MARIE-EVE RANCOURT

M É C A N I S M E S DE L ' H Y P E R T E N S I O N
A R T É R I E L L E CAUSÉE P A R LE T R A I T E M E N T À
L ' É R Y T H R O P O Ï É T I N E : R Ô L E DU STRESS
OXYDATIF

Mémoire présenté
à la Faculté des études supérieures de l'Université Laval
dans le cadre du programme de doctorat en médecine expérimentale
pour l'obtention du grade de maître ès sciences ( M . Se)

D E P A R T E M E N T DE M E D E C I N E
F A C U L T É DE M É D E C I N E
UNIVERSITÉ L A V A L
QUÉBEC

2008

© Marie-Eve Rancourt, 2008

Résumé
La correction de l'anémie par l'érythropoïétine recombinante humaine (rhEPO) en

insuffisance rénale chronique (IRC) s'accompagne d'une élévation de la pression artérielle.

Les mécanismes presseurs de l'rhEPO en IRC sont encore mal définis. Des études récentes

indiquent que le traitement à l'rhEPO accentue la dysfonction endothéliale déjà présente en

urémie. On note une élévation de la production endothéliale d'endothéline-1 (ET-1) et une

diminution de la relâche de monoxyde d'azote ( N O ) . Ces changements pourraient aussi

être associés à une augmentation de la formation d'espèces réactives de l'oxygène ( R O S )

qui peut accentuer ces changements. Notre étude a pour objectif d'évaluer l'effet d'un

antioxydant, le tempol (un mimétique de la superoxide dismutase ( S O D ) ) , sur la pression

artérielle et la progression de l'insuffisance rénale chez le rat urémique traité à l'rhEPO.

Pour ce faire, des rats Wistar rendus urémiques par néphrectomie subtotale 5/6 sont divisés

en quatre goupes : urémique (Nx) + véhicule; N x + rhEPO; N x + tempol (lmmol/1/jour

dans l'eau à boire); et N x + rhEPO + tempol, pendant quatre semaines. Les rats

développent de l'urémie, de l'anémie et de l'hypertension artérielle. Ces derniers effets

sont associés à une élévation des concentrations d'ET-1 et de la production de f a n i o n

superoxyde. Le traitement à l'rhEPO chez les rats urémiques corrige l'anémie, mais

aggrave l'hypertension artérielle et l'insuffisance rénale de même que l'augmentation

d'ET-1 et de f a n i o n superoxyde. Le traitement au tempol, chez les deux groupes

urémiques, atténue le développement de l'hypertension et la progression des dommages

histologiques rénaux qui sont d'ailleurs associés à une réduction des concentrations ET-1

plasmatique, urinaire et rénale ainsi qu'une diminution de la production de fanion

superoxyde.

En conclusion, le développement de l'hypertension et la progression de l'insuffisance

rénale chez le rat urémique sont causés, en partie, par la présence d'un stress oxydatif. Le

traitement à l'rhEPO accentue d'avantage le stress oxydatif, et ce dernier serait impliqué

dans l'aggravation de l'hypertension et de la progression de l'insuffisance rénale.

Abstract
The correction o f anémia with recombinant human erythropoietin (rhEPO) in chronic rénal

failure (CRF) is associated with an élévation in blood pressure (BP). The pressor

mechanisms o f rhEPO in CRF are still unclear. Récent studies indicate that rhEPO

enhances the endothelial dysfunction already présent in CRF. W e noted an élévation o f

endothelin-1 (ET-1) production in the endothelium and a réduction in nitric oxide (NO)

release. Thèse changes could also be associated with an élévation o f the reactive oxygen

species ( R O S ) which may exacerbate thèse changes. This study was design to investigate

the effect o f the superoxide dismutase SOD-mimetic, tempol, on BP and the progression o f

CRF in urémie rats treated with rhEPO.

Rénal failure was induced, on Wistar rats, by a two-stage 5/6 nephrectomy on four goups:

urémie (Nx) + vehicle; N x + rhEPO; N x + tempol ( l m m o l / L / d a y in the drinking water);

and N x + rhEPO + tempol, for four weeks. The rats, developed anémia, uremia and

hypertension. The latter were associated with elevated ET-1 concentrations and superoxide

anion production. The rhEPO treatment in urémie animais corrected the anémia but

aggravated the hypertension, the rénal failure as well as the increase in ET-1 and

superoxyde anion production. In both groups, treatment with tempol attenuated

hypertension and rénal injuries that were associated with a réduction in ET-1 concentrations

in plasma, urine and the rénal cortex as well as the superoxide anion production.

In conclusion, the development o f hypertension and the rénal failure progression in urémie

rats are caused, in part, by the présence o f oxidative stress. The rhEPO treatment, in urémie

condition, exacerbâtes the oxidative stress, which may play a rôle in the aggravation o f

hypertension and the rénal failure progression.

Remerciement

Je voudrais remercier particulièrement le Dr Richard Larivière ainsi que le Dr

Marcel Lebel, deux hommes passionnés de science et ayant à cœur la réussite de leurs

étudiants. Merci pour votre grande générosité envers moi, pour votre patience et votre

précieuse aide que vous m'avez apportées au cours de ma maîtrise. J'ai apprécié

énormément mon milieu de recherche avec son environnement chaleureux.

De plus, j e me sens très choyée d'avoir passé deux belles années, au sein du Vieux-

Québec, dans une équipe où il règne une ambiance dynamique et où chacun m'a transmis

un peu de leur passion pour la recherche biomédicale. Merci pour tout ! !

A u x membres de l'équipe : Marie-Eve Rodrigue, Frederick Therrien, Mélanie

Nadeau, Nadia Chbinou, Patrick Taillon, Danielle Lizotte, Claude Villeneuve. Merci pour

les agréables moments passés ensemble! Enfin, j'aimerais redire un gros merci à Marie-

Eve Rodrigue pour ses nombreux trucs-conseil et aussi pour son amitié.

Enfin, j e tiens à remercier mes parents ainsi que ma famille pour leur présence et

nombreux encouragements : mon père Renaud Rancourt et ma mère Louisette Girard.

Merci pour votre amour, vos merveilleux conseils et votre support afin d'être toujours là

pour moi; j ' e n suis très reconnaissante.

Saisi l'opportunité lorsqu'elle se
présente, une fois manquée, elle est
peut-être perdue pour toujours

Feng Menglong
Table des matières

Résumé i
Abstract ii
Remerciements iii
Table des matières v
Liste des tableaux vii
Liste des figures viii
Liste des abréviations ix
1. Introduction 1
1.1 La pression artérielle 1
1.1.1 Généralité 1
1.1.2 Hémodynamie de la pression artérielle 1
1.1.2.1 Débit Cardiaque 1
1.1.2.2 Résistance périphérique 1
1.1.3 Contrôle de la pression artérielle 2
1.1.3.1 Système nerveux 2
1.1.3.2 Les baro et chimio récepteurs 2
1.1.3.3 Effets hormonal 3
1.1.3.4 Système rénine-angiotensine 6
1.2 L'hypertension artérielle 7
1.2.1 Généralité 7
1.2.2 Facteurs de risques 7
1.2.3 Conséquences de l'hypertension 8
1.2.4 Mécanismes de l'hypertension 8
1.2.4.1 Réflexe des barorécepteurs 8
1.2.4.2 Effet de l'angiotensine II 8
1.2.4.3 Dysfonction endothéliale 10
1.2.4.3.1 L'Endothéline 1 11
A ) Biosynthèse 11
B ) Effets vasculaires 12
C ) Effets rénaux 14
1.2.4.3.2 Le m o n o x y d e d'azote 15
A ) Biosynthèse 15
B ) Effets vasculaires 17
C ) Effets rénaux 19
1.2.4.3.3 Espèces réactives à l'oxygène ( R O S ) 20
A ) Biosynthèse 20
B ) Implications 22
1.3 La fonction rénale 25
1.3.1 Anatomie rénale 25
1.3.1.1 Corpuscule rénal , 25
1.3.1.2 Appareil juxta-glomérulaire 26
1.3.1.3 Tubules rénaux 27
1.3.2 Fonction rénale 28
 1.3.2.1 La filtration glomérulaire 29
1.3.2.2 Réabsorption tubulaire 30
1.3.2.3 Sécrétion tubulaire 31
1.4 L'insuffisance rénale 32
1.4.1 Généralité 32
1.4.2 Facteurs de risques 32
1.4.3 Conséquences reliées à 1TRC 33
1.4.3.1 L'anémie 33
1.4.3.2 L'hypertension artérielle 33
1.4.4 Mécanisme de l'hypertension en insuffisance rénale 33
1.4.4.1 Rôle de F ET-1 en insuffisance rénale 34
1.4.5.2 Rôle du N O en insuffisance rénale 36
1.5 L'érythropoïétine 36
1.5.1 Généralité 36
1.5.2 Synthèse de l ' E P O 37
1.5.3 Récepteurs et mécanismes d'action 37
1.5.4 Hypertension induite par l'EPO en urémie 40
1.5.4.1 Généralité 40
1.5.4.2 Mécanismes 40
1.5.4.2.1 Viscosité sanguine 40
1.5.4.2.2 Système rénine-angiotensine 40
1.5.4.2.3 Effet contractile direct 41
1.5.4.2.4 Effet sur le volume sanguin 41
1.5.4.2.5 Dysfonction endothéliale 41
A ) Endothéline-1 41
B ) M o n o x y d e d'azote 42
C ) Prostaglandines 42
2. Hypothèse et objectifs de recherche 44
3. Rôle du stress oxydatif dans l'hypertension induite par l'rhEPO chez le rat urémique ...45
3.1 Résumé 45
3.2 Rôle o f oxidative stress in rhEPO-induced hypertension in urémie rats 47
4. Discussion -70
5. Conclusion 74
6. Bibliographie 75
Tableau 1.1 : Régulation h o r m o n a l e de la pression artérielle 4

Tableau 1.2 : Les tissus cibles et les fonctions principales des récepteurs de l ' A D H 5

Table 3.1: Systolic b l o o d pressure, hematocrit and sérum creatinine assessed before

treatment and at the end o f study..... 65

Table 3.2: Urinary v o l u m e , proteinuria and creatinine clearance at the end o f the

study 65

Table 3.3: E T - 1 concentrations in plasma, urine, the thoracic aorta and the rénal

cortex at the end o f the study 66

Table 3.4: Semi quantitative analysis o f the rénal injuries with M a s s o n staining,

m a c r o p h a g e infiltration with E D I immunohistochemical staining and superoxide

anion p r o d u c t i o n with D H E fluorescence staining in arbitrary units 66

Figure 1 . 1 : Dysfonction endothéliale 11

Figure 1.2 : Régulation et sécrétion de la p r o d u c t i o n endothéliale de l ' E T - 1 12

Figure 1.3 : M o d è l e p r o p o s a n t l'effet vasoconstricteur et h y p e r t r o p h i q u e de l ' E T - 1 . .14

Figure 1.4 : F o r m a t i o n du N O p a r la N O S à partir de la L-arginine 16

Figure 1.5 : Voies de relaxation des cellules musculaires lisses en présence de calcium.

18

Figure 1.6 : R é s u m é des rôles du N O dans la physiologie rénale 19

Figure 1.7 : R é d u c t i o n des radicaux libres de l ' o x y g è n e en eau 21

Figure 1.8 : Principales sources des R O S , leurs cellules cibles ainsi que leurs effets... 22

Figure 1.9 : L ' h y p e r t e n s i o n et le stress oxydatif. 24

Figure 1.10 : A p p a r e i l j u x t a g l o m é r u l a i r e 27

Figure 1.11 : R ô l e de l ' E T - 1 en I R C 35

Figure 1.12 : A c t i o n de l ' E P O de la cellule souche pluripotente à l'érythrocyte mature.

38

Figure 1.13 : Voies de signalisation impliquées dans la réponse à l ' E P O 39

Figure 3.1 : Relationships between systolic b l o o d pressures and sérum creatinine and

plasma endothelin-1 ( E T - 1 ) concentrations 67

Figure 3.2 : Représentative c o n f o c a l m i c r o s c o p y p h o t o g r a p h s show superoxide anion

levels 68

Figure 3.3 : M a s s o n - t r i c h r o m e staining and immunohistochemistry o f E D I 69

ACE enzyme de conversion de Fangiotensine
ACV accident cérébro-vasculaire
ADH hormone antidiurétique
ADMA diméthylarginine asymétrique
ADNc acide désoxyribonucléique complémentaire
ADN acide désoxyribonucléique
A n g II angiotensine II
ANP peptide natriurétique auriculaire
ARA antagoniste des récepteurs de Fangiotensine
ARNm acide ribonucléique messager
AT récepteur de Fangiotensine II
BFU-E burst-forming unit-erythroid
Ca 2 +
calcium
cAMP A M P cyclique
CFU-E colony-forming units-erythroid
cGMP guanidine monophosphate cyclique
Cl" chlore
CNP peptide natriurétique C-type
C0 2 dioxyde de carbone
COX cyclooxygénase
CRF chronic rénal failure
DC débit cardiaque
ECE enzyme de conversion de F endothéline
SOD superoxyde dismutase
EDRF endothelium-derived relaxing factor
EFF fraction de filtration effective
eNOS monoxyde d'azote synthase endothéliale
EPO erythropoïétine
ET endothéline
ETA/ETB récepteurs à F endothéline-1
FAD flavine-adénine dinucléotide
FC fréquence cardiaque
FMN flavine mononucleotide
GRF débit de filtration glomérulaire
H +
hydrogène
HCO3" bicarbonate
H 0
2 2
peroxyde d'hydrogène
HIF hypoxia-inducible transcription factors
ICAM-1 intercellular adhésion molécule
IECA inhibiteur de l'enzyme de conversion de Fangiotensine
IGF-1 insulin growth factor
iNOS N O S inductible
IP3 inositol triphosphate
IR insuffisance rénale
IRC insuffisance rénale chronique
IRST insuffisance rénale au stade terminal
JAK janus kinase
K +
potassium
L-arg L-arginine
L-NAME N -nitro-L -arginine methyl ester
MAPK mitogen-activated protein kinase
Na +
sodium
NAD(P)H nicotinamide adénine dinucléotide phosphate
NF-KB nuclear factor kappaB
NH4 +
ammonium
NO m o n o x y d e d'azote
N0 2 nitrite
NO3 nitrate
NOS N O synthase
nNOS N O S neuronale
NRP récepteur peptidique natriurétique
Nx néphrectomie
O2 oxygène
O2" anion superoxyde
ONOO" peroxinitrite
OH" radical hydroxyle
PAS pression artérielle systolique
PDGF platelet-derived growth factor
PGI2 prostacycline
PI3-K phosphatidyl-inositol 3-kinase
PNF pression nette de filtration
pp ET-1 pré-pro endothéline-1
rhEPO érythropoïétine recombinante humaine
ROS espèces réactives à l'oxygène
RP résistance périphérique
s.c. sous-cutanée
SCF stem cell factor
SOCS suppressor o f cytokine signaling
SOD superoxyde dismutase
STAT signal transducers and activators o f transcription
TGFp transforming growth factor bêta
TNN-a tumor necrosis factor-alpha
TX thromboxane
VCAM Vascular cell adhésion molécule
VS volume sanguin
1. Introduction

1.1 L a pression artérielle

1.1.1 Généralité

La pression artérielle ( P A ) représente la force exercée par le sang sur les parois des

vaisseaux sanguins. Elle est nécessaire pour permettre au sang de parcourir la circulation et

de transporter les substances vers et à partir des tissus et les organes vitaux.

1.1.2 Hémodynamie de la pression artérielle

La PA, chez un jeune adulte en situation de repos, atteint environ 120 mmHg pendant la

systole (contraction ventriculaire) et tombe à 80 m m H g lors de la diastole (relaxation

ventriculaire). La P A est reliée à deux facteurs, soit le débit cardiaque ( D C ) ainsi que la

résistance périphérique totale des vaisseaux (RP) sous la forme de cette équation :

PA = D C X R P [ 1 ] ,

1.1.2.1 Débit C a r d i a q u e

Le débit cardiaque se définit c o m m e la quantité de sang qui est pompée du ventricule

gauche (ou du droit) dans l'aorte (ou le tronc pulmonaire) à chaque minute. Le D C est

obtenu en multipliant le volume d'éjection systolique ( V S ) représentant le volume de sang

éjecté des ventricules à chaque contraction par la fréquence cardiaque ( F C ) , c'est-à-dire le

nombre de battements cardiaques par minute.

DC (ml/min) = VS (ml/battement) X FC (battement/min)

Le D C est influencé, entre autres, par l'activité du corps, l'âge et la taille [ 1 ] .

1.1.2.2 Résistance p é r i p h é r i q u e

La résistance périphérique correspond à la force s'opposant au flux sanguin. Elle résulte de

la friction du sang contre les parois vasculaires. Cette résistance varie en fonction du
diamètre des vaisseaux, de leur longueur ainsi que de la viscosité du sang. La viscosité du

sang, de même que la longueur des vaisseaux influencent de façon directement

proportionnelle la résistance périphérique. Par contre, ce sont les plus petits vaisseaux

(artérioles, capillaires et veinules) qui offrent une plus grande résistance à l'écoulement

sanguin. La pression est la plus élevée au niveau de l'aorte. Le sang quittant l'aorte pour

entrer dans la circulation systémique voit sa pression diminuée progressivement à mesure

qu'il s'éloigne du ventricule gauche. Le sang s'écoule toujours dans les vaisseaux selon un

gradient de pression passant d'un débit pulsatif à un débit continu pour ainsi permettre les

échanges dans les plus petits vaisseaux [ 1 ] .

1.1.3 Contrôle de la pression artérielle

Il existe de nombreux mécanismes afin d'assurer une P A constante dans l'organisme.

Ceux-ci se retrouvent interreliés et agissent par des phénomènes de rétro-inhibition sur la

RP, la FC ainsi que le volume sanguin. Certains vont agir rapidement sur la P A suite à un

événement aigu, par exemple lors d'une hémorragie majeure, d'une ischémie, d'un exercice

physique ou d'un stress quelconque.

1.1.3.1 Système nerveux

La régulation de la P A implique le système nerveux central, car celui-ci est un facteur

important dans la régulation de la fréquence cardiaque. Cette régulation implique une zone

au niveau du bulbe rachidien où l'on retrouve le centre cardiovasculaire. Cette région de

l'encéphale reçoit les différents influx provenant de substances chimiques et de récepteurs

sensoriels : les barorécepteurs et chimiorécepteurs. Ce centre cardiovasculaire régit à la fois

les nerfs sympathiques et parasympathiques qui stimulent le cœur et les vaisseaux sanguins

[!]•

1.1.3.2 Les b a r o et c h i m i o récepteurs

Le rôle des barorécepteurs est de détecter les changements de la pression sanguine dans les

principales artères de l'organisme et de les transmettre au centre cardiovasculaire [ 1 ] . Ils

sont principalement situés dans l'arc aortique et dans les sinus carotidiens. Suite à une

élévation de la PA, les barorécepteurs augmentent l'émission d'influx vers le centre

cardiovasculaire. Ce dernier stimule l'action parasympathique entraînant une diminution

de la FC et de la force de contraction du cœur, ce qui diminue le D C . Aussi, le centre

ralenti les influx sympathiques qui normalement induisent une vasoconstriction. Donc,

suite à ces effets sur le système nerveux central, il en résulte une vasodilatation et une

diminution de la RP. C o m m e nous l'avons vu précédemment la réduction du D C ainsi que

de la RP cause une diminution de la PA. À l'inverse, une réduction de la PA, perçue par

les barorécepteurs, stimule le centre cardiovasculaire vers une action plutôt sympathique.

Cette stimulation sympathique entraîne une action directe sur le cœur en augmentant la FC

et le D C et une action indirecte via la stimulation de la sécrétion d'adrénaline et de

noradrénaline par le médullosurrénale dans le sang. Ces deux hormones accélèrent la FC,

augmentent la force de contraction du cœur et provoquent la vasoconstriction qui augmente

la RP. Tous ces effets ont pour objectif de rétablir l'homéostasie de la PA. De plus, les

réflexes des barorécepteurs sont très rapides (secondes) et importants dans les changements

de P A suite au passage d'une position couchée à debout.

Les chimiorécepteurs ont pour rôle de percevoir les modifications de la composition

chimique du sang. Ils sont situés tout près des barorécepteurs du sinus carotidien et de l'arc

aortique. Ils détectent les variations en concentration sanguine en O 2 (oxygène), C O 2 (gaz

carbonique) et en ions H (hydrogène). Les chimiorécepteurs sont stimulés et envoient des

+

influx au centre cardiovasculaire lorsqu'il y a une baisse de la disponibilité en O 2 (situation

d'hypoxie), une augmentation de la concentration en ions H +

(situation d'acidose) ou bien

un excès en C O 2 (situation d'hypercapnie). Le centre cardiovasculaire répond en favorisant

la stimulation sympathique, en accélérant la FC, en produisant une vasoconstriction et en

augmentant la P A [1].

1.1.3.3 Effets h o r m o n a l

Les hormones participent à la régulation de la P A et du débit sanguin en altérant le D C , la

RP ainsi que le V S . Le tableau 1.1 résume bien ces hormones et leur effet.
Tableau 1 . 1 : Régulation h o r m o n a l e de la pression artérielle.

Facteurs influant Hormone Effet sur la PA

sur la PA

Débit cardiaque

Augmentation de la fréquence Noradrénaline Elévation

cardiaque et de la
contractilité du cœur Adrénaline

Résistance périphérique

Vasoconstriction Angiotensine II, Vasopressine Élévation

Noradrénaline, Adrénaline

Vasodilatation Peptide natriurétique Diminution

auriculaire, Adrénaline,
Monoxyde d'azote

Volume sanguin (VS)

Augmentation du VS Aldostérone, Vasopressine Élévation

Réduction du VS Peptide natriurétique auriculaire Diminution

Adapté du livre : Principes d'anatomie et de physiologie [2]

Adrénaline et noradrénaline : ces hormones dérivent de la médullosurrénale. Elles

amplifient le D C par l'augmentation de la fréquence et de la force des contractions

cardiaques. Elles activent aussi la vasoconstriction des artérioles et des veines dans la peau

et les viscères abdominaux. De même, l'adrénaline provoque la vasodilatation des

artérioles localisées dans le muscle cardiaque et les muscles squelettiques.

Hormone antidiurétique (ADH) : fabriquée par l'hypothalamus et libérée par la neuro-

hypophyse. Cette hormone cause une vasoconstriction et pour cette raison se nomme

également vasopressine. Sa demi-vie plasmatique est de 4-20 min [ 3 ] . Les plus importants

stimuli favorisant la relâche de vasopressine est l'augmentation de l'osmolarité

plasmatique, la diminution de la pression sanguine et une diminution du volume sanguin.

Son rôle principal est d'augmenter la perméabilité des cellules épithéliales tubulaires afin

de retenir l'eau dans l'organisme (anti-diurétique) et d'augmenter la pression sanguine.

Elle agit sur trois tissus cibles : les reins, les glandes sudoripares et les muscles lisses dans

la paroi des vaisseaux sanguins. A u niveau des reins, l ' A D H réduit la diurèse (la

production d'urine) en retenant plus d'eau. L ' A D H réduit aussi la perte d'eau par

transpiration cutanée en diminuant l'activité sécrétoire des glandes sudoripares.

Finalement, les muscles lisses dans la paroi des artérioles se contractent suite à une

élévation de la concentration en A D H entraînant ainsi la constriction de ces vaisseaux et

l'augmentation de la PA. Il existe trois sous-types de récepteurs V I , V 2 et V 3 qui ont été

identifiés et qui sont présentés dans le tableau 1.2.

Tableau 1.2 : Les tissus cibles et les fonctions principales des récepteurs de l ' A D H

Types de récepteur Tissu Fonction principale

V1 Foie, cellules musculaires Vasoconstriction

lisses vasculaires, système
nerveux central, la plupart
des tissus périphériques

V2 Cellules du tubule collecteur Osmorégulation, rétension

des reins d'eau

V3 Système nerveux central Sécrétion corticotropine

(adénohypophyse)

Adapté de (Treschan et al 2006) [3]

Peptide natriurétique auriculaire (ANP) : libéré par les myocytes dans les oreillettes du

cœur, il réduit la P A en provoquant une vasodilatation et en favorisant l'excrétion de

sodium et d'eau par les reins. Par son effet sur la natriurèse et la diurèse, l ' A N P entraîne

une réduction du volume sanguin. Un autre peptide natriurétique, le CNP (peptide

natriurétique C-type) provoque les mêmes effets que l ' A N P et est exprimé principalement

au niveau de système nerveux central, de l'endothélium, des macrophages et des

fibroblastes. Il existe trois récepteurs peptidique natriurétique ( N R P - A , N R P - B , N R P - C ) .

L ' A N P se lie de façon préférentielle au N R P - A tandis que le CNP se lie au N P R - B de

façon prédominante. L ' A N P et le CNP provoquent également l'inhibition de la synthèse de

l'aldostérone et de la sécrétion de rénine et jouent donc, un rôle important dans la

régulation de la pression sanguine et du volume sanguin [ 4 ] .

1.1.3.4 Système rénine-angiotensine

Le système rénine-angiotensine est reconnu c o m m e un mécanisme stimulant la synthèse et

la sécrétion de l'aldostérone de même qu'un mécanisme homéostatique de la régulation de

la pression sanguin et de la composition des électrolytes. De plus, il j o u e un rôle majeur

dans la régulation autant à court qu'à long terme de la P A [ 5 ] . Les parois des artérioles

glomérulaires afférentes perçoivent toute diminution de la P A et du volume sanguin

causant ainsi une sécrétion de la rénine par les cellules juxtaglomérulaires [1]. De plus, une

stimulation sympathique provoque également une libération de cette enzyme par ces

mêmes cellules. La demi-vie de la rénine circulante est de 15 minutes approximativement

[5]. La rénine, une fois dans la circulation, clive l'angiotensinogène qui est produit par les

cellules du foie (les hépatocytes) en angiotensine 1. Ensuite, cette dernière est clivée, au

niveau des poumons, par l'enzyme de conversion de Fangiotensine ( A C E ) , ce qui donne

Fangiotensine II (Ang II). L ' A n g II est un puissant vasoconstricteur des artérioles, ce qui a

pour effet d'accroître la RP. L ' A n g II possède quatre façons d'influencer la physiologie

rénale. Elle diminue le débit de filtration glomérulaire par son effet vasoconstricteur sur les

artérioles efférentes, elle augmente la réabsorption d'ions N a (sodium), Cl" (chlore) et celle
+

de l'eau au niveau du tubule contourné proximal en stimulant l'activité des antiporteurs

Na -H .
+ +
L ' A n g II entraîne la libération de l ' A D H , favorisant ainsi la réabsorption d'eau

dans les tubules collecteurs et stimule le cortex surrénalien à libérer de l'aldostérone : une

hormone diminuant l'excrétion d'eau et de sodium par les reins au niveau des tubules

collecteurs. Tout ceci a donc pour effet, d'élever la P A suite à l'augmentation du V S et,

secondairement, le D C [ 1 ] .

L ' A n g II agit via deux récepteurs à sept domaines transmembranaires, A T ] et A T 2 . L ' A T i

est distribué principalement dans les cellules musculaires lisses, les reins, les surrénales, le

cœur, le foie ainsi que le cerveau [6]. Ce récepteur entraîne la vasoconstriction, la rétention
hydrosodée et la relâche d'hormones : aldostérone, vasopressine et oxytocine. Il est aussi

responsable de l'atténuation du réflexe des barorécepteurs, de la stimulation de la soif, de la

natriurèse et de la prolifération cellulaire [7]. I / A T 2 est exprimé abondamment dans les

tissus fœtaux, mais chez l'adulte il se retrouve en plus faible quantité dans les tissus de la

surrénale, du rein, du pancréas, de l'utérus, du cœur, de l'endothélium vasculaire et du

cerveau [8] [ 7 ] . L'activation de ce récepteur par l ' A n g II contrecarre les effets médiés par

l'activation du récepteur A T i . Il est donc responsable de la vasodilatation engendrée par

l ' A n g II. Il est aussi impliqué dans l'apoptose et bloque la prolifération et la différenciation

cellulaire [6] .

1.2 L ' h y p e r t e n s i o n artérielle

1.2.1 Généralité
L'hypertension artérielle se définit, de façon conventionnelle, c o m m e une augmentation

constante de la P A : supérieure à 140/90 m m H g [ 9 ] . La prévalence de l'hypertension

augmente avec l'âge, par exemple, 50 % de la population âgée entre 60 et 69 ans souffre

d'hypertension et la prévalence s'accroît encore plus au-delà de 70 ans [ 1 0 ] . D e plus, un

patient d'âge moyen voit son risque d'accident cérébro-vasculaire ( A C V ) diminué de 4 2 %

et celui d'un événement coronarien de 1 6 % , suite à une médication anti-hypertensive

réduisant entre 5-6 m m H g sa pression diastolique [ 9 ] .

1.2.2 Facteurs de risques

Dans 90 % des cas, l'hypertension est dite essentielle ou primaire, c'est-à-dire qu'elle est de

cause inconnue, mais fortement reliée à l'hérédité [11] ou à l'environnement. L'âge et le

sexe sont des facteurs de risques considérables dans le développement de l'hypertension

artérielle essentielle. Il y a aussi des facteurs de risques reliés au m o d e de vie dont

l'obésité, la consommation d'alcool, la consommation en sel, le tabagisme, le stress et le

manque d'exercice physique. Ces derniers facteurs ont la possibilité d'être modifiés par les

personne atteintes d'hypertension et suite à l'adoption d'un m o d e de vie sain, il en résulte

une réduction de leur la PA. De plus, il est important de savoir que les facteurs de risques
tendent à être multiplicatifs plutôt qu'additifs [9]. D'autre part, les autres cas

d'hypertension sont dit secondaires et causés par une autre pathologie identifiable, c o m m e

des maladies rénales (voir section 1.4).

1.2.3 Conséquences de l'hypertension

Cette maladie est insidieuse, car elle est généralement asymptomatique, mais peut

engendrée beaucoup de dommages aux organes cibles. Selon les dernières statistiques

Canadiennes disponibles, il y a plus de 40 % des patients qui ne sont pas diagnostiqués

[12]. L'hypertension est considérée c o m m e un facteur de risque dans le développement de

maladie cardiovasculaire, car une élévation de la PA cause des changements sur les

vaisseaux et le coeur [ 5 ] . Ce dernier, c o m m e tout muscle squelettique, s'hypertrophie

quand sa charge de travail augmente, en particulier le ventricule gauche. En présence d'une

demande supplémentaire en oxygène, il y a risque d'angine de poitrine et même d'un

infarctus du myocarde. Il peut y avoir une sclérose de l'arbre vasculaire (artériosclérose)

qui peut être aggravée par l'hypertension. Les plus importants dommages qui surviennent

en hypertension sont l'hémorragie cérébrale, l'insuffisance rénale et cardiaque [1].

1.2.4 Mécanismes de l'hypertension

1.2.4.1 Réflexe des b a r o r é c e p t e u r s

Chez les patients hypertendus, les barorécepteurs, en quelques jours, s'adaptent au niveau

élevé et persistant de la pression artérielle. Les barorécepteurs sont donc moins impliqués

dans la régulation à long terme de la pression artérielle, ce qui limite l'influence du système

nerveux dans le maintient de la pression artérielle et de son effet sur le D C .

1.2.4.2 Effet de Fangiotensine II

L ' A n g II participe à court terme au maintient de la PA. Les mécanismes de l ' A n g II

impliquent l'effet vasoconstricteur, l'effet direct sur les reins et la stimulation de la

libération d'aldostérone. Les deux derniers effets de l ' A n g II favorisent la rétention rénale

d'eau et de sel. D o n c , l ' A n g II augmente la RP qui elle-même élève la PA. Ce processus

de contrôle de la PA nécessite environ une vingtaine de minutes [1].

De plus, lorsque la fonction rénale n'est pas atteinte, l'augmentation de la RP n'affectera

pas, à long terme, le niveau de PA. L ' A n g II possède deux mécanismes pouvant affectés le

contrôle de la P A à long terme ; l ' A n g II affecte directement la rétention rénale d'eau et de

sel et entraîne la libération d'aldostérone. Cette hormone, par son effet sur les reins,

augmente le volume extracellulaire qui mène, secondairement, à une élévation de la P A à

long terme [1].

Il a été démontré expérimentalement que lors d'une élévation dans la concentration

sanguine d ' A n g II, la P A augmente, mais sans provoquer des changements proportionnels

sur le niveau d'excrétion du sodium. Graphiquement, la courbe de natriurèse de la PA est

déplacée vers la droite ce qui entraîne une rétention sodée inappropriée compte tenu de

l'élévation de la P A [1].

De plus, une consommation faible en sodium, tend à diminuer autant le volume du liquide

extracellulaire que la PA, mais la concentration sanguine d ' A n g II augmente pour

compenser. D'un autre côté, si la consommation en sodium est élevée, la concentration

d ' A n g II devient presque à zéro [ 1 ] .

Dans certaines maladies, il peut se développer une hypertension secondaire c o m m e par

exemple, suite à l'obstruction du débit sanguin rénal (sténose de l'artère rénale) ou dans des

maladies rénales parenchymateuses. Ces effets endommagent le tissu rénal et entraînent

une hypersécrétion de rénine dans le sang. La rénine stimule une forte production d ' A n g II

causant une vasoconstriction et augmentant ainsi la RP. De plus, il en résulte en une

hypersécrétion d'aldostérone.

L'importance du système rénine-angiotensine a été confirmée par le traitement avec les

antagonistes des récepteurs A T j , ( A R A ) et les inhibiteurs de l'enzyme de conversion de

fangiotensine ( I E C A ) qui bloquent l'action du système rénine-angiotensine. Il a été

démontré chez le rat uémique que le losartan, un A R A , et le périndopril, un IECA,

réduisent efficacement la P A et ralentissent l'augmentation de la creatinine sérique [13]

[14] [15]. De plus, le fait de bloquer les récepteurs ATi et l'utilisation d'IECA prévient la

progression des dommages rénaux [16] [17].

Par ailleurs, il existe un système rénine-angiotensine tissulaire qui permet une production

locale d ' A n g II. En effet, les taux d ' A n g II tissulaires sont souvent plus élevés que ceux

plasmatiques ce qui permet de croire que ces deux systèmes rénine-angiotensine sont

régulés de façon indépendante. De plus, il a été démontré que l'action antihypertensive des

IECA corrèle mieux avec l'inhibition des E C A tissulaires que plasmatique et que les

patients hypertendus avec un niveau normale ou faible d'activité du système rénine-

angiotensine systémique peuvent être traités efficacement avec des inhibiteurs de ce

système [18].

1.2.4.3 Dysfonction endothéliale

L'ensemble des vaisseaux sanguins de l'organisme sont tapissés d'une seule couche de

cellules endothéliales : l'endothélium vasculaire. Ce dernier forme une barrière physique

entre les éléments figurés du sang circulant dans la lumière vasculaire et l'interstitium. Les

cellules endothéliales produisent des substances vasoconstrictrices et vasodilatatrices qui

permettent de maintenir un tonus vasculaire approprié. En condition normale, il existe un

équilibre entre ces facteurs vasoactifs pour maintenir le tonus vasculaire. Cependant, une

dysfonction endothéliale est observée dans les maladies cardiovasculaires dont

l'hypertension artérielle, l'insuffisance rénale chronique et le diabète. Parmi les substances

vasoconstrictrices relâchées par l'endothélium, nous retrouvons l'endothéline-1 (ET-1),

l ' A n g II, la tromboxane A 2 ( T X A ) et les espèces réactives à l ' o x y g è n e ( R O S ) .

2 Les

substances vasodilatatrices sont représentées par le m o n o x y d e d'azote (NO) et les

prostacyclines ( P G I 2 ) (figure 1.1). La dysfonction endothéliale se caractérise généralement

par la production accrue en vasoconstricteurs ou par une baisse dans la libération en

vasodilatateurs ou les deux à la fois.

 NO, PGI :

ET-1,TXA , 2

Ang II, ROS

Figure 1 . 1 : Dysfonction endothéliale.

1.2.4.3.1 L'Endothéline 1

A ) Biosynthèse

L ' E T - 1 est un peptide vasoactif de 21 acides aminés produit dans différents tissus [19].

L ' E T - 1 fut originalement isolé de cellules endothéliales en culture par Yanagisawa en 1988

[19]. Plus tard, deux autres isopeptides ont été découverts; E T - 2 et E T - 3 . L ' E T - 1 est

produit principalement par les cellules endothéliales, mais peut aussi être produit par les

cellules musculaires lisses et les cellules mésangiales [20] Aussi, l ' E T - 1 se retrouve dans

les reins, les poumons, le cœur, le placenta et le système nerveux central ainsi qu'au niveau

du tractus gastro-intestinal [21]. La demi-vie de l ' A R N m est d'environ 15 à 20 minutes

[22] et celle de l ' E T - 1 plasmatique est de 4 à 7 minutes. L ' E T - 1 est sécrétée de façon

majoritaire du côté abluminal des cellules endothéliales, ce qui explique que l'ET-1

plasmatique est généralement faible. D e plus, elle est éliminée (plus de 50 % ) par les

poumons durant le premier passage [23] [24]. La circulation pulmonaire a la capacité de

capter de la circulation l ' E T - 1 par un processus qui est médié par le récepteur E T B [ 2 4 ] . En

effet, le récepteur E T B j o u e un rôle dans la clairance de l ' E T - 1 [25] [ 2 6 ] .

L'ET-1 est obtenue par un clivage de son précurseur : la préproendothéline (ppET-1) en

« big-endothéline » par le biais d'une endopeptidase, puis la « big-endothéline » est ensuite

clivée par l'enzyme de conversion de F endothéline (ECE) [ 1 9 ] . La synthèse de l'ET-1 est

influencée par différents stimuli dont la vasopressine, le transforming growth factor-P

(TGFp), l ' A n g II, les catécholamines, Fhypoxie, la pression et la thrombine [ 2 7 ] . D'un

autre côté, le N O [28] ainsi que la P G I 2 [23] sont des inhibiteurs de la synthèse de l'ET-1

(figure 1.2).

Endothelial cell
Endothelin-1
t Endothelin-converting enzyme
Big endothelin-1
Nitric o x i d e
t
Preproendothelin-1

Artery
Endothelin-1
gene
Angiotensin II Atrial
Catecholamines natriuretic
Growth factors hormone
Hypoxia Endothelin-3
Insulin Prostaglandin E 2

LDL (oxidized), HDL

Prostacyclin
Shear stress
Thrombin

Figure 1.2 : Régulation et sécrétion de la p r o d u c t i o n endothéliale de l ' E T - 1 .

Tirée de (Levin 1995) [29]

B) Effets vasculaires

L ' E T - 1 agit sur deux sous-types de récepteur chez le mammifère ; le récepteur E T A (qui

présente une plus grande affinité pour l'isopeptide E T - 1 et E T - 2 comparativement à E T - 3 )

et le récepteur E T B (qui possède une affinité similaire pour les trois isopeptides) [30] [31].

Il s'agit de récepteur appartenant à la superfamille des récepteurs couplés aux protéines G

avec sept domaines transmembranaires. Les deux récepteurs à l ' E T - 1 n'ont pas le même

rôle au niveau vasculaire. La différence entre l'activité de ces deux récepteurs pourrait

contribuer à la pathogenèse des maladies vasculaires [ 3 2 ] . Le récepteur E T A est situé sur

les cellules musculaires lisses et produit une vasoconstriction de ces dernières. Par contre,
le récepteur E T B est localisé principalement sur les cellules endothéliales et est responsable

de la vasodilatation qui dépend de la relâche de NO ainsi que de PGI2 [23].

Dépendamment du type de vaisseaux et l'espèce, il se trouve aussi présent, mais en plus

faible quantité, sur les cellules musculaires lisses entraînant ainsi une vasoconstriction

(figure 1.3). Lors de l'administration d ' E T - 1 , la P A subit une faible diminution de courte

durée, causée par l'action de l ' E T - 1 sur son récepteur E T B au niveau des cellules

endothéliales. Ensuite, la PA augmente de façon plus persistante, causée par l'effet de l ' E T -

1 sur les cellules musculaires lisses via E T A [ 1 9 ] . Récemment, Quaschning [33] et son

équipe ont crée des souris croisées de phénotype E T +/+ et eNOS -/- (endothelial nitric

oxide synthase). Ces souris transgéniques E T +/+ eNOS -/- possèdent une surexpression

d ' E T - 1 et une baisse dans la production de N O dérivé du e N O S . La relaxation endothélium

dépendante à l'acétylcholine a été complètement bloquée chez ces souris. D e plus, elles ont

une P A systolique plus élevée que les animaux du groupe E T +/+ et que celle observée

chez le groupe eNOS -/- . Il s'agit d'un nouveau modèle expérimental d'hypertension qui

induit un déséquilibre entre les systèmes vasculaires d ' E T - 1 et du N O [ 3 3 ] .

Par ailleurs, des évidences suggèrent que l ' E T - 1 via le récepteur E T A stimule la production

de f a n i o n superoxyde (O2") dans les cellules musculaires lisses vasculaires en culture [34]

[35]. Le récepteur E T B entraîne, quant à lui, la production des R O S dans les cellules

endothéliales humaines de la veine ombilical en culture [ 3 6 ] .

 Depolarization *. +

Proliferation/Remodeling

Figure 1.3 : M o d è l e p r o p o s a n t l'effet vasoconstricteur et h y p e r t r o p h i q u e de l ' E T - 1 .

Tirée de (Motte et al 2006) [37]

C) Effets rénaux

L'ET-1 agit de façon autocrine et paracrine sur les cellules des vaisseaux rénaux ainsi que

sur les segments du néphron. L'endothélium est l'unique source d'ET-1 dans les vaisseaux

rénaux [38] [39]. L'infusion intrarénale d'ET-1 augmente la résistance vasculaire rénale et

réduit le flux sanguin de même que le taux de filtration glomérulaire suite à la constriction

des artérioles afférentes et efférentes [40]. Dans le glomérule, la production d'ET-1

provient des cellules endothéliales des capillaires de même que des cellules mésangiales et

épithéliales du glomérule [41] [38]. L'ET-1 possède un effet natriurétique et diurétique sur

le rein. En effet, l'ET-1 prévient la réabsorption de sodium en inhibant directement

l'activité N a / K
+ +
ATPase dans les tubules proximales et collecteurs [42]. De plus, l'ET-1

bloque l'action de la vasopressine ce qui cause une diminution de la réabsorption d'eau et

de sodium [43] [44]. Il y a aussi une production importante d'ET-1 dans la médulla rénale :
les cellules endothéliales de la vasa recta et les cellules épithéliales des tubules collecteurs

[39]. De plus, l'expression des récepteurs de l'ET-1 à l'intérieur des reins est localisée de

façon similaire à la production d'ET-1 ce qui supporte le concept que l'ET-1 est impliqué

localement afin de moduler la fonction rénale [ 4 5 ] . En effet, l'ET-1 j o u e un rôle de la

modulation de l'hémodynamie rénale, la filtration glomérulaire et la réabsorption tubulaire

d'eau et de sodium [46].

En ce qui concerne l'expression du récepteur E T , il est présent sur les muscles lisses
A

vasculaires ainsi que sur les cellules mésangiales du glomérule. D'un autre côté,

l'expression du récepteur E T B , se retrouve principalement sur les cellules endothéliales

vasculaires. Ces deux récepteurs sont impliqués dans la régulation de l'hémodynamie

rénale et du taux de filtration glomérulaire. D e plus, le récepteur E T B est localisé en faible

quantité dans les cellules épithéliales du tubule proximal, mais en grande quantité dans les

cellules épithéliales du tubule collecteur, où il est impliqué dans la régulation de la

réabsorption de sodium et de l'eau [47] [48].

1.2.4.3.2 Le monoxyde d'azote

A) Biosynthèse

Furchgott et Zawadzki [49] ont démontré qu'il existait un facteur relaxant produit par

l'endothélium, soit l'endothelium-derived relaxing factor (EDRF) qui favorise la réponse à

l'acétylcholine. Puis, vers la fin de 1980, cette substance a été identifiée c o m m e un radical

libre gazeux, le N O [50] [ 5 1 ] . Le N O est dérivé de l'oxydation de la L-arginine [50] par le

biais d'une enzyme nommée N O synthase ( N O S ) (figure 1.4) en présence de différents

cofacteurs : calmoduline, le calcium, tétrahydrobioptérine, la F A D (flavine-adénine

dinucléotide) et la F M N (flavine mononucléotide). Le N O est un gaz capable de diffuser

facilement à travers la membrane cellulaire et d'interagir avec plusieurs substances dans la

cellule dont la guanylate cyclase soluble ( G C ) qui catalyse la formation de guanosine

monophosphate cyclique ( G M P c ) [ 5 2 ] . Le N O possède une demi-vie de quelques secondes

dans un environnement aqueux, mais il a une plus grande stabilité dans un environnement

où il y a une plus faible concentration en oxygène (demi-vie > 15 sec.) [53].

 0 2 H,0 0 2 H,0
NHr I A XOH I A o
Il I T || \ 7 ||
R-N-C-XH, • R-N-C-XH, • R-N-C-NH. - NO

h
' i ; h
" i ; h

NADPH XADP- XADPH NADP*

L-argffiin N-hydroxy L-citrulin

L-arainin

Figure 1.4 : F o r m a t i o n du N O p a r la N O S à partir de la L-arginine.

Tirée de (Stankevicius et al. 2003) [54]

La famille des N O S (nitric oxide synthase) comprend trois membres : la N O S neuronale

(nNOS), la N O S inductible (iNOS) et la N O S endothéliale (eNOS) [55]. La nomenclature

des isoformes de cette enzyme reflète le tissu d'origine de l'isolation de la protéine et de

l'ADNc. La eNOS a été purifiée et clonée à partir de l'endothélium vasculaire, mais son

expression est observée aux niveaux des cardiomyocytes, des plaquettes sanguines ainsi

que des neurones de l'hippocampe. La eNOS et la nNOS sont activées en présence de

calcium et de la calmoduline tandis que la iNOS est indépendante du calcium. L'expression

de la eNOS est influencée par différents stimuli dont la bradykinine, l'histamine, l ' A n g II,

les forces de cisaillement et le TNF-a (tumor necrosis factor-alpha). Dans la plupart des

situations, la iNOS est non constitutive et est régulée par l'induction de sa transcription. La

iNOS qui se retrouve dans les macrophages est activée en réponse à des stimuli pro-

inflammatoires : l'interleukine-1, l'interféron-y et le TNF-a. La iNOS est par ailleurs,

inhibée par le TGF-p.

 B) Effets vasculaires

Le N O j o u e un rôle, entre autres, dans la régulation du tonus vasculaire, dans les fonctions

du système immunitaire, la neurotransmission ainsi que l'agrégation et l'adhésion

plaquettaires [56] [57]. Dans les cellules endothéliale, l'augmentation de calcium

cytosolique, suite à une stimulation, favorise la formation d'un complexe calcium-

calmoduline qui stimule la N O S qui produit le N O . Ce dernier diffuse vers les cellules

musculaires lisses et active la guanylate cyclase qui ensuite augmente la concentration

intracelluliare du G M P c (guanosine monophosphate cyclique). Cette élévation en G M P c

favorise la diminution de la concentration calcique dans les cellules musculaires lisses, ce

qui provoque une relaxation (figure 1.5).

Figure 1.5 : Voies de relaxation des cellules musculaires lisses en présence de calcium.

Tirée de (Stankevicius et al 2003) [54]

 C) Effets rénaux

La eNOS est présente dans les artères et artérioles rénales et les capillaires glomérulaires

[58]. La eNOS est fortement exprimée dans l'endothélium vasculaire rénal, mais

également au niveau des tubules soit dans l'anse de Henlé ascendante [59] et dans les

tubules collecteurs [60]. Un haut niveau d'expression de la nNOS est retrouvé dans la

macula densa [61] [55]. Dans les reins, le N O possède plusieurs rôles physiologiques dont

la régulation de l'hémodynamie rénale et glomérulaire [62]. Aussi, l'effet du N O sur les

reins est de promouvoir la natriurèse et la diurèse ainsi que de permettre l'adaptation rénale

face aux variations de consommation en sel [63] (figure 1.6).

Renin
angiotensin Rénal haemod) namics
Sodium
sxstem
A Medullary perfusion balance

j Pressure natriuresis
Sait
Tuhu loglomerular feedback
intake
Tubular sodium reabsorption

i Rénal sympathetic nerve

Bhod
pressure
Blood elïects régulation
pressure

Extrarenal Intrarenal Physiological

régulation fonctions rôles

Figure 1.6 : R é s u m é des rôles du N O dans la physiologie rénale.

Tirée de (Mount and Power 2006) [55]

Le N O est important dans la régulation de l'hémodynamie rénale. En effet, les études

utilisant un inhibiteur de N O S , le L - N A M E (N -nitro-L-arginine

G
methyl ester) ont

démontré que le N O participe à la maintenance du tonus des vaisseaux rénaux [ 6 2 ] . Le fait

d'utiliser le L - N A M E , un antagoniste de la L-arginine, a pour conséquence d'élever la

pression sanguine ainsi que celle des capillaires glomérulaires [64]. Les rats recevant du L-
N A M E dans leur eau à boire développent de l'hypertension, de la gloméruloscérose de

même que de la fibrose interstitielle rénale [65]. L'inhibition chronique de la N O S chez les

animaux normaux, suite à l'administration du L - N A M E provoque une hypertension

systémique de même que glomérulaire ce qui peut mener à des dommages glomérulaires et

de la protéinurie [64]. De plus, l'hypertension se développe chez les souris possédant une

déficience dans le gène de la eNOS [66] [ 6 7 ] . D'un autre côté, la production de N O est

diminuée chez les patients hypertendus [67]. Bref, l'inhibition de la synthèse rénale du N O

provoque une élévation dans la pression sanguine [ 6 8 ] .

1.2.4.3.3 Espèces réactives à l'oxygène (ROS)

A) Biosynthèse

L'expression R O S comprend une diversité de molécules (radicaux) dérivées de l'oxygène

et possédant une certaine réactivité face à différents constituants de la cellule. Les R O S les

plus familiers sont fanion superoxide, le radical hydroxyle (OH") et le peroxyde

d'hydrogène (H2O2). Notre organisme utilise les radicaux libres pour différentes fonctions

physiologiques. L'anion superoxyde est instable et possède un électron non apparié produit

par la réduction d'un électron sur la molécule d'02". Il peut être produit principalement

dans les mitochondries, mais aussi dans le réticulum endoplasmique et les cellules

endothéliales. A u niveau des leucocytes, des fibroblastes et des cellules endothéliales, les

électrons provenant de l'activité de la N A D ( P ) H intracellulaire sont transférés à l'oxygène

extracellulaire, menant ainsi à la formation de superoxyde dans l'espace extracellulaire.

Dans les muscles lisses vasculaires, le superoxyde est produit dans l'espace intracellulaire

[69] [70]. L ' O H " est la forme neutre de l'anion hydroxyle et il est impliqué dans la

régulation du fer. Dans les peroxysomes, la consommation d ' 0 2 mène à la formation d'

H2O2 qui est utilisé pour oxyder une variété de molécules. La xanthine oxydase, les

oxydases mitochondriales et la cyclooxygénase sont des sources majeures de molécules

d'oxygène dans les tissus non-vasculaire, mais la N A D H / N A D P H oxydase est considérée

comme la source la plus importante de l'anion superoxyde au niveau des cellules

vasculaires et dans les phagocytes [ 7 1 ] . La figure qui suit démontre les différentes sources

des R O S (figurel.8). En condition physiologique normale, il existe des mécanismes pour

permettre l'élimination des R O S . Un de ces mécanismes consiste à la réduction complète

des radicaux libres de FO2" en eau à l'aide d'enzymes : S O D (superoxide dismutase),

catalase et peroxydase [72] (figure 1.7).

cvtochrome oxidase complex

c ata 1 ase. perox 1 dase

e e +2HT e+H* H 02 e-+H'

Figure 1.7 : R é d u c t i o n des radicaux libres de l ' o x y g è n e en eau.

Tirée de (Mclntyre et al. 1999) [72]

Un équilibre entre les processus pro-oxydant et antioxydant régule la quantité produite de

R O S par les cellules endothéliales. Un désordre de la fonction endothéliale survient lors

d'une perturbation de cet équilibre. D o n c , ce système de défense naturel prévient les

dommages tissulaires et vasculaires.

 Mail}
sources N A D ( P ) H o x i d a s e . C O X . X / X O . m i l o c h o n d r i a . u n c o u p l e d N O S II

ROS

Main targcî cclfs Endothclial Smooth nui se le

at vascular wall cells

Vasorolaxalion Cell g r o w t h
Apoptosis/Anoikis Cell migration
Main effects Adhésion moleeules Matrix régulation
Angiogenesis Vascular reinodelinc
V a s c u l a r permeahility

Figure 1.8 : Principales sources des R O S , leurs cellules cibles ainsi que leurs effets.

Tirée de (Rojas et al. 2006) [73]

B) Implications

L'anion superoxyde ainsi que d'autres R O S ont la capacité de réagir avec le N O et de

F inactiver. L'anion superoxyde peut donc mener à une déficience du N O fonctionnel et à la

formation de produit hautement réactif et cytotoxique, c o m m e le peroxynitrite [ 7 4 ] . Aussi,

l ' A n g II est un stimulateur majeur de l'activité de la N A D P H oxydase dans les muscles

lisses vasculaires, les fibroblastes, les cellules endothéliales et les myocytes. L'infusion de

l ' A n g II a démontré la régulation positive des sous-unités de la N A D P H oxydase et

l'augmentation des niveaux d'02 _

dans des études chez les souris. Bref, l ' A n g II s'avère

important dans la stimulation de la production d'02 _

[75]. Il a été démontré que l'ET-1

stimule la production vasculaire de l'anion superoxyde [ 7 6 ] . En effet, une étude utilisant

des tissus aortiques a démontré que les deux récepteurs E T A et E T B sont impliqués dans la

production de FO2". Aussi, il y a 2 sources d ' 0 \ soit la N A D P H oxydase et la N O S non-

2

couplée qui contribues à augmenter la vasoconstriction médiée par l'ET-1 [76].

La dysfonction endothéliale provoquée par une diminution de l'activité biologique du N O

est associée avec une élévation de la production vasculaire de superoxyde (figure 1.9). Ce

phénomène survient dans diverses pathologies dont le diabète, l'artériosclérose et

l'hypercholestérolémie [77] [78], mais également chez les humains souffrants

d'hypertension [79] ainsi que dans les modèles expérimentaux d'hypertension [80].

Par ailleurs, les R O S interfèrent avec l'expression d'un certains nombre de gènes ainsi que

dans les voies de signalisations de transduction reliées à l'immunité et à l'inflammation.

Plusieurs études ont démontré que les cellules tumorales en provenance du colon, du sein et

du pancréas expriment le N F - K B activé [81] [82]. En effet, l'expression du N F - K B stimule

la prolifération cellulaire et les R O S sont d'ailleurs impliqués c o m m e seconds messagers

dans l'activation du N F - K B via le T N F et l'interleukine-1 [82] [83].

 ÎNAD(P)H
oxidasc

Endothelial
dysfunction

~T
Hypertension

Figure 1.9 : L ' h y p e r t e n s i o n et le stress oxydatif.

Tirée de (Ward and Croft 2006) [84]

1.3 L a fonction rénale

1.3.1 Anatomie rénale

L'unité fonctionnelle du rein est le néphron. Chez l'humain, chacun des reins contient

environ 1 million de néphrons tandis que chez le rat adulte nous en comptons qu'environ

33 000 [85]. Le néphron possède trois fonctions importantes; il filtre le sang, assure la

réabsorption des substances utiles et excrète les composantes nocives pour l'organisme. Le

néphron comprend deux parties, soit le corpuscule rénal où se retrouvent le glomérule et la

capsule de Bowman et la deuxième partie, le tubule rénal. En gros, le sang provenant de

Fartériole afférente est filtré dans le corpuscule rénal produisant ainsi f ultrafiltrat qui passe

dans les tubules. Certaines substances sont réabsorbées avant d'être éliminées dans l'urine

ou bien sécrétées pour être éliminées de l'organisme. À partir de la capsule glomérulaire,

f ultrafiltrat passe à travers les tubules rénaux selon cet ordre : le tubule contourné

proximal, l'anse de Henlé (partie descendante ensuite ascendante), le tubule contourné

distal, le tubule collecteur et les tubules rénaux droits.

1.3.1.1 C o r p u s c u l e rénal

Le corpuscule rénal est fait de deux parties : le glomérule et la capsule glomérulaire aussi

nommée la capsule de Bowman (figure 1.10). C o m m e mentionné plus haut, le sang atteint

le corpuscule rénal en provenance de f artériole glomérulaire afférente et le sang non filtré

s'écoule et retourne dans l'organisme via l'artériole efférente. Chaque glomérule est formé

de la division d'une artériole glomérulaire afférente en un réseau de capillaires enchevêtrés.

Il y a des cellules mésangiales qui se trouve parmi les capillaires glomérulaires et dans le

sillon entre les artérioles afférentes et efférentes. Les cellules mésangiales sont des cellules

contractiles participant à la régulation de la filtration glomérulaire. La paroi de la capsule

glomérulaire et des tubules qui y sont rattachés, est formée d'une seule couche de cellules

épithéliales. La capsule de Bowman comprend un feuillet viscéral et un feuillet pariétal

composés d'un épithélium simple pavimenteux. Le feuillet viscéral est constitué de

cellules modifiées, nommées podocytes, et forme la paroi interne de la capsule tandis que le

feuillet pariétal forme la paroi externe. La membrane de filtration se compose des cellules
endothéliales des capillaires glomérulaires, de la membrane basale et des podocytes

formant ainsi une barrière poreuse. Cette organisation de la membrane de filtration permet

le passage de l'eau et des petits solutés, mais bloque la majorité des protéines plasmatiques,

des globules rouges et des plaquettes. D o n c , le filtrat glomérulaire passe à travers trois

barrières différentes : celle des cellules endothéliales (assez poreuses), la membrane basale

(empêchant le passage des grosses protéines) et une fente de filtration formée par les

podocytes.

1.3.1.2 A p p a r e i l juxta-glomérulaire

La partie ascendante de l'anse du néphron, soit le dernier segment et la portion initiale du

tubule distal entrent en contact avec les artérioles afférente et efférente de ce même néphron

(figure 1.10). A ce niveau, les cellules épithéliales du tubule sont plus denses que les autres

cellules; elles sont prismatiques et entassées et forment la macula densa. La paroi de

f artériole glomérulaire afférente et efférente entrant justement en contact avec la macula

densa, est formée de fibres musculaires lisses modifiées appelées les cellules

juxtaglomérulaires. Ces dernières avec la macula densa représentent l'appareil

juxtaglomérulaire. Les cellules juxtaglomérulaires sont gonflées et contiennent des

granules foncées composées principalement de rénine inactive. La sécrétion de rénine par

l'appareil juxtaglomérulaire est sous le contrôle de différents mécanismes : la concentration

d'électrolytes dans le tubule et le système nerveux réflexe sympathique du rein.

Figure 1.10 : A p p a r e i l j u x t a g l o m é r u l a i r e

Source : Principes d'anatomie et de physiologie (Tortora) [2]

1.3.1.3 Tubules rénaux

Les tubules rénaux sont constitués du tubule contourné proximal, de F anse de Henlé, du

tubule contourné distal et du tubule collecteur. Les tubules rénaux jouent un rôle autant

dans la réabsorption que dans la sécrétion tubulaire afin de maintenir un équilibre

homéostatique de f eau, du glucose, du sodium ( N a ) , du chlore (Cl'), du potassium ( K ) ,

+ +

du bicarbonate (HCO3"), des protéines et de l'urée. Il y a différents mécanismes, soit actifs

ou passifs afin de permettre la réabsorption et/ou la sécrétion de ces substances et certaines

hormones peuvent réguler ces mécanismes. Les processus ne seront pas expliqués en

détail, mais les mécanismes passifs comprennent, entre autres, la pinocytose, l'osmose et la

diffusion passive et les mécanismes actifs impliquent des pompes N a +

K +
ATPase et des

transporteurs d'ions (symporteurs et antiporteurs). Les hormones, A n g l l , A D H , A N P et

aldostérone agissent sur ces deux processus rénaux (réabsorption, sécrétion) en régulant la

perméabilité à l'eau et au sodium et en modifiant l'activité des transporteurs.

D'ailleurs, même si la consommation en eau peut varier chez une personne, le volume total

des liquides organiques demeure assez stable. L'équilibre des volumes organiques dépend,

en grande partie, de la capacité des reins à réguler la perte d'eau dans l'urine. Le rein

normal produit un volume important d'urine diluée quand l'apport hydrique est grand et un

petit volume d'urine concentrée quand cet apport est faible ou que les pertes liquidiennes

sont élevées. L ' A D H détermine si l'urine formée sera diluée ou concentrée. En absence

d ' A D H , l'urine contient une grande quantité d'eau par rapport aux solutés (urine diluée).

A u contraire, en présence d ' A D H , beaucoup d'eau est réabsorbée, ce qui réduit le rapport

eau-solutés dans l'urine (urine concentrée).

1.3.2 Fonction rénale

Les reins ont c o m m e rôle de filtrer le sang et de former l'urine, c'est ainsi qu'ils

contribuent au maintient de l'équilibre des liquides de l'organisme, et ce, de plusieurs

façons. Les reins voient à la régulation de la composition ionique du sang, à un maintient

de l'osmolarité sanguine, du pH sanguin, à la régulation du volume sanguin et de la PA.

Aussi, les reins libèrent des hormones dont l'EPO et le calcitriol (forme active de la

vitamine D ) . Ces hormones sont responsables de l'homéostasie du calcium et de

l'érythropoïèse ou production des globules rouges (érythrocytes). Les reins sécrètent

également de la rénine, une enzyme qui stimule le système rénine-angiotensine. Ils

excrètent également des déchets et des substances étrangères à l'organisme c o m m e par

exemple : la creatinine (provenant de la dégradation de la créatine phosphate dans les fibres

musculaires), de l'ammoniaque, de l'urée (produits par la désaminations des acides aminés)

et certaines drogues, toxines ou médicaments. Afin de produire l'urine, le néphron et le

tubule collecteur réalisent trois processus rénaux de base : la filtration glomérulaire, la

réabsorption tubulaire ainsi que la sécrétion tubulaire [1].

1.3.2.1 L a filtration glomérulaire

En général, la quantité quotidienne de filtrat glomérulaire formée est de 150 L pour une

femme et de 180L pour un homme adulte. Par contre, plus de 99 % du filtrat glomérulaire

retourne à la circulation sanguine suite à la réabsorption tubulaire. La diurèse quotidienne

est d'environ 2 L [1]. A u cours de la filtration glomérulaire, une partie de l'eau et certains

solutés du plasma traversent la membrane de filtration glomérulaire pour se retrouver dans

la capsule glomérulaire et finalement dans le tubule proximal. Cette filtration glomérulaire

est tributaire de trois pressions : la pression hydrostatique glomérulaire, la pression

hydrostatique capsulaire et la pression oncotique. Les deux dernières pressions s'opposent

à la filtration tandis que la pression hydrostatique glomérulaire la favorise. Cette dernière

représente la pression du sang dans les capillaires glomérulaires (faisant passer l'eau et les

solutés du plasma à travers la membrane) et elle est de 55 m m H g environ. La pression

hydrostatique capsulaire est la pression qu'exerce le liquide se trouvant dans la chambre

glomérulaire et le tubule contre la membrane de filtration et elle est d'environ 15 mmHg.

La pression oncotique évoque la pression osmotique liée aux protéines plasmatiques

c o m m e l'albumine et les globulines et elle est d'environ 30 mmHg. Alors, la pression

totale favorisant la filtration est de 10 mmHg et se nomme la pression nette de filtration

(PNF). Le débit de filtration glomérulaire ( G R F ) est directement relié aux trois pressions

formant la pression nette de filtration.

Chez un adulte le GRF atteint 125 ml/min chez l'homme et de 105 ml/min chez la femme

en moyenne. La régulation du GRF se fait par des mécanismes hémodynamiques qui

agissent de deux façons, soit en réglant la pression intraglomérulaire (via une modification

du diamètre des artérioles afférentes et efférentes) et en modifiant la superficie des

capillaires glomérulaires disponible pour la filtration. En effet, les capillaires glomérulaires

possèdent une grande superficie pour la filtration qui dépend des cellules mésangiales. Une

fois ces cellules relâchées, la superficie est maximale et la filtration glomérulaire est très
élevée; quand elles sont contractées, la superficie disponible diminue et la filtration

glomérulaire ralentit. Il y a trois mécanismes hémodynamiques qui contrôlent le GRF,

f autorégulation rénale (incluant le mécanisme myogène et la rétroaction tubulo-

glomérulaire), la régulation nerveuse (comprenant la stimulation sympathique du système

nerveux autonome) et la régulation hormonale (impliquant l ' A n g II ainsi que le l ' A N P ) .

L'autorégulation vasculaire myogène représente la contraction des cellules musculaires

lisses de la paroi des artérioles glomérulaires à se contracter ou se dilater selon la PA

systémique. La rétroaction tubulo-glomérulaire résulte de la macula densa qui exerce une

rétroaction sur le glomérule. Les cellules de la macula densa perçoivent les modifications

de concentration en N a , Cl" et l'eau

+
et déclenchent la libération de substances par les

cellules de l'appareil juxtaglomérulaire afin de moduler la contraction des artérioles

afférentes pour rétablir le GRF. Les reins sont innervés par des fibres nerveuses de la partie

sympathique du système nerveux autonome qui libère de la noradrénaline. Cette hormone

entraîne une vasoconstriction via l'activation de récepteurs a-adrénergique des fibres

musculaires lisses des artérioles glomérulaires afférentes. L ' A n g II diminue le GRF par

son effet vasoconstricteur sur les artérioles afférentes et efférentes tandis que l'ANP

l'augmente puisqu'il provoque un relâchement des cellules mésangiales glomérulaires.

1.3.2.2 R é a b s o r p t i o n tubulaire

La réabsorption permet le retour dans la circulation sanguine de la majeure partie de l'eau

filtrée et de certains solutés suite à leur passage à travers la membrane de filtration par le

biais de mécanismes actifs et passifs. Elle s'effectue principalement au niveau des cellules

du tubule contourné proximal, mais également de façon moindre au niveau des cellules

épithéliales tout au long du tubule rénal et collecteur. Les solutés réabsorbés tant par les

mécanismes actifs que passifs comprennent le glucose, les acides aminés, l'urée et les ions

tels que N a , K , C a , Cl", HCO3" et HPO4". Le processus de réabsorption est ajusté avec
+ + 2 +

précision afin de maintenir l'équilibre homéostatique de l'eau et de certains ions. La

majorité des petites protéines et des peptides qui traversent le filtre sont réabsorbées
généralement par pinocytose. La totalité du glucose et des acides aminés filtrés sont

réabsorbés dans le tubule contourné proximal. La majorité des ions sont réabsorbés dans le

tubule contourné proximal et la réabsorption des ions N a et de d'autres solutés facilite la

+

réabsorption de l'eau par osmose.

1.3.2.3 Sécrétion tubulaire

La sécrétion tubulaire se veut d'être la troisième fonction des néphrons. Elle représente le

transfert de différentes substances à partir de la circulation sanguine vers le fluide tubulaire

en passant à travers l'épithélium du tubule rénal. La sécrétion constitue un processus très

sélectif mettant en jeu des transporteurs actifs ainsi que passifs. Les substances sécrétées

sont les ions H , K , l'ammonium ( N H ) , la creatinine et certains médicaments ( c o m m e la

+ +
4
+

pénicilline). La sécrétion de ces ions et de ces substances est très variable tout au long des

différents tubules. La sécrétion tubulaire a donc le rôle de débarrasser l'organisme de

certaines substances ou électrolytes et de maintenir l'équilibre acido-basique. Grâce à la

sécrétion d'ions H , les reins contribuent au maintient du pH sanguin.

+
De plus, la

conformation tridimensionnelle des protéines, sans laquelle les protéines de l'organisme ne

peuvent remplir leurs fonctions, est très sensible aux variations de pH.

Le mécanisme de contre-courant est impliquer dans la régulation du volume de l'urine, qui

lui-même dépend de la concentration de l'urine. Il comprend l'interaction entre le filtrat

dans l'anse de Henlé et le sang de la vasa recta. La partie descendante de l'anse de Henlé

amène le fluide tubulaire du cortex vers la médullaire tandis que la partie ascendante lui fait

faire le chemin inverse. Dans ces conduits parallèles voisins, on remarque que le fluide

s'écoule dans des directions contraires, cela représente le phénomène de contre-courant.

L'osmolarité du fluide varie en fonction du tubule, il augmente dans la partie descendante

de l'anse, il diminue de la partie ascendante puis continue de diminué jusqu'aux tubules

collecteurs. Ce phénomène crée un gradient osmotique et permet l'arrivée du fluide au

niveau des tubules collecteur au bon pH, donc l'urine ainsi formée est à la bonne

concentration. De plus la concentration de l'urine peut être influencée par l ' A D H (voir

section 1.3.1.3).
1.4 L'insuffisance rénale

1.4.1 Généralité
L'insuffisance rénale se définit c o m m e une diminution ou un arrêt de la filtration

glomérulaire, donc de la fonction rénale. Elle est dite aiguë lorsque les reins arrêtent de

fonctionner complètement (ou presque) de façon soudaine. La plupart du temps,

l'insuffisance rénale aiguë est réversible. L'insuffisance rénale peut aussi être chronique

lors d'un déclin progressif et généralement irréversible du nombre fonctionnel de néphrons

[2]. Les néphrons restants vont essayer de s'adapter à la surcharge de travail en devenant

hyperfiltrants [ 8 5 ] . A u Canada, le taux de nouveaux patients atteints d'insuffisance rénale

au stade terminale (IRST) sous une thérapie de suppléance rénale (soit la dialyse ou la

transplantation) est passée de 112 patients par million d'habitants en 1995 à 158 en 2004,

soit une augmentation de 4 1 % . La dialyse représente la thérapie de suppléance rénale

prédominante pour les nouveaux cas IRST [ 8 6 ] . Chaque jour, en moyenne 14 Canadiens

apprennent qu'ils ont une atteinte de leur fonction rénale [ 8 6 ] .

1.4.2 Facteurs de risques

Les trois causes majeures liées au développement de 1TRC sont le diabète, les problèmes

rénaux (incluant la glomérulonéphrite) et l'hypertension artérielle [87] [86]. Certains

facteurs de risques peuvent être modifiés par la personne atteinte d'IRC ou du moins être

contrôlés dépendamment de son mode de vie c o m m e par exemple, le tabagisme, la

sédentarité, le diabète, le cholestérol et l'hypertension artérielle. D'autres facteurs sont de

nature inchangeable c o m m e l'âge avancé, le sexe, une histoire familiale de maladie rénale

ou bien cardiovasculaire. Les maladies cardiovasculaires sont la cause principale de

mortalité chez les IRC qui possèdent un taux annuel de mortalité de 10-20 fois plus grand

que la population générale [88].

1.4.3 Conséquences reliées à P I R C

1.4.3.1 L'anémie

L'anémie se définit c o m m e la réduction de la capacité du sang à transporter l'oxygène en

quantité suffisante pour la production de l'énergie cellulaire suite à une diminution du

nombre de globules rouges (érythrocytes). Les gens atteints d'IRC développent de

l'anémie qui est secondaire à une réduction de la production d'érythropoïétine (EPO) par le

rein. L ' E P O est connu c o m m e la principale hormone qui contrôle l'érythropoïèse au

niveau de la moelle osseuse. Cette condition anémique entraîne une détérioration de la

qualité de vie des patients en IRC.

1.4.3.2 L ' h y p e r t e n s i o n artérielle

C o m m e mentionné auparavant, une des fonctions importantes des reins est le maintient de

la PA. En effet, la perte de la fonction rénale entraîne le développement de l'hypertension

artérielle secondaire à une surcharge volémique [85]. L'hypertension seule est considérée

c o m m e un facteur de risque de maladie rénale, mais si elle se développe suite à un désordre

rénal, l'hypertension devient alors un risque prédominant dans l'accélération de la perte de

la fonction rénale ; il s'agit d'un cercle vicieux entre ces deux maladies. De plus, il est

important de traiter rapidement et de façon efficace l'hypertension chez les gens en IRC

afin de ralentir, non seulement la vitesse de détérioration de la fonction rénale, mais aussi

pour réduire la morbidité et mortalité cardiovasculaire [85].

1.4.4 Mécanisme de l'hypertension en insuffisance rénale

Toutes lésions rénales causant une réduction du flux sanguin ou bien une diminution de la

filtration glomérulaire entraînent une rétention de sel et de l'eau qui éventuellement mène

vers l'hypertension artérielle. De plus, en situation d'IRC il y arrive qu'une partie de la

masse rénale devienne ischémique causant la sécrétion de rénine et menant donc, à la

formation d ' A n g IL L ' A n g II est un puissant vasoconstricteur qui augmente la résistance

périphérique ainsi que la réabsorption rénale de sodium.

1.4.4.1 R ô l e de l ' E T - 1 en insuffisance rénale

L'altération du système ET-1 dans les maladies rénales peut entraîner des désordres

cardiovasculaires conduisant à l'hypertension [89]. L'altération du système ET-1 est

impliquée dans le développement de la dysfonction endothéliale présente en IRC [90]. Les

animaux ayant subit une néphrectomie subtotale 5/6, possède un niveau plasmatique d'ET-

I élevé, de même qu'une élévation de l'excrétion urinaire d'ET-1 [91]. De plus, l'excrétion

urinaire d'ET-1 est corrélée avec le degré d'insuffisance rénale, de la creatinine sérique, de

la protéinurie et de la sclérose glomérulaire [91] [92].

II a été démontré que la concentration d'ET-1 est augmentée dans l'aorte thoracique et le lit

mésentérique de même que dans les artères préglomérulaires chez les rats avec une masse

rénale réduite [92] [93]. Ces derniers changements sont associés à l'augmentation en

expression de l ' A R N m de la préproET-1, ce qui témoigne de l'élévation de la production

locale en ET-1 [91] [14]. De plus, l'augmentation de l'ET-1 dans les vaisseaux sanguins

est corrélée avec la hausse de la pression artérielle et le développement de l'hypertrophie

vasculaire [92] [93]. Par ailleurs, nous avons démontré que le blocage du récepteur E T , en A

utilisant un antagoniste spécifique, réduit la progression de l'hypertension chez des rats

urémiques ainsi que la détérioration de la fonction rénale confirmant l'implication de l ' E T -

1 dans cette maladie [92]. La figure suivante illustre bien l'implication de l'ET-1 en

situation d'IRC (figure 1.11). L ' I R C s'accompagne d'une hypertrophie vasculaire [92]

[93] et l'administration d'un antagoniste spécifique au récepteur ET A prévient le

développement de cette hypertrophie cardiovasculaire [93]. De plus, l'administration brève

(3 fois 15 min. d'infusion i.v. à intervalle de 7 jours) d'un antagoniste non-spécifique au

récepteur E T / B chez des patients en IRC réduit la PA, mais diminue également la fraction
A

de filtration effective (EFF). Cette dernière représente la fraction du plasma qui est filtré à

travers la membrane glomérulaire et est tributaire du flux sanguin rénal et de GRF en

minute [46]. Ces résultats sont bien entendu importants pour le développement clinique

d'antagonistes des récepteurs d'ET en IRC. En effet, une réduction de la PA diminue les

risques cardiovasculaires en IRC et la réduction de la EFF pourrait retarder la progression

de 1TRC [ 4 6 ] . En ce sens, il y a présentement une étude clinique de phase III qui tente

d'explorer le potentiel des effets d'un antagoniste sélectif au récepteur E T , avosentan, en

A

néphropathie diabétique et en IRST [94].

 Association
Causation

Figure 1.11 : R ô l e de l ' E T - 1 en I R C .

Tirée de (Dhaun et al 2006) [46]

Le récepteur E T B détient un rôle compensateur afin de contrecarrer F effet presseur du

récepteur E T , en plus de réduire le niveau tissulaire d ' E T - 1 . Ce rôle est supporté par une
A

étude menée avec des rats déficients en récepteur E T B OÙ 1TRC est induite (néphrectomie

5/6) [95]. Ces animaux possèdent des concentrations plus élevées d'ET-1 [95]. Enfin,

l'insuffisance rénale de ces animaux progresse plus rapidement ainsi que l'augmentation
de leur pression sanguine : les dommages rénaux sont beaucoup plus sévères témoignant

donc, d'une perturbation de leur fonction rénale.

1.4.5.2 R ô l e du N O en insuffisance rénale

En situation normale, l'effet vasoconstricteur de l'ET-1 est atténué par la relâche de N O ,

suite à la stimulation du récepteur E T B [28] [23]. La vasodilatation NO-dépendante est

diminuée chez les IRC, causée par une dysfonction de l'endothélium vasculaire [89]. Les

gens atteints d'IRC ainsi que les rats urémiques présentent une diminution significative de

leur excrétion urinaire de NO2/NO3 (des métabolites du N O ) , ce qui témoigne d'une

atteinte dans la synthèse rénale du N O [14] [96].

En urémie, la réduction de la biodisponibilité de N O serait probablement associé à

l'inhibition de l'activité de la N O S [ 7 2 ] . Aussi, il y a accumulation, en urémie, de A D M A

(dimethylarginine asymmetrique) dans le plasma; ce dernier est un inhibiteur endogène de

la N O S [97]. Un autre facteur important dans la régulation de la biodisponibilité du N O

dans les reins est le niveau de stress oxydatif, soit de l'augmentation de la formation des

R O S [61]. En fait, l'élévation du stress oxydatif est associée avec de hauts niveaux de

l'anion superoxyde (O2") qui réagit rapidement avec le NO pour former l'anion

peroxynitrite hautement toxique (ONOO") [74]. De plus, 1TRC chez le rat est associée avec

une diminution de l'expression de S O D et une élévation N A D ( P ) H oxidase pouvant

contribuer au stress oxydatif en augmentant le niveau de superoxyde [ 9 8 ] .

1.5 L'érythropoïétine

1.5.1 Généralité

Une des conséquences de 1TRC est le développement de l'anémie (voir partie du texte 1.4.3

section A ) . Par le passé, la correction de l'anémie se faisait par le biais de transfusions

sanguine à répétions ce qui entraînait des problèmes immunologiques de même que le

risque de développer des maladies infectieuses. Depuis les années 1980, l'arrivée de la

thérapie de remplacement à l'EPO recombinante humaine (rhEPO) a donc été

révolutionnaire dans le traitement de l'anémie chez les gens en IRC. Cette nouvelle

thérapie résulte en une meilleure qualité de vie pour les patients en IRC. Selon les

statistiques du R C I T O , près de 7 5 % des IRC reçoivent une thérapie de remplacement à

l'EPO [86].

1.5.2 Synthèse de l ' E P O

L ' E P O est codée par un gène situé sur le chromosome 7 du génome humain. L'EPO

contient 193 acides aminés où les 27 premiers sont clivés durant la sécrétion, l'hormone

finale est une glycoprotéine de 34 KDa. A u cours du développement fœtal et néonatal,

l'EPO provient du foie [99]. Par contre, près de 90-95 % de l'EPO est produite dans la

région corticale des reins chez l'adulte. Une faible quantité (5-10 % ) est alors produite

dans le foie et les macrophages. L ' E P O est exprimée principalement dans les cellules

interstitielles péritubulaires des reins [100] [101]. La sécrétion de cette hormone est

influencée par les niveaux d'oxygénation. L'hypoxie cause une augmentation significative

de la production de l ' E P O suite à l'activation d'un facteur de transcription, soit HIF-1

(hypoxia-inductible factor) [102]. L'augmentation de la stabilité de HIF-1 avec l ' a -

ketoglutarate (qui inhibe l'hydroxylation de HIF-a) stimule la production de l'EPO dans les

reins et le foie chez un modèle animal de souris [103].

1.5.3 Récepteurs et mécanismes d'action

Le récepteur à l'EPO appartient à la superfamille des récepteurs des tyrosines kinases.

Pour stimuler l'érythropoïèse, l'EPO produit un signal prolifératif sur les cellules

précurseurs des globules rouges : les BFU-E (burst-forming unit-erythroid) et les CFU-E

(colony-forming unit-erythroid) (figure 1.12). Un plus grand nombre de récepteur à l'EPO

est observé à la surface des CFU-E, mais une plus petite quantité sur les BFU-E [104].

D o n c , les cellules CFU-E sont plus sensibles dans leur réponse à l'EPO.
 P l u r i p o t e n t Stem C e l l ( BRI ï SCF, 1L-L IL-X IL-ft. IL-J1

Mveloid Stem Cell

CFU CKM.M fflBl ) SCF.GM-CSMLO

CFU-MEG

CFU-E/M EG/b

CFL-b

BFl.'-E

CFU-E

Normoblast

Reîiculocvte

I
Mature Frythrocvte

Figure 1.12 : A c t i o n de l ' E P O de la cellule souche pluripotente à l'érythrocyte mature.

Tirée de (Fisher 2003) [100]

En se liant à son récepteur, l'EPO change la conformation du récepteur qui se dimérise

entraînant l'activation et la phosphorylation de la protéine JAK-2 qui se lie au domaine

intracellulaire du récepteur. Ensuite, JAK-2 phosphoryle le récepteur à l'EPO sur les

résidus tyrosines du domaine intracellulaire ce qui permet à différentes molécules de

signalisation de se lier sur ces sites tel que : STAT-5 (signal transducer and activator o f

transcription 5) et PI3-K (phosphatidyl-inositol 3-kinase). S T A T 5 active la transcription

de gènes cibles tandis que PI3-K inhibe l'apoptose (un processus de mort cellulaire). Une

action majeure de la liaison EPO-EPO récepteur est l'augmentation des niveaux de calcium

intracellulaire via IP3 (inositol 3-phosphate) (figure 1.13). Une fois la liaison de l'EPO sur

son récepteur, 6 0 % de l'EPO internalisée est resécrétée tandis que 4 0 % est dégradé au

niveau intracellulaire. Par contre, il reste à découvrir, si in vivo, l'EPO resécrétée est actif

biologiquement [105].

Figure 1.13 : Voies de signalisation impliquées dans la réponse à l ' E P O .

Tirée de (Smith et al 2003) [106]

1.5.4 Hypertension induite par l'EPO en urémie

1.5.4.1 Généralité

Chez les patients anémiques atteints d'IRC, l'administration de l'rhEPO (l'EPO

recombinante humaine) pour la correction de l'anémie augmente la pression artérielle

sanguine et peut mener à l'hypertension de novo ou à l'aggravation d'une hypertension déjà

existante [107] [108]. Cette élévation de la pression artérielle se produit soit quelques

semaines ou même en terme de mois, après l'initiation de la thérapie à l'rhEPO chez les

IRC [109] [110] et de façon approximative en 1-3 semaines chez les rats en IRC [111]. Cet

effet presseur semble apparaître de façon presque exclusive chez les patients urémiques.

Effectivement, l'hypertension n'a pas été rapportée dans des cas cliniques où de l'rhEPO

est administrée à des patients anémiques sans problème rénal [112] [113] ou des sujets

volontaires sains [114]. Dans ce même ordre d'idée, l'administration d'rhEPO entraîne le

développement de l'hypertension artérielle chez les rats atteints d'insuffisance rénale

(modèle de néphrectomie subtotale 5/6) tandis que les rats témoins demeurent normotendus

[115].

1.5.4.2 Mécanismes

1.5.4.2.1 Viscosité sanguine

L'administration d'rhEPO provoque une augmentation de la viscosité sanguine liée à

l'élévation de l'hématocrite. Par contre, il n'existe pas de corrélation entre l'élévation de

l'hématocrite et la pression artérielle chez le rat urémique traité à l'rhEPO [115]. De plus,

des rats urémiques traités à l'rhEPO recevant une diète faible en fer, développent une

hypertension artérielle malgré la persistance de l'anémie [111].

1.5.4.2.2 Système rénine-angiotensine

L'effet presseur de l'rhEPO en IRC serait associé à une augmentation de l'activité du

système rénine-angiotensine tissulaire, car on ne détecte pas d'augmentation plasmatique

de rénine ou bien d ' A n g II chez les patients en insuffisance rénale [116]. Nous savons que

le système rénine-angiotensine participe au développement de l'IRC et de l'hypertension.

En effet, nous avons démontré que l'utilisation d'un inhibiteur de l'enzyme de conversion

de Fangiotensine ou d'un antagoniste du récepteur A T i prévient la progression de

l'hypertension artérielle chez le rat urémique sans traitement à l'rhEPO [13]. Aussi,

l'inhibition du système rénine-angiotensine prévient non seulement l'hypertension artérielle

mais les dommages rénaux causés par l'rhEPO en IRC [117].

1.5.4.2.3 Effet contractile direct

L'administration d'rhEPO à forte dose entraîne la contraction in vitro de l'artère

mésentérique, des vaisseaux rénaux de résistances et de l'artère caudale du rat [118]. Par

contre, la concentration d'rhEPO utilisée dans cette étude est beaucoup plus grande que la

dose utilisée en clinique dans le traitement de l'anémie. Ce fait explique peut-être pourquoi

une autre étude n'a pas permis de démontrer l'effet presseur direct de l'rhEPO [119].

1.5.4.2.4 Effet sur le volume sanguin

En situation normale, le rein a la capacité de s'adapter à l'augmentation du volume sanguin

afin de rétablir l'équilibre. L'augmentation de l'hématocrite, suite au traitement à l'rhEPO

en insuffisance rénale, provoque une élévation du volume sanguin. Ce phénomène pourrait

entraîner une surcharge vasculaire et contribuer à l'élévation de la pression sanguine

puisque le rein ne peut compenser cette surcharge volémique. Afin de rétablir le volume

extracellulaire, les patients doivent avoir recours à l'hémodialyse [108].

1.5.4.2.5 Dysfonction endothéliale

A) Endothéline-1

Il a été démontré que l'incubation d'rhEPO augmente la sécrétion d'ET-1 des cellules

endothéliales en culture [120] [119]. Il a été prouvé que l'expression de l ' A R N m de la

prépro-ET-1 (précurseur de l'ET-1) est augmentée dans les cortex rénaux suite à un

traitement à l'rhEPO chez des rats urémiques [ 9 0 ] . Cette observation est reliée à une

élévation de la concentration vasculaire et rénale d'ET-1 chez les rats atteints d'IRC traités

à l'rhEPO [121] [122]. Par contre, le traitement à l'rhEPO n'induit aucun changement sur

la pression sanguine et sur les niveaux d'ET-1 chez le rat normal [123], Par ailleurs,
l'administration d'un antagoniste sélectif au récepteur ET A de l'ET-1 prévient la

progression de l'hypertension induite par l'rhEPO chez les animaux urémiques indiquant

son implication dans la pathogenèse de l'hypertension [122] [93]. Par contre, le fait de

bloquer simultanément les récepteurs E T A et E T B n'empêche pas le développement de

l'hypertension artérielle induite par l'rhEPO en situation d'IRC [93] suggérant que le

récepteur E T B pourrait être impliqué. En effet, l'implication de ce récepteur s'illustre dans

une étude récente chez des rats déficients en récepteur E T B {si/si). Ces animaux

développent également une hypertension en urémie suite au traitement à l'rhEPO [124].

B) Monoxyde d'azote

Vaziri et al. [125] ont démontré que l'hypertension induite par l'rhEPO pourrait être reliée

à un problème dans la réponse vasodilatatrice au N O chez le rat. En effet, cette étude est en

lien avec d'autres montrant que l'incubation de l'EPO avec des cellules endothéliales

humaines en culture diminue la production basale du N O ainsi que l'expression de la N O S

[126]. Dans le même ordre d'idée, le traitement à l'rhEPO diminue la production de N O

dans les cellules endothéliales en culture [126] [127], mais augmente l'ADMA

(dimethylarginine asymmetrique), un inhibiteur endogène de la N O S . L'augmentation

significative de la synthèse d ' A D M A est liée à une baisse de l'activité de la D D H A

(dimethylarginine dimethylalaminohydrolase), qui métabolise l ' A D M A [127]. Ce système

d ' A D M A - D D H A pourrait donc être impliqué dans la régulation de la synthèse du N O

endogène. En effet, l'inhibition du D D H A provoque l'augmentation de la concentration

d ' A D M A et la diminution de la vasodilatation médiée par le N O . Bref, la résistance de

l'action vasodilatatrice au N O pourrait être un facteur impliqué dans l'hypertension induite

par l'EPO en urémie.

C) Prostaglandines

Il y a été aussi démontré que la relâche de T X A 2 est augmentée dans des anneaux d'aortes

de lapins et des artères rénales humaines incubées avec de l'rhEPO, tandis que celle de la

P G I diminue légèrement [128] [119].

2 D o n c , il existe un débalancement entre les divers

facteurs favorisant la vasoconstriction. Par ailleurs, la concentration de T X B 2 , un

métabolite stable de la T X A 2 , est élevée dans le lit artériel mésentérique de rats urémiques
recevant de l'rhEPO [122]. Le rôle de la T X A 2 , a été confirmé par l'utilisation d'un

inhibiteur de la T X synthase et un antagoniste de récepteur de la T X A 2 , le ridogrel, qui

prévient l'hypertension artérielle induite par l'rhEPO en urémie [122].

2. Hypothèse et objectifs de recherche

Hypothèse :

La correction de l'anémie par l'érythropoïétine recombinante humaine (rhEPO) en

insuffisance rénale chronique (IRC) s'accompagne d'une élévation de la pression artérielle.

Les mécanismes presseurs de l'rhEPO en IRC sont encore mal définis. Des études récentes

indiquent que le traitement à l'rhEPO accentue la dysfonction endothéliale déjà présente en

urémie: production accrue d'ET-1 et de radicaux oxygénés et diminution de la

biodisponibilité du N O . Cette dernière baisse de la biodisponibilité du N O serait causée, en

partie, par la diminution de la synthèse du N O suite à l'accumulation dans le plasma

d'inhibiteurs de la eNOS tel que l ' A D M A . Par ailleurs, la diminution de la biodisponibilité

du N O pourrait être reliée à l'augmentation de la production vasculaire de R O S , dont

l'anion superoxyde ( O 2 ) , qui réagit avec le N O et réduit son activité. Une augmentation de

la production de R O S a été rapportée dans plusieurs pathologies cardiovasculaires c o m m e

le diabète, l'hypertension, athérosclérose ainsi que l'insuffisance cardiaque et rénale autant

chez l'humain que dans des modèles expérimentaux. Nous avons donc émis l'hypothèse

que le traitement à l'rhEPO accentue la dysfonction endothéliale en I R C , entre autres, en

aggravant la production de PO2". Par conséquent, l'aggravation du stress oxydant serait

impliquée dans le développement de l'hypertension induite par l'rhEPO en 1TRC.

Objectifs :

Évaluer l'effet d'un antioxydant, le tempol (un S O D mimétique) chez des rats urémiques

traités à l'rhEPO. Les paramètres suivants seront étudiés :

• La pression artérielle systolique

• La progression de l'insuffisance rénale

• Les dommages histologiques vasculaires, glomérulaires et tubulaires rénaux

• Les concentrations plasmatiques, urinaires et tissulaires de l'ET-1

• La production de F O 2 "
3. Rôle du stress oxydatif dans l'hypertension induite par
P r h E P O chez le rat urémique

3.1 R é s u m é
La thérapie de remplacement à l'érythropoïétine recombinante humaine (rhEPO) pour le

traitement de l'anémie chez les patients en insuffisance rénale chronique (IRC)

s'accompagne d'une élévation de la pression artérielle, ce qui peut accélérer le déclin de la

fonction rénale. Le stress oxydatif est impliqué en IRC et peut être modulé par l'rhEPO.

Notre étude a pour objectif d'évaluer l'effet d'un S O D mimétique, le tempol, sur la

pression artérielle, la fonction rénale, la concentration rénale et vasculaire d'endothéline-1

(ET-1) ainsi que de la production d'anions superoxydes chez le rat urémique traité ou non à

l'rhEPO.

L'insuffisance rénale est induite par néphrectomie subtotale 5/6 suivie d'une période de

stabilisation de trois semaines. Les rats urémiques sont divisés en quatre groupes de

traitement : véhicule, rhEPO (lOOu/kg, s . c , 3 fois par semaine), véhicule + tempol

( l m m o l / L / j o u r dans l'eau à boire) et rhEPO + tempol pour quatre semaines. La pression

artérielle et les paramètres sanguins sont mesurés avant et à la fin du traitement. Les

dommages histologiques, la clairance de la creatinine, les concentrations d'ET-1 dans

l'urine, le plasma, l'aorte thoracique et dans le cortex rénal, et la production de l'anion

superoxyde sont évalués à la fin de l'étude. Après la néphrectomie 5/6, les rats développent

de l'urémie, de l'anémie et de l'hypertension artérielle. Ces effets sont associés à une

élévation des concentrations d'ET-1 et de la production de l'anion superoxyde. Le

traitement à l'rhEPO chez les rats urémiques corrige l'anémie, mais aggrave l'hypertension

artérielle, l'insuffisance rénale de même que l'augmentation d'ET-1 et de la production de

l'anion superoxyde. Dans les deux groupes urémiques, le tempol atténue l'hypertension et

les dommages rénaux qui sont d'ailleurs associés à une réduction des concentrations

plasmatique, urinaire et rénale d'ET-1 ainsi qu'une diminution de la production de l'anion

superoxyde.

En conclusion, le développement de l'hypertension et la progression de l'insuffisance

rénale sont causés, en partie, par la présence d'un stress oxydatif. En situation d'urémie, le
traitement à l'rhEPO semble accentuer d'avantage ce stress oxydatif qui serait impliqué

dans l'aggravation de l'hypertension et la progression de l'insuffisance rénale.

3.2 Rôle of Oxidative Stress in Erythropoietin-Induced
Hypertension in Urémie Rats.

Marie-Eve Rancourt, Marie-Eve Rodrigue, Richard Larivière, Ph.D., Marcel Lebel, M . D .

Research Centre and Division o f Nephrology, C H U Q , L'Hôtel-Dieu de Québec Hospital

and Department o f Medicine, Laval University, Québec, Canada

Abbreviated title: Oxidative stress in EPO-induced hypertension

Keywords : rhEPO, hypertension, chronic rénal failure, E T - 1 , R O S , tempol

Correspondence:

Dr. Marcel Lebel

C H U Q , L'Hôtel-Dieu de Québec Hospital

11 Côte du Palais

Québec, Québec G 1 R 2J6, Canada

Tel : (418) 525-4444, ext. 5580

F a x : (418) 691-5562

Email : marcel.lebel@crhdq.ulaval.ca
ABSTRACT

Erythropoietin (EPO) administration in urémie rats leads to an increase in blood pressure

that may accelerate the décline in rénal function. Chrome rénal failure is associated with

oxidative stress. W e hypothesize that EPO treatment might accentuate oxidative stress and

the latter might contribute to hypertension. The présent study investigated the effect o f a

superoxide dismutase mimetic, tempol, on blood pressure, rénal function and damage,

vascular and rénal endothelin-1 (ET-1) concentrations and superoxide anion production in

EPO-treated urémie rats.

Rénal failure was induced by a two-stage 5/6 nephrectomy followed by a 3-week

stabilization period. Urémie rats were divided into four groups and received: vehicle,

recombinant human EPO (lOOu/kg, subcutaneously, 3 times per week), vehicle + tempol (1

mmol/L in drinking water) and EPO + tempol, for 4 weeks. Systolic blood pressure and

biochemical parameters were assessed before and at the end o f the treatment. Rénal

histology, creatinine clearance rate, ET-1 in plasma, urine, thoracic aorta and rénal cortex,

and superoxide anion production were assessed at the end o f the study. After 5/6

nephrectomy, the animais developed anémia, uremia and hypertension. The latter was

associated with increased ET-1 concentrations and superoxide anion production. EPO

treatment in thèse urémie rats corrected anémia, but accentuated hypertension and rénal

failure. This therapy also increased tissue levels o f ET-1 and the superoxide anion

production. Treatment with tempol ameliorated hypertension and rénal injuries and was

associated with a réduction in plasma, urinary and rénal cortex ET-1 concentrations as well

as superoxide anion production.

In conclusion, oxidative stress contributes to the development o f hypertension and to the

progression o f rénal failure in 5/6 nephrectomized animais. EPO administration accentuâtes

the condition o f oxidative stress, a phenomenon that can account for the accentuation o f

hypertension and the décline in rénal function in EPO-theated urémie animais.

INTRODUCTION

The availability o f human recombinant erythropoietin (EPO) using molecular cloning

technologies revolutionized the management o f rénal anémia. Indeed, EPO replacement

therapy in rénal failure patients was accompanied by positive clinical effects such as

reduced need for routine blood transfusions, increased exercise tolérance and enhanced

quality o f life. However, correcting anémia with EPO treatment in chronic rénal failure

may lead to the accentuation o f existing hypertension or the development o f de novo

hypertension 1
Interestingly, the pressor effect induced by EPO appears to occur almost

exclusively in urémie patients. Hypertension has not been reported in clinical trials in

which EPO was administered in cases o f non-renal anémia or in healthy volunteers .

Similarly, in rénal failure rats (5/6 nephrectomy), EPO administration induced

hypertension, whereas control rats remained normotensive . 4

The causes leading to the development o f this iatrogenic form o f hypertension is still

unclear. The potential mechanisms include inappropriate increase in peripheral vascular

résistance , enhanced tissue renin-angiotensin activity , résistance to nitric oxide

5 6 7
and

increase in vascular concentrations o f endothelin-1 (ET-1) ' . In the rat remnant kidney

model, ET-1 levels were reported increased in blood vessels and in the rénal cortex 9 1 0
. In

addition, the increased urinary ET-1 concentrations correlated positively with elevated

blood pressures, proteinuria and glomerular sclerosis . The administration o f EPO

induced a further increase in vascular ET-1 production 5

and E T A receptor blockade

prevented the progression o f hypertension in EPO-treated animais .

Under normal condition, the in vivo vascular production and pressor effect o f ET-1 are

compensated by the effects o f the endothelium-derived relaxing factor nitric oxide ( N O ) 12

.

In urémie conditions, however, the release o f N O is impaired 13

. This could be due, at least

in part, to the accumulation in plasma o f N O synthase inhibitors such as asymmetric

dimethylarginine ( A D M A ) . Indeed, rhEPO has been shown to increase the level o f A D M A

in vitro 1 4
, a phenomenon that may further reduce the vascular N O release. The réduction

in N O bioavailability could be also resuit from the increase in reactive oxygen species.

Other studies have shown enhanced reactive oxygen species-mediated N O inactivation,

protein nitration, functional N O deficiency and hypertension in chronic rénal failure l 5

.
Thus, reactive oxygen species may be involved in the development o f hypertension either

via vasoconstrictor effects or via a réduction o f the effect o f vasodilators such as N O 16

.

Consistent with this, it has been reported that treatment with tempol, a membrane-

perméable super oxide dismutase-mimetic, can block the increase in blood pressure induced

by the chronic administration o f low-dose angiotensin II 17

.

The présent study was designed to investigate the rôle o f reactive oxygen species in E P O -

induced hypertension in rénal failure animais. W e also studied the effect o f the superoxide

dismutase-mimetic tempol in EPO-treated urémie rats.

MATERIEL AND METHODS

A n i m a l Experiments

The research protocol and expérimental manipulations were conducted in accordance with

the guidelines o f the Canadian Council o f Protection o f Animais and were approved by the

Animal Care Committee o f Laval University. Maie Wistar rats (200-225 g ) were obtained

from Charles River (Saint-Constant, Québec, Canada) and allowed to acclimatize 1 week in

our animal facilities with température and humidity control and a 12-h dark/light cycle

before any expérimental intervention. The animais were allowed free access to standard

laboratory rat c h o w and untreated tap water. Ail animais were rendered urémie by a t w o -

stage 5/6 nephrectomy procédure. Briefly, the rats were anaesthetized with isoflurane 1 - 2 %

(Abbott Laboratories, Montréal, Québec, Canada) and via a left flank incision;

approximately two-third o f the left kidney was removed by excision o f the upper and lower

pôles. Blood loss was minimized by application o f gelatin sponges with light pressure

(Gelfoam; Upjohn, D o n Mills, Ontario, Canada). One week later, the right kidney was

removed through a right latéral flank incision. Rénal function was then allowed to stabilize

over the next 3 weeks to attain a state o f chronic rénal impairment (doubling sérum

creatinine concentrations and increase systolic BP to about 140 to 150 m m H g ) .

In this protocol, the urémie animais were divided into four groups with similar systolic

blood pressure and received either the vehicle (saline 0 . 9 % ) , recombinant human EPO
(Eprex, OrthoBiothec, D o n Mills, Ontario, Canada) 100 U/kg, subcutaneously, three times

per weeks, vehicle and tempol (Sigma Chemical Co., St-Louis, M O , U S A ) added to the

drinking water at 1 mmol/L, or the combination o f rhEPO and tempol for 4 weeks. The oral

dose o f tempol was demonstrated to effectively lower blood pressure in rats with a 5/6

nephrectomy model 15
. Bloods samples (~ 1 ml) were collected from a jugular punctures in

anesthetized (isoflurane, 1-2%) animais before treatment for measurement o f sérum

creatinine and hematocrit. Systolic blood pressure was measured prior to study, before

treatment, and every week thereafter. Before the end o f this protocol, the animais were

placed in metabolic cages and a 24-h urine samples were collected and stored at -20 °C to

assess urinary volume, protein, creatinine clearance and immunoreactive ET-1 excrétion.

The animais were then anesthetized with pentobarbital (Somnotol, 50mg/kg i.p.; M T C

Pharmaceuticals, Cambridge, Ont.) and exsanguinated by abdominal aortic puncture.

B l o o d samples were used for measurement o f hematocrit, sérum creatinine and ET-1

plasma levels. The remnant kidney and the thoracic aorta (from the diaphragm to the aortic

arch) were removed and cleaned o f adipose tissue. The kidney was eut longitudinally.

Half o f the cortex was dissected, eut into pièces and then frozen and stored at - 80 °C for

measurement o f ET-1 concentrations. The rest o f cortex was used for histological study.

The aortic cross was removed, cleaned o f adipose tissue put in an embedding médium for

frozen tissue spécimen, O.C.T Compound (Sakura Finetek, C A , U S A ) and quickly stored at

-80°C.

Methods

Blood pressure, hematocrit and biochemical parameters

Systolic blood pressure was measured by the tail-cuff method after warming and slight

restriction using an I.I.T.C. B l o o d pressure System fitted with a model 29 pulsar sensor

(I.I.T.C. Life Science, Woodland Hills, C A , U S A ) . Blood pressure was recorded using a

computerized acquisition System (model M P I 0 0 ; BioPac System, Goleta, C A , U S A ) and

the average o f three readings was used for analysis. Using this method, the systolic blood

pressure in control Wistar rats o f the same âge and weight was 119 ± 10 m m H g 4
.

Hematocrit was determined in duplicate in Pre-cal micro-hematocrit tubes (Becton-

Dickinson, Parsippany, NJ, U S A ) after centrifugation at 19,000 rpm for 2 min. Sérum

creatinine levels and urinary protein and creatinine concentrations were determined with an

autoanalyzer System (Ilab 1800, Lexington, M A , U S A ) ; normal values for control Wistar

rats o f the same âge and weight were 42.5 ± 1.3 |umol/L (mean ± SEM) . 4

Measurement of ET-1

A complète thoracic aorta segment and a fragment o f the rénal cortex were each utilized per

extraction tube and assayed individually 4

. Briefly, frozen tissues were weighed,

homogenized in 1 N H C L , 1% acetic acid, 1% trifluoroacetic acid ( T F A ) and 1% NaCl and,

centrifuged at 3000 x g for 30 min at 4 °C prior to purification on a C\g Sep-Pak column

(Waters, Milford, M A , U S A ) . Plasma and urine samples were acidified with 0 . 2 % TFA,

and extracted on a C\g Sep-Pak column. The ET-1 concentration was measured using a

spécifie radioimmunoassay and the concentrations were corrected for losses in the

extraction and purification steps using small amounts o f I-ET-1 ( - 1 0 0 0 cpm; DuPont

N E N , Boston, M A , U S A ) .4

Rénal histology

Rénal histologie assessment was performed on ail animais per group. Formalin-fixed

kidney s were dehydrated and embedded in paraffin and 3-urn thick sections were mounted

on glass slides. Rénal tissue sections were stained with Masson-trichrome for the

assessment o f histological injuries. Immunohistochemistry was performed to détermine

expression levels o f E D I using a spécifie mouse anti E D I (Serotec, N C , U S A ) and the

avidin-biotin-peroxidase technique (Vectastain ABC-AP kit, Vector Laboratories,

Burlingame, C A ) . Histological analysis was performed in a blinded manner. Areas close

to the scar zone were excluded from analysis. The E D I expressions and the Masson-

Trichrome staining were quantified using ImageJ analysis software (version 1.33u, NIH,

Bethesda, M D ) . The percentage o f pixels expressing the brown ( E D I ) or the blue

(Masson-trichrome) were quantified.

Measurement of superoxide anions

The aortic cross was immersed in Optimal Cutting Température Embedding Médium

(Tissue-Tek, Sakura Finetek, Torrance, C A , U S A ) , quickly frozen and stored at - 8 0 ° C .

Then, 30-um transversal sections were obtained and mounted on glass slides. Tissue

sections were washed in phosphate-buffered saline (PBS). Thereafter, dihydroethidium (2

X 10 -6
M ) was topically applied for 30 min at 37°C in a light-protected and humidified

chamber. Dihydroethidium freely enters cells where it reacts with superoxide anions,

which releases ethidium molécules that intercalate D N A and fluoresce upon excitation at

488 nm (Molecular Probes, Eugène, O R , U S A ) . After rinsing in PBS, tissue slices were

mounted on cover slipped. The fluorescence was detected and localized by confocal

microscopy ( M R C - 1 0 2 4 Confocal System, Bio-Rad, C A ) with the Laser Sharp image

acquisition software 3.2. Fluorescent images in the différent expérimental groups were

obtained with a 585-nm long-pass filter using the same conditions o f laser exposure. The

superoxide anion production was scored using a semi-quantitative method with Metamorph

offline analysis software (Universal Imaging Corporation, Pensylvanie, U S A ) .

Statistical Analyses

Results are expressed as means ± SEM unless specified otherwise. Statistical comparisons

were analyzed first by A N O V A foliowed by Student-Newman-KeuFs test for multiple

comparisons or by a two-tailed T-test as appropriate. Pearson corrélations were obtained

by linear régression analysis using the Prism program (Graph Pad Software, San Diego,

C A , U S A ) . Statistical significance was accepted at P < 0.05.

RESULTS

Systolic blood pressure

Before the treatment period, urémie rats were hypertensive and systolic blood pressure was

similar in the différent de groups o f rats (Table 3.1). At the end o f the protocol, systolic

blood pressure further increased in ail urémie rats. However, the increase in blood pressure

was significantly higher in urémie animais receiving EPO than in those receiving the

vehicle (p < 0.01). Treatment with tempol significantly attenuated the increase in systolic

blood pressure seen in urémie receiving the vehicle or EPO (p < 0.01; Table 3.1). There

was a significant corrélation between systolic blood pressures and sérum creatinine

concentrations (Figure 3.1)

Blood and urine parameters

Ail urémie rats developed anémia (Table 3.1). A s expected, hematocrit level was

significantly increased in animais receiving EPO (p < 0.01).

Before the treatment period, sérum creatinine was double than normal values (référence

values: 42.3 ± 1.4 umol/L) and was similar in ail four groups o f urémie rats (Table 3.1). At

the end o f the treatment period, sérum creatinine was further increased (p < 0.05).

Although, treatment with tempol in urémie rats receiving the vehicle tended to attenuate the

rise in sérum creatinine, it had no effect on this parameter in urémie under rhEPO therapy

(Table 3.1).

At the end o f the study, urinary volumes were comparable in ail four groups (Table 3.2).

Urinary protein values were elevated in control urémie rats and tempol significantly

lowered it {P <0.05). The effect o f tempol on creatinine clearance was not significant.
Superoxide anion production

The superoxide anion production was assessed by a quantitative fluorescence method with

DHE in frozen sections o f the thoracic aorta (Figure 3.2). A s expected, the fluorescence

was detected in the nucleus o f smooth muscle cells o f urémie rats (62 ± 8) and was higher

in thoracic aorta segments from urémie rats receiving EPO therapy (79 ± 3; p < 0.05).

Treatment with tempol significantly reduced the production o f superoxide anion in the

urémie rats receiving the vehicle (23 ± 3; p < 0.01 vs. untreated urémie rats) or EPO (36 ±

2; p < 0.01 vs. urémie rats + EPO).

Plasma, urine and tissue ET-1 levels

The concentration o f ET-1 in plasma, urine, thoracic aorta and rénal cortex was increased in

urémie rats receiving the vehicle (Table 3.3, référence values: 5.6 ± 0.2 pg/ml, 59 ± ng/24

h, 0.09 ± 0.005 pg/mg and 0.23 ± 0.01 pg/mg, respectively). Plasma and thoracic aorta ET-

1 levels were further increased in urémie rats under EPO therapy (p < 0.05 and p < 0.01,

respectively). Treatment with tempol significantly attenuated the increase in ET-1 levels in

urine and rénal cortex o f urémie rats receiving the vehicle and in plasma and thoracic aorta

o f urémie rats receiving EPO (Table 3.3). There was a positive corrélation between systolic

blood pressure and the concentration o f ET-1 in plasma (Figure 3.1) and in the thoracic

aorta (r = 0.6, P < 0.001).

Rénal histology

The histological changes in the kidney o f urémie rats assessed with Masson staining

(Figure 3.3) were comprised o f moderate vascular hypertrophy, focal and segmentai

glomerulosclerosis, tubular atrophy and interstitial fibrosis, which has been also quantified

(Table 4). Moreover, the immunohistochemical staining with the E D I antibody, which

reveals activated macrophages, showed marked inflammation in the interstitium (Figure

3.3; Table 3.4). Thèse histological changes were significantly worsened in hypertensive

urémie animais receiving EPO (p < 0.01; Table 3.4). The antioxidant tempol significantly
slowed down the development o f rénal injuries in the urémie rats receiving the vehicle and

in EPO-treated urémie animais.

DISCUSSION

Our work showed that the development o f hypertension and the progression o f rénal failure

associated with uremia in rats are caused, in part, by the increase in oxidative stress. We

also demonstrated that EPO treatment enhances the underlying oxidative stress and the

latter is likely involved in the pressor mechanisms o f EPO in chronic rénal failure. In

keeping with that, the treatment with the antioxidant tempol, a superoxide dismutase-

mimetic, in urémie rats receiving the vehicle or EPO, ameliorated hypertension and rénal

damages.

Tempol reduces oxidative stress by favoring the transformation o f O2" in H2O2 and then in
18 15

water via catalase and peroxidase enzymes . Vaziri et al. reported that chronic rénal

failure is accompanied by depressed superoxide dismutase and elevated N A D ( P ) H oxidase

expression, which can contribute to oxidative stress by increasing superoxide. The

administration o f tempol, which stimulâtes the superoxide dismutase activity, entails a

réduction in O2" concentrations allowing the return o f superoxide level close to normal 15
.

The administration o f the antioxidant tempol to urémie rats in the présent study resulted in

a significant blood pressure réduction. This effect was associated with a réduction in

superoxide anion production in the vascular wall in comparison to the urémie control rats.

Our observations are in keeping with other studies in which the treatment o f urémie rats

(5/6 nephrectomy) with tempol (the same dose for one week) ameliorated hypertension 15
.

Our results also showed that EPO treatment corrects anémia but accentuâtes hypertension

in urémie rats as previously reported .4

This EPO pressor effect was associated with an

increase in superoxide production suggesting that EPO can enhance oxidative stress in

chronic rénal failure. Indeed, tempol treatment in urémie animais receiving EPO

significantly reduced blood pressure and it increased the production o f superoxide anions.
Our results show for the first time that EPO can increase the reactive oxygen species

production, a phenomenon likely associated with the hypertensive effect o f EPO in uremia.

In the rat remnant kidney model, ET-1 levels are increased in blood vessels and in the rénal

cortex 1 0 , 1 9
. The administration o f EPO induces a further increase in vascular ET-1

production , and E T A receptor blockade prevents the progression o f hypertension in E P O -

4

treated animais ' . Similarly, the concentration o f ET-1 in plasma and in thoracic aorta

was increased following EPO treatment in the présent study. It is noteworthy that tempol

administration reduced ET-1 levels in plasma, thoracic aorta and rénal cortex in control

urémie rats and in EPO-treated animais. Thèse results suggest that oxidative stress in

chronic rénal failure and its aggravation following EPO treatment contributes, at least in

part, to endothelial dysfunction. Indeed, reactive oxygen species stimulâtes ppET-1

11

expression and ET-1 release in vascular cells . In normal condition, the ET-1 effects are

reduced by N O release 12
. In contrast, rats with chronic rénal failure exhibit lower N O

rénal formation 2 2
. The réduction in N O activity in uremia could also be related to the

higher vascular production of superoxide anions that react with NO to produce

peroxynitrite. The marked superoxide anion production observed in uremia could represent

an important mechanism accounting for the ET-1 overproduction. The increase in

superoxide anion production following EPO treatment in urémie animais likely contributes

to the accentuation o f endothelial dysfunction in urémie animais.

Rénal damages usually progress with the degree o f rénal failure and it has been shown that

EPO at therapeutic doses can worsen the décline in rénal function " . In the présent

study, rénal histological damages revealed interstitial fibrosis, vascular hypertrophy,

glomerulosclerosis and tubular atrophy in control urémie rats. The use o f EDI antiserum,

that shows activated macrophages, revealed the présence o f interstitial inflammation.

Tempol greatly attenuated the rénal failure progression and rénal histological damages and

inflammation. Tempol also ameliorated rénal damages induced by EPO treatment, but

without changing significantly the parameters o f rénal function. This could be related to

the lowering effect o f tempol on blood pressure in EPO-treated urémie rats. Blood pressure
remained elevated in urémie animais receiving the vehicle suggesting that the degree o f

uremia was similar in both groups.

The mechanisms responsible for the increase in reactive oxygen species in chronic rénal

failure and its accentuation by EPO treatment are still unclear. It could be related to the

increase in ET-1 or to the activation o f the renin-angiotensin System. Evidence suggest that

E T - 1 , via his E T A receptor, stimulâtes the superoxide anion production in the vascular

smooth muscle cells . 26

In vivo studies also show that ET-1 could be an important

modulator o f the superoxide anion production in vascular tissues 2 1

. Indeed, the use o f

BQ123 (an E T A receptor antagonist) can prevent the increase o f superoxide formation 2 8
.

Moreover, the superoxide production in rat aortic rings is stimulated by the exogenous

administration o f ET-1 in a dose-dependant manner 2 1

. Consistent with this, E T B receptor-

deficient rats exhibit increased plasma and urinary ET-1 concentrations associated with

increased formation o f oxygen reactive species, which is reduced by E T A receptor blockade

2 9
. On the other hand, the renin-angiotensin System plays an important rôle in the

development arterial hypertension in chronic rénal failure. Indeed, Lariviere et al. 9

reported that the administration o f an angiotensin converting enzyme inhibitor or an

angiotensin receptor antagonist prevented not only the progression o f hypertension but also

the détérioration o f rénal function in urémie animais. Thèse effects were associated with a

réduction in ET-1 vascular and rénal concentrations. Moreover, we showed that the renin-

angiotensin System blockade prevents the increase in blood pressure and the progression o f

rénal damages induced by EPO treatment in uremia , confirming the important rôle o f

angiotensin II in this form o f hypertension. Angiotensin II is a powerful stimulant o f the

reactive oxygen species production. Indeed, the infusion o f angiotensin II results in a

positive régulation o f the N A D ( P ) H oxidase sub-unit and in an increase in O2" level in mice

. The N A D ( P ) H oxydase is the principal source o f superoxide anion in vascular cells .

Angiotensin II infusion also increases the rénal m R N A expression and the p22phox protein

(a sub-unit o f the N A D ( P ) H oxidase), which contribute to the increase in reactive oxygen

species levels. Thus, the renin-angiotensin System entails enhanced reactive oxygen

species production via its effect on N A D ( P ) H levels in urémie rats and this phenomenon is

accentuated under EPO therapy.

In conclusion, oxidative stress contributes to the development o f hypertension and to the

progression o f rénal failure in urémie rats. This condition o f oxidative stress is further

increased following EPO therapy in thèse animais and might account, at least in part, for

the increase in blood pressure and the décline in rénal function. .

Acknowledgements

W e tank Danielle Paré and Claude Villeneuve for technical support. This work was

supported by a grant ( # M O P - 7 9 4 2 3 ) from the Canadian Institutes o f Health Research

(Ottawa, Ontario, Canada). M.-E. R. is the récipient o f a studentship from the same agency.
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Table 3.1 : Systolic b l o o d pressure, hematocrit and sérum creatinine assessed before
treatment and at the end o f the study

SBP Hematocrit Sérum creatinine

(mmHg) (%) (umol/L)
Before End o f the Before End o f the Before End o f the
Groups treatment study treatment study treatment study

Nx 152 ± 3 180±4 a
35.8 ± 1.1 3 3 . 7 ± 1.0 81 ± 6 109± 1 2 b

N x + tempol 145 ± 3 159±4 a c

38.0 ± 0 . 5 34.8 ± 1.1 b
74 ± 2 87±4 b

N x + EPO 146 ± 3 199±2 a c

37.5 ± 0 . 5 61.0±0.7 b c
75 ± 2 114± 12 b

N x + EPO +
tempol 151 ± 4 169±4 a d
35.9 ± 1.1
58.5 ± 0 . 9 79 ± 4 b
103 ± 8 b

N x , 5/6 nephrectomized rats. SBP, systolic blood pressure. Values are means ± SEM from
8 to 10 animais per group.
a P < 0.01 and b P < 0.05 vs. before the treatment period; c P < 0.01 vs. N x ;
dP< 0.001 vs. N x + EPO.

Table 3.2 : Urinary v o l u m e , proteinuria and creatinine clearance at the end o f the

study

Urinary volume Urinary protein Creatinine clearance

Groups (ml) (mg/24h) (ml/min)
Nx 53 ± 3 183 ± 3 8 0.93 ± 0 . 1 2
N x + tempol 41 ± 4 89± 17 a
1.06 ± 0 . 0 5
N x + EPO 44 ± 4 193 ± 3 3 0.70 ± 0 . 1 0
N x + EPO +
tempol 47 ± 3 229 ± 52 0.94 ± 0.09
N x , 5/6 nephrectomized rats. Values are means ± SEM from 8 to 10 animais per
group. a P < 0.05 vs. N x .
Table 3.3: E T - 1 concentrations in plasma, urine, the thoracic aorta and the rénal
cortex at the end o f the study

Plasma Urine Thoracic aorta Rénal cortex

Groups (pg/ml) (pg/ml) (Pg/mg) (Pg/mg)
Nx 8.0 ± 0 . 5 244 ± 73 0.21 ± 0 . 0 2 1.6 ± 0 . 3
N x + tempol 6.4 ± 0 . 4 73 ± 14 a
0.20 ± 0 . 0 1 0.7 ± 0 . 1 b

N x + EPO 11.1 ± 1.1 a

172 ± 3 7 0.41 ± 0 . 0 5 b
2.0 ± 0 . 6
N x + EPO +
tempol 5.3 ± 0.5 d
156 ± 37 0.26 ± 0 . 0 3 c
1.5 ± 0 . 3
N x , 5/6 nephrectomized rats. Values are means ± SEM from 8 to 10 animais per group
a P < 0.05 and b P < 0.01 vs. N x ; cP < 0.05 and d P < 0.001 vs. Nx + EPO;

Table 3.4 : Semi quantitative analysis o f rénal injuries with M a s s o n staining,

m a c r o p h a g e infiltration with E D I immunohistochemical staining and superoxide
anion p r o d u c t i o n with D H E fluorescence staining in arbitrary units

Group Masson-trichrome EDI

Nx 13±3 4.7 ± 0 . 4
N x + tempol 9 ± l a
1.7±0.4 a

N x + EPO 21 ± 1 a
9.0 ± 1.0 a

N x + EPO +
tempol 14±9 C
2.7 ± 0.7 e

N x , 5/6 nephrectomized rats. Values are means ± SEM from 8 to 10 animais per group.
a P < 0.01 and b P < 0.05 vs. N x ; cP < 0.01 and d P < 0.05 vs. N x + EPO
 Nx
300 Nx+ rhEPO
Nx + tempol
= 250- Nx + rhEPO + tempol
o
E
E
^ 200
c
2 150-
o
E
100-

50 r = 0.5
p < 0.001

0i i 1 1 1 i 1 1 r
130 140 150 160 170 180 190 200 210 220
Systolic blood pressure (mmHg)

18
Nx
Nx + rhEPO
15 Nx + tempol
Nx + rhEPO + tempol

i 12
-
m
CL

r = 0.6
p < 0.001

1 1 1 1 1 r— 1 —
210 220
130 140 150 160 170 180 190 200
Systolic blood pressure (mmHg)

Figure 3.1 : Relationships between systolic b l o o d pressures and sérum creatinine and
plasma endothelin-1 ( E T - 1 ) concentrations.
Figure 3.2 : Représentative confocal m i c r o s c o p y p h o t o g r a p h s showing superoxide
anion levels.
It was stained with the fluorescent dye dihydroethidium in the thoracic aorta from N x (5/6
nephrectomized rats), N x + tempol, N x + EPO and N x + EPO + tempol. Original
magnification, X 1 0 .
Figure 3.3 : M a s s o n - t r i c h r o m e staining and immunohistochemistry o f E D I .

Sections o f rénal cortex. In urémie group (a, e ) , N x + tempol group (b, f), N x + EPO group
(e, g) and, N x + tempol + EPO group (d, h). The left colums show représentative
glomerular, vascular, and interstitial changes with trichrome staining (original
magnification, X I 0 ) . The right column shows the staining for EDI (original magnification,
X10).
Mes travaux de recherche à la maîtrise démontrent que le développement de l'hypertension

de même que la progression de l'insuffisance rénale associée à l'IRC chez le rat urémique

est causée, en partie, par la présence d'un stress oxydatif. Nous avons également démontré

que le traitement à l'rhEPO semble accentuer ce stress oxydatif et qu'il serait impliqué, en

partie, dans les mécanismes presseurs de l'rhEPO en IRC. En effet, le traitement des

animaux urémiques recevant le véhicule aussi bien que l'rhEPO avec l'antioxydant tempol,

un S O D mimétique, atténue l'hypertension et les dommages rénaux.

Cette étude visait à évaluer la présence d'un stress oxydatif en IR et l'implication de ce

dernier dans l'hypertension induite par l'rhEPO chez le rat urémique. Pour ce faire, nous

avons utilisé le tempol, un S O D mimétique, qui a pour effet de réduire le stress oxydatif en

favorisant la transformation de FO2" en peroxyde d'hydrogène, puis en eau à l'aide de la

catalase et de la peroxydase [72]. De plus, en IR la déficience en S O D observée mène à

une forte production de l'anion superoxyde, donc l'utilisation du tempol qui mime l'activité

du S O D aide à réduire la concentration d'02~ permettant ainsi de rétablir le niveau de stress

oxydatif [98]. L'administration de l'antioxydant chez le groupe urémique cause une

atténuation significative de la PA. Cet effet est associé à une réduction de la production

d'anions superoxyde dans la paroi vasculaire, par rapport au groupe urémique non-traité.

Ces résultats indiquent donc la présence d'un stress oxydatif en IR et ce dernier est

impliqué dans le développement de cette forme d'hypertension rénale. N o s observations

sont en accord avec une autre étude démontrant que le traitement de rats urémiques

(néphrectomie 5/6) avec le tempol (même dose que nous avons utilisée, pour une semaine)

atténue significativement le développement de l'hypertension [98]. Par ailleurs, nos

résultats confirment nos travaux antérieurs montrant que le traitement à l'rhEPO corrige

l'anémie, mais aggrave l'hypertension artérielle chez le rat urémique [115]. Cet effet de

l'rhEPO est associé à une augmentation de la production de l'anion superoxyde révélant

que l'rhEPO accentue le stress oxydatif en IRC. En effet, le traitement au tempol chez les

rats urémiques recevant l'rhEPO diminue significativement la P A ainsi que la production

exagérée de l'anion superoxyde. N o s résultats démontrent donc pour la première fois que

l'rhEPO peut augmenter la production de R O S qui est associée à l'effet hypertenseur de

l'rhEPO en IR.

N o s travaux antérieurs ont montré que l'rhEPO accentue la dysfonction endothéliale

présente en urémie. En effet, l'augmentation de la PA en réponse à l'rhEPO chez le rat

urémique est associée à l'augmentation de la production vasculaire d'ET-1 [92] [132].

Dans cette étude, la concentration plasmatique d'ET-1 et celle de l'aorte thoracique sont

augmentées par le traitement à l'rhEPO, démontrant l'aggravation de la dysfonction

endothéliale suite à l'administration d'rhEPO en urémie. Plusieurs évidences suggèrent

que 1TRC s'accompagne d'une dysfonction endothéliale sévère [ 8 9 ] ; d'ailleurs le niveau

plasmatique d'ET-1 est augmenté de 4-5 fois chez les patients hémodialysés [132] et la

concentration d'ET-1 dans les vaisseaux sanguins et sa production rénale sont augmentées

chez le rats urémiques [92] [13]. L'administration de l'rhEPO augmente d'avantage la

concentration vasculaire d'ET-1 [121] et il en va ainsi pour l'expression de l ' A R N m de

l'ET-1 dans le cortex rénal [90]. De plus, les cellules endothéliales expriment les

récepteurs à l'rhEPO [133] et ces cellules, lors d'une stimulation à l'rhEPO, libèrent de

l'ET-1 [120]. Dans la présente étude, nous avons démontré que le traitement au tempol

diminue également la production d'ET-1 dans le plasma, l'aorte thoracique et le cortex

rénal. Chez le groupe recevant de l'rhEPO, l'antioxydant induit une réduction de la

concentration d'ET-1 dans l'aorte thoracique et le plasma. Ces derniers résultats indiquent

que le développement du stress oxydatif en IR et son aggravation suite au traitement à

l'rhEPO est impliqué, du moins en partie, dans la dysfonction endothéliale. En effet, les

ROS stimulent l'expression de la ppET-1 et la libération d'ET-1 dans les cellules

vasculaires [134]. Par ailleurs, en situation normale, les effets de l'ET-1 sont atténués par

la relâche de N O qui inhibe la synthèse endothéliale de l'ET-1 [28]. Par contre, les gens

atteints d'IRC ainsi que les rats urémiques présentent une diminution de la relâche de N O

[14]. La diminution de l'activité biologique du N O en urémie peut aussi être reliée à une

élévation de la production vasculaire de l'anion superoxyde qui réagit avec le N O pour

produire du peroxynitrite. Ainsi, la production accrue de l'anion superoxyde en urémie

serait un mécanisme important de la surproduction d'ET-1. Par conséquent, l'augmentation

de la production de l'anion superoxyde par l'rhEPO chez l'animal urémique serait

responsable de l'aggravation de la dysfonction endothéliale.

Il est bien établi que les dommages rénaux progressent en fonction du niveau d'urémie et

que l'rhEPO peut aggraver cette détérioration. Chez le rat urémique, les dommages

histologiques rénaux évalués par coloration au Masson-trichrome comprennent notamment

la fibrose interstitielle, l'hypertrophie vasculaire, la glomérulosclérose et l'atrophie

tubulaire. De plus, l'utilisation de l'anticorps EDI, qui révèle l'infiltration de

macrophages, démontre la présence d'inflammation interstitielle. Le traitement des

animaux urémiques avec l'rhEPO aggrave nettement les dommages rénaux ainsi que

l'inflammation interstitielle. Le tempol atténue de façon marquée la progression de 1TR

aussi bien que les dommages rénaux et l'inflammation interstitielle. De la même manière,

le tempol atténue l'aggravation des dommages rénaux induits par le traitement à l'rhEPO,

sans cependant affecter de façon significative les paramètres rénaux. Ce résultat peut être

causé, en partie, par le fait que bien que le tempol atténue l'augmentation de la P A en

réponse à l'rhEPO chez le rat urémique, la P A demeure toutefois élevée, suggérant un

degré d'urémie semblable aux animaux urémiques recevant le véhicule.

Les mécanismes responsables de l'augmentation des R O S en IR et de l'aggravation par le

traitement à l'rhEPO sont encore mal définis. Ils peuvent être expliqués, d'une part par

l'action de l'ET-1 ou encore par l'activation du système rénine-angiotensine. En effet, des

évidences suggèrent que l ' E T - 1 , via son récepteur E T A , stimulent la production d'anions

superoxyde dans les cellules musculaires lisses vasculaires en culture [34] [35]. Aussi, des

études, in vivo, ont confirmé que l'ET-1 peut être un important modulateur de la production

de l'anion superoxide dans les tissus vasculaires [135] [136]. En effet, l'utilisation du

BQ123 (un antagoniste du récepteur E T A ) prévient l'augmentation de la formation de

superoxides [136]. D'ailleurs, la production de l'anion superoxide dans les anneaux d'aorte

de rats est stimulée par l'administration exogène d'ET-1 de façon dose-dépendante [76]

[135]. De plus, l'infusion d'ET-1 chez les rats sous une diète riche en sel, stimule la

production du 8-isoprostane, un indicateur de stress oxydatif, qui est abolie par le

traitement avec le tempol [137]. Puisque nos résultats indiquent qu'il existe un stress
oxydatif en urémie qui contribue à la dysfonction endothéliale et que ces deux phénomènes

sont aggravés par l'rhEPO, il est possible qu'un cercle vicieux se développe entre l'ET-1 et

les R O S . Par ailleurs, il est reconnu que le système rénine-angiotensine j o u e un rôle

important dans le développement de 1TRC et de l'hypertension artérielle. En effet,

l'administration d'un IECA ou d'un A R A prévient non seulement la progression de

l'hypertension, mais également la détérioration de la fonction rénale chez l'animal

urémique [ 1 3 ] . Ces effets sont associés à une réduction des concentrations vasculaire ainsi

que rénale d ' E T - 1 . De plus, l'inhibition du système rénine-angiotensine avec un IECA ou

un A R A , prévient l'hypertension artérielle de même que les dommages rénaux occasionnés

par le traitement à l'rhEPO en IRC [117] démontrant un rôle important de l ' A n g II. Il est

maintenant bien établi que l ' A n g II est un puissant stimulateur de la production de R O S .

En effet, l'infusion d ' A n g II chez la souris active l'expression des sous-unités de la

N A D ( P ) H oxydase et, par conséquent, la production d ' 0 " [75].

2 En effet, la N A D P H

oxydase est la principale source de l'anion superoxide dans les cellules vasculaires [71].

De plus, l'infusion d ' A n g II augmente l'expression rénale de l ' A R N m et de la protéine

p22phox (une sous-unité de la N A D ( P ) H oxydase) induisant ainsi une élévation du niveau

des R O S . De ce fait, le stress oxydatif peut aussi augmenter l'expression de la N A D ( P ) H

oxydase, tandis que le tempol prévient l'activité de cette dernière [138]. D o n c , le système

rénine-angiotensine peut être impliqué dans l'augmentation de la production des R O S via

son effet sur le niveau de N A D ( P ) H chez le rat urémique aussi bien qu'en réponse à

l'rhEPO.
En conclusion, les résultats présentés dans ce mémoire démontrent que l'administration

d'rhEPO accentue non seulement la dysfonction endothéliale, mais également le stress

oxydatif présents en IRC. Ces derniers mécanismes pourraient expliquer, du moins en

partie, l'aggravation de l'hypertension artérielle induite par l'rhEPO en urémie. Par

ailleurs, l'antioxydant, le tempol, atténue efficacement la production d'anion superoxide et

la production d ' E T - 1 , réduisant ainsi le stress oxydatif et la dysfonction endothéliale

associés à l'urémie et atténue le développement de l'hypertension et de la progression de

l'insuffisance rénale.
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