Universidad Nacional Abierta y a Distancia

Vicerrectoría Académica y de Investigación

Guía de laboratorio in situ

Actividades a desarrollar:

Práctica No. 1
Aislamiento de microorganismos en diferentes
superficies
PRE – LABORATORIO

¿Que es bioseguridad?
Bioseguridad es un conjunto de normas preventivas destinadas a mantener el
control de riesgos laborales procedentes de agentes biológicos, físicos o químicos
en el laboratorio logrando la prevención de impactos nocivos frente a riesgos propios
de su actividad diaria, asegurando que el desarrollo o resultado final de dichos
procedimientos no atente contra la seguridad del trabajador. La bioseguridad
analiza los accidentes o incidentes para elaborar normas y procedimientos que
permitan evitarlos, promoviendo el uso adecuado de instrumentos, materiales,
espacios, etc.

Los laboratorios dedicados al trabajo en Microbiología deben cumplir con una serie
de características que aseguren las condiciones de trabajo y la seguridad de las
personas.
El objetivo de la Seguridad Biológica es el de disminuir y prevenir la salida y
exposición de agentes que puedan ser peligrosos para las personas que trabajan
tanto dentro como fuera de este tipo de laboratorios y para el medio o ecosistema
donde podrían ir directa o indirectamente estos agentes.
Los objetivos específicos de Bioseguridad comprenden una serie de acciones
tendientes al control del riesgo que encierran las actividades en los siguientes
campos:
a) Manipulación de microrganismos patógenos.
b) Usos de la tecnología del ADN Recombinante.
c) Manipulación de material infeccioso
d) Uso de fármacos, radiaciones y elementos químicos de efecto dañino en el
hombre, probado o no bien definido.
e) Medidas de protección del ambiente.
La Seguridad Biológica se puede resumir en tres elementos indispensables que son:
las técnicas de laboratorio, el equipo de seguridad y el diseño de la instalación.
 a. ¿Cuáles son las normas básicas de bioseguridad en el
l a b o r a t o r i o d e microbiología?
PRECAUSIONES UNIVERSALES PARA LABORATORIOS
Independientemente del tipo de riesgo del laboratorio, existen unas series de
normas de seguridad básicas para trabajar que se aplican en todos los casos.
Luego, y de acuerdo a las características del laboratorio, el trabajo que allí se
realice y el material con el que se trabaja, se aplicarán otras normas más
específicas. Estas normas se conocen como Precauciones universales de
Laboratorio, e incluyen:
Acceso limitado al laboratorio
No beber, comer, fumar, manipular lentes de contacto ni aplicarse cosméticos
dentro del laboratorio:
 Utilizar las barreras de protección primaria adecuadas: como guantes,
tapaboca.
 Ropas protectivas: batas de laboratorio con mangas largas, abotonado. No
usar la bata de otra persona
 Calzado cerrado
 Protección facial o/u ocular: gafas o máscaras. De preferencia, no usar
lentes de contacto en el laboratorio, aún con protección ocular
 El cabello debe estar recogido, no solo en el caso de usar mecheros, sino
también para evitar que obstruya la visión
 No pipetear con la boca
 No oler los reactivos y materiales
 No tocar los materiales y reactivos sin guantes
 Adoptar procedimientos que impidan la generación de aerosoles
 Descontaminar adecuadamente las mesadas, luego de finalizar el trabajo
del día y cada vez que derrame material químico o biológico
 Colocar los residuos en los recipientes designados a tal fin
 Lavado de manos, luego de manipular cualquier tipo de material (químico o
biológico), después de sacarse los guantes y antes de abandonar el
laboratorio
 No trabajar solo en el laboratorio, cerciorarse de la presencia de otra/s
personas en el servicio
 Almacenar las muestras y los reactivos en heladeras distintas y siempre
correctamente tapadas
 No utilizar las mismas heladeras ni mesas para reactivos y muestras que
Para los alimentos
 No usar las batas o guardapolvos de trabajo fuera del laboratorio
 Colocar carteles indicadores de riesgo en lugares claramente visibles
El simple cumplimiento de estas normas no asegura la eliminación definitiva del
riesgo de accidentes en los laboratorios, pero disminuye las posibilidades de que
estos ocurran.
Existe otra cuestión importante a la que no se le suele prestar la debida atención,
pero que es de gran importancia a la hora de trabajar de forma segura. Estas son
el orden y la limpieza. Una limpieza defectuosa y un aumento del uso de materiales
sucios y/o descartables que se almacenan en el laboratorio, dan como resultado
un lugar de trabajo incompatible con la bioseguridad.
Los procedimientos o protocolos de emergencia son extremadamente dificultosos
de ejecutar en el desorden. Además, el orden contribuye, entre otros aspectos, a
una mejor calidad del trabajo. La corrección de esta situación requiere un cambio
de actitud por parte del personal, lo cual a veces es difícil de conseguir.

b. Mencione las clases de esterilización, cuales son los agentes de

esterilización con más uso en el laboratorio, en que consiste cada
uno de ellos y para qué materiales se utilizan.

Material que se
Agente de Temperatura de
Equipo utilizado puede esterilizar
esterilización Uso (si se aplica)
por este método.
Esterilización con Agente Fisico La estufa de
calor seco 120° a 180°C esterilización
Esterilización con Agente Fisico 121°C Autoclave
calor húmedo

Radiaciones Agente Fisico

Filtración Agente Fisico Compresores de

Aire

c. Establezca las diferencias entre esterilización y desinfección

Diferencias
Esterilización Desinfección
Eliminación o muerte de todos los Agente que elimina la carga microbiana
microorganismos que contiene un total en superficies inanimadas tales como
objeto o sustancia, y que se habitaciones
encuentran acondicionados de tal
forma que no pueden contaminarse
nuevamente.

d. ¿Qué es un medio de cultivo; de qué están compuestos

principalmente; cómo se clasifican según su proporción de agar y
según su suministro de nutrientes?
Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el
desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un
cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que
los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial

debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad
y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o
alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en
composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de
muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que
se añadirán otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios
de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se
solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre
el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.

e. ¿Cuál es la utilidad de los medios de cultivo y qué diferencia

un caldo de un medio sólido?
f. ¿Cuál es el fundamento de la coloración de Gram?
g. ¿Qué diferencias encuentra entre bacterias Gram positivas y Gram
negativas?
h. ¿Cuáles son las principales características morfológicas y
metabólicas de los hongos?

Bibliografía.

 Calviño, G y Corbalán, M. (2013). Bioseguridad. Universidad Nacional del

Rosario. Facultad de ciencias bioquímicas y farmacéuticas.
 Norma IRAM 80059 (2000). Clasificación de microorganismos infectantes por
grupo de riesgo para humanos y animales, y su relación con los niveles de
bioseguridad según la actividad desarrollada. Primera edición. Instituto
Argentino de Normalización (IRAM).

Práctica No. 2
Condiciones de crecimiento y Metabolismo
Bacteriano
1. PRE – LABORATORIO
a. ¿Qué factores intrínsecos y extrínsecos afectan el
crecimiento de los microorganismos?
b. Defina los diferentes sistemas de siembra: Punción y estría, agotamiento,
rejilla y profundidad.
c. Qué se entiende por metabolismo Bacteriano

Practica No. 3
Análisis microbiológico de alimentos
1. PRE-LABORATORIO

a. ¿Qué son microorganismos indicadores y que revela su presencia en

un análisis microbiológico?
b. ¿Cómo se expresan los resultados de un recuento?
c. ¿En que consiste el método del número más probable?