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ULTRACENTRIFUGACION .................................................................................... 3
DEFINICIÓN............................................................................................................ 3
TÉCNICAS .............................................................................................................. 5
INSTRUCCIONES ................................................................................................... 9
REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA.......................................................................... 11
ULTRACENTRIFUGACION
DEFINICIÓN
Técnica que se utiliza para separar los componentes de una solución según su
peso. El proceso consiste en someter la solución a un campo gravitatorio
suficientemente elevado haciendo girar la muestra a más de 100000 revoluciones
por minuto durante un tiempo prolongado para que los distintos componentes se
ordenen por capas.
LA ULTRACENTRIFUGACIÓN ANALÍTICA
consiste en un conjunto de métodos (velocidad y equilibrio de sedimentación) que
permiten la determinación del tamaño, la forma global aproximada, y el grado de
homogeneidad de proteínas y otras macromoléculas biológicas en disolución. Estos
métodos están especialmente adaptados para la detección y la caracterización
cuantitativa de las interacciones (proporción de especies, estequiometría,
reversibilidad y afinidad) que dan lugar a la formación de complejos
macromoleculares, incluyendo las interacciones proteína-proteína, DNA-proteína y
receptor-ligando [Howlett et al. (2006) Curr. Opin. Chem. Biol. 10:430-436; Lebowitz
et al. (2002) Protein Sci. 11:2067-2079; Minton (2000) Exp. Mol. Med. 32:1-5; Rivas
et al. (1999) Methods 19:194-212].
La Dispersión de Luz Dinámica.-
proporciona información rápida y complementaria a la obtenida mediante
ultracentrifugación analítica, aportando dos grandes ventajas frente a otros
métodos analíticos: el bajo volumen de muestra requerido (15-45 µl) y la rapidez
en la obtención de los resultados (<10 min). La técnica permite conocer el grado
de polidispersidad de una muestra, determinar el coeficiente de difusión
traslacional de las especies macromoleculares en disolución y calcular su radio
hidrodinámico. Este equipo (modelo DynaPro MS/X, Wyatt Inc.) tiene un manejo
muy sencillo (cubeta) con un sistema de regulación de la temperatura por Peltier
(4-60ºC) y se puede utilizar para el análisis de diferentes tipos de macromoléculas
como proteínas, polisacáridos, nanopartículas y micelas lipídicas.
TÉCNICAS
Centrifugación por gradiente de equilibrio.
La centrifugación por gradiente de equilibrio, también conocida como centrifugación
por gradiente isopícnico es un tipo de centrifugación ampliamente utilizado en
bioquímica para separar moléculas basado en su punto isopícnico. El método
consiste en centrifugar preparaciones biológicas (u otras preparaciones) a altas
fuerzas g por largos periodos de tiempo en soluciones que contienen cantidades
variadas de una molécula viscosa. Por ejemplo, un gradiente de concentración por
etapas de 0.8Molaridad/1.2M de sacarosa usado en aislamiento por densidad
postsináptica o un gradiente lineal de sacarosa al 20-50% usado en la purificación
de vesículas cubiertas de clatrina (CCVs por sus siglas en inglés).
TIPOS DE CENTRIFUGACIÓN
Centrifugación diferencial: Se basa en la diferencia en la densidad de las
moléculas.1 Esta diferencia debe ser grande para que sea observada al centrifugar.
Las partículas que posean densidades similares sedimentarán juntas. Este método
es inespecífico, por lo que se usa como centrifugación preparativa para separar
componentes en la mezcla (por ejemplo, para separar mitocondrias de núcleos y
membrana) pero no es útil para separar moléculas.
INSTRUCCIONES
El Servicio de Ultracentrifugación Analítica y Dispersión de Luz ha establecido unas
tarifas ajustadas a cubrir mínimamente el uso del equipamiento y su mantenimiento,
que varían dependiendo de la Institución a la que pertenezca el usuario (CSIC,
universidades, centros de investigación ajenos al CSIC y empresas). Las tarifas
incluyen:
http://www.bbri.org/rasmb/rasmb.html
http://www.analyticalultracentrifugation.com/default.htm
http://www.jphilo.mailway.com/
http://www.malvern.com/
http://www.wyatt.com/theory/index.cfm
https://es.wikipedia.org/wiki/Ultracentrifugadora
Gerald Karp, Cell and molecular biology: Concepts and experiments, fourth
edition, 2005, Von Hoffman press
Roger A. Davis and Jean E. Vance, Structure, assembly and secretion of
lipoproteins, 1996, Elsevier Science B. V.
https://es.wikipedia.org/wiki/Ultracentrifugaci%C3%B3n