Nte Inen 1500-2

Quito – Ecuador
NORMA NTE INEN 1500

TÉCNICA Segunda revisión
2017-09
ECUATORIANA
LECHE CRUDA. DETERMINACIÓN DE LA ADULTERACIÓN.

MÉTODOS DE ENSAYO CUALITATIVOS
RAW MILK. DETERMINATION OF ADULTERATION. QUALITATIVE TEST METHODS
ICS: 67.100 15
Páginas
NTE INEN 1500 2017-09
LECHE CRUDA
DETERMINACIÓN DE LA ADULTERACIÓN
MÉTODOS DE ENSAYO CUALITATIVOS
1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN
Esta norma establece los métodos de ensayo cualitativos para la determinación de la adulteración
de leche cruda.
Esta norma aplica a métodos de ensayo cualitativos para la detección de las siguientes
sustancias: formaldehído, peróxido de hidrógeno, hipocloritos y cloraminas, neutralizantes
alcalinos (óxidos, hidróxidos, carbonatos y bicarbonatos), componentes de amonio, urea, jabones
y detergentes, almidones y sacarosa, y gelatina.
2. REFERENCIAS NORMATIVAS
Los siguientes documentos, en su totalidad o en parte, son indispensables para la aplicación de

este documento. Para referencias fechadas, solamente aplica la edición citada. Para referencias
sin fecha, aplica la última edición (incluyendo cualquier enmienda).
NTE INEN-ISO 707, Leche y productos lácteos - Directrices para la toma de muestras
NTE INEN-ISO 3696, Agua para uso en análisis de laboratorio - Especificación y métodos de
ensayo
3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES
Para los efectos de esta norma, se adoptan las siguientes definiciones
3.1
leche cruda
Leche que no ha sido sometida a ningún tipo de calentamiento, es decir, su temperatura no ha
superado la de la leche inmediatamente después de ser extraída de la ubre (no más de 40°C).
[FUENTE: NTE INEN 9:2012, 3.2.1]
3.2
adulteración de leche cruda
Acto por el cual se altera la leche cruda, siendo privada en forma parcial o total, de sus elementos
útiles o característicos, reemplazándolos o no, por otros inertes o extraños de cualquier
naturaleza, para disimular u ocultar alteraciones o calidad deficiente.
4. TOMA DE MUESTRAS
La toma de muestras debe realizarse de acuerdo con NTE INEN-ISO 707 de manera que se
obtengan muestras representativas del producto.
5. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
La muestra de leche cruda debe homogeneizarse previo a la realización de cada ensayo.
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6. MÉTODOS PARA LA DETECCIÓN DE FORMALDEHÍDO
6.1 Método I: Prueba de Hehner
6.1.1 Reactivos y materiales
Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio
que cumpla con NTE INEN-ISO 3696.
NOTA. De aquí en adelante el agua de grado 1, grado 2 o grado 3 de uso para análisis de laboratorio se denominará
simplemente agua.
6.1.1.1 solución cloruro de hierro (III) (FeCl3) recién preparada
Diluir 1 g de cloruro de hierro en 100 mL de agua.
6.1.1.2 ácido tetraoxosulfúrico (VI) (ácido sulfúrico = H2SO4), concentración en fracción

volumétrica de 0,98 (98 % de H2SO4)
6.1.1.3 tubos de ensayo, 20 mL
6.1.1.4 pipetas graduadas, 2 mL
6.1.1.5 gotero
6.1.2 Procedimiento
6.1.2.1 A 2 mL de ácido sulfúrico (6.1.1.2) añadir una gota de la solución de cloruro de hierro
(6.1.1.1) y agitar.
6.1.2.2 Pipetear 2 mL de la muestra de leche cruda homogenizada y colocar en un tubo de

ensayo (6.1.1.3), añadir 2 mL del ácido sulfúrico con el cloruro de hierro (6.1.2.1) lentamente por
las paredes del tubo de ensayo.
PRECAUCIÓN: Si se agrega ácido sulfúrico desde la parte superior y no desde las paredes del
tubo de ensayo, puede quemar los sólidos de la leche y afectar al resultado final.
6.1.3 Expresión de los resultados
Reportar el resultado como positivo si existe una coloración púrpura en la interfase entre el ácido y
la leche.
6.2 Método II: Prueba del ácido cromotrópico
6.2.1.1 solución de ácido tetraoxosulfúrico (VI) (ácido sulfúrico = H2SO4), fracción volumétrica
de 0,72 (72 % de H2SO4)
6.2.1.2 solución saturada de ácido 4,5-dihidroxinaftaleno-2,7-disulfónico (ácido cromotrópico

= C10H8O8S2), en ácido sulfúrico
Disolver aproximadamente 500 mg de ácido cromotrópico en 100 mL de la solución de ácido

sulfúrico (6.2.1.1).
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6.2.3 Procedimiento
Pipetear 1 mL de la muestra de leche cruda y colocar en un tubo de ensayo (6.2.1.3), añadir 1 mL

de la solución saturada de ácido cromotrópico (6.2.1.2) mezclar bien y observar el color.
6.2.4 Expresión de resultados
Reportar el resultado como positivo si existe una coloración amarilla.
7. MÉTODOS PARA LA DETECCIÓN DE PERÓXIDO DE HIDRÓGENO
7.1 Método I: Arnold y Mentzer (óxido de vanadio)
7.1.1 Principio
El óxido de vanadio (V2O5) en presencia de ácido sulfúrico (H2SO4) reacciona con el peróxido de
hidrógeno (dióxido de hidrógeno (H2O2)), dando un compuesto de color rojo o rosado.
7.1.2.1 solución de ácido tetraoxosulfúrico (VI) (ácido sulfúrico = H2SO4), fracción volumétrica
de 0,98 (98 % de H2SO4)
Diluir 6 mL de ácido sulfúrico (7.1.2.1), en 94 mL de agua.
7.1.2.2 solución de pentaóxido de divanadio (óxido de vanadio = V2O5)
Pesar 1 g de óxido de vanadio y disolver en 100 mL de ácido sulfúrico diluido (7.1.2.1).
7.1.2.4 pipetas graduadas, 5 mL y 10 mL
7.1.3 Equipo
7.1.3.1 balanza electrónica
7.1.4 Procedimiento
7.1.4.1 Pipetear 10 mL de leche cruda en un tubo de ensayo (7.1.2.3), añadir de 10 a 20 gotas de

la solución de óxido de vanadio (7.1.2.2) y agitar.
Reportar el resultado como positivo si existe una coloración roja o rosada.
7.2 Método II: Yoduro de potasio y almidón
7.2.1 Principio
La catalasa natural de la leche destruye al peróxido añadido. El yoduro de potasio reacciona con el
peróxido de hidrógeno dando una coloración azul.
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7.2.2.1 solución de yoduro de potasio (KI)
Pesar 20 g de yoduro de potasio y disolver en agua hasta obtener un volumen de 100 mL. Esta
solución debe preparase en cada ensayo.
7.2.2.2 solución de (2R,3S,4S,5R,6R)-2-(hidroximetil)-6-[(2R,3S,4R,5R,6S)-4,5,6-trihidroxi-2-

(hidroximetil) oxan-3-il] oxi-oxano-3,4,5-triol (solución de almidón = (C6H10O5)n)
Pesar 1 g de almidón soluble, disolver en 20 mL de agua fría, luego colocar 55 mL de agua

caliente y someter a ebullición, enfriar, luego añadir agua hasta un volumen de 100 mL.
7.2.2.3 solución yoduro de potasio (7.2.2.1) – almidón (7.2.2.2), relación 1:1
Mezclar volúmenes iguales de la solución de yoduro de potasio (7.2.2.1) y de la solución de

almidón (7.2.2.2).
7.2.3 Procedimiento A
Pipetear 1 mL de leche cruda y colocar en el tubo de ensayo (7.2.2.4) y añadir 1 mL de la solución

de yoduro de potasio-almidón (7.2.2.3) y agitar.
7.2.4 Procedimiento B
Pipetear 1 mL de leche cruda y colocar en el tubo de ensayo (7.2.2.4) y añadir 1 mL de la solución

de yoduro de potasio (7.2.2.1) y agitar.
Reportar el resultado como positivo si existe una coloración púrpura, del procedimiento A.
Reportar el resultado como positivo si existe una coloración amarilla, del procedimiento B.
8. MÉTODO DE ENSAYO PARA LA DETECCIÓN DE HIPOCLORITOS Y CLORAMINAS
8.1 Principio
La presencia de hipocloritos (ClO−) o cloraminas (NH2Cl) en leche cruda son detectados por
acción del ácido clorhídrico (HCl) y yoduro de potasio (KI), se forma cloro libre, presentando
cambios de color dependiendo de su concentración.
8.2 Reactivos y materiales
8.2.1 solución de yoduro de potasio (KI)
Disolver 7,0 g de yoduro de potasio en 100 mL de agua. Esta solución debe preparase en cada
ensayo.
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8.2.2 solución de cloruro de hidrógeno (ácido clorhídrico = HCl)
A 200 mL de agua añadir con cuidado 100 mL de ácido clorhídrico, fracción volumétrica de 0,365 a
0,385 (36,5 % a 38,5 % de HCl).
8.2.3 solución de (2R,3S,4S,5R,6R)-2-(hidroximetil)-6-[(2R,3S,4R,5R,6S)-4,5,6-trihidroxi-2-

(hidroximetil) oxan-3-il] oxi-oxano-3,4,5-triol (solución de almidón = (C6H10O5)n)
Hervir 1 g de almidón soluble en 100 mL de agua. Enfriar antes de usar.
8.2.4 pipetas graduadas, 2 mL y 5 mL
8.2.5 tubos de ensayo, 20 mL
8.2.6 varillas de vidrio de extremo plano
8.3 Equipo
8.3.1 baño de agua con temperatura controlada
8.4 Procedimiento
8.4.1 Ensayo I
Pipetear 5 mL de leche cruda y colocar en un tubo de ensayo (8.2.5), añadir 1,5 mL de la solución
de yoduro de potasio (8.2.1), mezclar completamente y observar el color.
8.4.2 Ensayo II
Si no cambia de color, pipetear en un tubo de ensayo (8.2.5) 4 mL de la solución de ácido

clorhídrico (8.2.2), mezclar bien con una varilla de vidrio de extremo plano y observar el color de la
cuajada.
8.4.3 Ensayo III
Colocar en el baño de agua (8.3.1) a temperatura de 85 °C y dejar por 10 minutos (durante este
tiempo la cuajada sube a la superficie), enfriar rápidamente colocando el tubo en agua fría. Anotar
el color de la cuajada y del líquido.
8.4.4 Ensayo IV
Añadir de 0,5 mL a 1 mL de la solución de almidón (8.2.3) al líquido por debajo de la cuajada.

Observar el color inmediatamente.
8.5 Expresión de los resultados
La concentración de cloro libre puede determinarse a partir de la Tabla 1.
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TABLA 1. Reacciones de los diferentes ensayos para detectar la concentración de cloro

libre
Prueba Concentración de cloro libre

1 : 1 000 1 : 2 000 1 : 5 000 1 : 10 000 1 : 25 000 1 : 50 000
Ensayo I Marrón Amarillo Amarillo - - -
amarillento oscuro pálido
Ensayo II Marrón Amarillo Amarillo - - -
amarillento oscuro claro
Ensayo III Marrón Amarillo Amarillo Amarillo Amarillo amarillo
amarillento oscuro pálido
Ensayo IV Azul-púrpura Azul-púrpura Azul-púrpura Rojo oscuro- Rojo- Rojo pálido -
púrpura púrpura púrpura
9. MÉTODOS PARA LA DETECCIÓN DE NEUTRALIZANTES ALCALINOS
Existen diversas sustancias alcalinas que neutralizan al ácido láctico desarrollado por la
fermentación de la lactosa realizada por microorganismos específicos, dentro de estas sustancias
alcalinas están los carbonatos, hidróxidos, bicarbonatos y óxidos.
9.1 Método I: Prueba del ácido rosólico (aurina)
9.1.1 Principio
El ácido rosólico es un indicador de pH que tiene un rango de viraje entre 6,8 a 8,0. Esta prueba
es utilizada para detectar la presencia de hidróxidos, carbonatos, bicarbonatos de sodio o calcio
añadidos a la leche cruda.
9.1.2.1 solución de etanol (alcohol etílico = C2H5OH), fracción volumétrica 0,95 (95 % etanol)
Medir 95 mL de etanol absoluto en un matraz aforado de 100 mL y completar a este volumen

utilizando agua y mezclar bien.
9.1.2.2 solución de 4-[bis(p-hidroxifenil) metileno]-2,5- Ciclohexadieno-1-ona (ácido rosólico

= C19H14O3)
Pesar 100 mg de ácido rosólico en polvo y colocar en un balón aforado (9.1.2.5) y disolver en 30
mL de la solución de etanol (9.1.2.1) y completar con agua hasta 100 mL.
9.1.2.5 balones aforados, 100 mL
9.1.3 Equipo
9.1.4 Procedimiento
Pipetear 10 mL de leche cruda en un tubo de ensayo (9.1.2.3) y añadir 10 mL de la solución de

etanol (9.1.2.1). Añadir unas 2 a 3 gotas de la solución de ácido rosólico (9.1.2.2) y mezclar.
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Reportar el resultado como positivo si existe una coloración roja-rosada.
9.2 Método II: Prueba de rojo fenol
9.2.1 Principio
El método de rojo fenol es una prueba cualitativa que consisten en añadir a la muestra una
cantidad de solución de rojo de fenol; la formación de un color rojo intenso indica que sí existe
presencia de neutralizantes en la leche cruda.
9.2.2.1 solución de 4,4'-(1,1-Dióxido-3H-2,1-benzoxatiol-3,3-diil) difenol o fenolsulfonftaleina

(rojo fenol = C19H14O5S)
Pesar 0,05 g de rojo fenol y disolver en 7 mL de hidróxido de sodio (NaOH) 0,02 N y aforar a
100 mL con agua.
9.2.2.2 solución de hidrogencarbonato (IV) de sodio (bicarbonato de sodio = NaHCO3)
Pesar 5 g de bicarbonato de sodio y diluir con agua previamente hervida y fría, y luego completar
hasta 100 mL.
9.2.2.3 solución testigo de leche cruda
Agregar 2 mL de metanal (formol = CH 2O) al 37 % (fracción volumétrica de 0,37) en 1 L de leche

cruda, para conservar la muestra.
9.2.2.4 soluciones patrón de leche con bicarbonato de sodio
Medir las siguientes cantidades de la solución de bicarbonato de sodio (9.2.2.2) y colocar en

balones aforados y completar con leche hasta el volumen de 100 mL.
Balón aforado de 100 Solución de bicarbonato de % Bicarbonato de sodio

mL sodio 50 mg/mL en leche cruda
1 1 mL 0,05
2 2 mL 0,10
3 3 mL 0,15
NOTA. Estas soluciones deben conservarse en refrigeración y diariamente serán analizadas como patrón de
comparación.
9.2.2.7 balones aforados, 100 mL
9.2.2.8 micropipetas, 100 L
9.2.3 Procedimiento
Medir 5 mL de la muestra de leche cruda, añadir 5 mL de agua y 0,5 mL de la solución de rojo

fenol (9.2.2.1). Agitar suavemente y observar el color.
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Reportar el resultado como positivo si existe una coloración roja intensa.

NOTA. Comparar la coloración con las soluciones patrón.
10. MÉTODO DE ENSAYO PARA LA DETECCIÓN DE COMPONENTES DE AMONIO
10.1 Método I
10.1.1.1 solución de hidróxido de sodio (NaOH), 2 g/100 mL
10.1.1.2 solución de hipoclorito de sodio (NaClO), 2 g/100 mL
10.1.1.3 solución de fenol (C6H6O), fracción volumétrica 0,05 (5 % de C6H6O)
10.1.2 Equipo
10.1.2.1 baño de agua
10.1.3 Procedimiento
10.1.3.1 Pipetear 1,0 mL de leche cruda en un tubo de ensayo (10.1.1.4), añadir 0,5 mL de la
solución de hidróxido de sodio (10.1.1.1), 0,5 mL de la solución de hipoclorito de sodio (10.1.1.2) y
0,5 mL de la solución de fenol (10.1.1.3).
10.1.3.2 Calentar durante 20 segundos en un baño de agua hirviendo (10.1.2.1).
Reportar el resultado como positivo si existe una coloración azul oscuro, este color indica la
presencia de sulfato de amonio; un color rosa indica que la muestra está libre de sulfato de
amonio.
10.2 Método II. Reactivo de Nessler
10.2.1 Reactivos
que cumpla con NTE INEN-ISO 3696
10.2.1.1 reactivo de Nessler
10.2.1.1.1 Preparar las siguientes soluciones:
Solución A
Pesar 0,8 g de cloruro de mercurio (II) (HgCl2) y disolver en 15 mL de agua.
Solución B
Pesar 6 g de hidróxido de sodio (NaOH) y disolver en 15 mL de agua.
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Solución C
Pesar 0,6 g de yoduro de potasio (Kl) y disolver en 15 mL de agua.
10.2.1.1.2 Añadir en un balón aforado (10.2.1.3) la solución A y la solución B, mezclar bien. A esta
mezcla, añadir la solución C, mezclar y diluir el contenido con agua hasta alcanzar el volumen de
50 mL.
10.2.1.1.3 Decantar la capa inferior de la capa superior que es transparente, usando un embudo
de separación de vidrio (10.2.1.6), almacenar en una botella de vidrio bien cerrada.
10.2.1.2 matraces graduados, 50 mL
10.2.1.3 balón aforado, 50 mL
10.2.1.4 probetas, 50 mL
10.2.1.6 embudo de separación de vidrio
10.2.2 Equipo
Pipetear 5 mL de muestra de leche cruda en un tubo de ensayo (10.2.1.5), añadir 1 mL del

reactivo de Nessler (10.2.1.1) y mezclar bien el contenido del tubo. Observar el color.
La formación inmediata de un ligero color gris indica la presencia de una baja concentración de
compuestos de amonio.
11. MÉTODO DE ENSAYO PARA LA DETECCIÓN DE UREA
11.1 Principio
La urea (Diaminometanal, CON2H4) es un componente natural de la leche y forma una parte

importante de la proteína de la leche, la concentración de urea varía de entre 20 mg/100 mL a 70
mg/100 mL. Un contenido mayor a 70 mg/100 mL indica que fue añadida urea a la leche cruda. La
urea en leche cruda es detectada usando 4-Dimetilaminobenzaldehído (DMAB), el método se basa
en el principio de que la urea forma un complejo amarillo con DMAB en una solución poco ácida a
temperatura ambiente.
11.2.1 cloruro de hidrógeno (ácido clorhídrico = HCl), fracción volumétrica 0,355 (35,5 % de
HCl)
11.2.2 etanol (alcohol etílico = C2H5OH), fracción volumétrica 0,96 (96 % de etanol)
11.2.3 solución de 4-Dimetilaminobenzaldehído, (DMAB = C₉H₁₁NO)
Pesar 1,6 g de DMAB y disolver en 100 mL de etanol (11.2.2) y añadir 10 mL de ácido clorhídrico
(11.2.1).
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11.2.4 matraces graduados, 250 mL
11.3 Equipo
11.3.1 balanza electrónica
11.4 Procedimiento
Pipetear en un tubo de ensayo 1 mL de leche cruda y añadir 1 mL de la solución de DMAB.

Observar el color.
11.5 Expresión de resultados
Reportar el resultado como positivo si existe una coloración amarilla.
12. MÉTODO DE ENSAYO PARA LA DETECCIÓN DE JABONES Y DETERGENTES
12.1 Principio
El ácido alquil benceno sulfónico (ABS) o el detergente aniónico pueden estar presente en la leche
cruda debido a la adición intencional o debido a un lavado insuficiente de los materiales o equipos
de ordeño. El siguiente método se basa en la interacción iónica entre el detergente aniónico y un
colorante catiónico. Los detergentes aniónicos tienen una propiedad para formar un complejo con
tintes catiónicos. La solubilidad del colorante y del complejo “colorante-detergente” es menos
polar en comparación que el colorante solo. El método se realiza mediante la adición de solución
de colorante de azul de metileno y cloroformo a la leche cruda seguido de una centrifugación.
12.2.1 solución colorante de 3,7-bis (dimetilamino)-Cloruro de fenazationio-Cloruro de

tetrametiltionina (azul de metileno = C16H18N3ClS)
Disolver 12,5 mg de azul de metileno en 100 mL de agua. Proteger la solución de la luz directa del
sol.
12.2.2 triclorometano (cloroformo = CHCl3)
PRECAUCIÓN: El cloroformo es inflamable y tóxico al inhalar, se recomienda no pipetear

directamente con la boca.
12.3 Equipo
12.3.1 centrifugadora
12.4 Procedimiento
12.4.1 Pipetear 1 mL de la muestra de leche cruda en un tubo de ensayo (12.2.3). Añadir 1 mL de

solución de azul de metileno (12.2.1) y en seguida añadir 2 mL de cloroformo (12.2.2). Mezclar
durante unos 15 segundos y centrifugar aproximadamente a 115,19 rad/s (1 100 rpm) durante 3
min.
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12.4.2 Observar la intensidad del color azul en la capa inferior y superior.
12.5.1 La formación de un color azul intenso en la capa inferior indica la presencia de detergente
en la leche cruda.
12.5.2 La formación de un color azul intenso en la capa superior indica la ausencia de detergente
en la leche cruda.
13. MÉTODO PARA LA DETECCIÓN DE ALMIDONES Y SACAROSA
13.1 Método para detectar almidones
13.1.1.1 solución de iodo (I)
Disolver 2,6 g de yodo y 3 g de yoduro de potasio (KI) con suficiente cantidad de agua y completar
hasta el volumen de 200 mL
13.1.1.2 recipiente con agua y hielo
13.1.1.4 pipeta graduada, 5 mL
13.1.1.5 gotero
13.1.2 Equipo
13.1.2.1 fuente de calor
Pipetear 5 mL de leche cruda en un tubo de ensayo (13.1.1.3), someter a ebullición, enfriar en el

recipiente que contienen agua con hielo y agregar 5 gotas la solución de iodo (13.1.1.1).
Reportar el resultado como positivo si existe una coloración azul.
13.2 Método para detectar sacarosa: Seliwanoff Modificado
13.2.1 Principio
La fructosa en el azúcar de caña (sacarosa) reacciona con resorcinol en ácido clorhídrico para dar
color rojo.
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13.2.2.1 cloruro de hidrógeno (ácido clorhídrico = HCl), fracción volumétrica de 0,355 (35,5 %
de ácido clorhídrico)
13.2.2.2 solución de resorcinol (C6H4(OH)2)
Pesar 0,5 g de resorcinol (C6H4(OH)2) en aproximadamente 40 mL de agua. Añadir 35 mL de

ácido clorhídrico (13.2.2.1) y completar con agua hasta un volumen de 100 mL.
NOTA. Las escamas de resorcinol deben ser de color blanco.
13.2.3 Equipo
13.2.3.1 baño de agua
13.2.4.1 Pipetear 1 mL de leche cruda en un tubo de ensayo (13.2.2.4). Añadir 1 mL de la

solución de resorcinol (13.2.2.2) y mezclar.
13.2.4.2 Colocar el tubo de ensayo en un baño de agua (13.2.3.1) hirviendo durante 5 min.
Retirar el tubo y observar el color.
Reportar el resultado como positivo si existe una coloración rosada.
14. MÉTODO PARA LA DETECCIÓN DE GELATINA
14.1.1 solución de nitrato de mercurio (II) (Hg(NO3)2)
14.1.2 solución saturada de 2,4,6-Trinitrofenol (ácido pícrico = C6H2OH(NO2)3)
14.2 Procedimiento
14.2.1 Pipetear en un tubo de ensayo (14.1.3) 10 mL de leche cruda, y añadir 10 mL de la

solución de nitrato de mercurio (II) (14.1.1). Agitar la mezcla y añadir 20 mL de agua, agitar otra
vez, dejar en reposo 5 minutos y filtrar.
14.2.2 Si hay gelatina presente, el filtrado se verá opaco, no se conseguirá obtener un filtrado
más claro.
14.2.3 Pipetear en un tubo de ensayo una porción del filtrado y añadir un volumen igual de la
solución saturada de ácido pícrico (14.1.2). Se producirá una precipitación en función de la
cantidad considerable de gelatina, cantidades menores se mostrará una nubosidad.
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NOTA. El ensayo es aplicable también a otros productos lácteos, como productos fermentados, agrios, cultivos lácticos,
leches maduras, crema o mantequilla, crema de leche esterilizada, leche evaporada o queso requesón. Hay que tener
cuidado en reconocer el precipitado producido por el ácido pícrico al añadirse a los filtrados de nitrato de mercurio en
ausencia de gelatina. Las muestras con o sin cuajo y libres de gelatina, dan un precipitado distinto a lo anterior. Sin
embargo, estos precipitados difieren en características a los producidos por el ácido pícrico con gelatina. El precipitado
de gelatina-ácido pícrico estará finamente dividido, y será más apto para permanecer en suspensión, y se adherirá
firmemente al fondo del tubo de ensayo, el cual se enjuagará con dificultad. Los precipitados producidos por el ácido
pícrico en ausencia de gelatina son flóculos que se separarán fácilmente (dejando el suero prácticamente
transparente), no se adherirán a las paredes del tubo de ensayo y se eliminarán fácilmente enjuagando con agua.
Cuando la gelatina esté presente, el precipitado de ácido pícrico permanecerá en suspensión mucho después de que
se haya formado el precipitado floculante, con el paso del tiempo se encontrará que se adherirá firmemente al fondo y a
los lados del tubo de ensayo. Si la gelatina está presente en una concentración relativamente alta (1 %), el precipitado
de ácido pícrico será voluminoso y se asentará con bastante rapidez.
Reportar el resultado como positivo si existe una coloración amarilla en el precipitado.
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ANEXO A
(Informativo)
DETERMINACIÓN DE LA ADULTERACIÓN DE LECHE CRUDA CON LA UTILIZACIÓN DE

PRUEBAS RÁPIDAS DENOMINADAS “KITS”
Existen pruebas rápidas para la determinación de adulterantes en leche cruda, las cuales están
conformadas por un conjunto de reactivos y utensilios que siguiendo las instrucciones del
fabricante permiten conseguir el objetivo esperado. Estas pruebas rápidas, “KITS”, son usadas
como métodos de ensayos rápidos más no definitivos, siempre y cuando estos provean resultados
de medición apropiados y confiables para su uso previsto en la evaluación de la veracidad de los
resultados.
NOTA. Los resultados obtenidos con los métodos normalizados son determinantes en caso de litigio.
2017-601 14
NTE INEN 1500 2017-09
BIBLIOGRAFÍA
AOAC 931.08, Formaldhyde in Food
AOAC 957.08, Hydrogen Peroxide in Milk. Qualitative Color Test
AOAC 911.08, Hypochlorites and Chloramines in Milk. Colorimetric Method Procedure
AOAC 920.106, Gelatin in Milk and Milk products. Qualitative Test
FOOD SAFETY AND STANDARDS AUTHORITY OF INDIA (FSSI). Manual of methods of analysis
of foods - Milk and milk products. MINISTRY OF HEALTH AND FAMILY WELFARE
GOVERNMENT OF INDIA. NEW DELHI 2016. P 7-28. Disponible en:
http://old.fssai.gov.in/Portals/0/Pdf/Manual_Milk_25_05_2016.pdf [Consulta: 2016-10-17]
IS 1479-2:1961, (Reaffirmed 2009) Methods of test for dairy industry - Part II chemical analysis of
milk. Disponible en: https://law.resource.org/pub/in/bis/S06/is.1479.2.1961.pdf [Consulta: 2016-10-
17]
IS 1470-1:1960, (Reaffirmed 2003) Methods of test for dairy industry – Part I Rapid examination of
milk. Disponible en: https://law.resource.org/pub/in/bis/S06/is.1479.1.1960.pdf [Consulta: 2016-10-
17]
PEE/CL/017, Procedimiento específico de ensayo. “Determinación de neutralizantes mediante la

prueba de rojo fenol”. AGENCIA ECUATORIANA DE ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DEL
AGRO (AGROCALIDAD). Revisión 1. 2015
2017-601 15
INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA
Documento: TÍTULO: LECHE CRUDA. DETERMINACIÓN DE LA Código ICS:

NTE INEN 1500 ADULTERACIÓN. MÉTODOS DE ENSAYO CUALITATIVOS 67.100
Segunda revisión
ORIGINAL: REVISIÓN:
Fecha de iniciación del estudio: La Subsecretaría de la Calidad del Ministerio de Industrias
y Productividad aprobó este proyecto de norma
Oficialización con el Carácter de Voluntaria
por Resolución No. 11 139 de 2011-05-20
publicado en el Registro Oficial No. 481 de 2011-06-30
Fecha de iniciación del estudio: 2016-07-21
Fechas de consulta pública: Desde 2016-08-09 hasta 2016-10-07
Comité Técnico de Normalización: Leche y Productos Lácteos

Fecha de iniciación: 2016-10-24 Fecha de aprobación: 2017-03-14
Integrantes del Comité:
NOMBRES: INSTITUCIÓN REPRESENTADA:
Ana Nieto (Presidenta) ARCSA

Mónica Quinatoa MSP
Homero Arteaga LA HOLANDESA
América Fey REYLECHE
Andrea Arboleda MIPRO
Paúl Bohóquez AGROCALIDAD
Mayra García AGROCALIDAD
Eder Ocaña Jara INIAP
Santiago León PROFESIONAL INDEPENDIENTE
Margoth Casco (Secretaria Técnica) INEN
Otros trámites: Esta NTE INEN 1500:2017 (Segunda revisión) reemplaza a la NTE INEN 1500:2011
(Primera revisión).
La Subsecretaría de la Calidad del Ministerio de Industrias y Productividad aprobó este proyecto de
norma.
Oficializada como: Voluntaria Por Resolución No. 17428 de 2017-08-07

Registro Oficial No. 75 de 2017-09-08
Servicio Ecuatoriano de Normalización, INEN - Baquerizo Moreno E8-29 y Av. 6 de Diciembre
Casilla 17-01-3999  Telfs: (593 2)3 825960 al 3 825999
Dirección Ejecutiva: direccion@normalizacion.gob.ec
Dirección de Normalización: consultanormalizacion@normalizacion.gob.ec
Centro de Información: centrodeinformacion@normalizacion.gob.ec
URL:www.normalizacion.gob.ec

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Quito – Ecuador

NORMA NTE INEN 1500

LECHE CRUDA. DETERMINACIÓN DE LA ADULTERACIÓN.

RAW MILK. DETERMINATION OF ADULTERATION. QUALITATIVE TEST METHODS

1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN

Los siguientes documentos, en su totalidad o en parte, son indispensables para la aplicación de

Para los efectos de esta norma, se adoptan las siguientes definiciones

[FUENTE: NTE INEN 9:2012, 3.2.1]

La muestra de leche cruda debe homogeneizarse previo a la realización de cada ensayo.

6. MÉTODOS PARA LA DETECCIÓN DE FORMALDEHÍDO

6.1 Método I: Prueba de Hehner

6.1.1 Reactivos y materiales

6.1.1.1 solución cloruro de hierro (III) (FeCl3) recién preparada

Diluir 1 g de cloruro de hierro en 100 mL de agua.

6.1.1.2 ácido tetraoxosulfúrico (VI) (ácido sulfúrico = H2SO4), concentración en fracción

6.1.1.3 tubos de ensayo, 20 mL

6.1.1.4 pipetas graduadas, 2 mL

6.1.2.2 Pipetear 2 mL de la muestra de leche cruda homogenizada y colocar en un tubo de

6.1.3 Expresión de los resultados

6.2 Método II: Prueba del ácido cromotrópico

6.2.1 Reactivos y materiales

6.2.1.2 solución saturada de ácido 4,5-dihidroxinaftaleno-2,7-disulfónico (ácido cromotrópico

Disolver aproximadamente 500 mg de ácido cromotrópico en 100 mL de la solución de ácido

6.2.1.3 tubos de ensayo, 20 mL

6.2.1.4 pipetas graduadas, 5 mL

Pipetear 1 mL de la muestra de leche cruda y colocar en un tubo de ensayo (6.2.1.3), añadir 1 mL

6.2.4 Expresión de resultados

Reportar el resultado como positivo si existe una coloración amarilla.

7. MÉTODOS PARA LA DETECCIÓN DE PERÓXIDO DE HIDRÓGENO

7.1 Método I: Arnold y Mentzer (óxido de vanadio)

7.1.2 Reactivos y materiales

Diluir 6 mL de ácido sulfúrico (7.1.2.1), en 94 mL de agua.

7.1.2.2 solución de pentaóxido de divanadio (óxido de vanadio = V2O5)

Pesar 1 g de óxido de vanadio y disolver en 100 mL de ácido sulfúrico diluido (7.1.2.1).

7.1.2.3 tubos de ensayo, 20 mL

7.1.2.4 pipetas graduadas, 5 mL y 10 mL

7.1.3.1 balanza electrónica

7.1.4.1 Pipetear 10 mL de leche cruda en un tubo de ensayo (7.1.2.3), añadir de 10 a 20 gotas de

7.1.5 Expresión de resultados

Reportar el resultado como positivo si existe una coloración roja o rosada.

7.2 Método II: Yoduro de potasio y almidón

7.2.2 Reactivos y materiales

7.2.2.1 solución de yoduro de potasio (KI)

7.2.2.2 solución de (2R,3S,4S,5R,6R)-2-(hidroximetil)-6-[(2R,3S,4R,5R,6S)-4,5,6-trihidroxi-2-

Pesar 1 g de almidón soluble, disolver en 20 mL de agua fría, luego colocar 55 mL de agua

7.2.2.3 solución yoduro de potasio (7.2.2.1) – almidón (7.2.2.2), relación 1:1

Mezclar volúmenes iguales de la solución de yoduro de potasio (7.2.2.1) y de la solución de

7.2.2.4 tubos de ensayo, 20 mL

7.2.2.5 pipetas graduadas, 1 mL

Pipetear 1 mL de leche cruda y colocar en el tubo de ensayo (7.2.2.4) y añadir 1 mL de la solución

Pipetear 1 mL de leche cruda y colocar en el tubo de ensayo (7.2.2.4) y añadir 1 mL de la solución

7.2.5 Expresión de resultados

8. MÉTODO DE ENSAYO PARA LA DETECCIÓN DE HIPOCLORITOS Y CLORAMINAS

8.2 Reactivos y materiales

8.2.1 solución de yoduro de potasio (KI)

8.2.2 solución de cloruro de hidrógeno (ácido clorhídrico = HCl)

8.2.3 solución de (2R,3S,4S,5R,6R)-2-(hidroximetil)-6-[(2R,3S,4R,5R,6S)-4,5,6-trihidroxi-2-

Hervir 1 g de almidón soluble en 100 mL de agua. Enfriar antes de usar.

8.2.4 pipetas graduadas, 2 mL y 5 mL

8.2.5 tubos de ensayo, 20 mL

8.2.6 varillas de vidrio de extremo plano

8.3.1 baño de agua con temperatura controlada

Si no cambia de color, pipetear en un tubo de ensayo (8.2.5) 4 mL de la solución de ácido