INTRODUCCIÓN

La levadura del género Saccharomyces es conocida por los humanos desde hace miles
de años siendo usada rutinariamente en muchos procesos biotecnológicos
tradicionales, incluyendo la industria panadera y en producción de varias bebidas
alcohólicas. En consecuencia, ha sido muy estudiada y es considerada como un sistema
modelo para el análisis metabólico, molecular y genético de organismos eucarióticos.
Debido a su GRAS status (de las siglas en inglés: Generally Recognized As Safe)
individuos del género Saccharomyces son utilizados en gran escala en procesos de
biomasa-dirigida, como producción de levadura de Baker, extractos de levadura y otros
aditivos alimenticios (vitaminas, proteínas, enzimas y agentes saborizantes) (Bekatorou
et al., 2006), así como para la producción de proteínas heterólogas (incluyendo vacunas
y otros componentes terapéuticos), o incluso para la ingeniería completa de vías
metabólicas nuevas que lleven a la producción biotecnológica de importantes
farmacéuticos. (Hensing et al., 1995). La combinación del amplio conocimiento de la
fisiología de la levadura S. cervisiae, junto al completo secuenciamiento de su genoma,
ha llevado al desarrollo de la producción de cepas con propiedades optimizadas (Sagt
SM et al., 2000). Una de las mayores aplicaciones industriales de S. cerevisiae se da
en su habilidad de fermentar azúcares eficientemente, incluso bajo condiciones
totalmente aeróbicas. (Lagunas et al., 1979). En el caso de S. uvarum, al ser un hibrido
de S. cerevisiae y S. monacensis (Nguyen, 2005), presenta varias características
heredadas de sus dos parentales, así como otras como: la degradación de pentosas,
menor producción de etanol (Bertolini et al, 1996) y tolerancia a pH ácidos para la
preparación de vinos (Nguyen, 2005).

La fermentación es el proceso en el que se usa microorganismos para producir

productos de valor como antibióticos, enzimas industriales, alimentos, y químicos.
(Daramola et al., 2008) La fermentación comercial requiere de rendimiento máximo,
actividad, estabilidad de almacenaje y aparición del producto final de la levadura.
(Burrows et al., 1979) Esto puede alcanzarse manipulando varios parámetros
incluyendo el patrón de adición de sustrato y nutriente. (Oura E. et al., 1983) El diseño
óptimo del medio de cultivo es un aspecto muy importante para desarrollar el proceso
de fermentación. Las técnicas de diseño experimental son herramientas muy útiles para
este propósito, al proporcionar modelos estadísticos, que ayudan a entender las
interacciones entre los nutrientes al variar la concentración y en calcular la
concentración óptima de cada nutriente para un objetivo concreto (máxima producción
enzimática) (Sarra et al., 1993)
Ya que la baja formación de subproducto y una tasa alta de biomasa del azúcar son pre
requisitos para la viabilidad económica de las aplicaciones de biomasa-dirigida, la
ocurrencia de fermentación alcohólica en estos procesos es altamente indeseable
porque reduciría la tasa de biomasa. (Verduyn et al., 1991)

Como bien se sabe, el metabolismo de la glucosa en S. uvarum puede ser por

respiración o por fermentación dependiendo de las condiciones de cultivo y de su
disponibilidad del sustrato limitante cuando una adecuada y continua provisión de
suplementos minerales, nitrógeno, factores de crecimiento y otros inputs fisiológicos,
están disponibles. Bajo condiciones aeróbicas, S. uvarum usa azúcares como glucosa
para generar más masa celular que alcohol. (Barford, 1979). Durante estas condiciones,
S. uvarum crece lentamente produciendo largas cantidades de biomasa.

En la presente práctica se buscó cuantificar la producción de biomasa y etanol de la S.

uvarum en sistema lote utilizando un reactor del tipo tanque agitado, así como la
determinación del rendimiento de biomasa por unidad de sustrato y el rendimiento de
etanol por unidad de sustrato.

MATERIALES Y MÉTODOS

Obtención de inóculo

Se realizó una suspensión añadiendo 5 ml de suero fisiológico a una cuña de

Saccharomyces uvarum (Laboratorio de Micología y Biotecnología UNALM, Lima-
Perú). 4 frascos de 250 ml conteniendo 50 ml de Medio A (glucosa (1.0g/L), (NH 4)2SO4
(0.1g/L), K2HPO4 (0.01g/L), extracto de levadura (0.01g/L) y agua de caño) fueron
inoculados con 0.5 ml de esta suspensión y posteriormente incubados en baño agitado
a 30ºC y 200 rpm durante 12 a 18 horas.

Producción de biomasa

Se procedió a inocular el contenido de los 4 Erlenmeyers a un biorreactor Applikon de

3L conteniendo 1.8 L de medio B (glucosa (20.0g), (NH4)2SO4 (2.0 g), K2HPO4 (0.2 g),
extracto de levadura (0.2 g) y agua de caño 1.8 L) y 1 ml de antiespumante 289 sigma.
La fermentación se mantuvo a condiciones constantes de temperatura (28ºC con
refrigeración a baño flujo), pH (7.0±0.2), condensación (refrigerado con agua de caño),
agitación (400 rpm), y aireación (2vvm) y proceso tuvo una duración de 72 horas.
Pasado este tiempo se tomaron 4 alícuotas de 40 ml y se centrifugaron a 3500 rpm
durante 20 minutos.
Procedimientos analíticos

Para determinar la cantidad de azucares reductores, se trabajó con el sobrenadante

obtenido en el paso anterior y se utilizó el método de Miller utilizando ácido
dinitrosalicílico (DNS) (Miller, 1959). Para determinar el peso seco final de biomasa, se
secó el sedimento obtenido a partir de la centrifugación anterior.

Falta lo del etanol solo es copiar lo del informe anterior

BIBLIOGRAFÍA

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