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PRECIPITACIÓN DE GAMMAGLOBULINAS
INTRODUCCIÓN
El presente trabajo de investigación está básicamente relacionado con el campo de la
purificación de proteínas terapéuticas como son las inmunoglobulinas son un tipo de
proteínas que están clasificadas de la siguiente manera: IgM, IgG, IgA, IgD, IgE y son
sintetizadas por nuestro organismo con el fin de conferir inmunidad, los productos
derivados de plasma sanguíneo tales como albúmina humana, la inmunoglobulinas
humanas y antivenenosa heterólogos, son medicamentos importantes en el tratamiento
de diversas enfermedades que pueden ser naturales como aquellas ligadas al
cromosoma, accidentes y lesiones entre otras. y puesto que son anticuerpos en
determinadas situaciones patológicas puede ser necesaria la administración de
inmunoglobulinas intravenosas (IgIV).De acuerdo al trabajo a realizar, en este
documento se describirá el/los método(s) más factible(s) para las extracción de
gammaglobulinas en el suero humano ya que es un muy importante tema de actualidad
debido aumento de la demanda actual de estos productos, es importante mejorar la
eficiencia de los métodos de producción de los mismos, para poder abastecer
adecuadamente dicha demanda, y de esta manera prevenir que a corto plazo se
presente una escasez global de estos medicamentos.
OBJETIVOS
Aprender y comprender los métodos y técnicas más adecuados para la
extracción de gammaglobulinas.
Buscar la información más relevante sobre la precipitación de
gammaglobulinas.
DESARROLLO
GAMMAGLOBULINAS
Las inmunoglobulinas son complejos proteicos que actúan como anticuerpos. La
estructura básica de las inmunoglobulinas es una unidad formada por dos cadenas
ligeras y dos cadenas pesadas. Estas unidades contienen dominios variables y dominios
constantes. Las regiones constantes de las cadenas pesadas son responsables de la
activación del complemento y de la capacidad de algunas de estas unidades de formar
polímeros. La clasificación de las inmunoglobulinas se de acuerdo a las cadenas pesadas
expresadas en su estructura y estás han sido designadas como: Gamma, Alfa, Delta,
Épsilon y Mu siendo estos tipos de inmunoglobulinas conocidas generalmente como IgG,
IgA, IgD, IgE e IgM respectivamente. Las inmunoglobulinas que contienen cadenas
gamma se denominan IgG. Las moléculas de IgG están formadas por una unidad (LH)2
. Las Inmunoglobulinas G son las inmunoglobulinas mas abundantes en el suero (600-
1800 mg/dL). Estas inmunoglobulinas promueven la fagocitosis en el plasma y activan al
sistema del complemento. Las IgG son el único tipo de anticuerpos que puede cruzar la
placenta. (1)
TRABAJO DE INVESTIGACIÓN BIBLIOGRÁFICA
PRECIPITACIÓN DE GAMMAGLOBULINAS
Los datos antecedentes sobre gammaglobulina datan a 1935, McKhann y colaboradores
publicaron un estudio en el que preparaban extractos de placenta con el fin de purificar
y concentrar el anticuerpo contra el sarampión y demostraron que el extracto era eficaz
en la prevención o modificación de la enfermedad. Este fue el primer antecedente del
uso clínico de la gammaglobulina. Los trabajos de Cohn y su grupo en 1940, reconocieron
la extensa experiencia del uso de plasma en diversas afecciones médicas, como
quemaduras, choque, profilaxis o en el tratamiento de ciertas enfermedades
infecciosas. Fue entonces que se demostró que estas preparaciones concentradas de
anticuerpos eran útiles contra enfermedades con diferentes. Casi una década después,
en 1952, Bruton publicó su experiencia con la administración de gammaglobulina, a un
paciente al que se aislaron ocho diferentes tipos de pneumococo. Estos hallazgos dieron
lugar a la primera administración de gammaglobulina en un paciente con deficiencia de
ésta. Se administraron 3.2 g de gammaglobulina (GG) vía subcutánea (SC). El estudio de
electroforesis mostró la presencia de gammaglobulina, que desapareció en un promedio
de seis semanas. Actualmente, esta inmunodeficiencia se conoce como
agammaglobulinemia de Bruton o agammaglobulinemia ligada a X, a fines de esté año
aún existían muchos problemas con la administración de este tipo de Igs ya que no
encontraban la dosis adecuada, no fue hasta 1966 donde se logró administrar via
intravenosa pero todavía no se resolvía la consistencia de IgG ya que está no era pura y
podía conllevar ciertos riesgos. El reto fue encontrar la manera de tratar químicamente
la gammaglobulina concentrada para que no formara agregados, no se activara el
complemento y, al mismo tiempo, dejara las porciones FC y Fab biológicamente intactas.
Este proceso llevó a que la gammaglobulina fuera tratada por diferentes métodos,
probando diferentes sustancias como el polipropilenglicol, sistemas enzimáticos,
manipulación de pH, Temperatura y combinaciones de estos con el fin de encontrar una
solución de manera estándar. Con ello probaron diferentes soluciones de Igs al 5% poco
estable, y aún activaba el sistema de complemento, una solución al 10% para vía IV y un
de 16,5% para vía subcutánea las cuales fueron más estables y eficientes. Por ultimo una
solución al 20% para administración vía sub cutánea existiendo 2 producto que difieren
por el estabilizaor de los cuales pueden mantenerse estable hast una temperatura de
25° y tiene la ventaja de poder administrarse cada tres o cuatro semanas. (2)
El material de partida para la obtención de la gammaglobulina (inmunoglobulina G
humana o IgG) de la invención procede de un pool de donaciones (superior a 1000) de
plasma humano formando una mezcla polivalente de actividades anticuerpo, cuyas
unidades individuales han sido testadas frente a los marcadores típicos de infecciosidad
(virus VIH, hepatitis B, C). La administración de la gammaglobulina puede efectuarse por
vía intramuscular, o más efectivamente por vía intravenosa. Esta segunda vía presenta
grandes ventajas terapéuticas con respecto a la primera, como es su mayor eficacia,
pero puede acarrear reacciones adversas graves. Sólo los productos obtenidos en unas
condiciones que no promuevan la desnaturalización y con un grado de pureza adecuado,
son aceptables por vía intravenosa. (3)
TRABAJO DE INVESTIGACIÓN BIBLIOGRÁFICA
que contiene empaquetadas las resinas, hasta agotar la solución, de forma tal
que la cantidad introducida, equivalente a material de partida inicial (fracción
II+III, preferentemente), se halla preferentemente entre 1 g-2,5 g por ml de
resinas. Una vez finalizada la carga de la solución, se lava la columna
preferentemente con 2,5 volúmenes hasta 4,5 volúmenes de columna de una
solución de fuerza iónica y pH similar a la solución del producto previamente
inyectada. (3)
d) Reducción del contenido de PEG en el efluente por ultrafiltración
El líquido efluente durante la carga y lavado, o excluido de columna (fracción no
adsorbida), se ultrafiltra con el fin de reducir el contenido de PEG y obtener la
adecuada concentración de proteína para llevar a cabo las posteriores etapas de
inactivación vírica. La membrana de ultrafiltración preferente tiene un corte
molecular nominal de 100 kDa, y preferentemente construida con polisulfona (o
sus derivados). Inicialmente la solución se ajusta a pH entre 5,0 y 5,5 por adición
de un ácido débil (por ejemplo acético diluido) y se mantiene a la temperatura
de 2ºC-8ºC, iniciándose la filtración a una presión transmembrana de entre 1,5
bar-2 bar, preferentemente. Después de reducir el volumen, preferentemente
hasta la mitad del inicial, se diafiltra preferentemente a volumen constante
empleando, preferentemente, entre 1-3 volúmenes de agua para inyección.
Luego, se lleva el pH de la solución a 4,0-4,8, y preferentemente entre 4,2-4,6,
por adición de un ácido mineral. La presión transmembrana se ajusta a un valor
inferior a 1,2 bar, y preferentemente entre 0,5 bar y 1,0 bar, y opcionalmente se
concentra de nuevo mediante reducción del volumen actual hasta la mitad. Se
diafiltra, preferentemente por adición de no menos de 3 volúmenes de una
solución que contiene un azúcar-alcohol, preferentemente sorbitol a la
concentración (p/v) de entre 2%-10% ajustado al pH de 4-5 con ácido acético.
Finalmente se concentra de proteína hasta el valor requerido, preferentemente
hasta una densidad óptica (a 280 nm) superior a 45 UA (unidades de absorción),
siendo posteriormente esterilizada por filtración, usando membrana absoluta de
0,22 micras, preferentemente. Opcionalmente, la solución esterilizada y
estabilizada puede conservarse durante largo período de tiempo a la
temperatura de 2ºC-8ºC.
Finalizado el eventual tratamiento a pH ácido, se lleva a 2ºC-8ºC y se alcaliniza la
solución por adición preferente de una base fuerte diluida alcanzando el pH un
valor comprendido entre 4,7 y 5,2. Se añade seguidamente un carbohidrato
como estabilizante, preferentemente un azúcar-alcohol y más preferentemente
sorbitol, a una concentración (p/p) final preferente de entre 25%-35%. (3)
TRABAJO DE INVESTIGACIÓN BIBLIOGRÁFICA
DISCUSIÓN
De acuerdo con l revisión bibliográfica revisada se encontró una gran variedad de
procedimientos para la obtención de gammaglobulinas de las cuales todas varían en sus
procesos pero tienen como base un método estándar que modifican de acuerdo a sus
criterios que sean mas factibles para obtener un producto de acuerdo a sus
conveniencia, es por ello que es importante conocer estos 4 métodos básicos los cuales
son utilizados como bases para la obtención de nuevos métodos de obtención de
gammaglobulinas los cuales se obtienen mediante la modificación de uno de ellos o de
la combinación de los mismos con la finalidad de obtener un producto de
gammaglobulinas de acuerdo a la necesidad del investigador, es así como se han dado
un gran número de invenciones en la extracción de las mismas.
Para la extracción adecuada gammaglobulinas es necesario adecuarse al método más
apropiado que el investigador elija ya que este es proceso demasiado complejo de
realizar ya que intervienen muchos factores los cuales pueden afectar el resultado del
producto como por ejemplo la temperatura adecuada, el Ph, los reactivos a utilizar, los
equipos a utilizar, los intervalos de tiempo, estado de la muestra, etc. Es por ello que se
debe conocer muy bien las propiedades y funciones de cada uno de ellos y utilizarlos
como corresponde con el objetivo de tener los resultados que se desee obtener.
TRABAJO DE INVESTIGACIÓN BIBLIOGRÁFICA
CONCLUSIONES
En este trabajo realizado en busca de información relaciona al tema se logró Aprender
y comprender los métodos y técnicas utilizados en la extracción de gammaglobulinas
las cuales tienen una gran importancia en el ámbito de la salud la cual es muy
requerida en algunos países del mundo.
La información encontrada ha sido de buena fuente ya que ha sido extraída de trabajos
de investigación, patentes, y estás son fuentes confiables porque están muy bien
referenciadas.
BIBLIOGRAFÍA
1 biochemistryquestions. Temas de Bioquimica. [Online]; 2009. Acceso 08 de 11de 2018.
. Disponible en: https://temasdebioquimica.wordpress.com/2009/05/26/inmunoglobulinas-
estructura-y-funcion/.
3 Debart TLHRGR. Google Patents. [Online]; 2001. Acceso 08 de 11de 2018. Disponible en:
. https://patents.google.com/patent/ES2295308T3/es?q=precipitaci%C3%B3n&q=gammaglo
bulinas&oq=precipitaci%C3%B3n+gammaglobulinas.