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PÚBLICO “TRUJILLO”
LABORATORIO CLÍNICO IV
PROFESOR:
TEMA:
TRUJILLO – PERÚ
2018
I. INTRODUCCIÓN:
Los virus (en latín, ‘veneno’) son entidades orgánicas compuestas tan sólo de material
genético, rodeado por una envuelta o envoltura protectora. El término virus se utilizó en
la última década del siglo XIX para describir a los agentes causantes de enfermedades
más pequeños que las bacterias. Carecen de vida independiente, pero se pueden replicar
en el interior de las células vivas, perjudicando en muchos casos a su huésped en este
proceso. Los cientos de virus conocidos son causa de muchas enfermedades distintas en
los seres humanos, animales, bacterias y plantas (Encarta, 2003).
Los virus se pueden aislar e identificar durante el curso clínico de una enfermedad,
estableciéndose en esta forma el diagnóstico causativo. Si embargo, por lo general, el
diagnóstico específico no se puede hacer en los primeros días subsiguientes a la
infección; el resultado de muchas de las pruebas diagnósticas para las enfermedades
virales no se obtiene hasta que el paciente se ha recuperado o ha muerto (Pelczar y Reid,
1982).
Los procedimientos de laboratorio empleados en el diagnóstico de las enfermedades
virales en los seres humanos, incluyen los siguientes (Ingraham y cols., 1998):
Aislamiento e identificación del agente.
Medición del incremento de la cantidad de anticuerpos durante el curso de la
infección.
Examen histológico de los tejidos infectados.
Demostración de antígenos virales en las lesiones, por el uso de anticuerpos
marcados con fluoresceína o peroxidasa.
Exámenes en el microscopio electrónico de los líquidos de las vesículas o de
extractos de tejidos tratados con colorantes especiales.
Los virus también se pueden estudiar en animales de experimentación, desarrollo en
cultivos celulares y los huevos embrionados. Los huevos con embrión pueden ser
inoculados por varias vías. Después de la inoculación, los huevos se reincuban varios días
a 36 – 38 ºC y se examinan diariamente. La vías de inoculación son la membrana
corioalantoidea, en el saco vitelino, en el saco alantoideo y saco amniótico en donde se
observa el efecto del virus (Tortora, 1997; Jawtez y cols.; 1981).
Entre los lugares de inoculación tenemos:
Membrana Corioalantoidea: Se emplean embriones de 10 – 12 días y la
cantidad de inóculo es de 0,1 – 0,5 mL. Apropiada especialmente para el
aislamiento y cultivo de virus variolicos; virus de laringotraqueitis aviar y de la
enfermedad de Beyer (Pseudorrabia); que provocan focos o pústulas fácilmente
visibles.
Cavidad Alantoidea: Se emplean embriones de 9 – 12 días y la cantidad de
inoculo es de 0,1 – 0,2 mL. Entre los virus que desarrollan en el endodermo
alantoideo tenemos: peste, New Castle, virus de la bronquitisinfecciosa,
encefalitis equina occidental y oriental Venezuela, parotiditis. Ventaja:
simplicidad de la inoculación y toma de muestra
Cavidad Amniótica: Se emplean embriones de 7 – 15 días y la cantidad de
inoculo es de 0,1 – 0,2 mL. La edad de los mismos depende fundamentalmente
del tipo de virus o del estudio que se realiza.
Saco Vitelino: Se emplean embriones de 5 – 8 días de incubación y la cantidad
de inoculo es de 0,2 – 1 mL. Vía es sumamente adecuada para el aislamiento y
cultivo de los virus de enfermedades venéreas, neumonía y rickettsias. El vitelo
es empleado para la preparación de vacunas y como antígeno para reacciones
serológicas de los virus ya mencionados.
Vía Intravenosa: La membrana corialantoidea está irrigada por vasos
sanguíneos, es susceptible de inoculación para casos especiales, virus que
ocasionan cambios hematológicos; por ejemplo, virus de la Leucemia. Son
empleados embriones de 10 - 15 días y la cantidad de inoculo es de 0,02 -0,05
mL.
Vía Intracerebral (embrión): Se emplea embriones de 8 – 14 días,
específicamente para virus que producen alteraciones cerebrales: la rabia,
herpes, etc.; 0.01 – 0.02 ml
Los objetivos de la presente práctica son:
1. Conocer las vías de inoculación de virus en huevos embrionados.
2. Realizar una inoculación de una suspensión en una cavidad en un huevo
embrionado.
II. MATERIAL Y MÉTODOS:
2.1. Materiales:
2.1.1. Material biológico:
Embriones de pollo de 5 a 8 días de incubación.
Embriones de pollo de 9 a 11 días de incubación.
Embriones de pollo de 10 a 12 días de incubación.
2.1.2. Material de laboratorio:
Jeringas de tuberculina de 1mL.
Agujas Nº 22 de 1 pulgada.
Agujas Nº 22 de 1 ½ pulgada.
Agujas Nº 26 de ½ pulgada.
Tubos de 13 x 100 mm.
Punzón.
Taladro.
Bulbo de goma.
Aplicadores.
Parafina fundida o cinta adhesiva.
Lápiz marcador.
Porta huevos.
Ovoscopio.
Mechero.
Gradilla para tubos.
Placas Petri.
2.1.3. Reactivos:
Solución buffer fosfato (PBS).
Tintura de iodo.
2.1.4. Equipos de laboratorio:
Centrífuga.
2.2. Procedimiento:
2.2.1. Experimento Nº 01: Inoculación en la cavidad alantoidea:
Método Nº 1:
Con ayuda del ovoscopio:
- Verificar la viabilidad del embrión de 9 a 11 días de incubación.
- Ubicar la cámara de aire y marcar con lápiz un aspa en el centro
de ella (la cámara de aire se encuentra en le lado romo del
huevo).
- Manteniendo el huevo en posición vertical, con la cámara de
aire hacia arriba, localizar al embrión. La presencia de grandes
vasos sanguíneos y una zona oscura indican la posición del
embrión.
- Seleccionar una zona que esté libre de grandes vasos sanguíneos
y aproximadamente a 3 mm de la base de la cámara de aire
marcar un aspa, la cual constituirá el punto de inoculación.
Desinfectar las zonas marcadas, frotando con un aplicador
embebido con tintura de yodo y dejar secar. El área desinfectada
debe ser aproximadamente de 2 cm de diámetro.
Con un punzón desinfectado con tintura de iodo, perforar
cuidadosamente el cascarón en el centro de cada aspa.
Utilizando una jeringa de tuberculina de 1 mL, con aguja Nº 26 de
½ pulgada, introducir la aguja a través del orificio en el lado lateral
del huevo hasta una profundidad de aproximadamente ¼ de pulgada
(0,6 cm) e inyectar 0,1 a 0,2 mL del inóculo (PBS). Concluida la
inoculación, sacar la aguja y colocar la jeringa dentro de un tubo
estéril.
Sellar los orificios con parafina fundida o cinta adhesiva. En primer
lugar el orificio donde se hizo la inoculación.
Método Nº 2:
Con ayuda del ovoscopio:
- Verificar la viabilidad del embrión de 9 a 11 días de
incubación.
- Ubicar la cámara de aire y marcar con lápiz un aspa en el
centro de ella.
Desinfectar la zona marcada frotando un aplicador embebido de
tintura de yodo y dejar secar. El área desinfectada debe ser de
aproximadamente 2 cm de diámetro.
Con un punzón desinfectado con tintura de iodo, perforar
cuidadosamente el cascarón en el centro del aspa.
Utilizando una jeringa de tuberculina de 1 mL, con aguja Nº 22 de 1
pulgada, introducir la aguja perpendicularmente a través del orifico
hasta una profundidad de 5/8 de pulgada (1,6 cm) e inyectar 0,1 a
0,2 mL del inóculo (PBS). Concluida la inoculación, sacar la aguja
y colocar la jeringa dentro de un tubo estéril.
Sellar el orificio con parafina fundida o cinta adhesiva.
2.2.2. Experimento Nº 02: Cavidad Amniótica
Con ayuda del ovoscopio:
- Verificar la viabilidad del embrión de 9 a 11 días de
incubación.
- Ubicar la cámara de aire y marcar con lápiz un aspa en el
centro de ella.
- Localizar el embrión determinando su posición exacta (girar el
huevo, extremo romo hacia arriba, hasta que los grandes vasos
sanguíneos y una sombra oscura, indiquen la posición del
embrión).
- Marcar un aspa en la zona de la cámara de aire que está
directamente por encima del embrión.
Desinfectar la zona marcada frotando un aplicador embebido de
tintura de yodo y dejar secar. El área desinfectada debe ser de
aproximadamente 2 cm de diámetro.
Con un punzón desinfectado con tintura de iodo, perforar
cuidadosamente el cascarón en el centro del aspa.
Manteniendo el huevo en el ovoscopio. Con una jeringa de
tuberculina de 1 mL, con aguja Nº 22 de 1 ½ pulgada, introducir la
aguja
a
1. ¿Cuáles son los métodos que se emplean para estudiar los virus?
5. ¿Por qué las pruebas inmunológicas son los métodos más estudiados en las
infecciones virales?
6. ¿Se pueden utilizar toros tipos de huevos embrionados además de los de gallina?