Aplicaciones y limitaciones de los modelos de ratón para

comprender la aterosclerosis humana

La mayor parte de la comprensión biológica de los mecanismos que subyacen a la

enfermedad arterial coronaria (CAD) se deriva de los estudios de modelos de ratón. La
identificación de múltiples loci CAD y genes candidatos fuertes en grandes estudios de
asociación de genoma humano (GWAS) presentó una oportunidad para examinar la
relevancia de los modelos de ratón para la enfermedad humana. Revisamos
exhaustivamente la literatura de ratones, incluidos 827 genes derivados de la literatura, y la
comparamos con datos humanos. En primer lugar, observamos una sorprendente
concordancia de los factores de riesgo para la aterosclerosis en ratones y humanos. En
segundo lugar, hubo una superposición altamente significativa de genes de ratón con genes
humanos identificados por GWAS. En particular, de los 46 genes con fuertes señales de
asociación en GWAS de CAD que se estudiaron en modelos de ratón, todos menos uno
mostraron efectos consistentes en los fenotipos relacionados con la aterosclerosis. En tercer
lugar, comparamos 178 vías asociadas con CAD derivadas de GWAS humanos con 263 de
estudios con ratones y observamos que la mayoría era consistente entre las especies.

Palabras clave
estudios de asociación de genoma completo ……..modelos de ratón
diseñados………….Factores de riesgo CAD……………..genes de
pasajeros…………….enfermedad común y compleja………….modelado del
camino……………análisis de lesiones………..metabolismo de las
lipoproteínas………….genes de la aterosclerosis del ratón………….diabetes

Introducción
Durante los últimos 35 a 40 años, el ratón se ha convertido, con mucho, en el modelo
animal más utilizado para la investigación de la aterosclerosis. Los ratones y los seres
humanos están divergentes en unos 80 millones de años y, sin duda, han sido sometidos a
muchas presiones selectivas diferentes. Sin embargo, sus genomas han permanecido muy
similares, con aproximadamente el 95% de sus genes codificantes de proteínas, aunque los
genes no codificantes y las regiones reguladoras están considerablemente menos
conservados. Lo último puede ser de particular relevancia para el tema, ya que las variantes
humanas que afectan el riesgo de aterosclerosis lo hacen con mayor frecuencia mediante la
modulación de la regulación génica en lugar de la estructura de la proteína ( Nikpay et al.,
2015, Samani et al., 2007, Seifert et al., 2016).

El propósito de esta revisión es evaluar exhaustivamente la consistencia de los hallazgos

mediante los cuales las alteraciones genéticas conducen a fenotipos relacionados con la
aterosclerosis en ratones y humanos. Discutimos brevemente el desarrollo de modelos de
ratón y resumimos los resultados de los estudios histológicos y genéticos de aterosclerosis
utilizando modelos de ratón. En total, revisamos un total de más de 9,000
publicaciones. Luego comparamos los resultados en ratones con lo que se sabe actualmente
sobre los factores que afectan el riesgo de enfermedad en los seres humanos. Durante la
última década, en particular, se han logrado avances espectaculares en el mapeo y la
caracterización funcional de los loci que contribuyen a formas comunes de enfermedad
arterial coronaria (CAD) (Ghosh et al., 2015, Mäkinen et al., 2014, McPherson y Tybjaerg-
Hansen, 2016, Nikpay et al., 2015, Nurnberg et al., 2016, Samani et al., 2007, Seifert et al.,
2016). Estas comparaciones se realizan en tres niveles. Primero, examinamos la
consistencia entre los resultados del ratón y los diversos factores de riesgo que se han
identificado en los estudios epidemiológicos y genéticos en humanos. En segundo lugar,
examinamos la superposición entre los hallazgos en el ratón y los resultados recientes de
los estudios de asociación del genoma humano (GWAS). En tercer lugar, además de las
comparaciones basadas en genes, construimos 263 vías de aterosclerosis de ratones según
nuestra búsqueda bibliográfica de genes y las comparamos con 178 vías conocidas de CAD
en humanos basadas en GWAS. Cada una de estas comparaciones tiene limitaciones, las
cuales discutimos. Sobre la base de nuestros hallazgos, hacemos algunas recomendaciones
sobre las estrategias de investigación más útiles para avanzar.
Antecedentes: modelos de ratón en la investigación de la aterosclerosis
Perspectiva historica
Desde principios de 1900, el ratón ha sido el modelo animal clásico para el análisis
genético. La investigación sobre el ratón como modelo de aterosclerosis comenzó a fines de
los años 70 y principios de los 80 con esfuerzos para caracterizar el metabolismo de las
lipoproteínas en plasma y desarrollar dietas que promuevan el desarrollo de lesiones
ateroscleróticas en ratones (LeBoeuf et al., 1983, Lusis et al., 1983, Paigen et al.,
1987, Reue et al., 1984, Roberts y Thompson, 1976). Los ratones tienen niveles muy bajos
de lipoproteínas aterogénicas y, a diferencia de los conejos, los hámsters y algunos otros
modelos animales, no desarrollan lesiones significativas cuando se les alimenta con una
dieta de tipo occidental con alto contenido de grasa y colesterol. Sin embargo, se encontró
que la adición de ácido cólico a tales dietas dio lugar a lesiones aórticas que correspondían
a lesiones tempranas de rayas grasosas en humanos (Paigen et al., 1987, Roberts y
Thompson, 1976). A principios de la década de 1990, se crearon modelos de ratones con
niveles de colesterol muy altos y lesiones relativamente avanzadas mediante ingeniería
genética, incluidos los ratones knockout para apolipoproteína E ( Apoe - / - ) y knockout para
el receptor LDL ( Ldlr - / - ) (Ishibashi et al., 1994, Li et al., 1993, Plump et al.,
1992, Warden et al., 1993).
Se utilizaron dos enfoques para identificar los factores genéticos que contribuyen a la
aterosclerosis en el ratón. El primero involucró el análisis genético de la variación natural
en el ratón mediante el análisis del locus de rasgos cuantitativos (QTL), un método
analítico para el mapeo de genes que subyacen a rasgos complejos. Tales estudios revelaron
la considerable complejidad genética de la aterosclerosis, pero la mala resolución del
mapeo QTL dificultó la identificación de genes (Rodríguez et al., 2013). El segundo
enfoque involucró el análisis de genes hipotetizados para desempeñar un papel en la
aterosclerosis basada en la biología conocida, conocida como "genes candidatos". En la
mayoría de los estudios, la expresión de los genes candidatos se modificó a través de la
ingeniería genética (por ejemplo, la orientación genética). , generalmente seguido de un
análisis sobre un fondo hiperlipidémico para evaluar el desarrollo de la lesión. Tales
estudios se han realizado para muchos cientos de genes (Stylianou et al., 2012). A
continuación, preguntamos cómo encajan los resultados de estos estudios con lo que se sabe
sobre la aterosclerosis humana, en particular los resultados de los GWAS humanos.
Patología
En modelos experimentales como Apoe - / - o Ldlr - / -En ratones alimentados con dietas
"occidentales", el desarrollo de lesiones ateroscleróticas es similar al observado en estudios
patológicos de la enfermedad humana. El primer evento perceptible es la acumulación de
partículas de lipoproteínas que contienen apolipoproteína B agregada en el espacio
íntimo. A esto le sigue el reclutamiento de monocitos de sangre a la íntima en los sitios de
acumulación de lipoproteínas y la transformación posterior a macrófagos. Estas células
luego proceden a absorber las lipoproteínas a través de los receptores del eliminador o la
fagocitosis para dar lugar a "células espumosas" cargadas de colesterol que son el sello
distintivo de la aterosclerosis temprana. A medida que las lesiones crecen en tamaño, se
forma un núcleo necrótico formado por células de espuma, cristales de colesterol y células
apoptóticas.Lusis, 2000). Además de los monocitos, los linfocitos T se reclutan para las
lesiones y, en ciertos antecedentes genéticos, se produce una calcificación intimal y medial
(Rattazzi et al., 2005).
Sin embargo, existen algunas diferencias distintas en comparación con la aterosclerosis
humana. Mientras que, como en los humanos, las lesiones en ratones tienden a ocurrir en
regiones de flujo sanguíneo alterado, los sitios principales de desarrollo de lesiones en
ratones son la aorta y las carótidas, no las arterias coronarias (Hu et al., 2005). Además,
aunque el engrosamiento de la íntima generalmente ocurre en lesiones tempranas en
humanos, este no es el caso en ratones (Schwartz et al., 1995). Además, los modelos de
ratón rara vez muestran evidencia de rotura de la lesión, un punto particularmente
significativo, ya que aproximadamente tres cuartas partes de los ataques cardíacos se
producen por rotura de placa seguida de trombosis. Cabe señalar que ciertos modelos de
ratón, en particular el ratón combinado Srb-1 - / - / Apoe - / - , desarrollan lesiones coronarias
significativas, aunque no se han utilizado ampliamente en la investigación, probablemente
debido a la dificultad de la reproducción de alelos manipulados. un fondo de doble nocaut
(Zhang et al., 2005). Además, las lesiones en ciertos vasos, como la arteria innominada que
se ramifica desde la aorta, muestran una mayor complejidad que las lesiones aórticas,
incluida la presencia de fibrina en las lesiones, aunque no parecen ser un buen modelo para
los estudios de los mecanismos de rotura de la placa en humanos (Schwartz et al., 2007).
La mayoría de los estudios en ratones han evaluado solo el tamaño de las lesiones, no la
composición. Está claro que en los ratones, los antecedentes genéticos y los factores
ambientales pueden influir en el contenido relativo de macrófagos, células del músculo liso,
linfocitos, depósitos calcificados, colágeno y residuos necróticos (Bennett et al.,
2006, Shaposhnik et al., 2007). Dada su importancia en la vulnerabilidad de la placa, la
evaluación cuantitativa de la composición de la lesión es claramente de interés (Schwartz et
al., 2000). Por otro lado, muchos estudios en humanos a menudo carecen de cualquier
caracterización patológica de las lesiones ateroscleróticas. Específicamente, los GWAS a
gran escala a menudo utilizan definiciones clínicas para las manifestaciones de la
enfermedad aterosclerótica que van desde los síntomas (p. Ej., Angina de pecho) y los
hallazgos en estudios de imagen (p. Ej., Angiografía coronaria) hasta manifestaciones
clínicas (p. Ej., Infarto de miocardio y accidente cerebrovascular de gran tamaño).
Variación genética natural
Los estudios de variación natural en ratones se han centrado en la arquitectura genética
general de la aterosclerosis y las firmas moleculares asociadas con el desarrollo de lesiones
(Hsu y Smith, 2013, Kayashima et al., 2015, Rodríguez et al., 2013, Welch, 2012). Por
ejemplo, un gran cruce entre las cepas C3H / HeJ y C57BL / 6J en un fondo Apoe - /
-
identificó numerosos loci significativamente asociados con aterosclerosis, calcificación
vascular y rasgos como la obesidad, los niveles de insulina y los lípidos plasmáticos. El
análisis de las vías usando ingenio reveló una serie de vías fuertemente asociadas con la
aterosclerosis, como el metabolismo del colesterol, la fosforilación oxidativa mitocondrial y
la inflamación (Wang et al., 2007).
Debido a la mala resolución del análisis de ligamiento en ratones (y humanos), muy pocos
genes nuevos que contribuyen a formas complejas de susceptibilidad a la aterosclerosis se
identificaron en base a cruces genéticos (Broeckel et al., 2002, Erdmann et al., 2013). Sin
embargo, con el desarrollo de tecnologías para la genotipificación de alta densidad, el
mapeo de asociación de rasgos complejos de resolución relativamente alta se ha hecho
posible en ratones y en humanos. Dichos análisis de asociación pueden realizarse utilizando
poblaciones de ratones criados o utilizando poblaciones de ratones criados después de la
corrección de la estructura de la población (Bennett et al., 2010, Valdar et al., 2006). Una
ventaja del uso de ratones consanguíneos para tales análisis es que se pueden examinar
muchos fenotipos diferentes en los mismos antecedentes genéticos (Bennett et al.,
2015, Orozco et al., 2012, Parks et al., 2013).
Los estudios de variación natural en ratones han revelado que la aterosclerosis es un rasgo
altamente complejo, que involucra a muchos genes que contribuyen a una variedad de
factores de riesgo. Un estudio reciente de un gran conjunto de cepas puras conocidas como
el Hybrid Mouse Diversity Panel (HMDP) reveló una fuerte evidencia de asociación con
inflamación, señalización de óxido nítrico y niveles de trimetilamina-N-óxido (TMAO), así
como factores de riesgo tradicionales tales como los niveles de lípidos en plasma. Además,
el estudio proporcionó pruebas sólidas de las interacciones gen por gen así como las
interacciones gen por ambiente (Bennett et al., 2015).
Modelos de ingeniería y estudios de drogas
Para investigar los mecanismos que contribuyen a la susceptibilidad de la aterosclerosis, se
han examinado cientos de "genes candidatos" por sus efectos sobre la aterosclerosis en
ratones. Dichos genes candidatos fueron elegidos en base a hipótesis generadas a partir de
la comprensión de la aterosclerosis humana y, por lo tanto, están sesgados de forma
inherente. Al relacionar los resultados de dichos estudios con la genética de la
aterosclerosis humana, se deben tener en cuenta una serie de otras advertencias, incluidas
las diferencias en el tamaño del efecto, el problema de los "genes pasajeros" y algunas
consideraciones estadísticas. Tales factores de confusión se discuten en una sección
posterior.
Revisamos exhaustivamente más de 9,000 publicaciones de PubMed que examinaron genes
que contribuyen a la aterosclerosis en ratones. Estos incluyeron un total de 827 genes de
aterosclerosis de ratón, según lo definido por un efecto significativo en el tamaño o la
composición de la lesión aterosclerótica cuando se perturba en un modelo de ratón. A
nuestro entender, esto representa la colección más completa de genes de ratón que tienen
efectos significativos en la aterosclerosis en modelos de ratón. Las citas para todos los
genes incluidos se proporcionan en la Tabla S1 , disponible en línea. Los genes de ratón se
clasificaron en tres grupos:

(1)

Modelos diseñados de expresión génica reducida (knockdown o knockout)

(2)

Modelos diseñados de sobreexpresión de genes (principalmente ratones

transgénicos)

(3)

Modelos de tratamiento farmacológico.

Las comparaciones de datos de ratón y humanos a nivel genético deben considerar las
diferencias genéticas. Para evaluar la superposición de genes entre las especies, se
consideraron los homólogos más recientes de ENSEMBL (Kersey et al., 2016). Después de
los ajustes específicos de la especie, 19,583 genes humanos codificantes de proteínas
podrían combinarse con 20,738 genes de ratón. Por lo tanto, aproximadamente el 98,8%
(19,583 de 19,815) de los genes humanos están representados en el genoma del ratón y el
94,5% (20,738 de 21,936) de los genes del ratón están representados en el genoma humano
(Harrow et al., 2012, Mudge y Harrow, 2015).
Siguiendo la clasificación de los modelos de ratón, nuestra investigación reveló un total de
827 genes de ratón, de los cuales 535 (64.5%) fueron modelos de expresión génica
reducida, 48 (5.8%) fueron modelos de genes sobreexpresados y 244 (29.5%) fueron
modelos de tratamiento farmacológico. Se consideró que los genes que mostraron
alteraciones significativas en el tamaño de la lesión (808 genes) o la estabilidad de la placa
(19) tienen un efecto sobre la aterosclerosis. En total, 805 de nuestros 827 genes de ratones
derivados de la literatura tienen un ortólogo humano (97.3%). Estos 805 genes de ratón se
combinaron con 797 genes únicos en humanos. Diez genes de ratón
( Ang , Ang2 , Ang4 , Ang5 , Ang6 , Bglap , Bglap2 , Bglap3 ,Ces3a y Ces3b ) estaban
representados por tres genes humanos (ANG, BGLAP y CES). Los ratones con eliminación
de Apoe (68.6% de los estudios) o Ldlr (27.2%) sirvieron con mayor frecuencia como
modelos para los estudios de aterosclerosis. Por lo tanto, la gran mayoría de todos los
modelos genéticos de ratones se exploraron en el contexto de hipercolesterolemia excesiva,
una condición que es similar a la hipercolesterolemia familiar en el hombre. De los 827
genes, el 58.6% (485) de los genes se describió para mediar los efectos pro-aterogénicos y
el 41.2% (341) de los efectos anti-aterogénicos; Pecam1 es un gen que afecta a la
aterosclerosis de una manera específica del sitio, ya sea positiva o negativamente (Goel et
al., 2008).
Usando la herramienta de enriquecimiento de genes DAVID, observamos que las categorías
principales de enfermedades correspondientes a los 827 genes de ratones estaban
fuertemente asociadas con la aterosclerosis. Entre las diez principales enfermedades
asociadas con los humanos, seis están relacionadas directamente con CAD o aterosclerosis
en humanos y dos representan factores de riesgo conocidos de CAD. Las dos condiciones
restantes son la enfermedad de Alzheimer y la longevidad ( Tabla 1 ).
Tabla 1 Asociación de ortólogos humano-ratón con bases de datos de enfermedades
humanas

Fold Genes de FDR p valor

Término
Change ratón una segundo

Enfermedad de la arteria 2.70E − 1.10E −

4.5 53
coronaria 23 27

Enfermedad isquémica 1.20E − 5.40E −

4.4 32
del corazón 12 17

2.90E − 1.30E −
Restenosis 4.3 47
19 23

8.40E − 4.90E −
Longevidad 4 47
17 21

Arterioesclerosis 5.80E − 3.60E −

3.9 100
coronaria 39 43

1.40E − 8.40E −
Enfermedad coronaria 3.9 35
11 16

Enfermedad de 6.10E − 3.30E −

3.3 89
Alzheimer 12 15

5.30E − 5.70E −
Infarto de miocardio 3 62
15 19

5.40E − 7.80E −
Hipertensión 2.6 79
15 19
 Fold Genes de FDR p valor
Término
Change ratón una segundo

2.00E − 3.00E −
Diabetes tipo 2 2.1 104
13 17

Se enumeran los diez principales términos de DAVID asociados con 827 genes de
aterosclerosis de ratones derivados de la literatura. El "cambio en el pliegue" es el grado de
enriquecimiento de los genes de aterosclerosis de ratón dentro de cada categoría de genes, y
"genes de ratón" es el número de dichos genes. FDR, tasa de descubrimiento falso.
un ajustado por comparación múltiple.
b Calculado utilizando la prueba exacta de Fisher.
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Factores de riesgo: concordancia de ratón y estudios humanos

Los estudios epidemiológicos de poblaciones humanas han identificado varios factores de
"riesgo" genéticos o ambientales que se asocian significativamente con la prevalencia de
EAC ( Tabla 2 ). Aquí hemos evaluado exhaustivamente la consistencia de los hallazgos en
ratones y humanos en términos de los efectos de estos factores de riesgo en la
aterosclerosis.
Tabla 2: consistencia de los factores de riesgo CAD humanos en modelos de ratones
con aterosclerosis

Factores de riesgo Efecto sobre la

Referencia
concordantes aterosclerosis

Plump et al., 1992

,
Hipercolesterolemia ↑
van Ree et al.,
1994

Huszar et al., 2000

Niveles elevados de ,
↑
lipoproteínas: LDL Powell-Braxton y
otros, 1998

Niveles elevados de Knouff et al., 2004

↑
lipoproteínas: VLDL ,
Factores de riesgo Efecto sobre la
Referencia
concordantes aterosclerosis

VanderLaan et al.,
2009

Bérard et al., 1997

Niveles elevados de ,
↓
lipoproteínas: HDL Feig et al., 2014
;

Callow et al., 1995

,
Schneider et al.,
Niveles elevados de
↑ 2005
lipoproteínas: LPA
,
Pedersen et al.,
2010

Voyiaziakis et al.,
Hipertrigliceridemia ↑
1998

Leong et al., 2015

,
Hipertensión ↑ Weiss et al., 2001
,
Wiesel et al., 1997

Enfermedades inflamatorias:
↑ Rose et al., 2013
artritis.

Enfermedades inflamatorias:
↑ Ma et al., 2008
lupus.

Enfermedades inflamatorias: Karbach et al.,

↑
psoriasis. 2014
Factores de riesgo Efecto sobre la
Referencia
concordantes aterosclerosis

Boué et al., 2012

,
De fumar ↑ Gairola et al., 2001
,
Lietz et al., 2013

Araujo, 2010
,
La contaminación del aire ↑ Soares et al., 2009
,
Sun et al., 2005

In't Veld, 2014

,
Kunjathoor et al.,
T1D ↑ 1996
,
Shen y Bornfeldt,
2007

Jun et al., 2011

,
Rey, 2012
,
T2D ↑
Renard et al., 2004
,
Schreyer et al.,
1998

Merat et al., 2000

,
Envejecimiento ↑
Rosenfeld et al.,
2000

Kumari et al., 2003

Angustia ↑
,
Factores de riesgo Efecto sobre la
Referencia
concordantes aterosclerosis

Najafi et al., 2013

,
Roth et al., 2015

Gregory et al.,
2015
,
TMAO ↑ Hartiala et al.,
2014
,
Wang et al., 2011

Trombosis ↑ Schafer et al., 2003

Meissner et al.,
2011
Falta de actividad física ↑ ,
Pellegrin et al.,
2009

Gibson et al., 2004

Presencia bacteriana ↑ ,
Lalla et al., 2003

Bro et al., 2003

,
Hewitson et al.,
Insuficiencia renal ↑ 2015
,
Neven y D'Haese,
2011

Kennedy et al.,
Síndrome metabólico ↑
2010
 Factores de riesgo Efecto sobre la
Referencia
concordantes aterosclerosis

Factores de riesgo Efecto sobre Athero en

Referencia
discordantes humanos / ratones

Chiba et al., 2008

,
Nishina et al., 1994
Obesidad ↑ / - (Lep ob / obratones)
,
Plummer y Hasty,
2008

Venegas-Pino et
Género masculino ↑ / femenino ↑
al., 2016

↑ indica que el factor está asociado positivamente con la aterosclerosis, ↓ indica una
asociación negativa, y - indica que no hay asociación con la aterosclerosis.
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Dislipidemia
Los niveles altos de colesterol de lipoproteínas de baja densidad (LDL-C), VLDL-C y
triglicéridos y los niveles bajos de colesterol de lipoproteínas de alta densidad (HDL-C)
están fuertemente relacionados con el CAD humano (
Panel de expertos sobre detección, evaluación y tratamiento del colesterol alto en la sangre
en adultos, 2001
,
Grundy et al., 2004
). Para imitar la hipercolesterolemia humana en modelos de ratón, se necesitaron
adaptaciones genéticas y dietéticas, ya que el colesterol circulante se basa
predominantemente en HDL en ratones y LDL en humanos. Además, la proteína de
transferencia de éster de colesterilo (CETP), que transfiere los ésteres de colesterol y los
triglicéridos entre las lipoproteínas, no está presente en los ratones. Por otra parte, la
absorción de colesterol en la dieta es baja en ratones. Al resumir los resultados de varios
modelos de ratones modificados genéticamente que abordan el metabolismo de los lípidos y
las lipoproteínas, los datos son más consistentes con un aumento de la aterosclerosis en
ratones con hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia y elevaciones singulares de los niveles
plasmáticos de LDL o VLDL (Huszar et al., 2000, Knouff et al., 2004, Plump et al.,
1992, Powell-Braxton y otros, 1998, van Ree et al., 1994, VanderLaan et al.,
2009, Voyiaziakis et al., 1998). Los niveles elevados de HDL, por otro lado, redujeron la
progresión de la aterosclerosis (Bérard et al., 1997), y en las lesiones ateroscleróticas sin
calcificación, los niveles elevados de HDL incluso llevaron a una regresión parcial del
tamaño de la lesión (Feig et al., 2014).
Alta presion sanguinea
La presión arterial alta es un factor de riesgo bien conocido de CAD humana (Stamler y
otros, 1993). La inducción de la presión arterial alta en modelos de ratón se inició por una
ingesta excesiva de sal, la regulación positiva del sistema renina-angiotensina-aldosterona,
perturbaciones genéticas o constricción mecanicista de las arterias renales. Aunque las
causas de la hipertensión en esos modelos son diferentes, la aceleración de la aterosclerosis
fue un hallazgo consistente (Leong et al., 2015, Weiss et al., 2001, Wiesel et al., 1997).
Trastornos inflamatorios sistémicos
Los trastornos inflamatorios sistémicos humanos, como la artritis reumatoide, el lupus y la
psoriasis, están fuertemente asociados con la CAD humana, aunque los fundamentos
genéticos de los dos trastornos pueden ser diferentes (del Rincón et al., 2001, Jansen et
al.,2015, Wang et al., 2012, Westerweel et al., 2007). De acuerdo, los modelos de ratón de
la artritis reumatoide humana, el lupus y la psoriasis también mostraron un aumento de las
lesiones ateroscleróticas en los modelos de ratón (Cao et al., 2013, Karbach et al., 2014, Ma
et al., 2008, Rose et al., 2013).
De fumar
Fumar acelera el desarrollo de CAD en humanos (Kannel et al., 1968). En los modelos de
ratón, la exposición al humo del cigarrillo convencional provocó perturbaciones del
metabolismo de los lípidos, la función de las células endoteliales arteriales y el desarrollo
de lesiones ateroescleróticas (Boué et al., 2012). El cese de la exposición al humo condujo a
una desaceleración de la progresión de la placa y disminuyó la acumulación de lípidos pro-
aterogénicos (Lietz et al., 2013).
La contaminación del aire
La contaminación del aire es un factor de riesgo para la aterosclerosis humana acelerada
(Araujo, 2010). Los modelos de ratones expuestos a partículas ambientales concentradas a
largo plazo menores de 2,5 μm (que simulan el aire contaminado) mostraron una
aceleración de la aterosclerosis y la inflamación vascular (Sun et al., 2005).
Diabetes tipo 1
La diabetes tipo 1 (T1D) promueve la progresión de la CAD humana (Schnell et al.,
2013). La T1D en modelos de ratón fue inducida por estreptozotocina o por infección
viral. Ambos métodos resultaron en la formación acelerada de la lesión (Shen y Bornfeldt,
2007).
Diabetes tipo 2
La diabetes tipo 2 (T2D) es un factor de riesgo de la CAD humana (Reaven, 2003). La
mayoría de los modelos T2D de ratón se basan en un modelo deficiente en leptina,
alimentación con grasa o carbohidratos o disfunción de las células beta inducida
genéticamente, y la mayoría mostró que la T2D acelera la aterosclerosis (Jun et al., 2011
, Rey, 2012, Renard et al., 2004, Schreyer et al., 1998). Hubo algunos resultados
contradictorios, posiblemente debido a la participación del sistema inmunológico (Taleb et
al., 2007) o efectos ateroprotectores de la deficiencia de leptina en sí ( Lep ob / ob ) (Chiba et
al., 2008).
Angustia
La angustia, aguda y crónica, es un factor de riesgo para el desarrollo y la progresión de la
CAD humana (Holmes et al., 2006). En un modelo de estrés crónico en ratones, los ratones
fueron expuestos repetidamente a agua helada. Los animales desarrollaron lesiones
ateroscleróticas más avanzadas y complejas (Heidt et al., 2014, Najafi et al., 2013).
Trimetilamina-N-óxido
El TMAO, derivado de la colina o la carnitina en la dieta a través de la acción de la
microbiota intestinal, ha demostrado recientemente ser un factor de riesgo para la EAC y la
insuficiencia cardíaca (Koeth et al., 2013). Las cepas puras de ratones exhiben variaciones
en los niveles de TMAO cuando se mantienen en una dieta occidental, y estas se asocian
significativamente con la aterosclerosis (Bennett et al., 2015). Los modelos de ratones
experimentales revelaron que la suplementación dietética con colina (que puede procesarse
a TMAO) o TMAO en sí promovió la aterosclerosis (Wang et al., 2011).

Trombosis
La trombosis está significativamente relacionada con la CAD humana (Davies, 1996). Una
investigación del inhibidor de la activación del plasminógeno 1 ( Pai1 ) en un modelo de
ratón mostró un fenotipo protrombótico con formación acelerada de lesiones (Schafer et al.,
2003).

Falta de actividad física

La falta de actividad física es un factor de riesgo bien conocido de la CAD humana
(Warburton et al., 2006). Los estudios en modelos de ratones revelaron un desarrollo
desacelerado de la aterosclerosis en ratones sometidos a ejercicio (Meissner et al., 2011).

Bacteriemia indebida
La bacteriemia indebida se asocia con la EAC. La enfermedad periodontal proporciona la
entrada más común para tales patógenos (Beck et al., 1996). Los modelos de infección oral
con patógenos periodontales mostraron aterosclerosis acelerada en ratones (Lalla et al.,
2003).

Insuficiencia renal
La insuficiencia renal acelera la progresión de la CAD humana, especialmente cuando la
carga de calcificación es alta (Yerkey et al., 2004). Los modelos genéticamente
modificados de ratón de insuficiencia renal ( Fgf23 - / - o Klotho - / - ) o ratones en los que se
inició la inducción con toxinas urémicas, como el indoxil sulfato, mostraron aterosclerosis
acelerada y lesiones altamente calcificadas (Neven y D'Haese, 2011).

Síndrome metabólico
El síndrome metabólico, caracterizado por resistencia a la insulina, obesidad, presión
arterial elevada y dislipidemia, es un factor de riesgo para el desarrollo de la CAD humana
(Isomaa et al., 2001.). Varios modelos de ratones con síndrome metabólico muestran una
formación acelerada de lesiones (Kennedy et al., 2010).

Obesidad
La obesidad es un factor de riesgo establecido para la EAC en humanos. La obesidad
también se asocia positivamente con la aterosclerosis en ratones con dietas altas en grasa y
colesterol (Kennedy et al., 2010). Los ratones con deficiencia de leptina ( Lep ob / ob ) tienen
un fenotipo obeso distinto, pero están protegidos contra la aterosclerosis (Chiba et al., 2008
, Nishina et al., 1994, Plummer y Hasty, 2008). Este efecto puede estar relacionado con el
aumento de tamaño de las lipoproteínas en ratones obesos Lep ob / ob , lo que lleva a una
menor penetración de las paredes arteriales (Nishina et al., 1994) y la regulación de la
presión arterial (Huby et al., 2016). La deficiencia del receptor de leptina ( Lep db / db ), en
contraste con la deficiencia de leptina, condujo a un aumento de los niveles plasmáticos de
leptina y aterosclerosis pronunciada, lo que sugiere que la leptina en sí promueve la
aterosclerosis (Wu et al., 2005).

Diferencias de sexo
En los seres humanos, los hombres muestran un inicio más temprano de CAD en
comparación con las mujeres. En los ratones, por otro lado, la aterosclerosis es
generalmente más prominente en las hembras, aunque esto depende del modelo de ratón y
la dieta utilizada. La mayor susceptibilidad a la aterosclerosis en ratones hembras se ha
atribuido en parte a los genes codificados por los cromosomas sexuales (Arnold et al.,
2016, Link et al., 2015) y también a las diferencias en el metabolismo de TMAO, un factor
de riesgo potente para la aterosclerosis (Bennett et al., 2013). El TMAO se produce por
oxidación de la trimetilamina circulante, catalizada por la enzima flavina monooxigenasa 3
(FMO3). En ratones, la expresión de FMO se suprime dramáticamente por la testosterona y,
por lo tanto, los niveles de TMAO son mucho más bajos en los machos en comparación con
las hembras (Bennett et al., 2013, Kloss et al., 1982). En contraste, los niveles de expresión
de FMO3 hepáticos son similares o solo ligeramente más bajos en hombres que en mujeres,
y los niveles de TMAO en circulación son similares en hombres y mujeres (Tang et al.,
2013).

Resultados de la Asociación del Genoma Humano: Superposición con estudios

en ratones
Durante la última década, los GWAS han mapeado de manera robusta miles de loci para
varias enfermedades comunes. En general, los loci identificados exhiben individualmente
un tamaño de efecto muy modesto, y juntos explican una pequeña fracción del componente
genético (heredabilidad) de la enfermedad, aunque algunos loci muestran series alélicas que
van desde alelos comunes, genómicamente significativos asociados a mutaciones raras.
elevarse a rasgos mendelianos, por ejemplo, deficiencia de LDLR o GUCY1A3 (Erdmann
et al., 2013, Goldstein y Brown, 2015). En el caso de la aterosclerosis, los grandes
metanálisis han identificado un total de 57 loci que cumplen con un nivel de umbral
ajustado de Bonferroni, y aproximadamente 100 loci adicionales muestran una asociación
sugestiva (Deloukas et al., 2013, Consorcio Genético de Enfermedades de las Arterias
Coronarias (C4D), 2011, McPherson y Tybjaerg-Hansen, 2016, Nikpay et al.,
2015, Schunkert et al., 2011). En contraste con los rasgos mendelianos (en los que
aproximadamente el 85% de las variantes causales afectan a las secuencias de
codificación), los rasgos de enfermedades complejas comunes parecen deberse
principalmente a variaciones en las regiones no codificantes que afectan la expresión
génica(Nikpay et al., 2015, Seifert et al., 2016). En general, dentro de la región de
desequilibrio de ligamiento (LD), los loci contienen múltiples genes. El gen causal puede
incluso estar fuera de la región de LD si está regulado por un potenciador dentro de la
región asociada con la enfermedad. Por lo tanto, un desafío en la actualidad es identificar
las variantes genéticas causales y los genes causales en cada locus. Para nuestra
comparación con los ratones, hemos utilizado dos conjuntos de genes GWAS humanos
diferentes, que se describen a continuación ( Tabla S2).
El primer conjunto de genes (244 genes GWAS) se basa en anotaciones de 169 loci GWAS
significativos y sugerentes conocidos, que incorporan conocimiento y enfoques basados en
datos (Brænne et al., 2015, Deloukas et al., 2013, Nikpay et al., 2015, Schunkert et al.,
2011). Esta lista de genes es un conjunto de genes curados de forma conservadora que
probablemente proporcione los genes CAD humanos más confiables basados en el enfoque
GWAS.El segundo conjunto de genes (880 genes GWAS extendidos) también se basa en
los loci GWAS (Deloukas et al., 2013, Nikpay et al., 2015) pero además incorpora aspectos
funcionales que utilizan loci de rasgos cuantitativos de expresión (eQTLs) y anotaciones
ENCODE, de manera que se incorporan genes adicionales que no cumplen con un nivel de
significación de todo el genoma (p <5E − 8). La extensión de los genes aumenta la
probabilidad de incluir genes falsos positivos, pero ofrece una mejor oportunidad para
inferir mecanismos biológicos y vías que contribuyen a la CAD (Zhao et al., 2016).

Perturbación experimental en ratones

Los 797 ortólogos humanos ( Tabla S2 ) de los genes de ratón identificados en modelos de
ratón diseñados se superponen significativamente con los conjuntos de genes CAD
humanos descritos anteriormente. Por lo tanto, 45 (18.4%) de los genes GWAS de CAD (p
= 1.13E-17) y 72 (8.2%) de los genes GWAS extendidos (p = 1.27E-8) se superponen con
la lista de 797 ortólogos de ratón. La cantidad de genes que se superponen es
necesariamente pequeña porque solo se ha identificado una pequeña fracción de los genes
humanos (como se juzga a la fracción de heredabilidad) y algunos de ellos probablemente
sean falsos positivos.
 Quizás un análisis más significativo es preguntar qué fracción de los genes GWAS
humanos que se han estudiado en modelos de ratón producen un resultado
consistente. Dado que los resultados del GWAS humano se publicaron muy recientemente,
solo una fracción de los candidatos humanos se ha estudiado en ratones. Además, debemos
tener en cuenta que un resultado negativo en el mouse puede no ser publicado. Sin
embargo, encontramos que de los 244 genes GWAS humanos significativamente o
sugestivos, 46 ya se han estudiado por su efecto sobre el tamaño de la lesión en ratones y
45 de estos afectaron significativamente la aterosclerosis en modelos de ratones ( Figuras
1 y 2 ), dejando alrededor de 190 candidatos humanos. Genes que aún no han sido
estudiados ( Figura S1 ). La información detallada se proporciona en la Tabla S2.. Dado
que es poco probable que muchos de los genes GWAS humanos en nuestra lista sean
causales, tal grado de superposición parece sorprendente. Sin embargo, la mayoría de los
genes superpuestos se consideraron previamente (antes de GWAS) como fuertes candidatos
en función de sus funciones en el metabolismo de los lípidos, la presión arterial o la
inflamación y, por lo tanto, se estudiaron en ratones ( Figura 1 ).

Figura 1 Genes candidatos de CAD GWAS humanos: enfoque en genes ya validados

en ratones
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 Figura 2 Genes candidatos a CAD GWAS humanos que se han probado en modelos
animales de ratón
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Variación natural a través de cepas de ratones consanguíneos

Hay algunos problemas potenciales con el uso de genes knockouts en ratones para modelar
la aterosclerosis humana. Es importante destacar que estos estudios están sesgados por la
elección del gen. Además, el efecto puede depender de los antecedentes genéticos, y la
mayoría de los nocauts estudiados hasta la fecha pueden verse comprometidos por un
efecto del "gen pasajero" (ver más abajo) (Lusis et al., 2007). Finalmente, los knockouts
tienen un tamaño de efecto mucho mayor que las sutiles variaciones genéticas cuantitativas
o estructurales de la mayoría de los genes GWAS. Estos problemas con los knockouts se
pueden evitar comparando los resultados de GWAS humanos con los resultados de estudios
de variaciones naturales en ratones. El estudio más completo de aterosclerosis entre cepas
de ratones consanguíneos se realizó en un conjunto de aproximadamente 100 cepas
consanguíneas de ratones altamente diversas, disponibles comercialmente, conocido como
el Panel de Diversidad de Ratones Híbridos (HMDP) (Bennett et al., 2015). En total, se
estudiaron unos 1.000 ratones en el fondo de los transgenes combinados de ApoE-Leiden y
CETP humanos. La susceptibilidad a la aterosclerosis varió varias veces en 100 veces entre
las cepas (Bennett et al., 2015).
Primero preguntamos si los ortólogos de ratón de los genes GWAS humanos exhibían una
correlación significativa (p <0,05) con aterosclerosis en todo el HMDP. De los 244 genes
 GWAS, 66 (27,0%) mostraron una correlación significativa (en forma de expresión) con el
tamaño de la lesión en la aorta. Además, los niveles de expresión de 27 (11,1%) genes en el
hígado se correlacionaron significativamente con el aumento del tamaño de la lesión en la
aorta de ratón ( Tabla 3 ). Además de los GWAS CAD, ha habido grandes GWAS de
lípidos en la sangre, con un total de 274 genes candidatos identificados (
Goodarzi, 2016, Welter et al., 2014). Se probó si los ortólogos de ratones de estos genes
mostraron una correlación significativa (p <0,05) en la expresión en hígados o tejido
adiposo con lípidos plasmáticos en ratones. En general, el 55,1% (151 de 274) de estos
genes mostró una correlación significativa con los lípidos plasmáticos en el HMDP ( Tabla
3 ). Los resultados de ambas comparaciones se presentan en la Tabla S3 . Llegamos a la
conclusión de que los genes GWAS para la aterosclerosis y los lípidos plasmáticos
muestran variaciones muy consistentes cuando se estudian a través de diferentes cepas de
ratones consanguíneos.
Tabla 3 Correlación de conjuntos de genes con el tamaño de la lesión y los lípidos en la
sangre en ratones HMDP

Aorta p valor Hígado p valor

una una

Genes de aterosclerosis 202 2.08E − 156 3.67E −

de ratón (827) (24.4%) 109 (18.9%) 66

Genes CAD GWAS 66 5.38E − 27 2.54E −

(244) (27.0%) 36 (11,1%) 6

Genes CAD extendidos 152 6.17E − 98 1.75E −

GWAS (880) (17.3%) 65 (11.1%) 25

p valor p valor
Adiposo Hígado
una una

Genes LIPID GWAS 116 6.21E − 126 3.77E −

(274) (42,3%) 97 (46.0%) 111

El nombre y el tamaño de cada conjunto de genes, el tejido en el que se midió la expresión

génica y el número de genes correlacionados significativamente con el tamaño de la lesión
en la aorta y el hígado y con los lípidos en el tejido adiposo y el hígado. Los cálculos se
basaron en los niveles de expresión de genes de ratón.
a Calculado utilizando la prueba exacta de Fisher.
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Modelado de la ruta: concordancia de los estudios en humanos y ratones
Tres estudios independientes han modelado rutas de CAD basadas en datos del Consorcio
de replicación y metanálisis del genoma de la enfermedad coronaria (CARDIoGRAM)
(Ghosh et al., 2015, Mäkinen et al., 2014, Zhao et al., 2016). Mäkinen et al. utilizó un
análisis de enriquecimiento de conjuntos de SNP (SSEA) que primero cartografió los
GWAS de CARDIoGRAM con los genes basados en eQTL, y luego evaluó el
enriquecimiento de las señales CAD en redes de coexpresión específicas de tejido y vías
canónicas de las bases de datos Biocarta, KEGG y Reactome. El estudio reveló 79 vías
significativas para la CAD humana (Mäkinen et al., 2014). Gosh et al. usó una estrategia
alternativa de mapeo de genes que se basaba en la distancia cromosómica entre los SNP y
los genes y un análisis alternativo de enriquecimiento de conjuntos de genes para identificar
32 vías CAD significativas derivadas de la base de datos Reactome (Ghosh et al., 2015
). Zhao et al. curaron diferentes listas de genes candidatos basadas en SNP pico de GWAS e
implementaron redes reguladoras de genes y patrones de expresión para identificar 93 vías
relevantes de CAD basadas en rutas canónicas de Biocarta, KEGG y Reactome (Zhao et
al.,2016). Cuando se combinaron, estos tres estudios identificaron un total de 178 vías
únicas asociadas con CAD GWAS humanas ( Tabla S4 ).
Para examinar la concordancia de las vías humanas y de ratón ( Figura 3 ), modelamos las
vías de aterosclerosis en ratones utilizando métodos similares basados en el conjunto de
827 genes que se ha demostrado que contribuyen a la aterosclerosis utilizando perturbación
experimental (ver arriba). Aplicamos vías canónicas basadas en el conocimiento de las
bases de datos KEGG, Reactome y Biocarta para definir conjuntos de genes representados
en exceso. Utilizamos la prueba exacta de Fisher y definimos el significado de la
representación excesiva como p <0.01 después de la corrección de Bonferroni. Nos
centramos en 263 vías que muestran una representación excesiva significativa de genes de
ratones ateroscleróticos. Las vías para el metabolismo de los lípidos, el sistema
inmunológico, la cascada de receptores tipo peaje, la adhesión focal, la hemostasia, la
señalización de activación de las plaquetas y la agregación fueron altamente sobre
representadas.
 Figura 3 Vías de aterosclerosis de ratón de mayor clasificación: se superponen con las
vías CAD humanas
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De las 178 vías CAD humanas, 72 (40.2%) vías fueron idénticas a nuestras vías de
ratón. Un factor limitante es la diferente nomenclatura de Biocarta, KEGG y Reactome, que
hace imposible una comparación directa. Para abordar esta limitación, analizamos la
superposición de genes incluidos en estas vías y consideramos aquellas vías altamente
significativas que compartían mutuamente más del 50% de sus genes o que incluían al
menos el 90% de sus genes en una ruta de las otras especies. Al utilizar estos criterios,
observamos que el 55,1% (98 vías únicas) de las vías asociadas con la CAD humana se
superponen con las vías de aterosclerosis del ratón y el 53,2% (140) de las vías del ratón se
superponen con las vías asociadas con el GWAS humano de la CAD.
Para las rutas basadas en datos del mouse, solo cinco se superponen menos del 30% con las
rutas humanas. Estas vías específicas para ratones incluían diabetes, biología del desarrollo
y regulación de la expresión génica en células beta. La última ruta, por ejemplo, consta de
20 genes y comparte Akt1 , Akt2 , Akt3 , Foxo1 , Hnf4a , Hnf4g e insulina con rutas
asociadas con CAD humanas conocidas, mientras que los
genes Foxa2 , Foxa3 , Gck , Iapp , Mafa , Neurod1 , Nkx2-2 , Nkx6-1 , Pax6 ,Pdx1 , Pklr ,
y Slc2a2No estaban presentes en las vías humanas. En total, 37 vías humanas mostraron
una superposición de menos del 30%. Estos incluyeron el metabolismo de las poliaminas,
el transporte de zwitterión de anión de catión orgánico, la biosíntesis de pantotenato y CoA,
el metabolismo de fenilalanina, el metabolismo de aminoácidos de azufre y la
aminoacilación de ARNt. Dos vías inesperadas, la vía de interacción del receptor de
ligando neuroactivo y la vía de señalización de la neurotrofina, mostraron una
superposición de alrededor del 50% entre ratones y humanos. Dado que la mayoría de los
modelos de ratón no desarrollan infartos de miocardio, fue interesante examinar si las
especies diferían en vías relevantes como la coagulación o la degradación del colágeno. Sin
embargo, no se observaron tales diferencias significativas. En general, estos hallazgos
destacan una alta consistencia biológica entre las especies, por solo 42 (11.
Una forma de visualizar la concordancia de las vías asociadas a la aterosclerosis entre el
humano y el ratón es resumirlas en grupos. Utilizamos un análisis de componentes
principales para reducir la alta dimensionalidad de los datos para agrupar las vías según la
superposición de sus genes constituyentes ( Figura S2 ). En esta representación, cuanto más
cerca estén las vías, mayor será el porcentaje de genes compartidos. Dividimos los grupos
de acuerdo con las funciones de sus genes, con las siguientes categorías: antígeno,
apoptosis, cáncer, ciclo celular, adhesión focal, sistema inmunológico, inflamación,
metabolismo de lípidos y lipoproteínas, función y proliferación de las plaquetas y
transcripción.
Problemas de confusión
Al evaluar la relevancia de los estudios en ratones para la CAD humana, hay una serie de
posibles factores de confusión que deben considerarse. A continuación, discutimos
brevemente los más significativos.
Perturbaciones genéticas de tamaño grande contra efecto pequeño
Mientras que las formas comunes de EAC resultan de interacciones de muchos factores
genéticos y ambientales diferentes, la mayoría de los estudios con ratones se llevan a cabo
utilizando grandes perturbaciones genéticas o ambientales, como ratones knockout o dietas
extremadamente ricas en colesterol. Dichas perturbaciones extremas pueden afectar muchas
vías y cientos o miles de genes, posiblemente influyendo en la aterosclerosis de una manera
pasajera y no directamente. Los genes identificados en los GWAS, por otro lado,
generalmente exhiben una variación funcional muy modesta.
El problema de los genes del pasajero
Hasta hace varios años, la mayoría de los ratones dirigidos por genes se generaban en un
fondo genético de la cepa 129 / J y luego se transferían a la cepa C57BL / 6J mediante una
serie de retrocruzamientos. Mientras que de cinco a diez generaciones de retrocruzamiento
eliminarán con éxito la mayoría de la contribución genética 129 / J, las regiones que
flanquean inmediatamente el gen objetivo permanecerán, ya que se requerirán eventos de
recombinación poco frecuentes para sustituir los alelos C57BL / 6J. Por lo tanto, cientos de
genes 129 / J, incluyendo muchos con diferencias funcionales, contaminarán típicamente
tales estudios. Dado que muchas vías biológicas diferentes convergen en la aterosclerosis,
la posibilidad de un efecto del gen pasajero es significativa. De manera similar, los ratones
transgénicos a menudo se generan en fondos distintos de C57BL / 6J (Lusis et al.,
2007). Estudios recientes han examinado la cuestión del gen pasajero en estudios de
funciones inmunes y metabolismo óseo (Ackert-Bicknell y Rosen, 2016, Vanden Berghe et
al., 2015).
El enfoque del gen candidato es intrínsecamente parcial
Los genes candidatos generalmente se seleccionan para un estudio en base a lo que se
conoce de estudios en humanos sobre aterosclerosis o de otros datos biológicos. Por
ejemplo, algunos estudios están dirigidos a investigar mecanismos que contribuyan a
factores de riesgo como la hipertensión arterial o hipercolesterolemia. Claramente, esto
podría resultar en una superposición artificial de los resultados en las comparaciones entre
humanos y ratones. Los estudios de variaciones naturales en ratones, por otro lado, no
sufren este sesgo y es más probable que reflejen una superposición significativa.
Consideraciones estadísticas
Fenómenos como "maldición del ganador", el concepto de que el primer informe
probablemente tendrá un tamaño de efecto mayor que los estudios posteriores, y el "sesgo
de publicación", el concepto de que la literatura estará sesgada porque es más probable que
se publiquen resultados positivos resultados negativos, indudablemente han sesgado los
resultados de los estudios de genes candidatos. Por ejemplo, a partir de la década de 1980
con el desarrollo de métodos para examinar la variación genética a nivel de ADN, muchos
estudios de un número relativamente pequeño de pacientes y controles (típicamente
cientos) informaron asociaciones "significativas" de variantes de ADN con enfermedades
comunes. Pocos de los muchos cientos de hallazgos reportados podrían replicarse en los
GWAS más grandes e imparciales (Altshuler et al., 2008). Una situación similar puede
aplicarse a las investigaciones de genes candidatos en ratones que utilizan tecnologías
knockout o transgénicas, particularmente dada la gran variación no genética de los ensayos
de lesiones de aterosclerosis en ratones (Daugherty y Rateri, 2012). De hecho, hay
numerosos ejemplos de la falla en replicar los hallazgos de dichos estudios, como los que
involucran Abcg1, SRA y CD36 (Moore et al., 2005, Witztum, 2005).
Análisis de lesiones en ratones y humanos
Las comparaciones de diferentes estudios en ratones son difíciles debido a la falta de un
protocolo estandarizado. Las variables entre los estudios incluyen el modelo, el método (en
la cara, las secciones congeladas y el contenido de colesterol), el procedimiento de tinción
(lípidos e inmunitarios), la dieta, la duración del estudio, la edad de los ratones, las
condiciones del vivario y la cantidad de ratones estudiados. Debido al pequeño tamaño de
las lesiones del ratón, los análisis cuantitativos de la composición celular y la expresión
génica son difíciles (Erbilgin et al., 2013, Zhao et al., 2007). Por otro lado, la mayoría de
los estudios en humanos utilizaron definiciones clínicas para la aterosclerosis.
Discusión
La mayor parte de nuestra comprensión actual de los mecanismos subyacentes a la
aterosclerosis se deriva de estudios con modelos de ratón. Un tema importante se relaciona
con la relevancia de los modelos de ratón para la patobiología humana, particularmente
porque los datos de ratón se están utilizando para desarrollar objetivos farmacológicos, y
los modelos de ratón también se usan para probar compuestos terapéuticos en estudios
preclínicos. La reciente identificación de loci humanos asociados con CAD o lípidos
plasmáticos en GWAS grandes (Consorcio Genético de Enfermedades de las Arterias
Coronarias (C4D), 2011, Deloukas et al., 2013, Goodarzi, 2016, Nikpay et al.,
2015, Samani et al., 2007, Schunkert et al., 2011, Welter et al., 2014) brindó la oportunidad
de realizar comparaciones genéticas sistemáticas entre las dos especies. Primero realizamos
un estudio exhaustivo de los genes que se han asociado significativamente con la
aterosclerosis en ratones mediante perturbación experimental, identificando un total de 827
genes que se ha informado que influyen en el desarrollo de la lesión. También examinamos
los resultados de estudios de variación genética natural que afectan a la aterosclerosis en
ratones. Luego realizamos tres análisis comparativos diferentes. El primero abordó la
consistencia de los factores de riesgo de aterosclerosis entre las especies. El segundo
abordó la superposición de los genes GWAS CAD humanos con los resultados de estudios
con ratones. El tercero examinó la superposición de 178 vías CAD humanas y 263 vías de
aterosclerosis de ratón. Observamos una fuerte superposición en los tres análisis. En
particular, casi todos los genes GWAS humanos que se han estudiado en ratones (45 de 46)
muestran efectos consistentes en la aterosclerosis. Esto incluye la lipoproteína (a), que se
estudió como un transgénico pero no tiene un homólogo en el ratón.
Nuestras conclusiones difieren de un estudio reciente realizado por Pasterkamp y colegas
en el que los investigadores concluyeron que, con la excepción del metabolismo de las
lipoproteínas, es probable que los estudios con ratones tengan un valor muy limitado para
comprender la enfermedad humana (Pasterkamp et al., 2016). Estos investigadores
realizaron una encuesta exhaustiva de estudios en ratones de genes candidatos (en total
659) y se centraron en la superposición con genes GWAS humanos. Confirmamos
aproximadamente el 75% de sus genes candidatos de ratón en nuestra búsqueda
bibliográfica, pero no encontramos pruebas claras del 25% restante en la literatura. Esto
puede haber sido causado por la selección de los nombres de los ortólogos humanos, los
diferentes criterios de búsqueda y la inclusión más estricta de genes en nuestro estudio (por
ejemplo, varios de sus genes mostraron solo un efecto sugestivo sobre la aterosclerosis en
ratones). Sin embargo, además del número y la interpretación de los genes de ratón
identificados en la literatura, hubo diferencias significativas adicionales entre los
estudios. Primero, nuestro análisis incluyó factores de riesgo de aterosclerosis adicionales,
mientras que los suyos se enfocaron solo en los lípidos. Segundo, utilizamos un conjunto
más refinado de genes humanos basados no solo en la distancia al pico de SNP, sino
también en información funcional, particularmente datos de eQTL. Usando datos de
GWAS, realizamos comparaciones adicionales, como el examen de los genes GWAS que
se han probado en modelos de ratón para determinar su consistencia. En tercer lugar, no
restringimos nuestra comparación con los genes de modelos de ratones diseñados, pero
incluimos datos de estudios de variaciones que ocurren naturalmente en ratones. Esta es
quizás la línea de evidencia más sólida que respalda la relevancia de los modelos de mouse
porque evita algunos de los sesgos inherentes en las otras comparaciones. Finalmente, las
bases de datos de las vías utilizadas en los dos estudios son diferentes: el estudio anterior
usó Ingenuity, una compilación de datos de literatura amplia de múltiples especies y
tejidos, mientras que usamos las bases de datos Biocarta, KEGG y Reactome. En contraste
con el informe anterior, concluimos que los genes y las vías descubiertas en los estudios de
aterosclerosis en ratones reflejan una biología altamente superpuesta con la revelada por los
GWAS humanos de CAD. Esto no significa que no haya diferencias significativas. Por
ejemplo, el locus GWAS humano más impactante, en el cromosoma 9p21, probablemente
esté mediado por cambios en la expresión de un ARN largo no codificante, ANRIL, que no
se conserva en el ratón (Holdt et al., 2013). Además, si bien la conservación de las vías de
la enfermedad entre ratones y humanos es altamente significativa, está lejos de ser
completa.
La relevancia de los modelos animales para los trastornos humanos comunes ha sido
cuestionada, en gran medida por el hecho de que las dianas farmacológicas desarrolladas en
modelos animales no muestren eficacia en los ensayos en humanos (Griego y Hansen,
2013, Mak et al., 2014, Perrin, 2014, Richmond y Su, 2008). Una explicación, por
supuesto, es que hay diferencias significativas entre las especies. Otra explicación plausible
es que hay falsos positivos en los datos del mouse, como se explicó anteriormente. Un
tercero se refiere al diseño experimental. En particular, no está claro que los ratones
knockout sean apropiados para modelar las variaciones genéticas sutiles que subyacen a las
formas comunes de aterosclerosis. Finalmente, la mayoría de los estudios con ratones se
realizaron en un solo fondo genético (generalmente, la cepa C57BL / 6J), lo que puede
limitar gravemente la amplitud de las conclusiones que se pueden extraer (Gasch et
al.,2016). A pesar de estas limitaciones en los estudios con ratones, nuestra comparación
entre especies reveló muchas vías convergentes y apoya el valor de los modelos de ratones
en la revelación de procesos mecanicistas críticos de la aterogénesis.
Es probable que centrarse en las rutas patógenas en lugar de los genes individuales sea una
forma más productiva de traducir la información de modelos animales a estudios
humanos. De interés inmediato es determinar con más detalle los factores que regulan estas
vías e identificar los tejidos en los que contribuyen a la aterosclerosis. Además, las rutas
convergentes y divergentes entre las especies reveladas en nuestra revisión comparativa
pueden ayudar a guiar la selección de los modelos apropiados en futuros estudios
preclínicos. Además de la progresión de la lesión, algunos estudios han sugerido una
superposición de genes que controlan la regresión de la lesión en ratones y humanos, lo que
sugiere una posible vía para la investigación terapéutica (Ramsey et al., 2014). Dadas las
muchas ventajas de los ratones para estudiar la aterosclerosis, incluido el acceso a los
tejidos y la capacidad de controlar el medio ambiente, los estudios en ratones
probablemente continuarán abriendo el camino hacia la comprensión mecanicista.

Contribuciones de autor
MVS realizó la búsqueda bibliográfica de genes de ratón. Todos los autores participaron en
los análisis de los datos y revisaron críticamente el manuscrito, que fue escrito por MVS,
HS y AJL.
Expresiones de gratitud
Este trabajo fue apoyado por subvenciones de la Fondation Leducq ( CADgenomics :
Understanding CAD Genes, 12CVD02), el Ministerio Federal Alemán de Educación e
Investigación (BMBF) en el marco o el concepto de investigación y financiamiento e: Med
( e: AtheroSysMed , subvención 01ZX1313A -2014), el Séptimo Programa Marco de la
Unión Europea FP7 / 2007-2013 en virtud del acuerdo de subvención n. HEALTH-F2-
2013-601456 ( CVgenes -at-target), la DFG como parte de Sonderforschungsbereich CRC
1123 (B2), y NIH otorga HL28481 y HL30568.

Figura 1 Genes candidatos de CAD GWAS humanos: enfoque en genes y

validados en ratones
El gráfico circular (izquierda) muestra genes candidatos humanos GWAS de CAD
agrupados en aquellos que aún no se han estudiado en ratones (azul), aquellos
estudiados en modelos experimentales con efectos consistentes (verde) o efectos
inconsistentes (rojo), y aquellos sin homólogo humano (blanco). ). El segundo
gráfico circular muestra el porcentaje de genes que contribuyen a los rasgos o
funciones asociados con CAD (derecha). Los genes con efectos pleiotrópicos se
ordenan de acuerdo con su contribución más dominante.
Figura 2 Genes candidatos a CAD GWAS humanos que han sido probados
en modelos animales de ratón
Esta gráfica circular muestra una fracción de 244 genes candidatos humanos
GWAS de CAD que se han probado en modelos animales. Los números dentro del
círculo representan los 22 pares autosomas humanos. Los genes candidatos se
ordenan de acuerdo con el SNP pico de GWAS. Los genes marcados de verde ya
se han estudiado en modelos de ratones y muestran efectos significativos en la
aterosclerosis. Se estudió la lipoproteína (a) (LPA), que no tiene ortólogo en
ratones, en un modelo de ratón transgénico. El rojo indica que la perturbación
experimental del gen en ratones no mostró un efecto significativo sobre la
aterosclerosis. Los genes marcados con azul son el tema de la investigación en
curso en modelos de ratón.

Figura 3 Vías de aterosclerosis del ratón de mayor clasificación: se

superponen con las vías CAD humanas
Se enumeran las rutas de aterosclerosis de ratón más significativas (valor p). Las
vías idénticas y altamente superpuestas entre las especies están representadas
por líneas continuas. Las líneas discontinuas indican rutas humanas que
contribuyen con> 90% de sus genes a una ruta de ratón. Las rutas menos
superpuestas de ambas especies se muestran a continuación.

Tabla 1 Asociación de ortólogos humano-ratón con bases de datos de

enfermedades humanas

Fold Genes p
Término FDR a
Change de ratón Valor b

Enfermedad de la 2.70E 1.10E −

4.5 53
arteria coronaria − 23 27

Enfermedad 1.20E 5.40E −

4.4 32
isquémica del corazón − 12 17

2.90E 1.30E −
Restenosis 4.3 47
− 19 23

8.40E 4.90E −
Longevidad 4 47
− 17 21

Arterioesclerosis 5.80E 3.60E −

3.9 100
coronaria − 39 43

1.40E 8.40E −
Enfermedad coronaria 3.9 35
− 11 16

Enfermedad de 6.10E 3.30E −

3.3 89
Alzheimer − 12 15

5.30E 5.70E −
Infarto de miocardio 3 62
− 15 19

5.40E 7.80E −
Hipertensión 2.6 79
− 15 19
 Fold Genes p
Término FDR a
Change de ratón Valor b

2.00E 3.00E −
Diabetes tipo 2 2.1 104
− 13 17

Se enumeran los diez principales términos de DAVID asociados con 827 genes de
aterosclerosis de ratones derivados de la literatura. El "cambio en el pliegue" es el
grado de enriquecimiento de los genes de aterosclerosis de ratón dentro de cada
categoría de genes, y "genes de ratón" es el número de dichos genes. FDR, tasa de
descubrimiento falso.
un ajustado por comparación múltiple.
b Calculado utilizando la prueba exacta de Fisher.

Tabla 2: consistencia de los factores de riesgo CAD humanos en modelos de

ratones con aterosclerosis

Factores de riesgo Efecto sobre la

referencia
concordantes aterosclerosis

Plump et al., 1992; van

hipercolesterolemia ↑
Ree et al., 1994

Huszar et al.,
Niveles elevados de
↑ 2000; Powell-Braxton y
lipoproteínas: LDL
otros, 1998

Knouff et al.,
Niveles elevados de
↑ 2004; VanderLaan et al.,
lipoproteínas: VLDL
2009

Niveles elevados de Bérard et al., 1997; Feig

↓
lipoproteínas: HDL et al., 2014;

Callow y otros,
Niveles elevados de 1995; Schneider et al.,
↑
lipoproteínas: LPA 2005; Pedersen et al.,
2010
Factores de riesgo Efecto sobre la
referencia
concordantes aterosclerosis

hipertrigliceridemia ↑ Voyiaziakis et al., 1998

Leong et al., 2015; Weiss

hipertensión ↑ et al., 2001; Wiesel et al.,
1997

Enfermedades
↑ Rose et al., 2013
inflamatorias: artritis.

Enfermedades
↑ Ma et al., 2008
inflamatorias: lupus.

Enfermedades
inflamatorias: ↑ Karbach et al., 2014
psoriasis.

Boué et al., 2012; Gairola

smoking ↑ et al., 2001; Lietz et al.,
2013

Contaminación del Araujo, 2010; Soares et

↑
aire al., 2009; Sun et al., 2005

In't Veld,
2014; Kunjathoor et al.,
DT1 ↑
1996; Shen y Bornfeldt,
2007

Jun et al., 2011; Rey,

2012; Renard et al.,
DT2 ↑
2004; Schreyer et al.,
1998
Factores de riesgo Efecto sobre la
referencia
concordantes aterosclerosis

Merat et al.,
envejecimiento ↑ 2000; Rosenfeld et al.,
2000

Kumari et al., 2003; Najafi

angustia ↑ et al., 2013; Roth et al.,
2015

Gregory et al.,
OTMA ↑ 2015; Hartiala et al.,
2014; Wang et al., 2011

trombosis ↑ Schafer et al., 2003

Meissner et al.,
Falta de actividad
↑ 2011; Pellegrin et al.,
fisica
2009

Gibson et al., 2004; Lalla

Presencia bacteriana ↑
et al., 2003

Bro et al., 2003; Hewitson

Insuficiencia renal ↑ et al., 2015; Neven y
D'Haese, 2011

Sindrome metabolico ↑ Kennedy et al., 2010

Efecto sobre
Factores de riesgo Athero en
referencia
discordantes humanos /
ratones
 Factores de riesgo Efecto sobre la
referencia
concordantes aterosclerosis

Chiba et al.,
↑ / - (Lep ob / 2008; Nishina et al.,
obesidad ob
ratones) 1994; Plummer y Hasty,
2008

masculino ↑ /
género Venegas-Pino et al., 2016
femenino ↑

↑ indica que el factor está asociado positivamente con la aterosclerosis, ↓ indica una
asociación negativa, y - indica que no hay asociación con la aterosclerosis.

Tabla 3 Correlación de conjuntos de genes con el tamaño de la lesión y los

lípidos en la sangre en ratones HMDP

p p
Aorta Hígado
valorar a valorar a

Genes de
202 2.08E − 156 3.67E −
aterosclerosis de
(24.4%) 109 (18.9%) 66
ratón (827)

Genes CAD GWAS 66 5.38E − 27

2.54E − 6
(244) (27.0%) 36 (11,1%)

Genes CAD
152 6.17E − 98 1.75E −
extendidos GWAS
(17.3%) 65 (11.1%) 25
(880)

p p
Adiposo Hígado
valorar a valorar a

Genes LIPID 116 6.21E − 126 3.77E −

GWAS (274) (42,3%) 97 (46.0%) 111
El nombre y el tamaño de cada conjunto de genes, el tejido en el que se midió la
expresión génica y el número de genes correlacionados significativamente con el
tamaño de la lesión en la aorta y el hígado y con los lípidos en el tejido adiposo y el
hígado. Los cálculos se basaron en los niveles de expresión de genes de ratón.
a Calculado utilizando la prueba exacta de Fisher.