus SHR, diamati antara jam
pertama sampai jam keenam dengan pemulihan lengkap setelah 24 jam.
Temuan penting lainnya adalah bahwa penurunan tekanan darah oleh
ADSP oral dan MESP hanya terjadi pada tikus hipertensi spontan (SHR),
model yang meniru hipertensi esensial pada manusia, tetapi tidak pada
tikus Wistar-Kyoto (WKY) normotensif. Temuan ini sangat penting untuk
pemahaman kita karena daun S. polyanthum tidak hanya dikonsumsi
sebagai obat untuk hipertensi, tetapi mereka juga secara teratur dikonsumsi
sebagai aditif kuliner di banyak masakan Melayu dan bahkan dikonsumsi
dalam bentuk mentah sebagai salad.
Table 4: Quantity of Gallic acid in ADSP and MESP.
Extracts Concentration (ppm)
(10 mg/ml) Run 1 Run 2 Run 3
ADSP 161.70 153.55 156.03
MESP 141.32 126.75 n.d
Note: ADSP: Aqueous decoction of S. polyanthum leaves, MESP: Methanolic extract of S. polyanthum leaves, ppm: Parts per million, SD: Standard
deviation, w/w: Weight over weight and n.d: not determined.
668
Bahkan, pengurangan selektif dalam tekanan darah sebelumnya diamati
dalam studi tentang quercetin dan captopril. Quercetin mengurangi tekanan
darah tikus SHR dengan mengembalikan oksidasi nitrit oksida yang
diinduksi dan dengan mengurangi produksi vasokonstriktor isoprostana
F2α, penanda untuk stres oksidatif. Captopril terbukti mengurangi tekanan
darah tikus SHR melalui pengurangan vasokonstriktor angiotensin II dan
endotelin serta dengan mengurangi tingkat oksidan, yang secara abnormal
diderita pada tikus SHR. Oleh karena itu, dijelaskan bahwa alasan yang
mungkin untuk pengurangan selektif dalam tekanan darah mungkin
disebabkan oleh tindakan dari ekstrak daun oral S. polyanthum yang
berlawanan dengan disfungsi endotel atau vaskular yang ada pada model
tikus SHR yang lumpuh. , tanpa mempengaruhi kondisi normal pada model
tikus WKY normotensive.
Sebaliknya, pengurangan selektif dalam tekanan darah oleh ekstrak daun S.
polyanthum oral tidak diamati dalam penelitian kami sebelumnya ketika
ekstrak serupa diberikan secara intravena ke dalam tikus WKY dan SHR
yang dibius. Perbedaan ini mungkin disebabkan oleh penggunaan rute
administrasi yang berbeda dalam studi ini. Anggapan kami adalah bahwa
pemberian rute oral dapat mempengaruhi ekstrak dengan predisposisi
beberapa komponen aktif untuk penghancuran oleh enzim pencernaan atau
cairan lambung, atau bahwa beberapa komponen aktifnya mungkin
dimetabolisme oleh enzim atau bakteri di saluran pencernaan sebelum
penyerapan sistemik. terjadi. Aspek ini bisa mempengaruhi bioavailabilitas
komponen aktif dan ini mungkin pada gilirannya, berdampak pada hasil
yang dihasilkan dari ekstrak. Prinsip-prinsip yang mendasari yang
mengatur temuan ini masih harus diteliti lebih lanjut.
Selain itu, penelitian ini juga menunjukkan bahwa efek oleh MESP lebih
menonjol daripada ADSP selama studi efek dosis tunggal dosis akut dan
sub akut. Ketika secara akut diberikan, MESP menyebabkan pengurangan
SBP yang signifikan dengan dosis 2,00 g / kg, lebih rendah dari ADSP (2,5
g / kg). Selama studi efek akut, MESP mencapai pengurangan SBP yang
signifikan pada awal minggu 2, yang lebih cepat daripada ADSP yang
mulai menunjukkan penurunan SBP yang signifikan hanya pada minggu ke
3. Selain itu, efek yang dihasilkan MESP pada minggu 2 mampu bertahan
hingga minggu ke-3. Dalam menguatkan temuan ini, penelitian terbaru oleh
Ahmad et al.4 juga menunjukkan bahwa ekstrak metanol mereka yang
disiapkan menggunakan metode bantuan ultrasound menyebabkan
penurunan yang signifikan dalam tekanan darah di SHR dengan perbaikan
struktural dari aorta dan ginjalnya ketika dirawat setiap hari selama 6
minggu.
Selain itu, penelitian kami menunjukkan bahwa MESP oral dan losartan,
obat antihipertensi standar memiliki onset waktu tindakan dan kemanjuran
yang sebanding ketika diobati setiap hari selama 3 minggu. Menurut
Hukum et al., 28 bahkan 5 mmHg pengurangan tekanan darah sudah
penting untuk menyebabkan penurunan signifikan dalam risiko stroke dan
penyakit jantung iskemik sebesar 34,00% dan 21,00%, masing-masing.
Dalam penelitian ini, MESP (2,5 g / kg / hari) berhasil menyebabkan
pengurangan SBP maksimum sebesar 16,46 ± 3,52 mmHg sedangkan
ADSP (2,5 g / kg / hari) sebesar 8,63 ± 4,07 mmHg setelah 3 minggu
perawatan setiap hari. Bahkan losartan potasium pada dosis terapeutik 0,01
g / kg / hari menyebabkan penurunan SBP signifikan yang signifikan 12,71
± 3,12 mmHg setelah 3 minggu pengobatan harian. Oleh karena itu,
besarnya penurunan tekanan darah
Average concentration (ppm) ± SD Concentration in
(per 10 mg sample) percentage of sample (w/w)
157.09 ± 4.18 1.57
134.04 ± 10.30 1.34
Pharmacognosy Journal, Vol 10, Issue 4, Jul-Aug, 2018
 Ismail, et al.: Acute and Sub-Acute Antihypertensive Effects of Syzygium polyanthum Leaf Extracts

Figure 1: Sub-acute effect of vehicles, losartan, ADSP and MESP on

SBP of SHR rats (n=4) for a period of 3-week. SBP for week 0, 1, 2 and 3
imply SBP measured before experiment start and after first (day 8),
second (day 15), and third (day 22) weeks. Results expressed as mean
± S.E.M. ADSP: Aqueous decoction of S. polyanthum leaves, MESP:
Methanolic extract of S. polyanthum leaves, CMC: carboxymethylcel-
lulose, SBP: Systolic blood pressure, SHR: Spontaneously
hypertensive rats, *: P<0.05 and #: P<0.001, all vs. pre-treatment
baseline value (w=0), ×: P < 0.05, ADSP- vs. MESP-treated group.

Figure 3: HPLC chromatograms of MESP at the wavelengths of A) 210,

B) 254, C) 280 and D) 300. The x-axis represents time while the y-axis
represents the abundance. AU: Absorption units, and nm: Nanometre.

Figure 2: HPLC chromatograms of ADSP at the wavelengths

of A) 210, B) 254, C) 280, D) and D) 300. The x-axis
represents time while the y-axis represents the abundance. Figure 4: HPLC chromatograms of ADSP, MESP, and gallic acid
AU: Absorption units, and nm: Nanometre. (100 ppm) at 280 nm. ppm: Parts per million, AU: Absorption units.

Pharmacognosy Journal, Vol 10, Issue 4, Jul-Aug, 2018 669

 Ismail, et al.: Acute and Sub-Acute Antihypertensive Effects of Syzygium polyanthum Leaf Extracts
Figure 5: A standard curve for gallic acid. ppm: Parts per million.
oleh ekstrak daun S. polyanthum oral pada 2,5 g / kg / hari lebih tinggi
daripada jumlah pengurangan tekanan darah yang dapat mengurangi risiko
penyakit kardiovaskular. Selain itu, penelitian skrining fitokimia
menunjukkan bahwa ADSP dan MESP mengandung fenolat, seperti yang
ditunjukkan oleh warna biru-hitam yang kuat dari endapan dalam uji besi-
klorida. asam galat diidentifikasi sebagai puncak utama dalam
kromatogram HPLC kami ADSP dan MESP dengan kuantitas 1,57% dan
1,34%, masing-masing. Oleh karena itu, temuan ini dikuatkan dengan baik
oleh Har dan Ismail10 yang telah mengidentifikasi asam galat sebagai
senyawa fenolik utama dalam ekstrak metanol mentah daun S. polyanthum,
disiapkan dengan teknik perkolasi.
Asam galat adalah jenis asam fenolik yang ada dalam bahan tanaman
dalam bentuk asam bebas, ester, turunan katekin dan tanin terhidrolisa.29
Sehubungan dengan efek antihipertensi, beberapa penelitian telah
menunjukkan beberapa bukti langsung dan tidak langsung yang dapat
menghubungkan asam galat dengan pengurangan tekanan darah. Butyl
gallate, ester asam galat mengurangi tekanan darah tikus normotensif
ketika diberikan melalui injeksi intraperitoneal; lebih penting lagi, itu juga
mengurangi tekanan darah tikus hipertensi ketika diberi makan secara
oral.30 Sebuah penelitian yang lebih baru telah menunjukkan bahwa
pengobatan oral dengan asam galat selama 4 minggu berhasil menormalkan
tekanan darah arterial sistolik, diastolik dan rerata tikus diabetes. Selain itu,
beberapa penelitian in vitro telah menunjukkan aktivitas renin-
penghambatan dan efek vasore-laksasi oleh asam galat. Li et al.13
melaporkan bahwa asam galat memiliki aktivitas penghambatan terhadap
renin, enzim penting yang dapat membelah angiotensinogen untuk
menghasilkan angiotensin I. Ini adalah langkah pembatasan laju dalam
produksi angiotensin II, vasokonstriktor kuat. Dengan demikian,
penghambatan renin disarankan untuk menekan produksi angioten-sin II,
yang pada gilirannya menghasilkan penurunan tekanan darah. Beberapa
penelitian in vitro telah menunjukkan efek vasorelaksasi lebih lanjut
dengan asam galat 14,15 yang dimediasi melalui jalur pensinyalan nitrat
oksida / cGMP. Asam galat dapat bertindak sebagai pembuka saluran
kalium dan juga sebagai blocker saluran kalsium untuk menyebabkan
vasorelaksasi. Efek vasorelaksasi yang dihasilkan dapat mengurangi
resistensi perifer total yang mengakibatkan penurunan tekanan darah.
Menariknya, penelitian kami baru-baru ini telah menunjukkan bahwa
ekstrak aque-ous dan metanol ekstrak daun S. polyanthum memiliki
beberapa sifat vasorelaksasi ketika diuji pada cincin aorta toraks terisolasi
dari tikus WKY dan SHR.3 Secara keseluruhan, penelitian sebelumnya
pada asam galat dapat menyarankan untuk kontribusinya terhadap tekanan
darah mengurangi aktivitas oleh ekstrak daun S. polyanthum ke arah
tertentu.
670
Meskipun demikian, temuan kami menunjukkan bahwa asam galat yang
ada dalam persentase yang lebih tinggi dalam ADSP daripada di MESP,
tetapi kemampuan mengurangi tekanan darah oleh MESP lebih signifikan
dibandingkan dengan ADSP. Dengan demikian, dijelaskan bahwa asam
galat mungkin memiliki beberapa kemungkinan interaksi dengan senyawa
lain untuk efek bersih. Oleh karena itu, sangat disarankan untuk
melanjutkan dengan studi yang lebih definitif seperti fraksiasi yang
dipandu bioassay dan isolasi senyawa bioaktif di masa depan.
KESIMPULAN
Penelitian ini menunjukkan bahwa baik Air rebusan dan ekstrak metanol
daun S. polyanthum secara signifikan mengurangi tekanan darah pada
Tikus hipretensi spontan, tetapi tidak dari tikus Wistar-Kyoto normotensif.
Namun, efek antihipertensi oleh ekstrak metanol ditemukan lebih menonjol
daripada rebusan air ketika diberikan secara oral. Air rebusan dan ekstrak
metanol mengandung asam galat sebagai senyawa fenolik utama.
PENGAKUAN
Studi ini didanai oleh Departemen Pendidikan Tinggi Malaysia melalui
Hibah Jangka Pendek (304 / PPSK / 61312059) dari Universitas Sains
Malaysia dan Skema Hibah Inisiatif Penelitian (RIGS-15-039-0039) dari
International Islamic University Malaysia
SINGKATAN
ADSP: Aqueous decoction of S. polyanthum leaves; MESP: Methanolic
extract of S. polyanthum leaves; WKY: Wistar-Kyoto rats; SHR: Sponta-
neously hypertensive rats; SBP: Systolic blood pressure.
DAFTAR PUSTAKA
1.  Kato E, Nakagomi R, Gunawan-Puteri M, Kawabata J. Identification of hy-
droxychavicol and its dimers, the lipase inhibitors contained in the Indonesian
spice, Eugenia polyantha. Food Chem. 2013:136(3-4):1239-42.
2.  Ismail A, Mohamed M, Sulaiman S, Wan Ahmad W. Autonomic nervous
system mediates the hypotensive effects of aqueous and residual methanolic
extracts of Syzygium polyanthum (Wight) Walp. var. polyanthum leaves in
anaesthetized rats. Evid-Based Complement Alternat Med. 2013:2013:1-17.
3.  Ismail A, Ahmad WANW. Autonomic receptors and nitric-oxide involvements
in mediating vasorelaxation effect induced by Syzygium polyanthum leaves
ex-tract. Pharmacogn Res. 2017:9(1):S9-S14.
4.  Ahmad WW, Jamal N, Rahmat U, Ramli N, Muhammad N, Noordin L. Evalu-
ation of Syzygium polyanthum leaves methanol extract as antihypertensive
agent in rat. Int J Cardiol. 2017:249:S10.
5.  Ramli N, Muhammad N, Safuan, Noordin L, Wan Ahmad WAN. Preliminary
evaluation on the effect of methanolic extract from Syzygium polyanthum on
improvement of hypertensive-renal damage among Spontaneous
Hypertensive Rat models. Annals of Microsc. 2017:16:15-22.
6.  Ichimura T, Yamanaka A, Ichiba T, Toyokawa T, Kamada Y, Tamamura T, et al. An-
tihypertensive effect of an extract of Passiflora edulis rind in spontaneously
hypertensive rats. Biosci, Biotechnol Biochem. 2006:70(3):718-21.
7.  Lv GY, Zhang YP, Gao JL, Yu JJ, Lei J, Zhang ZR, et al. Combined antihyper-
tensive effect of luteolin and buddleoside enriched extracts in spontaneously
hypertensive rats. J Ethnopharmacol. 2013:150(2):507-13.
8.  Widyawati T, Yusoff NA, Asmawi MZ, Ahmad M. Antihyperglycemic effect of
methanol extract of Syzygium polyanthum (Wight.) leaf in streptozotocin-in-
duced diabetic rats. Nutrients. 2015:7(9):7764-80.
9.  Kusuma IW, Kuspradini H, Arung ET, Aryani F, Min YH, Kim JS, et al.
Biological activity and phytochemical analysis of three Indonesian medicinal
plants, Mur-raya koenigii, Syzygium polyanthum and Zingiber purpurea. J
Acupunct Merid-ian Stud. 2011:4(1):75-9.
10.  Har L, Ismail I. Antioxidant activity, total phenolics and total flavonoids of Syzy-gium
polyanthum (Wight) Walp leaves. Int J Med Arom Plant. 2012:2(2):219-28.
11.  Hamad A, Mahardika MGP, Istifah I, Hartanti D. Antimicrobial and volatile
com-pounds study of four spices commonly used in Indonesian culinary. J
Food Pharm Sci. 2016:4(1):1-5.
12.  Mantruad A, Pannangpetch P, Kongyingyoes B, Kukongviriyapan U, Chuanta S,
Pharmacognosy Journal, Vol 10, Issue 4, Jul-Aug, 2018
 Ismail, et al.: Acute and Sub-Acute Antihypertensive Effects of Syzygium polyanthum Leaf Extracts

Nakmareong S, et al. Roselle extract and Gallic acid improve vascular
reactivity of diabetic rats. Srinagarind Med J. 2010:25:257-61.
13.  Li F, Takahashi Y, Yamaki K. Inhibitory effect of catechin-related compounds
on renin activity. Biomed Res. 2013:34(3):167-71.
14.  Gil-Longo J, Gonzalez-Vazquez C. Vascular pro-oxidant effects secondary to
the autoxidation of Gallic acid in rat aorta. J Nutr Biochem. 2010:21(4):304-9.
15.  De Oliveira LM, De Oliveira TS, Da Costa RM, De Souza Gil E, Costa EA, Pas-
saglia RdCAT, et al. The vasorelaxant effect of Gallic acid involves endothelium-
dependent and-independent mechanisms. Vascul Pharmacol. 2016:81:69-74.
16.  Malkoff J. About mouse and rat tail cuff-method non invasive blood pressure.
Animal Lab News. 2005. [updated 2005 October 31; cited 2018 February 27].
Available from: https://www.alnmag.com/article/2005/10/non-invasive-blood-
pressure-mice-and-rats.
17.  Tom E, Girard-Thernier C, Martin H, Dimo T, Alvergnas M, Nappey M, et al.
Treat-ment with an extract of Terminalia superba Engler and Diels decreases
blood pressure and improves endothelial function in spontaneously
hypertensive rats. J Ethnopharmacol. 2014:151(1):372-9.
18.  Ng C, Koona C, Cheunga D, Lama M, Leunga P, Laua C, et al. The anti-
hyperten-sive effect of Danshen (Salvia miltiorrhiza) and Gegen (Pueraria
lobata) formula in rats and its underlying mechanisms of vasorelaxation. J
Ethnopharmacol. 2011:137(3):1366-72.
19.  Maghrani M, Zeggwagh N, Michel J, Eddouks M. Antihypertensive effect of
Lepidium sativum L. In spontaneously hypertensive rats. J Ethnopharmacol.
2005:100(1-2):193-97.
20.  Eddouks M, Maghrani M, Zeggwagh N-A, Haloui M, Michel J-B. Fraxinus excel-sior
L. evokes a hypotensive action in normal and spontaneously hypertensive
rats. J Ethnopharmacol. 2005:99(1):49-54.
21.  Ashraf MS, Vongpatanasin W. Estrogen and hypertension. Curr Hypertens Rep.
2006:8(5):368-76.
22.  Abraham HMA, White CM, White WB. The comparative efficacy and safety of
the angiotensin receptor blockers in the management of hypertension and
other cardiovascular diseases. Drug Saf. 2015:38(1):33-54.
23.  Turner P, Brabb T, Pekow C, Vasbinder M. Administration of substances to
labo-ratory animals: Routes of administration and factors to consider. J Am
Assoc Lab Anim Sci. 2011:50(5):600-13.
24.  Raaman N. Phytochemical techniques. New Delhi: New India Publishing. 2006.
25.  Rangari VD. Pharmacognosy and phytochemistry Volume 1. Maharashta:
Career publications. 2009.
26.  Duarte J, Pérez‐Palencia R, Vargas F, Angeles Ocete M, Pérez‐Vizcaino F,
Zar-zuelo A, et al. Antihypertensive effects of the flavonoid quercetin in
spontane-ously hypertensive rats. Br J Pharmacol. 2001:133(1):117-24.
27.  Bolterman RJ, Manriquez MC, Ruiz MCO, Juncos LA, Romero JC. Effects of
captopril on the renin angiotensin system, oxidative stress, and endothelin in
normal and hypertensive rats. Hypertension. 2005:46(4):943-47.
28.  Law M, Wald N, Morris J. Lowering blood pressure to prevent myocar-dial
infarction and stroke: A new preventive strategy. Health Technol Assess.
2003:7(31):1-109.
29.  Karamac M, Kosinska A, Pegg R. Content of Gallic acid in selected plant ex-
tracts. Pol J Food Nutri Sci. 2006:15(1):55-8.
30.  Cash W. Production of an hypotensive effect with esters of Gallic acid. United
States of America Patent 3784695. 1974.

GRAPHICAL ABSTRACT SUMMARY

•  Oral administration of aqueous decoction and methanol extract of Syzygium

polyanthum leaves that contain gallic acid causes acute and sub-acute
antihy-pertensive effects in SHR.
•  The methanol extract was found to be more prominent than the aqueous de-
coction.
•  No significant effect seen on normal rats.
ABOUT AUTHORS

Azlini Ismail: Is currently an Assistant Profes-

sor in the field of Pharmacology at Department
of Fundamental Dental and Medical Sciences,
Kulliyyah of Dentistry, International Islamic Uni-
versity Malaysia.

Nurul Syahida Ramli: Is currently a PhD student in Pharmacology at School of Health Sciences, Universiti
Sains Malaysia.

Mahaneem Mohamed: Is an Associate Professor at Physiology Department, School of Medical Sciences,

Universiti Sains Malaysia.

Wan Amir Nizam Wan Ahmad: Is currently holding a post as a senior medical lecturer in Pharmacology and
Biostatistics at School of Health Sciences, Universiti Sains Malaysia.

Cite this article: Ismail A, Ramli NS, Mohamed M, Ahmad WANW. Acute and Sub-Acute Antihypertensive Effects of Syzygium
polyanthumLeaf Extracts with Determination of Gallic Acid using HPLC Analysis. Pharmacog J. 2018;10(4):663-71.

Pharmacognosy Journal, Vol 10, Issue 4, Jul-Aug, 2018 671