Artikel Ilmiah STIFAR Riau 2017

UJI TOKSISITAS SUBKRONIS EKSTRAK ETANOL

KULIT BUAH SALAK PONDOH (Salacca affinis Griff.) TERHADAP
KADAR BLOOD UREA NITROGEN (BUN) DAN HISTOLOGI GINJAL
MENCIT PUTIH (Mus musculus L.) JANTAN

Toxicity Test of Subchronic Ethanol Skin Fruit Extract

of Pondoh Snake Fruits (Salacca affinis Griff.) Toward on
The Blood Urea Nitrogen (BUN) levels and Renal Histology
of White Mice (Mus musculus L.) Males
Ade Syafarullah1, Nofri Hendri Sandi1*
1
Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Pekanbaru, 28928

ABSTRAK

Telah dilakukan penelitian mengenai uji toksisitas subkronis ekstrak etanol kulit buah salak pondoh (Salacca affinis Griff.) terhadap kadar Blood
Urea Nitrogen (BUN) dan histologi ginjal mencit (Mus musculus L.) jantan. Percobaan terdiri dari 4 kelompok, satu kelompok kontrol yang diberikan
Na CMC 1% dan tiga kelompok uji yang diberikan ekstrak etanol kulit buah salak pondoh (Salacca affinis Griff.) dengan dosis 200, 400, dan 800
mg/kgBB. Parameter uji meliputi perubahan berat badan, rasio berat organ ginjal, kadar Blood Urea Nitrogen (BUN) dan histologi ginjal. Pengukuran
kadar Blood Urea Nitrogen (BUN) dilakukan dengan metoda Urease – Glutamat Dehidrogenase Enzymatic UV Test menggunakan alat fotometer
(Mindray@ BA-88A) pada panjang gelombang 340 nm. Preparat histologi ginjal dibuat menggunakan metode parafin dengan pewarnaan
hematoksilin dan eosin. Kadar Blood Urea Nitrogen (BUN) , rasio berat organ ginjal, persentase kerusakan glomerulus dan pengukuran diameter
glomerulus dianalisis dengan analisis statistik ANOVA satu arah dan perubahan berat badan dengan statistik ANOVA dua arah. Kadar Blood Urea
Nitrogen (BUN) dan rasio berat organ ginjal pada kelompok dosis 200,400, dan 800 mg/kgBB tidak berbeda signifikan (p>0,05) terhadap kontrol.
Perubahan berat badan pada dosis 200 mg/kgBB tidak berbeda signifikan (p>0,05) terhadap kontrol, tetapi dosis 400 dan 800 mg/kgBB berbeda
signifikan (p<0,05) terhadap kontrol dan dosis 200 mg/kgBB. Hasil pengamatan preparat histologi menunjukkan persentase kerusakan dan diameter
glomerulus baik ginjal kanan maupun kiri dosis 800 mg/kgBB menunjukkan perbedaan yang signifikan (p<0,05) terhadap kontrol. Pengamatan
histopatologi organ ginjal kelompok kontrol dan dosis 200 mg/kgBB struktur glomerulus dan ruang bowman normal. Sedangkan dosis 400 mg/kgBB
struktur glomerulus dan ruang bowman masih dapat dikatakan normal, meskipun terjadi sedikit kerusakan. Pada dosis 800 mg/kgBB struktur
glomerulus mengalami pembesaran sehingga ruang bowman terlihat terjadi penyempitan. Untuk setiap dosis menunjukkan tubulus proksimal dan
tubulus distal normal.

Kata Kunci : Toksisitas Subkronis, Kulit Buah Salak Pondoh (Salacca affinis Griff.), Blood Urea Nitrogen (BUN), Histologi Ginjal

ABSTRACT

The research was done about subchronic toxicity test of ethanol extract of snake fruits skin (Salacca affinis Griff.) toward on the blood urea nitrogen
(BUN) levels and renal histology of white mice (Mus musculus L.) males. The experiment consist of 4 groups that was gave ethanol extract of snake
fruits skin (Salacca affinis Griff.) with control group was gave 1% of Na CMC and doses of 200, 400, and 800 mg/kgBB. Parameter test include of
weight changed, renal weight ratio, blood urea nitrogen (BUN) levels and renal histology. Measurement of blood urea nitrogen (BUN) levels done by
test method with photometric Urease-Glutamat Dehidrogenase method using mindray@ and photometers instrument (Mindray@ BA-88A) at the
wave’s length 340 nm. Histology of preparat made by using paraffin method and done coloring hematoxylin and eosin. Blood urea nitrogen (BUN)
levels, renal weight ratio, percentage glomerular damage and glomerular diameter measurement analyzed by one-way ANOVA statistics and weight
changed by two-way ANOVA statistic. Blood Urea Nitrogen (BUN) levels and renal weight ratio in dose group 200, 400, and 800 mg/kgBB were not
significantly different (p>0.05) to control. Weight changed of the doses 200 mg/kgBB did not significantly different (p>0.05) towards control, but
doses 400 and 800 mg/kgBB significantly different (p<0.05) towards control and doses 200 mg/kgBB. The result of histological preparation showed
that the percentage of glomerular damage and glomerular diameter in right and left of renal at doses 800 mg/kgBB was significantly different
(p<0.05) towards control. Histopathological observation of renal organs in the control group and doses 200 mg/kgBB showed normal glomerular and
bowman space. While the doses group of 400 mg/kgBB the glomerular structure and bowman space still showed normal, although there is little
damage. At doses of 800 mg/kgBB the glomerular structure undergoes an enlargement, so that the bowman space appears to be constricted. In
general, proximal and distal tubules appear normal at all test doses.

Keywords: Toxicity of Subchronic, Skin Fruit of Snake Fruits (Salacca affinis Griff.), Blood Urea Nitrogen (BUN), Renal Histology

PENDAHULUAN jamu dalam berbagai macam pengobatan (Agoes,

Pengobatan dengan bahan alam (tanaman, 2007). Perkembangan menunjukkan bahwa
hewan, mineral) telah dikenal sejak awal keberadaan penggunaan obat-obatan alami ini cenderung semakin
manusia. Di Indonesia, kita mengenal penggunaan meningkat seiring timbulnya berbagai pengaruh buruk

*Corresponding Author: Nofri Hendri Sandi

Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau,
Email: nofhensan@yahoo.com
Telp. +6285355848355

penggunaan obat kimiawi sintesis (Prasetyo dan
Inorah, 2013).
Indonesia memiliki kekayaan alam yang
melimpah, terutama dari jumlah tanaman obat. Namun,
sebagian besar tanaman obat tersebut belum dibuktikan
secara ilmiah. Salah satu tanaman obat tersebut adalah
salak. Di Indonesia terdapat beberapa jenis salak yang
meliputi salak pondoh (Salacca affinis Griff), salak
Bali (Salacca amboinensis Becc.) dan salak Padang
Sidempuan (Salacca sumatrana (Becc.). Salak
merupakan buah khas Indonesia yang mudah diperoleh
dan termasuk buah yang disukai masyarakat. Salak
tidak hanya untuk dimakan daging buahnya saja, tetapi
bagian lain dari buah ini dapat dimanfaatkan juga oleh
masyarakat seperti kulit buah (Nazaruddin dan
Kristiawati, 1992).
Beberapa penelitian terdahulu yang telah
dilakukan bahwa ekstrak etanol kulit buah salak
pondoh (Salacca affinis Griff.) terbukti memberikan
efek farmakologi yang diarahkan menjadi sediaan
herbal terstandar. Penelitian yang dilakukan oleh
Harahap (2014) ekstrak etanol kulit buah salak pondoh
(Salacca affinis Griff.) memiliki kandungan senyawa
metabolit sekunder yang terdiri atas senyawa alkaloid,
fenolik, flavonoid, terpenoid, dan saponin. Dalam
penelitiannya juga disebutkan bahwa ekstrak etanol
kulit buah salak pondoh tersebut memiliki efek
farmakologi yang mampu menurunkan kadar glukosa
darah mencit putih (Mus musculus L.) jantan pada
dosis 200, 300 mg/kgBB secara signifikan (p<0,05)
yang diinduksi oleh aloksan. Sedangkan fraksi etil
asetat dan fraksi butanol kulit buah salak pondoh
(Salacca affinis Griff.) juga mampu menurunkan kadar
glukosa darah pada dosis 100, 200, 300 mg/kgBB
(Rahmawati, 2014; Sari, 2014).
Penelitian oleh Kanon dkk, (2012)
membuktikan bahwa, ekstrak etanol kulit buah salak
pondoh dengan dosis 150 mg/kgBB dapat menurunkan
kadar glukosa darah tikus putih jantan galur wistar
(Rattus norvegicus L.) yang diinduksi oleh sukrosa.
Selain itu juga, ekstrak etanol kulit buah salak pondoh
memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC50 sebesar
229,27 ± 6,35 µg/mL (Fitrianingsih, 2014).
Pendekatan penilaian keamanan obat dapat
dilakukan dengan uji toksisitas. Pengujian keamanan
toksisitas terdiri dari uji toksisitas akut, toksisitas
subkronis dan toksisitas kronis (Priyanto, 2009). Pada
penelitian sebelumnya telah dilakukan pengujian
toksisitas akut ekstrak etanol, fraksi etil asetat dan
fraksi butanol kulit buah salak pondoh (Salacca affinis
Griff,) dengan nilai LD50 diatas 5000 mg/kgBB yang
tidak menyebabkan kematian pada mencit putih (Mus
musculus L.) jantan (Kartina, 2015; Ulum, 2015; Yuni,
2015). Sedangkan pada penelitian uji toksisitas
subkronis ekstrak etanol kulit buah salak pondoh
(Salacca affinis Griff.) telah dilakukan terhadap mencit
putih (Mus musculus L.) jantan dengan parameter yang
diamati berupa pengaruh terhadap nilai SGOT (Serum
Glutamic Oxaloacetic Transaminase) dan SGPT
(Serum Glutamic Pyruvic Transaminase)
Artikel Ilmiah STIFAR Riau 2017
menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan
terhadap kontrol pada dosis 600 dan 900 mg/kgBB
(p<0,05). Akan tetapi, pada dosis 300 mg/kgBB
menunjukkan perbedaan yang tidak signifikan (p>0,05)
(Dewi, 2015).
Uji toksisitas ini bertujuan untuk memberikan
informasi terkait efek toksik yang ditimbulkan akibat
paparan zat tertentu terhadap organ vital hewan yang
bersangkutan, salah satunya adalah organ ginjal. Ginjal
memiliki fungsi untuk mengekskresikan senyawa asing
seperti obat, makanan, pestisida dan bahan-bahan
eksogen non nutrisi lainnya yang masuk ke dalam
tubuh. Dengan demikian, ginjal berpotensi dapat
dipengaruhi oleh senyawa toksik dalam dosis tinggi
(Price dan Wilson, 2005).
Pemeriksaan biokimia klinis untuk uji
toksisitas subkronis terhadap fungsi ginjal meliputi
Blood Urea Nitrogen (BUN), kreatinin, total-bilirubin.
Sedangkan parameter utama minimal yang harus
dilakukan adalah pemeriksaan Blood Urea Nitrogen
(BUN) dan kreatinin (Anonim, 2014).
Blood Urea Nitrogen (BUN) merupakan
produk akhir nitrogen yang secara normal
diekskresikan kedalam urin dari metabolisme protein
(Price dan Wilson, 2005). Dalam beberapa keadaan
kadar BUN dapat mengalami peningkatan dalam darah
seperti hipovolemia, dehidrasi, gagal jantung kongestif,
infark miokard, mengkonsumsi protein yang tinggi,
dan gagal ginjal. Sedangkan kadar BUN menurun
terjadi karena kerusakan hati, hipervolemia, malnutrisi,
kehamilan dan sindrom nefrotik (Pagana dan Pagana,
2014). Maka dari itu, tingginya kadar BUN merupakan
indikasi adanya gangguan dari fungsi ginjal (Anonim
2014).
Pada penelitian ini juga akan dilakukan
pengamatan secara histologi ginjal. Dengan tujuan
memberikan gambaran pengaruh dari paparan zat
tertentu terhadap organ ginjal. Dimana histologi
mencakup semua aspek biologi jaringan yang berfokus
pada mekanisme susunan dan struktur sel dalam
mengoptimalkan fungsi yang spesifik untuk setiap
organ (Mescher, 2011).
Berdasarkan uraian diatas, maka peneliti
tertarik untuk melakukan penelitian tentang uji
toksisitas subkronis terhadap parameter Blood Urea
Nitrogen (BUN) dan histologi ginjal untuk mengetahui
pengaruh pemberian ekstrak etanol kulit salak pondoh
(Salacca affinis Griff) pada mencit putih (Mus
musculus L.) jantan selama 60 hari dengan
menggunakan dosis 200, 400 dan 800 mg/kgBB.
Disamping itu, adapun parameter histologi
ginjal yang akan diamati meliputi pengamatan
makroskopis dan mikroskopis. Pengamatan secara
makroskopis yang diamati adalah tekstur dan warna
ginjal, sedangkan secara mikroskopis terdiri dari
parameter kuantitatif dengan menghitung persentase
kerusakan glomerulus yang mengalami penyempitan
ruang filtrasi dan diameter glomerulus. Parameter
kualitatif dengan mengamati ruang bowman

(sempit/tidak sempit), tubulus proksimal (lisis/utuh),
dan tubulus distal (lisis atau/utuh).
METODOLOGI
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan pada saat penelitian
yaitu alat pengukur waktu, alat suntik, batang
pengaduk, beaker glass, blog plate, botol gelap,
corong, cover glass, erlenmeyer, fotometer (Mindray
BA-88A), gelas ukur, gunting bedah, hot plate,
inkubator, kaca objek, kaca arloji, kain kasa, kandang
hewan, kapas, kertas saring, kertas perkamen,
keranjang, kuas, label, lemari pendingin, meja bedah,
mikroskop Olympus BX-53, mikrotom, mortir dan
stamfer, parafin embedding center, pinset, pisau bedah,
pisau cutter, pipet mikro, pipet tetes, rotary tissue
processor, seperangkat alat destilasi, sentrifus, silet,
sonde oral, sudip, spatel, tabung reaksi, timbangan
analitik, timbangan hewan, tisu, tissue cassete, vaccum
rotary evaporator, vial, wadah pewarnaan, waterbatch.
Bahan yang digunakan pada saat penelitian
yaitu asam asetat anhidrat, asam klorida, asam sulfat
2N, asam sulfat (p), aquadest, canada balsem, etanol
absolut, etanol 70%, etanol 80%, etanol 96%, eosin,
formalin 10%, hematoksilin, kloroform, kloroform
amoniak, kulit buah salak pondoh, larutan besi (III)
klorida, logam magnesium, makanan standar mencit
(Pellet CP 552 Produksi PT. Chareon Pokphand
Indonesia), meyer albumin (gliserin + putih telur),
natrium carboximethyl cellulosa, natrium klorida
fisiologis, norit, parafin, reagen meyer, reagen urea
(Mindray BA-88A), xylol.
Pembuatan Ekstrak
Kulit buah salak dibersihkan dan
dikeringanginkan. Sampel yang sudah kering disortir
untuk menghilangkan kotoran yang terdapat selama
proses pengeringan. Kemudian sampel dirajang lalu
ditimbang berat keringnya. Sampel yang telah kering
tadi dimasukkan ke dalam botol yang berwarna gelap
lalu direndam dengan pelarut etanol yang telah
didestilasi hingga sampel terendam seluruhnya. Wadah
sampel disimpan pada temperatur kamar dan terlindung
dari cahaya matahari langsung. Proses perendaman
tersebut berlangsung selama 5 hari sambil sesekali
diaduk. Sari etanol disaring dan ampasnya dimaserasi
dengan cara yang sama selama 5 hari hingga 3 kali
pengulangan. Hasil maserasi dikumpulkan, kemudian
dipekatkan dengan vaccum rotary evaporator.
Persiapan Hewan Uji
Sebelum percobaan dimulai hewan
diaklimatisasi dahulu selama lebih kurang 7 hari untuk
pengadaptasian lingkungannya. Hewan uji yang
digunakan adalah mencit putih jantan (Mus musculus
L.) dengan berat rata-rata diatas 20 gram berat badan.
Hewan dikelompokkan menjadi empat kelompok, yaitu
kelompok kontrol, dosis 200 mg/kgBB, 400 mg/kgBB
dan 800 mg/kgBB. Pengelompokkan dilakukan secara
acak sedemikian rupa sehingga penyebaran berat badan
merata untuk semua kelompok dengan variasi berat
badan tidak lebih 20% dari rata-rata berat badan.
Artikel Ilmiah STIFAR Riau 2017
Monitoring kenaikan berat badan dilakukan seminggu
2 kali. Hewan ditimbang setiap hari untuk menentukan
volume sediaan uji yang akan diberikan.
Pengambilan Sampel Serum dan Organ Ginjal
Darah mencit diambil dengan cara memotong
pembuluh darah di leher, darah ditampung dengan
tabung reaksi dan dibiarkan selama 30 menit. Darah
disentrifus selama 10 menit dengan kecepatan 3000
rpm, serum dipisahkan. Selanjutnya, dilakukan
pembedahan untuk pengambilan organ ginjal kemudian
dilakukan pengamatan secara makroskopis,
penimbangan dan perendaman dengan Formalin 10%.
Pengukuran Kadar Blood Urea Nitrogen (BUN)
Metode pengukuran yang digunakan
berdasarkan metode “Urease - Glutamat
Dehidrogenase”: Enzymatic UV Test. Serum (bagian
yang jernih) dari darah yang telah diperoleh dipipet
sebanyak 5 L lalu dimasukkan kedalam tabung reaksi
kemudian dicampur dengan reagen 1 sebanyak 500 L
dan inkubasi selama 2 menit pada suhu 370C.
Kemudian tambahkan reagen 2 sebanyak 125 L lalu
dihomogenkan. Campuran diinkubasi selama 30 detik
pada suhu 370C, setelah itu baca nilai absorbansi yang
terlihat 1–2 menit. Pengukuran yang dilakukan dengan
menggunakan alat fotometer (Mindray BA-88A) pada
panjang gelombang 340 nm. Hasil pengukuran yang
diperoleh yaitu kadar urea. Untuk mendapatkan kadar
Blood Urea Nitrogen (BUN), kadar urea harus
dikonversikan menjadi BUN dengan faktor
konversinya. Adapun perhitungan faktor konversi
sebagai berikut:
Urea [mg/dL] x 0,467 = BUN [mg/dL] (BUN: Blood
Urea Nitrogen)
Pembuatan Preparat Histologi dan Pewarnaan
Setelah dilakukan pembedahan terhadap
hewan uji organ ginjal diamati secara makroskopis
yaitu warna dan tekstur organ ginjal. Preparat histologi
dibuat menggunakan metode parafin dengan
pewarnaan hematoksilin dan eosin. Pembuatan preparat
histologi dengan metoda parafin ini terdapat beberapa
tahapan kerja yaitu fiksasi dan pemotongan, dehidrasi,
penjernihan (clearing), infiltrasi, penanaman
(embedding), penyayatan (sectioning), pewarnaan
(staining) dan penutupan (mounting). Setelah
pembuatan preparat histologi selesai, maka dilanjutkan
dengan pemeriksaan preparat histologi di bawah
mikroskop cahaya Olympus BX-53.Secara mikroskopis
ada dua parameter yaitu kualitatif dan kuantitatif.
Parameter kualitatif dengan mengamati ruang bowman
(sempit/tidak sempit), tubulus proksimal (lisis/utuh),
dan tubulus distal (lisis atau/utuh) sedangkan parameter
kuantitatif dengan menghitung persentase kerusakan
glomerulus yang mengalami penyempitan ruang filtrasi
dan diameter glomerulus.
Analisis Data
Untuk mengevaluasi dan menganalisis data
hasil pengukuran kadar Blood Urea Nitrogen (BUN),
berat relatif organ ginjal, gambaran histologi ginjal
yang mewakili dari kontrol dan perlakuan data
persentase kerusakan glomerulus dan diameter
 Artikel Ilmiah STIFAR Riau 2017

glomerulus organ ginjal dapat dilakukan dengan
statistik Analysis of Variance (ANOVA) satu arah,
sedangkan pengamatan kenaikan berat badan dilakukan
dengan Analysis of Variance (ANOVA) dua arah. Jika
hasil analisis bermakna, maka analisis lanjut digunakan
statistik Wilayah Berganda Tukey (Tukey Multiple
Range Test).
HASIL DAN PEMBAHASAN
Ginjal merupakan salah satu organ vital yang
berpotensi dipengaruhi oleh toksikan atau senyawa
asing. Sebab organ ginjal memiliki fungsi ekskresi
yakni mengeluarkan toksikan yang masuk kedalam
tubuh. Toksikan tersebut dapat berasal dari makanan
yang dikonsumsi, pestisida dan bahan-bahan eksogen
non nutrisi lainnya serta obat-obatan (Price dan
Wilson, 2005). Dengan katakan lain, memungkinkan
fungsi dari organ ginjal akan terganggu dengan adanya
paparan toksikan yang melebihi batas kemampuan
organ ginjal untuk menjalankan aktivitas sebagaimana
mestinya.
Menurut Lu (2010), Parameter efek toksik
dapat juga dilihat dari mortalitas, pertambahan berat
badan dan rasio berat organ hati dan ginjal. Pengukuran
berat badan merupakan salah satu parameter penelitian
yang biasa digunakan untuk mengetahui kondisi fisik.
Berat badan mencerminkan gambaran kasar keadaan
kesehatan secara umum, sekaligus data penunjang yang
menggambarkan kesehatan pada hewan percobaan
(Nugroho, 2007).
31
30
29
28
Berat Badan (gram)
gizi seperti protein, lemak dan serat kasar. Sehingga
nutrisi mencit terpenuhi yang ditunjukkan dengan
pertambahan berat badan mencit.
Menurut Anonim (2014), salah satu parameter
utama yang harus dilakukan dalam pemeriksaan
biokimia klinis terhadap fungsi ginjal adalah nitrogen
urea atau lebih dikenal dengan Blood Urea Nitrogen
(BUN). Indeks klinis yang paling sering ditentukan
untuk memperkirakan fungsi ginjal bergantung pada
konsentrasi urea dalam serum. Peningkatan kadar BUN
berhubungan dengan penyakit/gagal ginjal,
penyumbatan saluran kemih akibat adanya batu ginjal,
gagal jantung kongestif, dehidrasi, komsumsi protein
yang berlebih dan lain-lain (Gowda, 2010). Apabila
kadar BUN melebihi 100 mg/dL maka menunjukkan
pada kerusakan dari fungsi ginjal. Sementara apabila
BUN mengalami penurunan disebabkan karena
kelebihan cairan, malnutrisi, kerusakan hati, kehamilan
dan sindrom nefrotik (Pagana and Pagana, 2014).
Pengukuran kadar Blood Urea Nitrogen
(BUN) menggunakan metode Urease Glutamat
Dehidrogenase (GLDH)- Enzymatic UV Test. Metode
ini dipilih karena memiliki sensitivitas dan spesifisitas
yang tinggi terhadap urea. Pengukuran yang dilakukan
dengan menggunakan alat fotometer (Mindray BA-
88A) pada panjang gelombang 340 nm (Anonim,
2014). Dalam penelitian ini untuk mendapatkan kadar
BUN, kadar urea yang merupakan hasil yang diperoleh
dari proses fotometri harus dikonversikan dengan cara
perhitungan faktor konversinya.
Tabel 1. Data Kadar Blood Urea Nitrogen (BUN)
BUN (mg/dL)
No. Hewan Dosis 200 Dosis 400 Dosis 800

27 Kontrol
mg/kgBB mg/kgBB mg/kgBB
26
25
1 21,165 19,741 33,172 25,235
Kontrol
24 2 18,316 27,270 25,032 23,607
Dosis 200 mg/kgBB
23
Dosis 400 mg/kgBB 3 29,509 30,527 34,597 36,428
22
Dosis 800 mg/kgBB
21 27,474 33,986 26,253 36,836
4
20
1 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 5 20,351 22,183 24,625 31,544
Waktu (Hari ke-) Rata- 23,363 26,741 ± 28,735 ± 30,730 ±
rata±SD ± 4,848 5,849 4,764 6,151
Gambar 1. Grafik Rata-rata Perubahan Berat Badan
Mencit Putih Jantan Selama 60 Hari 35 30,730
28.735
30 26.741
Hasil analisis statistik ANOVA dua arah 23.363
BUN (mg/dL)

25
menunjukkan ada perbedaan signifikan (p<0,05). 20 Kontrol
Berdasarkan hasil uji Tukey kelompok dosis 200 15
200 mg/kgBB
mg/kgBB tidak berbeda signifikan (p>0,05) terhadap 10
400 mg/kgBB
kelompok kontrol. Pada dosis 400 dan 800 mg/kgBB 5
menunjukkan hasil yang berbeda signifikan (p<0,05) 0 800 mg/kgBB
Kontrol 200 400 800
dibandingkan dengan kelompok kontrol dan dosis 200 mg/kgBB mg/kgBB mg/kgBB
mg/kgBB. Akan tetapi, secara umum memperlihatkan Perlakuan
kenaikan berat badan mencit.
Hal ini mungkin disebabkan karena
pertambahan berat badan pada suatu individu Gambar 2. Diagram Batang Kadar Blood Urea
dipengaruhi oleh faktor nutrisi (Mardiati dan Agung, Nitrogen (BUN) Mencit Putih (Mus musculus L.)
2016). Sebagaimana diketahui, pakan CP 552 yang Jantan
diberikan kepada hewan uji mengandung nutrisi atau Berdasarkan hasil analisis statistik ANOVA
satu arah diperoleh bahwa kadar blood urea nitrogen

(BUN) mencit putih (Mus musculus. L) jantan setelah
pemberian ekstrak etanol kulit buah salak pondoh
(Salacca affinis Griff.) dosis 200, 400 dan 800
mg/kgBB tidak berbeda signifikan (p>0,05) terhadap
kontrol. Kadar BUN yang diperoleh pada penelitian ini
masih berada dalam rentang normal untuk mencit
jantan yaitu 15-45 mg/dL (Gad, 2016).
Ginjal Kanan Ginjal Kiri
Gambar 3. Makroskopis organ ginjal kelompok
kontrol
Ginjal Kanan Ginjal Kiri
Gambar 4. Makroskopis organ ginjal kelompok dosis
200 mg/kgBB
Ginjal Kanan Ginjal Kiri
Gambar 5. Makroskopis organ ginjal kelompok dosis
400 mg/kgBB
Ginjal Kanan Ginjal Kiri
Gambar 6. Makroskopis organ ginjal kelompok dosis
800 mg/kgBB
Pengamatan secara makroskopis pada
kelompok kontrol, dosis 200, 400 dan 800 mg/kgBB
Artikel Ilmiah STIFAR Riau 2017
menunjukkan hasil yang normal, seperti berwarna
merah pekat dan memiliki tekstur yang licin baik untuk
ginjal kanan maupun kiri. Hasil yang diperoleh
tersebut, terlihat secara visual tidak ada kerusakan dari
jaringan organ ginjal akibat pemberian ekstrak etanol
kulit buah salak pondoh (Salacca affinis Griff.).
Hasil penentuan rasio berat organ ginjal
mencit jantan (Mus musculus L.) yang diberi ekstrak
etanol kulit buah salak pondoh (Salacca affinis Griff.)
diperoleh kelompok kontrol, dosis 200, 400 dan 800
mg/kgBB berturut-turut adalah 0,0136; 0,0142; 0,0145
dan 0,0149. Berdasarkan analisis statistik ANOVA satu
arah berat relatif organ ginjal pada dosis 200, 400 dan
800 mg/kgBB tidak memberikan perbedaan secara
signifikan (p>0,05) terhadap kontrol. Hal ini
menunjukkan bahwa ekstrak etanol kulit buah salak
pondoh (Salacca affinis Griff.) tidak mempengaruhi
rasio berat organ hati dan tidak menimbulkan efek
toksik yang terlihat nyata pada hewan uji.
0.0149
0.015
Rasio Berat Relatif Organ Ginjal
0.0145
0.0145
0.0142
0.014
0.0136 Kontrol
0.0135 200 mg/kgBB
400 mg/kgBB
0.013
800 mg/kgBB
0.0125
Kontrol 200 400 800
mg/kgBB mg/kgBB mg/kgBB
Perlakuan
Gambar 7. Diagram Batang Rasio Berat Organ Ginjal
Rata-rata Mencit Putih (Mus musculus L.) Jantan
Pengamatan histologi ginjal secara
mikroskopis dilakukan dengan cara pembuatan
preparat histopatologi ginjal dengan metode parafin.
Metode parafin merupakan suatu metode yang paling
umum digunakan karena pembuatannya lebih mudah
dan lebih cepat serta material kering dapat disimpan
lebih lama. Kelebihan metode ini adalah irisan jauh
lebih tipis dari pada menggunakan metode beku atau
metode seloidin. Tebal irisan dengan metode beku rata-
rata diatas 10 mikron, tetapi dengan metode parafin
tebal irisan dapat mencapai rata-rata 6 mikron
(Kiernan, 1981).
Pada pemeriksaan histologi ginjal dilakukan
pengamatan secara kuantitatif yaitu dengan
menghitung persentase kerusakan glomerulus.
Glomerulus merupakan bagian unit anatomi ginjal
yang menjalankan fungsi filtrasi. Glomerulus
bertanggungjawab sebagai ultrafiltrasi plasma melalui
serangkaian proses tertentu secara selektif (Anderson,
2009). Apabila ginjal mengalami kerusakan tetapi
fungsi ginjal masih dapat berfungsi dengan baik bisa
disebabkan karena jumlah nefron yang rusak lebih
sedikit dibandingkan nefron yang tidak mengalami
gangguan, sehingga nefron yang masih utuh
 Artikel Ilmiah STIFAR Riau 2017

mengambil alih fungsi nefron yang telah rusak. Hal ini Hasil persentase kerusakan glomerulus
menyebabkan ginjal masih dapat berfungsi dengan menunjukkan bahwa persentase kerusakan ginjal kiri
baik. Penyakit ginjal akan tampak secara klinis sampai lebih tinggi bila dibandingkan dengan persentase
terjadi penurunan fungsi ginjal yang bermakna kerusakan ginjal kanan. Perbedaan ini diduga karena
(O’Callaghan, 2006). secara anatomis ginjal kiri letaknya lebih tinggi dari
ginjal kanan (Irianto, 2012), sehingga aliran darah yang
40
35.545
mengandung zat toksik lebih banyak menuju ginjal
35 kiri. Hal inilah yang menyebabkan persentase
Persentase (%) Kerusakan Glomerulus

30.691
29.389 kerusakan ginjal kiri lebih tinggi.
30
25.404 Pemeriksaan secara kualitatif parameter yang
25 21,380 diamati adalah kondisi ruang bowman, tubulus
17,830
19.455 proksimal dan tubulus distal. Berdasarkan hasil
20 Persentase (%) Kerusakan
15,829 Glomerulus Ginjal Kanan pengamatan pada kelompok kontrol dan dosis 200
15
Persentase (%) Kerusakan mg/kgBB struktur glomerulus dan kondisi ruang
10
Glomerulus Ginjal Kiri bowman terlihat normal yang ditandai dengan tidak
terjadinya pembesaran dari struktur glomerulus
5 sehingga ruang bowman tidak mengalami
0
penyempitan. Pada dosis 400 mg/kgBB struktur
Kontrol 200 400 800 glomerulus sedikit mengalami pembesaran sehingga
mg/kgBB mg/kgBB mg/kgBB
Perlakuan
ruang bowman terlihat sedikit mengalami
penyempitan. Namun dalam hal ini kondisi dari
glomerulus masih dapat dikatakan normal, sebab ruang
Gambar 8. Diagram Batang Persentase (%) Kerusakan
bowman secara keseluruhan tidak mengalami
Glomerulus Organ Ginjal Kanan dan Kiri
penyempitan. Sedangkan pada dosis 800 mg/kgBB
Dari data yang diperoleh, persentase struktur glomerulus mengalami pembesaran sehingga
kerusakan glomerulus pada ginjal untuk kelompok ruang bowman mengalami penyempitan. Untuk
kontrol yaitu 15,829% (kanan) dan 17,830% (kiri); Tubulus proksimal dan tubulus distal pada kelompok
dosis 200 mg/kgBB 19,455% (kanan) dan 21,380% kontrol, dosis 200, 400 dan 800 mg/kgBB tidak
(kiri), 400 mg/kgBB 25,404% (kanan) dan 29,389% mengalami kerusakan/lisis dimana sel-sel dan lumen
(kiri), 800 mg/kgBB adalah 30,691% (kanan) dan tubulus terlihat utuh. Pada tubulus proksimal terlihat
35,545% (kiri). Berdasarkan hasil analisis ANOVA jelas sel-sel yang masih utuh dan adanya brush border
satu arah didapat bahwa persentase kerusakan pada lumen tubulus. Sedangkan pada tubulus distal
glomerulus organ ginjal mencit setelah pemberian terlihat sel-sel dan lumen tubulus dalam keadaan utuh.
ekstrak etanol kulit buah salak pondoh (Salacca affinis Disamping itu, untuk membedakan tubulus proksimal
Griff.) dosis 200 dan 400 mg/kgBB tidak berbeda dan tubulus distal yaitu pada lumen tubulus distal tidak
secara signifikan (p>0,05) terhadap kontrol, akan tetapi terdapat brush border.
dosis 800 mg/kgBB berbeda secara signifikan (p<0,05)
terhadap kontrol.
Hal ini bermakna bahwa pemberian ekstrak
etanol kulit buah salak pondoh (Salacca affinis Griff.)
pada dosis 200 dan 400 mg/kgBB tidak berpengaruh
terhadap persentase kerusakan glomerulus organ ginjal
mencit putih (Mus musculus L.) jantan. Sedangkan
pada dosis 800 mg/kgBB menunjukkan adanya
pengaruh terhadap persentase kerusakan glomerulus
organ ginjal mencit putih (Mus musculus L.) jantan.
Meskipun pada dosis 800 mg/kgBB memberikan
pengaruh terhadap persentase kerusakan glomerulus,
namun tidak mempengaruhi fungsi dari organ ginjal
tersebut. Hal ini didukung oleh data kadar Blood Urea
Nitrogen (BUN) yang masih dalam rentang normal Keterangan:
serta nilai persentase kerusakan glomerulus yang tidak 1. Struktur glomerulus normal
melebihi 50%. Artinya, jumlah glomerulus yang tidak 2. Ruang bowman normal
mengalami kerusakan lebih dominan dibandingkan 3. Tubulus proksimal normal
jumlah glomerulus yang mengalami kerusakan 4. Tubulus distal normal
sehingga fungsi ginjal masih dapat berfungsi dengan
baik. Menurut Sherwood (2011), penurunan fungsi Gambar 9. Gambaran Mikroskopis Kelompok Kontrol
ginjal mencapai 90% maka ginjal telah mengalami (400x)
kerusakan.
 Artikel Ilmiah STIFAR Riau 2017

Keterangan:
1. Struktur glomerulus mengalami pembesaran
2. Ruang bowman terlihat mengalami penyempitan
3. Tubulus proksimal normal
4. Tubulus distal normal
Gambar 12. Gambaran Mikroskopis Kelompok Dosis
800 mg/kgBB (400x)

Adanya kerusakan pada glomerulus mungkin

disebabkan karena adanya radang pada glomerulus
sehingga merangsang proliferasi sel, infiltrasi leukosit
atau ketebalan membran basal. Hal ini menyebabkan
terjadinya pembesaran diameter glomerulus yang
berdampak pada penyempitan ruang bowman (Calado,
Keterangan:
2013). Selain itu, kerusakan yang terjadi kemungkinan
1. Struktur glomerulus normal
disebabkan karena adanya senyawa alkaloid,
2. Ruang bowman normal
sebagaimana yang teridentifikasi pada uji metabolit
3. Tubulus proksimal normal
sekunder. Menurut Yakubu (2012), senyawa alkaloid
4. Tubulus distal normal
dapat menyebabkan kerusakan pada nefron apabila
Gambar 10. Gambaran Mikroskopis Kelompok Dosis penggunaan dosis yang tinggi. Hal ini diduga mengacu
200 mg/kgBB (400x) pada kerusakan glomerulus.
Faktor lain yang dapat mempengaruhi
kerusakan ginjal adalah stres. Hal ini sesuai dengan
pendapat Bruce (2016) yang menyatakan bahwa salah
satu faktor pemicu kerusakan pada ginjal adalah stres
yang secara patologis mempengaruhi saraf-saraf yang
ada pada ginjal. Selain itu, juga dilihat dari kondisi
mencit yang sebelumnya tidak terdeteksi. Meskipun
secara fisik tidak terlihat cacat dan tidak menunjukkan
tanda-tanda abnormal yang spesifik, akan tetapi kondisi
anatomi fisiologi organ dalam mencit tidak diketahui.
Sebab tidak bisa dipastikan organ dalam mencit
tersebut mengalami kerusakan atau berfungsi dengan
baik sebagaimana mestinya.
Pemeriksaan mikroskopis ginjal secara
kuantitatif selanjutnya adalah pengukuran diameter
Keterangan: golmerulus. Pengukuran ini bertujuan untuk
1. Struktur glomerulus terlihat sedikit mengalami mengetahui keadaan diameter glomerulus, dimana
pembesaran glomerulus yang mengalami pembesaran menunjukkan
2. Ruang bowman sedikit mengalami penyempitan berbagai penyakit.
dan dapat dikatakan normal
3. Tubulus proksimal normal
1600 1410,00
4. Tubulus distal normal 1289,401379,00
1400 1224,00
1198,40 1203,80
Gambar 11. Gambaran Mikroskopis Kelompok Dosis 1182,80
1200 1115,00
400 mg/kgBB (400x)
Diameter Glomerulus

1000

800 Diameter Glomerulus

Ginjal Kanan
600
Diameter Glomerulus
400 Ginjal Kiri

200

0
Kontrol 200 400 800
mg/kgBB mg/kgBB mg/kgBB
Perlakuan

Gambar 13. Diagram Batang Diameter Glomerulus

Ginjal Mencit Putih Jantan (Mus musculus L.)

Hasil rata-rata diameter glomerulus kelompok
kontrol dan kelompok dosis 200, 400 dan 800
mg/kgBB berdasarkan hasil uji statistik ANOVA satu
arah pada kelompok dosis 200 dan 400 mg/kgBB tidak
memperlihatkan perbedaan yang signifikan (p>0,05)
terhadap kontrol, baik pada ginjal kanan maupun kiri.
Sedangkan dosis 800 mg/kgBB memperlihatkan
perbedaan yang signifikan (p<0,05) terhadap kontrol
pada ginjal kanan maupun kiri. Hal ini ditunjukkan
melalui hasil rata-rata diameter glomerulus pada ginjal
kelompok kontrol yaitu 1115,00 m (kanan) dan
1198,40 m (kiri), dosis 200 mg/kgBB 1182,80 m
(kanan) dan 1224,00 m (kiri), dosis 400 mg/kgBB
1203,80 m (kanan) dan 1289,40 m (kiri), 800
mg/kgBB 1379,00 m (kanan) dan 1410,00 m (kiri).
Pengukuran diameter glomerulus ini sedikit
mengalami kesulitan, hal ini dikarenakan
ketidakkonsistenan dalam hal bentuk dan ukuran
glomerulus pada korpus ginjal (Kotyk, 2015). Menurut
O’Callaghan (2006), kelainan glomerulus dapat dilihat
dari keadaan diameter yang mengalami perubahan. Hal
ini dapat disebabkan karena terjadinya penebalan
membran basal glomerulus, proliferasi sel oleh
disebabkan adanya peradangan.
KESIMPULAN
Dari penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan
bahwa pemberian ekstrak etanol kulit buah salak
pondoh (Salacca affinis Griff) selama 60 hari terhadap
mencit putih (Mus musculus L.) jantan pada dosis 200,
400 dan 800 mg/kgBB memberikan kadar Blood Urea
Nitrogen (BUN) yang tidak berbeda signifikan
(p>0,05) dibandingkan dengan kelompok kontrol.
Persentase kerusakan glomerulus dan pengukuran
diameter glomerulus dosis 800 mg/kgBB menunjukkan
perbedaan yang signifikan (p<0,05) terhadap kontrol.
Pengamatan secara histopatologi pada dosis 800
mg/kgBB memperlihatkan pembesaran glomerulus
sehingga ruang bowman terjadi penyempitan.
DAFTAR PUSTAKA
Agoes, G., 2007. Teknologi Bahan Alam, Penerbit ITB,
Bandung.
Anderson, D.J., 2009. Clinical Chemistry of the Kidney
and Renal Associated Physiology, Clinical
Chemistry Division, Cleveland State University.
Anonim, 2014. Pedoman Uji Toksisitas Nonklinik
Secara In Vivo, Badan Pengawas Obat dan
Makanan Republik Indonesia, Jakarta.
Bruce, M.A., Griffith, D.M., and Roland, J.T.J., 2016.
Stress and Kidney, Adv Chronic Kidney Dis,
PMC, 22 (1): 46-53.
Calado, A., 2013. Introduction to The Renal
Histopathology The Glomerular Evaluation by
Routine Optic Microscopy, Experimental
Pathology and Health Sciences, 7 (1): 19-24.
Artikel Ilmiah STIFAR Riau 2017
Fitrianingsih, S.P., Lestari, F., dan Aminah, S., 2014.
Uji Efek Antioksidan Ekstrak Etanol Kulit Buah
Salak (Salacca zalacca (Gaertner) Voss) Dengan
Metode Perendaman DPPH. Prosiding
SnaPP2014 Sains, Teknologi dan Kesehatan,
Universitas Islam Bandung, Bandung, 49-54.
Gad, S.C., 2016. Animal Models in Toxicology, Third
Edition, CRC Press, Boca Raton.
Gowda, S., Desai, P.B., Kulkarni, S.S., Hull, V.V.,
Math, A.A.K., and Vernekar, S.N., 2010.
Markers of Renal Function Test, North American
Journal of Medical Sciences, 2 (4), 170-173.
Harahap, M.S., 2014. Uji Aktivitas Antidiabetes
Ekstrak Etanol Kulit Buah Salak Pondoh
(Salacca affinis Griff.) Terhadap Mencit Putih
(Mus musculus L.) Jantan Diabetes, Skripsi,
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau.
Irianto, K., 2012. Anatomi dan Fisiologi, Penerbit
Alfabeta, Bandung.
Kanon, M.Q., Fatimawali., dan Bodhi, W., 2012. Uji
Efektivitas Ekstrak Kulit Buah Salak (Salacca
zalacca (Gaertn.) Voss) Terhadap Penurunan
Kadar Gula Darah Tikus Putih Jantan Galur
Wistar (Rattus norvegicus L.) yang Diinduksi
Sukrosa, FMIPA UNSRAT, Manado.
Kartina, L., 2015. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol
Kulit Buah Salak Pondoh (Salacca affinis Griff.)
Mencit Putih (Mus musculus L.) Jantan. Karya
Tulis Ilmiah, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau.
Kiernan, J.A., 1981. Histologycal and Histochemical
Methode: Theory and Practice, Pergamon Press,
Oxford, New York.
Kotyk, T., Ashour, A.S., Timar, D.B., Chakraborty, S.,
Tavares, R.S., 2015. Measurement of the
Glomerulus Diameter and Bowman’s Space
Thickness of Renal Albino Rats, Ukraina.
Lu, F.C., 2010. Toksikologi Dasar, Asas, Organ
Sasaran dan Penilaian Resiko, Edisi II,
Universitas Indonesia Press, Jakarta.
Mardiati, S.M. dan Agung, J.S., 2016. Pertambahan
Berat Badan Mencit (Mus musculus L.) Setelah
Perlakuan Ekstrak Air Biji Pepaya (Carica
papaya Linn.) Secara Oral Selama 21 Hari,
Buletin Anatomi Fisiologi, 1 (1): 75-80.
Mescher, A.L., 2011. Histologi Dasar Junqueira, Edisi
12, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Nazaruddin dan Kristiawati, 1992. 18 Varietas Salak,
Penebar Swadaya, Jakarta.
Nugroho, Y.A., Budi, N., dan Winarno, M.W., 2007.
 Artikel Ilmiah STIFAR Riau 2017

Kolesom (Talinum triangulare Wild.) Tumbuhan

Berkhasiat Afrodisiak yang Aman, Buletin
Penelitian Kesehatan, 35 (3): 108-114.

O’Callaghan, C., 2006. Sistem Ginjal, Penerbit

Erlangga, Jakarta.

Pagana, K.D and Pagana, T.J., 2014. Mosby’s Manual

Of Diagnostic and Laboratory Tests, Fifth
Edition, Mosby.

Prasetyo dan Inorah, E., 2013. Pengelolaan Budidaya

Tanaman Obat-Obatan (Bahan Simplisia), Badan
Penerbitan Fakultas Pertanian UNIB, Bengkulu.

Price, S.A dan Wilson, L.M., 2005. Patofisiologi

Konsep Klinis Proses-Proses Penyakit, Edisi 6
Volume 2, Penerbit Buku Kedokteran EGC,
Jakarta.

Priyanto, 2009. Toksikologi, Mekanisme, Terapi

Antidotum dan Penilaian Resiko, Penerbit
Lembaga Studi dan Konsultasi Farmakologi
(Leskonfi), Jakarta.

Rahmawati, D., 2014. Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi

Etil Asetat Kulit Buah Salak Pondoh (Salacca
affinis Griff.) Terhadap Mencit Putih (Mus
musculus L.) Jantan Diabetes, Skripsi, Sekolah
Tinggi Ilmu Farmasi Riau.

Sari, W.P., 2014. Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi

Butanol Kulit Buah Salak Pondoh (Salacca
affinis Griff.) Terhadap Mencit Putih (Mus
musculus L.) Jantan Diabetes, Skripsi, Sekolah
Tinggi Ilmu Farmasi Riau.

Sherwood, L., 2011. Fisiologi Manusia: Dari Sel ke

Sistem, Edisi 6, Penerbit Buku Kedokteran EGC,
Jakarta.

Ulum, M.B., 2015. Uji Toksisitas Akut Fraksi Etil

Asetat Kulit Buah Salak Pondoh (Salacca affinis
Griff.) Terhadap Mencit Putih (Mus musculus L.)
Jantan, Karya Tulis Ilmiah, Sekolah Tinggi Ilmu
Farmasi Riau.

Yakubu, M.T. and Musa, I.F., 2012. Liver and Kidney

Functional Indices of Pregnant Rats Following
the Administration of the Crude Alkaloids from
Senna alata (Linn. Roxb) Leaves, Iranian
Journal of Toxicology, 6 (16): 615-625.

Yuni, R., 2015. Uji Toksisitas Akut Fraksi Butanol

Kulit Buah Salak Pondoh (Salacca affinis Griff.)
Terhadap Mencit Putih (Mus musculus L.),
Karya Tulis Ilmiah, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi
Riau.