TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MEXICALI

Ingeniería Química

Análisis instrumental

Practica de Laboratorio #1

“Determinación de concentración de clorofila”

Maestra:

Toscano Palomar Lydia

Alumnos:

Ortega Almanza Karla Isabel

Soto Chávez Jessica

Valenzuela Rentería José Giovanny

29 de Septiembre de 2018
INTRODUCCIÓN

En esta práctica se va a extraer la clorofila de la espinaca, así mismo conocer la

concentración de la misma, como su absorbancia en la cual se usará el aparto de
espectrofotómetro y la determinación de contenido de la humedad.

En la práctica desarrollada se llevó a cabo “La ley de Beer que consiste que la
absorbancia de una especie en solución homogénea es directamente proporcional
a su actividad óptica, longitud del paso óptico y su concentración”. Es una relación
empírica que relaciona la absorción de luz con las propiedades del material
atravesado.

La clorofila es un pigmento que se encuentra presente en las plantas. Este pigmento

les proporciona a las plantas su característico color verde. La clorofila absorbe la
luz necesaria para la fotosíntesis, proceso fundamental para fabricar materia
orgánica. La clorofila absorbe principalmente luz violeta roja y azul y refleja luz verde
y conocimiento de sus propiedades.

La clorofila tiene la capacidad de transformar la energía luminosa absorbida en

energía química, canalizándola hacia reacciones celulares de biosíntesis. El
pigmento no entra en si en las reacciones químicas que se llevan a cabo, si no que
ejerce solamente una acción catalítica que activa las reacciones sin intervenir en
ellas. Esta acción catalítica es extraordinariamente rápida y trabaja en fracciones de
segundo.

La clorofila, el pigmento verde común a todas las células fotosintéticas, absorbe

todas las longitudes de onda del espectro visible, excepto las de la percepción global
del verde, detectado por nuestros ojos.
MATERIAL

Etapa 1
Mortero
Espátula
1 Probeta de 100ml
Frasco ámbar tipo esmerilado
Piseta con agua DI
1 vaso de precipitado de 100 ml

Etapa 2
4 Matraces volumétricos de 200 ml
1 pipeta volumétrica de 1 ml
Perilla de succión
Un vaso de precipitados de 100 ml
Piseta de agua DI
1 gatero sin frasco
1 embudo Buchner
1 matraz Enrlenmeyer de 250 ml
1 probeta de 100 ml
2 papel filtro whatman
1 pipeta graduada de 10 ml

REACTIVOS

Etanol
H2O DI
Clorofila
 Std concentración Absorbancia
S1 0 0
S2 3.38E-05 0.007
S3 1.69E-04 0.023
S4 8.44E-04 0.107
S5 4.33E-03 0.548

Curva de calibración 650 nm

0.6
4.33E-03, 0.548
0.5

0.4
Absrbancia

y = 126.24x + 0.0013
0.3 R² = 1

0.2

0.1

0
0 0.0005 0.001 0.0015 0.002 0.0025 0.003 0.0035 0.004 0.0045 0.005
Concentración mg/L

Determinación de clorofila en la muestra

Clorofila “A” = (16.5)(𝐴665 ) − (8.3)(𝐴650 )
Clorofila “A” = (16.5)(0.233) − (8.3)(0.307) = 1.2964
Clorofila “B” = (33.8)(𝐴650 ) − (12.5)(𝐴665 )
Clorofila “B” = (16.5)(0.307) − (8.3)(0.233) = 3.1316
Cálculos de la curva de calibración
Concentración de la muestra:

0.0013 + 𝐴
𝐶𝑎𝑏𝑠 =
126.24
0.0013 + 0.307
𝐶𝑎𝑏𝑠 = = 0.002442
126.24

0.05𝑚𝑙
Factor de dilución: = 100
50𝑚𝑙

𝑚𝑔
𝐶𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 = 𝐶𝑎𝑏𝑠 (𝐹𝐷) = (0.002442)(100) = 0.2442
𝑚𝑙

Peso de clorofila en la muestra extraída:

𝑚𝑔
𝑃𝑐 = (0.2442 ) (50𝑚𝑙) = 12.21 𝑚𝑔
𝑚𝑙

Contenido de clorofila en base húmeda:

12.21 𝑚𝑔 𝑚𝑔
𝐶ℎ𝑢𝑚 = = 2.3977
5.0922 𝑔 𝑔

Contenido de clorofila en base seca:

 𝑚𝑔 1𝑔 ℎ𝑢𝑚𝑒𝑑𝑜
𝐶𝑠𝑒𝑐𝑎 = 2.3977 [ ] = 11.9885 𝑚𝑔 𝑝𝑜𝑟 𝑔 𝑑𝑒 𝑒𝑠𝑝𝑖𝑛𝑎𝑐𝑎 𝑠𝑒𝑐𝑎
𝑔 ℎ𝑢𝑚𝑒𝑑𝑜 1 − 0.8

Determinación de épsilon

𝐴 = 𝜀𝑏𝑐
A: Absorbancia
b: longitud del trayecto óptico
c: concentración de la muestra
𝜀 : absortividad molar

𝐴 0.307
𝜀 = 𝜀= = 125.7166 𝑀−1 𝑐𝑚−1
𝑏𝑐 (1)(0.002442)

Conclusión
La obtención de clorofila es muy importante, de la cual por diversos métodos es
posible obtenerla, la clorofila puede ayudar a las plantas y a algunas bacterias a
realizar la fotosíntesis.
La extracción y cuantificación de la clorofila-a en la hoja de espinaca es bastante
viable en la preparación de un estándar de trabajo, debido a la facilidad de extraer
el pigmento con acetona al 90% y a que en su mayoría está compuesta del
pigmento verde correspondiente a la clorofila.
La cantidad de muestra indicada proporciona, habitualmente, una lectura de
densidad óptica apropiada para el análisis.
Se demostró cuantitativamente que la energía absorbida corresponde a la
cantidad necesaria para promover un electrón de un orbital a otro en una molécula
conjugada.
Cuestionario
1.- ¿Por qué se emplean celdas de cuarzo, en lugar de celdas de vidrio para la
región de ultravioleta?
Cuando una molécula absorbe energía radiante en la región visible o ultravioleta,
la valencia o los enlaces electrónicos en la molécula se elevan a órbitas de más
alta energía. Las celdas de cuarzo deben ser tan claras o transparentes como sea
posible, sin impurezas que puedan afectar a una lectura espectroscópica. Las
celdas deben de estar marcadas para que el paso del haz de radiación sea
siempre en el mismo lugar de la celda y de esta manera compensar por
imperfecciones ópticas en las paredes de la celda.

2.- Discuta qué efecto habría si se prendiera la lampara antes de colocar el filtro.
La absorción depende en gran medida de la concentración de clorofila. Pero
también depende obviamente de la cantidad de luz disponible y de la calidad de la
misma, esto es, que contenga suficiente radiación comprendida en la banda de
absorción. El efecto que podría suceder si la lampara prendiera antes de colocarse
el filtro, es que el espectrofotómetro podría descalibrarse, alterando cualquier
resultado de la muestra.

Referencias

Curtis, H, Schnek, A, & Massarini, A. (2008). Curtis. Biología. En H. Curtis, A.

Schnek, & A. Massarini, Curtis. Biología. Buenos Aires: Editorial Médica
Panamericana.

Bioquímica: texto y atlas. En J. Koolman, & K.-H. Röhm, Bioquímica: texto y atlas.
Ed. Médica Panamericana, 129-130
Evidencia