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EMPRESA SOCIAL DEL ESTADO CÓDIGO:ADG-LCL-407

HOSPITAL LA MARÍA VERSIÓN: 02

MANUAL DE HEMATOLOGÍA PÁGINA: 1 DE 21

ALCANCE

Este manual aplica para el laboratorio de la E.S.E Hospital La María y los servicios de
urgencias, UCI, UCE, cirugía, hospitalización y consulta externa.

OBJETIVO

Proporcionar al laboratorio clínico del Hospital La María, un instrumento que facilite el


desarrollo adecuado, sistematizado y estandarizado de los procedimientos técnicos que
se realizan en el laboratorio.

INTRODUCCIÓN

Actualizó Revisó Aprobó


Paola Andrea Salazar Gallego Patricia Mazo Muñoz William Marulanda Tobón
Coordinadora Laboratorio Clínico Coordinadora de Calidad Gerente
Firma Firma Firma

Fecha: 13/11/2013 Fecha: 20/11/2013 Fecha: 27/11/2013


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El área de hematología es fundamental en el ámbito de la salud para el diagnóstico de


algunas entidades relacionadas con alteraciones hematológicas, como leucemias/
linfomas, anemias, entre otras; además del apoyo clínico que esta le ofrece a otras áreas.
Por esta razón es necesario aplicar las diferentes tecnologías y herramientas
hematológicas adecuadamente.
El presente manual proporciona información práctica acerca de equipos y técnicas que se
utilizan en el laboratorio de la E.S.E. Hospital La María, lo cual permite que el personal del
laboratorio clínico acceda a una guía teórica sobre lo que se maneja en la sección, de
esta forma se garantiza que haya una estandarización de los procesos aquí establecidos
y por lo tanto un adecuado manejo de los mismos.
Teniendo esto en cuenta se logra así ofrecer un mejor servicio tanto al personal de la
salud como a los pacientes que son manejados en el hospital y aquellos que asisten al
laboratorio clínico.
La interpretación correcta de los resultados y el manejo apropiado de los recursos permite
un adecuado diagnóstico y por tanto un oportuno tratamiento al paciente.

HEMOLEUCOGRAMA

El hemoleucograma es el análisis automatizado de las tres líneas celulares: eritroide,


leucocitaria y plaquetaria. Estas son medidas en valor absoluto y porcentual mediante el
equipo MINDRAY BC 5800.

Este equipo tiene las siguientes características:

 Analiza 29 parámetros
 Hace el diferencial a 5 partes
 Procesa 90 hemogramas por hora
 Incluye tecnología por citometría de flujo de flujo
 Tiene canal independiente y métodos ópticos para medir basófilos
 Detecta células anormales

Para la medición de cada uno de los parámetros el equipo emplea los siguientes
métodos:

 El diferencial es obtenido mediante el método de citometría de flujo por laser, en la que


mediante la intensidad de la dispersión refleja el tamaño y densidad celular.

La evaluación del cuadro hemático se


hace teniendo en cuenta cada uno de
los parámetros medidos, como son:
hemoglobina (HB), hematocrito
(HCT), índices eritrocitarios (MVC,
MCH, MCHC), amplio de
distribución eritrocitaria (RDW),
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plaquetas (PL), tamaño plaquetario (PLCC), amplio de distribución plaquetaria (PLC-W).


Cuando algunos de estos parámetros se encuentran aumentados se toma la decisión de
evaluar la muestra del paciente mediante extendido de sangre periférica.
Hemoglobina: molécula que forma parte del hematíe que transporta oxigeno y dióxido de
carbono.
Hematocrito: mide porcentaje de hematíe en el volumen total de la sangre.
Índices eritrocitarios: proporcionan información sobre el tamaño (MCV), cantidad y
concentración de hemoglobina (MCH, MCHC).
RDW: mide el grado de variabilidad del tamaño de los glóbulos rojos.

 La hemoglobina es determinada por método colorimétrico, mediante la lisis de glóbulos


rojos queda libre la hemoglobina que es detectada por un LED que emite una luz
monocromática a 525nm.

 Los demás parámetros son medidos por el método de impedancia eléctrica, en la que
mediante la medición de cambios en la resistencia eléctrica se produce un impulso
eléctrico mensurable, el número de impulsos indica el número de partículas que pasan por
la abertura.

Cuando la HB y el HCT no coinciden, se considera un error del equipo y se vuelve a pasar


la muestra.

RECOMENDACIONES

Se recomienda realizar extendido de sangre periférica a toda muestra pediátrica y a


jóvenes y adultos que presenten:

Hemoglobina:< 5g/dl
Hematocrito: <20%
Glóbulos blancos: < 2.5*109/L o > 16*109 /l
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Plaquetas: <50*109 /l o > 600*109/l

Hay que tener en cuenta que las líneas celulares se puede encontrar afectada por:

Serie roja
Alteración en el tamaño de los hematíes.
Número muy elevado de leucocitos.
Hemodilución: presente en mujeres embarazadas.
Deshidratación.
Hemorragia inmediatamente previa a la prueba.
Medicamentos.

Serie blanca:
Ingesta de algunos medicamentos.
Actividad física.
Ultimo mes de embarazo y en el parto.
Pacientes con esplenectomía.

Serie plaquetaria:
Residencia a gran altitud.
Ejercicio intenso.
Medicamentos.

Valores críticos:
Hb: <5g/dl.
Htc: <15%.
Leucocitos: <2.5*109/l ó>30*109/l.
Plaquetas: <50*109/l ó> 1millon *109/l.

MÉTODO DEL MICROHEMATOCRITO

El hematocrito es la fracción de volumen que los eritrocitos ocupan en un volumen de


sangre. Determina la cantidad relativa de eritrocitos empacados y de plasma.
En este método se utiliza una fuerza centrifuga de 8.000-12.000 r.p.m y es considerado
por algunos el mejor método. Para el estudio The effects of over-anticoagulated blood on
hematocrit values by the microcentrifuge method.2008. No hay diferencias entre el método
automatizado y el método por centrifugación.

Procedimiento

 Mezclar cuidadosamente la sangre.


 Llenar el capilar 2/3 con la muestra evitando la formación de burbujas.
 Sellar el extremo del capilar con plastilina (el extremo que no contiene la marca azul).
 Colocar los capilares en los surcos radiales de la centrifuga con el capilar calibrador.
 Centrifugar de 3- 5 minutos.
 Extraer inmediatamente los capilares apenas termine la centrifugación.
 Realizar la lectura en la tabla para microhematocrito.
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 Calcular el valor de la hemoglobina dividiendo entre 3 el valor del hematocrito

1 2 3

El Hematocrito en algunas entidades.


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EXTENDIDO DE SANGRE PERIFÉRICA

El frotis sanguíneo o extendido de sangre periférica es de gran importancia como apoyo


diagnostico para muchas alteraciones hematológicas. La evaluación morfológica depende
de la correcta realización del extendido de sangre periférica.
El extendido no debe ser muy delgado ni tampoco muy grueso con el fin de que los
leucocitos se distribuyan uniformemente.

Se considera hacer extendido de sangre periférica según las indicaciones dadas en el


hemoleucograma.

Para realizar el extendido de sangre periférica mediante dos portaobjetos se procede de


la siguiente forma:

 Colocar 5ul sobre un portaobjetos.


 Colocar el borde de otro portaobjetos sobre la parte anterior de la gota de sangre
formando un ángulo de 45º y desplazarlo suavemente hacia atrás hasta alcanzar la gota
de sangre.
 Esperar a que por capilaridad la gota de sangre se distribuya uniformemente.
 Deslizar suavemente el portaobjetos hasta que la gota de sangre quede bien
extendida.
 Dejar secar el frotis al aire y colorear con Wrigth.

Un buen extendido está compuesto de tres partes:

Cabeza: zona gruesa donde se observa un aumento de linfocitos.

Cuerpo: zona ideal para leer el extendido, corresponde a la zona intermedia, en ella hay
una distribución uniforme de las células.

Cola: zona delgada, en esta las células adoptan una disposición acordonada, aquí hay
exceso de granulocitos y monocitos.

TINCIÓN DE WRIGTH

La mayoría de los colorantes para tinciones hematológicas se basan en el de


Romanowsky, esta consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación como la
eosina. La acción combinada de estos dos colorantes produce el efecto Romanowsky y le
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da una coloración purpúrica a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrófilos; a
los eritrocitos le da una coloración rosácea. La tinción de wrigth es una coloración
policromática y su fundamento es el siguiente:

Los componentes de esta coloración son

Azul B: azul de metileno, colorante básico que tiñe los núcleos por su acción básica.

Eosina Y: tiñe la hemoglobina por su acción acida.

Las demás estructuras se tiñen por combinación de ambos colorantes y son llamadas
neutrófilas.

Método

 Colocar el extendido en una superficie plana horizontal y con la extensión de sangre


hacia arriba.
 Cubrir la superficie con Wrigth, esperar 2 minutos.
 Agregar un volumen igual de solución amortiguadora y soplar suavemente hasta obtener
una apariencia verde metálica. Esperar 5 minutos más.
 Remover el colorante con agua corriente, el lavado debe ser rápido para evitar la
formación de precipitados.
 Quitar el colorante adherido a la placa en parte trasera de la placa.
 Dejar secar al aire.

Control de calidad en la coloración

El uso correcto de los tiempos durante la coloración y el extendido, permiten obtener un


frotis adecuado para la lectura de los componentes sanguíneos.
El criterio más confiable sobre la calidad de la tinción es la forma como se tiñen los
monocitos, el cual debe tener un núcleo vesicular fino y el citoplasma debe verse con
gránulos rosados muy finos.

Una tinción satisfactoria debe dar los siguientes resultados

Glóbulos rojos: rojo amarillento.


Neutrófilos: cromatina purpura oscuro, citoplasma rosa pálido y gránulos lila.
Eosinófilos: cromatina purpura oscuro, citoplasma azul pálido y gránulos rojos brillantes.
Basófilos: cromatina purpura oscuro, gránulos azul oscuro.
Linfocitos: cromatina purpura oscuro, cromatina azul cielo.
Monocitos: cromatina purpura medio, citoplasma azul grisáceo y gránulos lila.
Plaquetas: centrómero violeta o purpura, hialómero azul claro. .

Causas de error

Extensión excesivamente azul


Extensión gruesa.
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Lavado insuficientes.
Tiempo de tinción excesivamente prolongado.
Empleo de colorante excesivamente alcalino.

Una coloración excesivamente rosada


Extensión delgada.
Exceso de buffer.
Empleo de colorante excesivamente acido.

ERITROSEDIMENTACIÓN

La eritrosedimentación es una medida de la velocidad a la cual se sedimentan los


eritrocitos en el plasma. Esta depende de:

La composición de proteínas del plasma: aumentan la VSG, debido a una disminución


del potencial zeta (fibrinógeno, alfa globulina y gamma globulina).

El tamaño y forma de los eritrocitos: los macrocitos aumenta la VSG, por el contrario
los microcitos y poiquilocitos la disminuyen.

La concentración de los eritrocitos: disminuye la VSG

Procedimiento:

 Mezclar suavemente por inmersión la sangre total anticoagulada con EDTA.}


 Llenar la pipeta de Westergren con un propipeteador hasta que la sangre llegue a la
marca 0. Evitando la formación de burbujas.
 Colocar la pipeta en la gradilla de Westergren en forma vertical.
 Marcar una hora y leer en el tiempo exacto los milímetros dados por la pipeta.
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Anotaciones
La determinación de la velocidad de eritrosedimentación debe efectuarse en el transcurso
de la hora siguiente a la toma de la muestra.

La prueba es inespecífica, por tanto para enfermedades infecciosas e inflamatorias se


recomienda la PCR.

Esta prueba no tiene utilidad clínica como prueba de tamizaje, pero en enfermedades
especificas como artritis temporal y polimialgia reumática la VSG está íntimamente
relacionada y hace parte de los criterios diagnósticos.

Valores de referencia

Niños: <10mm/h
Hombres (hasta 50 años): 0-15mm/h
Mujeres (hasta 50 años): 0-20mm/h
Hombres (después de 50 años): 0-20mm/h
Mujeres (después de 50 años): 0-30mm/h

Velocidad de sedimentación corregida:

La corrección de la VSG se debe realizar a todo paciente que se le asocia la anemia a un


proceso infeccioso y que la muestra no se haya diluido para eliminar el efecto de la
concentración de los eritrocitos. La corrección se realiza con la siguiente fórmula:

VSG corregida: VSG del paciente x hto del paciente/hto ideal.

Hematocrito ideal:

Hombres: 45%
Mujeres: 42%

RECUENTO DE RETICULOCITOS

El reticulocito es la célula que antecede al eritrocito, este representa el grado de


producción y liberación de eritrocitos por la medula ósea a circulación, manifestando así el
estado de la actividad eritropoyética.

De acuerdo a lo anterior, valores superiores de reticulocitos a lo establecido como normal,


indica aumento en la actividad eritropoyética debido a hemorragias, anemias hemolíticas,
anemias carenciales (anemia ferropénica y megaloblástica).

Los recuentos bajos de reticulocitos reflejan una eritropoyesis defectuosa, esta situación
se presenta en anemia aplásica, crisis aplásica de anemias hemolíticas e infiltración de
células tumorales a medula ósea.
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El reticulocito se tiñe con azul de cresil brillante, revelando con esta coloración la
presencia de sustancias reticulofilamentosas formadas por RNA y otras organelas
citoplasmáticas que se tiñen de azul profundo.

Método

 Mezclar la muestra por inmersión.


 Verter a partes iguales la cantidad de sangre y azul de cresil brillante en un tubo de
ensayo.
 Incubar a baño María por 15 minutos a 37ºC.
 Realizar el extendido en un portaobjetos.
 Leer la placa, contando la cantidad de reticulocitos por 500 células rojas.

Se determina el porcentaje de reticulocitos de la siguiente forma

500 células blancas 100%

X cantidad de reticulocitos

O simplemente se multiplica el valor de reticulocitos dados por 0.2

Valores de referencia:

Relativos:

Mujeres: 0.4-2.4%
Hombres: 0.6-2.6%
Recién nacidos: 2.5-6.5%

Absolutos:

40-100*109/L con un promedio de 60*10 9/l

Porcentaje corregido de reticulocitos:

Este se emplea siempre que se encuentre un hematocrito por debajo de lo establecido


como normal, donde la masa eritroide se encuentra disminuida y el recuento de
reticulocitos en valores relativos no es normal. El porcentaje corregido se obtiene así:

% Reticulocitos corregido: % reticulocitos x Hto del paciente/ Hto normal.

Hematocrito ideal:

Hombres: 45%
Mujeres: 42%
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Índice de producción reticulocitaria (IPR):

Proporciona información sobre la tasa de eritropoyesis efectiva en comparación con la


tasa normal de maduración del reticulocito en sangre periférica, que corresponde a 1 (1
día). Si los reticulocitos inmaduros aparecen en el extendido como eritrocitos
policromatófilos, significa que el tiempo de maduración en medula ósea al tiempo de
maduración en sangre periférica se demora más del día habitual para su maduración
como eritrocito.

Para la determinación del IPR se sigue la siguiente fórmula

IPR: % reticulocitos corregidos


_______________________________________________________
Tiempo de maduración del cambio de reticulocitos con base en el Hto

Tabla1. Tiempo de maduración de cambio de reticulocitos con base en el hematocrito.

Hto del paciente % Tiempo maduración sangre periférica


(días)
35 1.5
25 2.0
15 2.5

FORMAS ANORMALES DE LOS ERITROCITOS

Las anormalidades de la morfología de los glóbulos rojos se presentan como:

Anisocitosis: anormalidades en el tamaño


Poiquilocitosis: anormalidades en la forma
Inclusiones: anormalidades citoplasmáticas
Cromasia: variaciones en el contenido de hemoglobina

Anormalidades en la distribución de los eritrocitos.


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ANISOCITOSIS

Macrocitos

Se encuentran en anemias megaloblásticas,


alcoholismo, hipotiroidismo, estimulo eritropoyético,
enfermedades hepáticas, anemia aplásica y
pacientes esplenectomizados.
Se debe contar en 10 campos la cantidad de
macrocitos y reportarse por cruces:

Normal: 0-2
Ligera: 3-10 (+)
Moderada: 11-25 (++)
Moderada a marcada: 26-50 (+++)
Marcada: >50 (++++)

Microcitos

Se encuentran en anemia ferropénica, talasemia,


anemia sideroblástica, anemia por inflamación.

Se debe contar en 10 campos la cantidad de


microcitos y reportarse por cruces:

Normal: 0-2
Ligera: 3-10 (+)
Moderada: 11-25 (++)
Moderada a marcada: 26-50 (+++)
Marcada: >50 (++++)

POIQUILOCITOSIS

Crenocitos (equinocitos):

Comunes en neonatos y se observan transitoriamente


después de transfusiones masivas, se encuentran
además en carencia de ATP, deficiencia de
piruvatokinasa, insuficiencia renal, anemia
microangipática y uremia.
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Acantocitos

Se observa en pacientes esplenectomizados, cirrosis


alcohólica con anemia hemolítica, hepatitis del recién
nacido.

Estomatocitos

En individuos normales puede estar hasta en un 3%.


Se genera por falla en la bomba Na/K, se aumenta
la entrada de Na en comparación con la perdida de
K. el eritrocito en este caso gana cationes, agua y
se hincha.
Se observa en estomatocitosis hereditaria,
enfermedad de Rh nulo, envejecimiento normal del
glóbulo rojo.

Esferocitos

Relacionado con desordenes hemolíticos de carácter


heredado o adquirido. Se observan en esferocitosis
hereditaria, anemia hemolítica autoinmune, anemia
microangiopática.
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Dianocitos

La región central del dianocito con mayor contenido de


Hb es debido a un aumento en el contenido de lípidos de
la membrana o a una disminución de el contenido de Hb
o presencia de Hb anormal. Se encuentra en deficiencia
de LCAT, hemoglobinopatías 8C, S ,SC, anemia
ferropénica, talasemia, enfermedad renal.

Ovalocitos

La presencia de 20-75% en sangre periférica se


asocia a eliptocitosis hereditaria.
Se observa en anemia megaloblástica, anemia
ferropénica, talasemia, enfermedad por hemoglobina
C.

Células falciformes

Las células falciformes se forman por presencia de la


hemoglobina S (B6 Glu-Val), la cual se polimeriza en
condiciones de hipoxia, acidosis, altos niveles de 2-
3DPG y deshidratación del glóbulo rojo. Se observan
en anemia drepanocitica (S-S), rasgos falciformes (A-
S)
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Dacriocitos

Se puede encontrar en síndrome mieloproliferativo,


anemia megaloblástica, talasemia, anemia
ferropénica.

Queratocitos:

Aparece en entidades que cursan con cuerpos de


Heinz, como en G6PDH y talasemia.

Esquistocitos

Indica hemolisis intravascular asociada con


anemia hemolítica que cursan con trauma físico
directo de la célula roja.
Se presentan en CID, purpura trombótica
trombocitopénica, inserción de válvulas
cardiacas.
Se debe tener en cuenta la cantidad de cada
una de las células de diferente forma en 10
campos y reportarlas por cruces así:

Normal: <2
Ligera: 3-10 (+)
Moderada: 11-25 (++)
Moderada a marcada: 26-50 (+++)
Marcada: >50 (++++)
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INCLUSIONES

Punteado basófilo

El punteado basófilo está constituido por numerosos


ribosomas aglutinados de manera espontanea. Se
observa en anemia sideroblástica, intoxicación por
plomo, deficiencia de 5 pirimidin nucleotidasa, anemia
hemolítica, fase de recuperación de anemias carenciales,
talasemia, paludismo.

Cuerpos de Howell-Jolly

Anillos de Cabott (A) y Cuerpos de Heinz (B)

A B
Los anillos de Cabott se encuentran en
anemia megaloblástica, eritroblastosis
fetal, intoxicación por plomo, anemia
perniciosa y anemia hemolítica.
Los cuerpos de Heinz están asociados con
esplenectomía, talasemia, deficiencia de
D6PDH
Se debe tener en cuenta la cantidad de
inclusiones que hay en las células por
campo y reportarse por cantidad:
Normal: 0
Ligera: 1-2
Moderada: 3-5
Marcada: >6
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Cromasia

La cromasia se refiere a la tinción del glóbulo rojo con Wrigth, dando cuenta de la
normocromía, hipocromía, hipercromía y policromatofília. Esta se evalúa de la siguiente
forma:

Normal: 0-5 Ligera: 6-15 (+) Moderada: 15-30 Marcada: >30


(++) (+++)
VCM (29-33) VCM (28-30) VCM (25-27) VCM (<24)

Para la evaluación de la policromatofília se tiene en cuenta lo siguiente


Se cuentan 10 campos y se saca el promedio y se compara con la siguiente tabla:

Normal: 0-1.5 Ligera: 1.6-2.5 Moderada: 2.6-3.5 Marcada: >3.6


(+) (++) (+++)
Reticulocitos % Reticulocitos Reticulocitos % Reticulocitos %
0.5-1.5 % 1.6-4.0 4.1-6.0 >6

ANORMALIDADES EN LA DISTRIBUCIÓN EROITROIDE

Efecto Rouleaux:

Se relaciona con proteínas plasmáticas anormales o


aumentadas. Se observa en Mieloma múltiple y otras
gammapatías.

Aglutinación

Fenómeno presentado por efecto Ag/ Ac, se


relaciona con aglutininas frías, anemias hemolíticas
autoinmunes. Esto se controla manteniendo la
muestra de sangre a 37ºc. En equipos
automatizados estos acúmulos pasan como células
muy grandes lo que disminuye en número total de
glóbulos rojos, disminuyendo falsamente el
hematocrito del paciente y aumentando el VCM,
semejando una anemia macrocítica.
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ANALIZADOR Mindray BC-5800

BC-5800 es un equipo equipado con las tecnologías más avanzadas incluyendo


láser de dispersión, citometría de flujo y tinción celular. Con 29 parámetros a bordo y 90
pruebas por hora de rendimiento, BC-5800 es adecuado para laboratorios de tamaño
mediano que solicite información con diferencial de 5 partes,
capacidad de establecer normas re-examen y automatización.

Los procedimientos de mantenimiento preventivo y correctivos son necesarios para


mantener el equipo BC5800 en buenas condiciones de funcionamiento. Este analizador
funciona con variaos opciones de mantenimiento para este objetivo. A continuación se
menciona el procedimiento para el mantenimiento diario y semanal.

MANTENIMIENTO DIARIO Mindray BC-5800

Para realizar el mantenimiento diario del equipo se hace click en reparación

Luego se señala la opción limpieza (limp), acto seguido se da click en la opción dispositivo
completo, se espera a que esta se ejecute
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Posteriormente señalar mantenimiento (mantenim), dispositivo completo y finalmente se


adiciona prob cleanser, su realización dura 11 minutos.

MANTENIMINTO SEMANAL Mindray BC-5800

Para la limpieza semanal se apaga inicialmente el equipo y se abre la cubierta frontal,


luego se limpia la bandeja de SRV
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Luego se empuja el conjunto de limpieza de la sonda hasta la posición más baja.

Se extrae la válvula SRV desajustando el tornillo que la sostiene y se procede a la


limpieza de esta con un paño.
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Posteriormente se vuelve a ajustar la válvula SRV. Finalmente se limpia todo el espacio


interno del equipo, como la bandeja de acumulación y las mangueras.

Finalmente se cierra la cubierta frontal y se prende el equipo. Se espera la inicialización y


se elimina el error fondo anómalo llevando las plaquetas a valores entre 0-4

CAMBIOS
Fecha Naturaleza del cambio solicitante
19/11/2013 Actualización de documentos para el Necesidad del servicio
mejoramiento continuo y oportunidades
de mejora.

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