Fijación y técnicas de preparación de extendidos

citológicos
Introducción
Citología es parte de la biología que estudia las células y sus
organelas, su desarrollo ha sido paralela al del microscopio.
Desde hace muchos años ha sido de gran valor en el campo de
la medicina para la detección del cáncer cervico-uterino y de
otros sitios del cuerpo.
Los laboratorios de citología deben estar dotados de varias
áreas de trabajo:
-Citología ginecológica
-Citología de líquidos o derrames
-Punción aspiración con aguja fina(PAAF)
Interpretación celular
Métodos de recolección
Fijación y fijadores
Preservación de líquidos antes de ser procesados
Preparación de material citológico para el examen
microscópico
Tinción y montaje de la muestra celular
 Métodos de recolección
 Citología ginecológica:
Citología convencional es
recolectada del cérvix por el
personal médico o enfermería
 Punción Aspiración con aguja
Fina pueden ser recolectadas
por patólogos (as) con
experiencia en este campo.
 Citología de líquidos
corporales como orina y
esputo pueden ser
recolectada por el mismo
paciente siguiendo las
recomendaciones médicas
o del laboratorio
 Para la recolección de los
derrames como pleural,
peritoneal, LCR y otros , el
paciente debe estar
ingresado y el medico debe
realizar la recolección
adecuada.
Citología cervico-vaginal
Punción aspiración con aguja
fina (PAAF=BAAF)
Derrames corporales
Toracocentesis y paracentesis
 Fijación
 La fijación inmediata de las muestras es necesaria
para preservar los detalles celulares en los
extendidos citológicos.
 Si las muestras se dejan secar al aire antes de la
fijación las células pueden sufrir distorsión en su
arquitectura.
 Fijadores
 Para preservar muestras ginecológicas :
 Alcohol al 95%- éter.
 Alcohol 95% en atomizador o citospray.
 Metanol al 100%
 Propanol 80%
 Isopropanol 80%
 Pre-fijador para muestras de líquidos corporales:
 alcohol 50%.
 Para las PAAF se pueden utilizar:
 Alcohol 95%
 Formalina buferada al 10%
 Secado al aire.
Fijación inmediata
Liq. Pleural fijado en alcohol 95% Liq. Pleural fijado en formalina al 10%
Muestra de liq. Peritoneal fijada en alcohol al 95%
Fijadores especiales
 Solución de formalina buferada neutral: Fijador de Carnoy
Formalina 37-40%100ml -Etanol 95% 60 ml
Agua 900ml -Cloroformo 30 ml
Fosfato de sodio -Acido acético
monobásico ………. 4 g glacial 10 ml
Fosfato de sodio (en este fijador la muestra no debe
bibásico…………… 6.5 g. permanecer más de 15 min)

Solución de Bouin
Solución acuosa de Vapor de formalina: este fijador hemolisa los
ácido pícrico 1.2 %50ml glóbulo rojos y encoge las células

Formol 37-40% 250ml Fijador ácido Pícrico

-Acido pícrico 1.3 g
Acido acético glacial -Alcohol etílico 70% 1000ml
50ml
 Preservación de Líquidos antes de ser
procesados
 Preservar la morfología celular hasta que la muestra sea
procesada es esencial para la correcta interpretación.
 Los especimenes pueden ser sometidos al laboratorio sin
preservación si se facilita la inmediata preparación de los
extendidos.
 El tiempo entre la recolección de la muestra y la preparación
antes de sufrir daño celular depende del PH, proteínas, actividad
enzimática y la presencia o ausencia de bacterias. Ejemplo:
Lavado Gástrico
 Preparación del material citológico para el
examen microscópico
Muestras líquidas como orina , derrames pleurales,
peritoneales o LCR., se deben someter al método de
sedimentación en centrifuga por 5 min a 1500 o 2000rpm ,
del material obtenido se realiza los extendidos.
Muestras con alto contenido mucoso como Esputo, aspirado
bronquial o líquido de mucocele deben realizarse los
extendidos citológicos directamente seleccionando
partículas sólidas, decoloradas o con sangre.
Método de sedimentación celular
Preparación del extendido citológico de esputo
Preparación con filtro de membrana o
millipore
 Los filtros de millipore son elaborados de celulosa
aproximadamente de 140milimicras, especialmente
utilizado en muestra con poco contenido celular como LCR.
 Preparación de bloque celular
 La técnica de bloque celular o inclusión en agar
parafina se realiza a partir del sedimento celular
decantando liquido sobrenadante y agregando agar
líquido, este método es útil para complementar
diagnostico del citológico .
 Tinción Papanicolaou
 Tinción de rutina elaborada por el Dr. Georges
Papanicolaou, tienen un valor práctico en la
diferenciación celular tanto citoplasmática como
nuclear y sus modificaciones.
 Para este método se necesitan 3 soluciones especificas:
Hematoxilina de Harris
Orange 6 (OG6)
Eosina Azur 36, 50 ó 65 (EA-50)
Cada una de estas soluciones deben de ser filtradas
antes de utilizarla.
 Pasos de tinción Pap .
1. Re fijación en alcohol al 95% 10 min
2. Hidratación en alcohol 80%, 70%, 50% agua una sumersión en cada
una
3. Tinción Nuclear en Hematoxilina de Harris 6 min
4. Enjuague en agua
5. Extracción diferencial en ácido clorhídrico al 0,25%.
6. Enjuague y deshidratación en agua, alcohol 50%, 70%, 80% y 95%
7. Tinción citoplasmática en Orange 6 1 ½ min
8. 3 enjuague en alcohol al 95%
9. Tinción citoplasmática en EA 36, 50 o 65 1 a 3 min.
10. Enjuague en 3 alcoholes 95%
11. Deshidratación total en etanol absoluto
12. Clarificación celular en Xilol
 Tinciones especiales
 Tinción para evaluación  Método de la tinción:
hormonal: Tinción de 1. Teñir la Mx., en
Shorr solución de Shorr por 1
min.
1. Alcohol al 50%……100ml 2. Enjuagar en alcohol al
2. Biebrich Scarlet 0.5 gr
70%, 95% y alcohol
3. Orange G-6 0.25gr
4. Fast-Green 0.075gr
absoluto
5. Acido fosfotúngstico 3. Aclarar en xilol y
0.5gr montaje permanente
6. Acido fosfomolíbdico 0.5gr
7. Acido acético 1.0ml
Otras tinciones
Método de Rakoft:  Tinción para cromatina
sexual:
 Light Green 83ml
 Solución acuosa de eosina 1. Tinción de Biebrich
al 1 % 17ml Scarlet-Fast-Green
La muestra tomada de la 2. Tinción de Orceina
pared vaginal se coloca en acética
2 cc., de solución salina y se 3. Tinción Cresil Violeta
le agrega 1 gota de la
mezcla de Rakoft, se
deposita esta muestra en la
lamina.
 Montaje de la muestra procesada
 Los medios de montajes crean un capa permanente
entre la lámina y el cubreobjetos protegiéndola del
medio ambiente, daños mecánicos, disecación celular,
logrando así almacenarlas luego de haber sido
visualizadas o diagnosticadas .
 Se coloca una gota del medio de montaje sobre la
muestra
 Se diluye con Xilol y antes de que se seque colocar el
cubre objeto tratando de que la muestra quede
protegida
 Algunas recomendaciones
 Muestras citológicas hemorrágicas antes de proceder a
tinción deben de sumergirse por 5 seg., en solución
acuosa de ácido acético al 2%
 Extendidos citológicos cervicovaginal sin fijar se re
hidrataran sumergiendo la laminilla en glicerina al
50% por 2 seg., y luego sumergir en alcohol al 95% .