UNIDAD DIDÁCTICA DE INMUNOLOGÍA Y SERODIAGNÓSTICO

GUÍA DE PRÁCTICA N° 01:

SEROLOGIA DE LA SÍFILIS

I. INTRODUCCIÓN

La sífilis es una enfermedad venérea causada por el Treponema pallidum, que invade
las mucosas intactas o la piel en áreas de abrasiones. El contacto sexual es la forma
más común de transmisión. La detección y tratamiento de la enfermedad en sus
estadios tempranos es fundamental a fin de evitar complicaciones graves como sífilis
cardiovascular, neurosífilis y sífilis congénita. El diagnóstico de esta enfermedad
sufre la carencia de un método para cultivar el microorganismo en medios de
laboratorio y la dificultad para detectarlo en estadios de la enfermedad en los que
no se observan lesiones epidérmicas. Sin embargo, desde el comienzo de la infección
aparecen en el suero del individuo infectado ciertas sustancias denominadas
"reaginas", que reaccionan con antígenos de cardiolipina, lecitina y colesterol. Estas
reaginas junto a los signos clínicos son por lo tanto los procedimientos más rápidos
y útiles disponibles para diagnóstico de sífilis.

Las reaginas son un grupo de anticuerpos dirigidos contra componentes del propio
organismo, originadas en pacientes que sufren infección por Treponema pallidum,
agente causal de la sífilis. Este microorganismo produce lesiones en el hígado y
corazón, liberando al torrente circulatorio pequeños fragmentos de estos órganos
no reconocidos por el propio individuo. El sistema inmunológico del paciente
reacciona dando lugar a la formación de reaginas, anticuerpos frente a estos
fragmentos. El ensayo es útil para seguir la presencia a la terapia antibiótica.

El RPR carbón es una técnica no treponémica de aglutinación en porta para la

detección cualitativa y semicualitativa de reaginas plasmáticas en suero humano. Las
partículas de carbón sensibilizadas con una mezcla de lípidos son aglutinadas en
presencia de reaginas presentes en la muestra del paciente afectado por sífilis.

II. OBJETIVO

 Determinar cualitativamente y semicuantitativamente las reaginas plasmáticas

como respuesta a una infección por T. pallidum.
 Determinar los criterios de valoración en las pruebas de RPR y sus posibles
alteraciones.
 Realizar un reporte adecuado de lo observado
III. FUNDAMENTO

El método se fundamenta en una reacción de floculación (La reacción produce una

aglutinación visible macroscópicamente) de una suspensión estabilizada de cristales
de colesterol, cardiolipina, lecitina y partículas de carbón para facilitar la lectura de
la reacción. Este reactivo actúa como antígeno frente a unos anticuerpos presentes
en los enfermos de sífilis. Dichos anticuerpos reciben el nombre de reaginas luéticas
y su detección forma parte de la serología luética no treponémica.

IV. MUESTRA

Suero.

V. MATERIAL

• Agujas
• Jeringas
• Torundas
• Alcohol
• Microscopio óptico
• Cronómetro
• RPR-carbón: Partículas de carbón sensibilizadas con una mezcla de lípidos
cardiolipina, lecitina y colesterol, en tampón fostato 20mmol/l, azida sódica
0.95 g/L ph 7
• Control + (Tapón rojo): Suero humano con un título de reaginas > o igual ¼,
azida sódica 0.95 g/L
• Control – (tapón azul): Suero animal. Azida sódica 0.95
VI. PROCEDIMIENTO:

Técnica: Cualitativa

1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad

del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2. Depositar 50 μL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los
controles positivo y negativo, sobre círculos distintos de una tarjeta.
3. Homogeneizar suavemente el reactivo de RPR carbón antes de usar. Invertir el
vial dispensador y presionar ligeramente para eliminar las burbujas de aire.
4. Situar la micropipeta en posición vertical y prependicular a la tarjeta, y
dispensar una gota de este reactivo junto a cada una de las gotas anteriores
(Muestra, control positivo y control negativo).
5. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la
superficie interior del círculo. Emplear palillos distintos para cada muestra.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS.
SI EXISTE FLOCULACIÓN LA REACCIÓN ES “REACTIVA”,
SI NO AGLUTINÓ LA REACCIÓN ES “NO REACTIVA”.

NOTA: Si sale REACTIVO realizamos la prueba semicuantitativa. Verificando la

reactividad comparando con el Control Positivo, y la No Reactividad con el
control Negativo.

Técnica: Semicuantitativa

1. Realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9g/L

2. Proceder para cada dilución, como en la prueba cualitativa.
3. Ponemos en todos los pocillos 25 microlitros de solución salina
4. En el primer pocillo ponemos 25 microlitros de la muestra y transferimos de un
pocillo a otro 25 microlitros y en el último desechamos
5. Añadimos a cada pocillo 25 micolitros de RPR carbón mezclamos y observamos
la aglutinación.

VII. CUESTIONARIO:

 ¿Qué factores pueden interferir en la reacción mostrando Falsos Positivos o Falsos

Negativos?
 ¿Por qué dentro de los componentes del Reactivo se encuentra la Cardiolipina y
el Colesterol?
 ¿Qué es la floculación y que factores intervienen para que se origine?