Escena del crimen: Perfil del DNA

Equipo 4
Cerdán Centeno Keyla Tamara, Franco Carrillo David, Martínez Ruiz María Fernanda, Ortiz Xaltenco
Leidi Laura, Sánchez Espinosa Sofía, Vazquez Ibarra Marlene Saranya
Laboratorio de Prácticas de Biología Molecular de la Célula 1. Facultad de Ciencias, UNAM CDMX

RESUMEN

Una de las técnicas de biología molecular, es la disposición del “Análisis de fragmentos de restricción
de longitud polimórfica (RFLPS)”, se utilizan para calcular la variación de la longitud de un fragmento
específico en el DNA entre distintos individuos (esto se realiza posteriormente de que es cortado con
enzimas de restricción). Para llevar a cabo dicho análisis se obtiene DNA de cualquier material
humano (semen, sangre, saliva, etc). En la presente práctica se simuló una prueba de DNA forense
planteándose así: “En un bar, se produce una pelea entre seis desconocidos, uno de ellos es
asesinado; en la escena del crimen se encontró un arma blanca con manchas hemáticas en el filo de
la navaja y en la empuñadura. Se demostró, por comparación del grupo sanguíneo, que estas
manchas pertenecían a dos personas diferentes…para determinar cuál de los dos sospechosos es el
homicida, se realizará un análisis de DNA para comparar la muestra hemática que se encuentre
presente en la empuñadura”. Así con el problema planteado se llevó acabó el análisis
correspondiente para identificar la muestra del DNA perteneciente al asesino.

INTRODUCCIÓN
Es una técnica inventada en 1984 por el
científico Inglés Alec Jeffreys durante la
investigación en enfermedades hereditarias.
Se utiliza para el análisis de modelos únicos en
el DNA en fragmentos para distinguir entre
organismos
Los fragmentos de restricción de longitud
polimórfica (RFLPs) son un tipo de
polimorfismo que resulta de la variación en la
secuencia de ADN reconocida por las enzimas
de restricción. Estas son enzimas bacterianas
que utilizan los científicos para cortar
moléculas de ADN en lugares conocidos. Los
RFLPs (se pronuncia "rif lips") y que se utilizan
como marcadores en los mapas genéticos. Por
lo general, para visualizar los RFLPs se utiliza
la electroforesis en gel.
Para comenzar con la técnica, el DNA se
extrae de sangre, de saliva o de otras
muestras y se purifica. El DNA purificado se
digiere usando las endonucleasas (enzimas
de la restricción). Los sitios de reconocimiento
de estas enzimas son generalmente 4 a 6
pares bajos de largo. Cuanto más corta es la
serie reconocida, mayor es el número de
fragmentos generados de la digestión. Los
fragmentos de la restricción producidos
durante la fragmentación de la DNA se
analizan usando electroforesis en gel.
1. Mp (muestra problema)
2. Sospechoso 1
3. Sospechoso 2
4. Sospechoso 3
5. Sospechoso 4
6. Sospechoso 5
Se colocó en cada uno 10 microlitros de
muestra de DNA y 10 de enzima EcoR1, se
mezcló, se centrifugó a máxima velocidad y se
incubó a 37°C durante 45 minutos.
Durante la incubación se procedió a preparar
el gel de agarosa al 1% en amortiguador TAE
1x, ya solidificado se colocó en la cámara de
electroforesis y se cargó con las muestras
previamente mezcladas con amortiguador de
carga con GelRed.
En el primer pozo se colocó el marcador de
masa molecular DNA. En el segundo la
muestra problema y así sucesivamente con los
sospechosos.
Una vez lista la cámara (cerrada y conectada
correctamente) se enciende la fuente de poder
y se deja correr a 100 Volts de 30 a 40
minutos. Transcurrido el tiempo se observa el
gel a través del transiluminador.

RESULTADOS

METODOLOGÍA
Se marcaron 6 tubos de la siguiente manera:

Ilustración 1. Perfil electroforético visto bajo un
transiluminador de luz ultravioleta, de diferentes muestras
de DNA en gel de agarosa. Las bandas del segundo carril
corresponden a la muestra hallada en la escena del
crimen, comparándolas con el corrimiento de las demás
se nota una evidente similitud con las del sospechoso 3,
tanto en número, posición y tamaño, por lo que se infiere
es el perpetrador.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Esta práctica fue una práctica temática en la
que se simuló un caso de la vida real. La
situación es la siguiente: hubo una pelea en un
bar, en la cual un hombre resultó dañado y
murió. En la escena del crimen se encontró un
cuchillo con la sangre de la víctima y la sangre
del agresor. Se tienen cinco sospechosos, a
los cuales se les tomó una muestra de DNA.
El objetivo de la práctica es determinar al
culpable de entre los sospechosos utilizando
técnicas aprendidas en el laboratorio de
biología molecular de la célula I. Para esta
práctica, vamos a llevar a cabo una de las
aplicaciones de las enzimas de restricción.
Las enzimas de restricción reconocen sitios
específicos en el DNA y cortan dichas
secuencias. Esto se hace reconociendo uno o
más sitios de 4 a 6 pares de bases llamados
sitios de restricción.
La enzima de restricción usada es: EcoRI, que
tiene un sitio de restricción,
Una vez se tenían las muestras de los
sospechosos se les agregaron las enzimas
para que comenzara la reacción enzimática.
Mientras tanto se preparó el gel de agarosa
para electroforesis de ácidos nucléicos y la
cámara de electroforesis, además del buffer de
corrida.
Una vez terminada la reacción enzimática, se
combinó cada muestra con el colorante
fluorescente para ácidos nucléicos, GelRed.
Se cargaron las muestras en el gel, que ya
estaba en la cámara de electroforesis y se dejó
correr a 120 V por 30 min.
Los resultados obtenidos se ven en la
ilustración 1, en la cual podemos notar las
bandas que se separaron durante la
electroforesis. Cada una de estas bandas,
representan fragmentos de DNA separados
por las enzimas de restricción.
El fundamento de esta técnica y esta práctica
se basa en el funcionamiento de dichas
enzimas. Estas, reconocen y cortan las
secuencias, dejando fragmentos de DNA con
diferentes tamaños. Como cada persona tiene
diferencias en las secuencias de su DNA,
estos fragmentos no son iguales de persona a
persona, puesto que los sitios de restricción no
están en las mismas posiciones en la cadena
de DNA. Solo una muestra de DNA de la
misma persona tendrá como resultado
fragmentos cortados de la misma longitud. Es
por eso que se le llama DNA fingerprint, o
‘huella dactilar de DNA’. De esta forma, los
fragmentos más pequeños de DNA se deslizan
más fácilmente a través del gel, llegando más
lejos y formando las bandas más lejanas. Por
el contrario, fragmentos grande tendrán más
dificultad y quedarán más cercanas a donde se
cargaron.
Revisando los resultados, solo hay, tenemos
que comparar la muestra problema, que
tenemos la seguridad de que pertenece al
asesino con las demás bandas. Solo hay una
muestra que tiene las mismas bandas y la
misma distancia entre estas, las del
sospechoso número 3.
CONCLUSIÓN
Como conclusión general/comentario,
aplicado a una escena del crimen real, lo que
sucedería con esta práctica desarrollada en
forma de artículo, se le llamaría dictamen, el
juez emitirá un juicio para declarar culpable al
sospechoso 3 (que es el que creemos que es
el perpetrador), antes de eso, la persona que
es criminalista (el que procesa el lugar) y da la
muestra (en este caso 6 muestras de 6
diferentes sospechosos), el juez pedirá que la
persona a cargo (biólogo), cumpla ciertos
objetivos, al tener los resultados anteriores, el
biólogo se encargaría de dar los resultados al
criminalista (dictamen terminado), se anexa a
una carpeta, y se requerirá que asista (biólogo)
a juicios orales, en donde se tendrá que asistir
por haber escrito el dictamen, el juez
preguntará qué se hizo, cómo se hizo, y los
resultados. El abogado a cargo buscará fallas
en la redacción y durante el proceso, en este
caso la descripción de los resultados al poner:
“una evidente similitud con las del sospechoso
3” es ahí, donde se atacará al biólogo a cargo,
porque el biólogo a cargo, siempre tiene que
afirmar, y no provocar dudas, el juez
preguntará la fiabilidad del método que se
ocupó y en que consistió, en esté caso sería el
Análisis de fragmentos de restricción de
longitud polimórfica (RFLPS) ya que el error
fue poner “una evidente similitud” él dirá ( el
juez) que solo se parece a una muestra del
sospechoso 3 pero que no coincide y es así
como el culpable saldría libre (sospechoso 3).

REFERENCIAS.

1. Cheriyedath, S. ( 2016), Técnica del

Polimorfismo de Longitud de Fragmento
(RFLP) de Restricción, recuperado el día:
27/05/2018 de: https://www.news-
medical.net/life-sciences/Restriction-
Fragment-Length-Polymorphism-(RFLP)-
Technique-(Spanish).aspx

2. Ruiz, C., Karen (2018), tía de María Fernanda

Martínez Ruiz (alumna), es estudiante en la
CLEU Colegio Libre de Estudios Universitarios
Campus 1.
3. Segal, C., & Ortega, J, G ( Año 2010), Manual
de prácticas de biología molecular de la célula 1,
Práctica 12: Escena del Crimen: Perfil del DNA,
(3a. edición), ISBN: 9786070212215, pp. 153. P.
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