Introducción Materiales y Métodos
Todas las proteínas de la célula tienen
la función de catálisis que consiste en
proporcionarle mayor o menor
velocidad a las reacciones químicas
dentro de la célula, además estas
ayudan en el proceso de metabolismo,
adicional a la disminución de energía
de activación que esta requiere. Las
enzimas controlan también la
velocidad con que se da la reacción
para que la energía se libere a una
temperatura que no afecte al
organismo. Los metabolismos de los
seres vivos se encuentran bajo las
respectivas reacciones provocadas
por miles de enzimas. Según lo antes
dicho diríamos que las enzimas
cumplen un papel importante en el
buen funcionamiento del cuerpo
humano, dado que más que acelerar
reacciones en el metabolismo, estas
ayuda y hacen presencia en muchas
otras cosas en las que más adelante
irán conociendo.
Lo que puede hacer una enzima o
provocar es un tema bástate amplio y
que se vuelve complejo a la hora de
hablar de este, por tal motivo nos
centramos en la observación y los
factores que afectan la estructura de la
proteína, que también se ven
reflejados en la función o las
actividades de las enzimas, dándonos
la información necesaria para llegar a
la deducción de que es lo que
sucedería si en el organismo algunas
de estas llegaran a fallar o no
estuvieran presentes.
Lugar y fecha de observación:
Laboratorio de Biología II de la
Universidad del Magdalena, 06 de
abril de 2018.
Los materiales usados fueron: Tubos
de ensayo, papel absorbente,
peróxido de hidrogeno, ácido acético,
amoniaco, solución de almidón.
Hígado fresco licuado en agua.
En la primera actividad, se lavaron y
rotularon 4 tubos de ensayo, al
primero no se le agregó hígado, al
segundo se le agregó 1ml de hígado,
al tercero, 2m y al cuarto, 4ml de
extracto de hígado, luego, se procedió
a agregar 2ml de peróxido de
hidrogeno en cada uno de los tubos.
En una segunda parte, se lavaron y
rotularon 5 tubos de ensayo, en los
que se agregó 1ml de extracto de
hígado a cada uno, luego, al primer
tubo de ensayo no se le aplicó ningún
sustrato, al segundo se le hizo
reaccionar con 1ml de peróxido de
hidrogeno, al tercero, 2ml, al cuarto
4ml y al quinto 6ml, y se procedió a su
observación.
Para la tercera actividad se lavaron y
rotularon 3 tubos de ensayo, al cual se
le colocaron 2ml de extracto de hígado
a cada uno, luego, el primer tubo se
puso en baño con hielo por
aproximadamente 40 minutos, el
segundo se mantuvo a temperatura
ambiente y el tercero se colocó en
agua hirviendo por alrededor de 5
minutos, Después de esto, se agregó
2ml de peróxido de hidrogeno a cada
uno de los tubos y posteriormente se
realizó la observación y su respectiva
reacción.
En la cuarta actividad, se prepararon y
rotularon 3 tubos de ensayos, en el
que se agregó 2ml de hígado a cada
uno de los tubos. Al primero se le
agregó 5 gotas de ácido acético, al
segundo se le agregó 5 gotas de
Amoniaco y al tercero no se le agregó
nada, se agitaron con fuerza y se
procedió a agregar 2ml de peróxido de
hidrogeno a cada uno.
Por último se prepararon cuatro tubos
de ensayos, al primero y tercero se le
agregaron 1 ml de extracto de hígado,
y al segundo y cuarto, se le agregaron
1ml de saliva, luego se procedió a
agregar 2ml d peróxido de hidrógeno
al primer y segundo tubo de ensayo, y
después, al tercero y cuarto 2ml de
solución de almidón, se agitó
fuertemente y se le agregaron a estos
dos últimos mencionados 3 gotas de
Lugol y se agitó, procediendo a su
observación.
Resultados
El procedimiento realizado en el
laboratorio, mediante la reacción de la
enzima peroxidasa, presente en el
hígado cuando actúa con el agua
oxigenada, genera diferentes
resultados, que dependen de distintos
factores como la temperatura, la
concentración de protones, la enzima
o el sustrato. En una primera instancia
se tenía distintas cantidades de
extracto de hígado, conservando
constante la cantidad de sustrato
(agua oxigenada). A excepción del
primer tubo, el cual no reacciono,
quedando física y químicamente igual,
contrastando con el segundo tubo en
donde al añadir el sustrato subió
rápidamente generando espuma
blanquecina, en el tercer tubo, subió
igual de alto que el primero pero no a
la misma velocidad, sino un poco más
lento, por último, el cuarto tubo de
ensayo no subió tan rápido en
comparación a los otros, generando
burbujas más espesas y con una
coloración café mucho más oscura
que las otras como se muestra en la
(fig. 1) que presentaban burbujas
blancas y naranja claro.
Para la segunda parte, en donde se
mantuvo constante la cantidad de
extracto de hígado, variando esta vez
el sustrato. Al primer tubo, no se le
agrego peróxido de hidrogeno, por
ende no hubo cambio, a diferencia de
los tubos 2 y 3, en donde se pudo
notar que a más sustrato más rápido
reaccionaba la enzima con el
peróxido, haciendo que subiera más
en menor cantidad de tiempo. El tubo
de ensayo 4, reacciono rápidamente,
generando espuma de coloración
blanca hasta por fuera del mismo, pero
no derramándose, la cual bajaba
lentamente después de un tiempo de
haber adicionado el peróxido. En el
tubo 5, debido a que se agregó una
mayor cantidad de sustrato, la
reacción de la enzima ocurrió con
mayor rapidez, haciendo que
desbordara la espuma blanca del tubo
(fig. 2), además del aumento de
temperatura que esta sufrió. Después
de unos minutos, se pudo ver que la
mezcla del extracto de hígado con el
agua oxigenada era heterogénea, y
estaba dividida en una parte más
oscura y otra más clara, en donde era
menos notable a medida que había
más peróxido de hidrogeno.
En la parte 3, el primer tubo, que
estuvo en hielo por varios minutos, al
momento de adicionarle peróxido de
hidrógeno, generó pequeñas burbujas
que no subieron tanto como indica la
(fig. 3.1), a una velocidad relativamente
media, mucho menor que la del tubo a
temperatura ambiente, el cual
reacciono con rapidez, subiendo la
mezcla a gran velocidad generando
burbujas poco espesas. En el tubo de
ensayo 3, el cual había sido calentado
previamente, adquirió un color
morado como se muestra en la (fig. 3.2),
con aparición de burbujas al mismo
tiempo que presento efervescencia,
en donde una parte se sedimento,
generando una mezcla heterogénea.
En la cuarta parte del laboratorio, se
agregó ácido acético, conocido
comercialmente como vinagre, al
primer tubo de ensayo con extracto de
hígado, el cual adquirió una coloración
café verdoso pero no subió y genero
pocas burbujas, ya que a esta
temperatura las peroxidasas se
desnaturalizan y al momento de
agregar el agua oxigenada no
presentó efervescencia conservando
la misma coloración. En el segundo
tubo de ensayo, al cual se le agrego
Amoniaco al extracto de hígado, una
sustancia básica, esta tomo una
coloración marrón oscura y después
de agregar el peróxido de hidrogeno
reacciono subiendo lentamente, y
después separándose una parte más
oscura y una menos oscura, formando
una mezcla heterogénea. Para el
tercer tubo de ensayo, no se le agrego
ninguna sustancia al hígado,
quedando de manera neutra, pero al
momento de agregar el peróxido de
hidrogeno, reacciono rápidamente,
provocando gran cantidad de espuma.
(fig. 4)
En última instancia, el primer tubo el
cual contenía extracto de hígado y se
le fue agregado peróxido de
hidrogeno, reacciono rápidamente,
haciéndolo subir a gran velocidad,
además de la aparición de gran
cantidad de burbujas. En el segundo
tubo el cual contenía saliva al que se
le agregó el mismo sustrato del
anterior, no ocurrió nada, no hubo
reacción, por ende ningún cambio
físico o químico. En un tercer tubo de
ensayo, el cual tenía extracto de
hígado y se le adiciono solución de
almidón, no reacciono, es decir, no se
elevó pero cambió de color, a uno
beige, hubo un cambio químico. En el
último tubo de ensayo, que contenía
saliva y se le agrego solución de
almidón y posteriormente Lugol
adquirió una coloración morada. (fig. 5)
Fig. 1. Reacción de la enzima peroxidasa
con la presencia del peróxido de hidrogeno.
Fig. 2. Reacción de la enzima con diferentes
cantidades de peróxido de hidrogeno.
Fig. 3.1, izq. 3.2 der. Enzimas sometidas a
distintas temperaturas.
Fig. 4. Reacción enzimática sometida a
diferentes pH.
Fig. 5. Reacción de las enzimas
peroxidasas y amilasa frente al peroxido de
hidrogeno y el almidón.
Discusión
Tal como se estudió anteriormente, las
enzimas representan un catalizador
biológico de diversos tipos de
reacciones, en las que estas pueden
acelerar o desacelerar una reacción
química sin alterar su resultado final.
Luego de realizadas las actividades
correspondientes a la práctica del
tema a tratar, se obtuvieron unas serie
de resultados muy variados, en los
que según las condiciones de
realizado el experimento, unos difieren
muchos de otros.
Primeramente se obtuvieron cuatro
reacciones diferentes, en las que la
cantidad de peróxido de hidrogeno era
constante, y la cantidad de peroxidasa
(extracto de hígado) era
uniformemente creciente. Aquí, al
efectuar esta reacción, se observo que
a medida que el nivel de peroxidasa
aumentaba, la reacción al momento
de encontrarse esta ante peróxido de
hidrogeno, era más lenta y más
concentrada que la anterior. Según
Rodney Boyer, la actividad enzimática
está definida por diferentes factores
experimentales, uno de esos es la
cantidad de enzimas que interactúan
con el sustrato, al ser esta cantidad
mayor, se esperaría que la reacción
también lo fuera siempre y cuando
haya suficiente sustrato, esto se
evidencia en los resultados obtenidos
al observar que en el último tubo de
ensayo (en donde la cantidad
enzimática era mayor a la cantidad de
sustrato o peróxido de hidrogeno) la
reacción fue más tardía a conclusión
comparación con los tubos a
anteriores, en esta la cantidad de
sustrato era insuficiente para la
proporción enzimática que la hacía
reaccionar. En esta reacción también
hubo aparición de burbujas, las cuales
eran más oscuras en el último tubo, en
comparación con los otros, esto
debido a que junto a la reacción
química ocurre un desprendimiento de
gases que forman una espuma
blanca6. Es decir, al momento de
reaccionar la enzima con el peróxido,
existe una formación de burbujas
causadas por el gas oxigeno
producido por la ruptura de H2O2.
Estas burbujas eran más oscuras ya
que había mayor cantidad de hígado,
por ende su coloración fue más fuerte.
En la segunda actividad, en donde
había cinco tubos de ensayo, los
cuales contenían constante la
cantidad de hígado, variando de
manera ascendente la proporción de
sustrato, se notó que a mayor sustrato
más rápida era la reacción, Esto se
debe ya que a una concentración
constante de enzima, la velocidad de
una reacción se incrementa
directamente en proporción al
aumento de la cantidad de sustrato,
hasta alcanzar un óptimo, Es decir a
una concentración suficientemente
alta de sustrato, los sitios catalíticos de
la enzima se saturan y la reacción
alcanza su velocidad maxima, Así
como se explica en la ecuación de
𝑽𝒎𝒂𝒙 ⁅𝑺⁆
Michelis-Menten, 𝑽𝒐 = en
𝑲𝒎+ ⁅𝑺⁆
donde realizaron un experimento
parecido para estudiar las velocidades
de las reacciones, llegando a la misma
de que, con
concentraciones relativamente bajas
de sustrato, la velocidad inicial de la
reacción aumenta conforme se añade
más sustrato, conocido como un
efecto de saturación de sustrato. El
último tubo, aparte de reaccionar
rápidamente, se calentó debido a la
liberación de energía que ocurre
durante la reacción química.
En estas dos primeras actividades, las
diferentes reacciones después de
unos minutos de haber subido,
bajaron nuevamente, esto se debe a
que, los complejos que se forman
entre enzima-sustrato son inestables y
se descomponen rápidamente, por
esto la peroxidasa, que es una hemo-
enzima que posee espectro de
absorción característico de su grupo
hemo muestra cambios transitorios en
sus espectro cuando se mezcla con el
peróxido de hidrogeno.
En el análisis de la tercera actividad,
en donde se estudiaron las diferentes
reacciones a diferentes temperaturas,
se obtuvo que enel tubo de ensayo
que fue previamente calentado
reaccionó lentamente, esto debido a
que, la temperatura afecta a todas las
reacciones químicas, aumentando la
velocidad, pero las enzimas, al ser
proteínas, se desnaturalizan a
elevadas temperaturas, cada enzima
tiene una temperatura optima a la que
actúa con su máxima eficacia, y esta
depende del pH, Las enzimas
presentan una marcada fragilidad
térmica ya que por una elevada
temperatura tienden a la perdida de la
estructura terciaria alterando los sitios
isoterico y alosterico y por ende, al
desnaturalizarse con la temperatura,
no reaccionó de la manera a la cual
harían a un temperatura ambiente,
como se realizó en el segundo tubo de
ensayo, en donde, si la enzima se
encuentra a una temperatura optima,
que normalmente esta cerca de la
temperatura normal del organismo del
que procede, la cual reacciona con
mucha más facilidad, como en este
caso la peroxidasa, que por proceder
de mamífero, la temperatura optima se
aproxima a 37ºC, Esta reacción
también tuvo un cambio de color,
causado por una respuesta a la
reacción enzimática. En el caso del
tubo de ensayo, el cual se dejó en
hielo por varios minutos, reaccionó,
pero en una forma mucho más lenta,
debido a que las enzimas, por la
temperatura, estaban muy rígidas, y
por ende, no reaccionan de la misma
manera.
En una cuarta actividad, en donde al
primer tubo se le agregó ácido acético,
teniendo en cuenta que el pH óptimo
al cual actúa la peroxidasa es entre 6
y 8, no reaccionó, ya que la
concentración de ion hidrogeno afecta
a las enzimas, debido a que la
variación del mismo puede afectar la
ionización de los grupos del lugar
activo y el ácido acético, al ser una
sustancia altamente acida, afectó el
pH de la peroxidasa, produciendo que
esta no reaccionara. Para el segundo
tubo de ensayo la peroxidasa trabajo
en un Ph neutro en el cual reaccionó
con rapidez, gracias a que esto no
afectó a los sitios activos de las
enzimas, que están frecuentemente
compuestos por grupos ionizantes que
deben estar en la forma iónica
apropiada para mantener la
conformación del sitio activo. En el
tercer tubo, al cual se le hizo
reaccionar con amoniaco, una base,
en donde, la peroxidasa, si se
mantiene activa puede reaccionar
hasta en un pH de 10 a 11 en donde
la peroxidasa puede realizar la
actividad enzimática correctamente,
con su pH óptimo.
Para la última actividad, el primer tubo
al cual se le agrego extracto de hígado
y peróxido de hidrogeno, reaccionó,
como ya antes se explicó. En el
segundo tubo al cual se agregó agua
oxigenada a un poco de saliva, esta no
reaccionó, y solo se separó, debido a
qué a que la enzima presente en la
saliva, denominada, amilasa, solo
rompe los enlaces químicos llamados
alfa-bonos que se producen en medio
de largas cadenas de moléculas de
glucosa en almidones complejos, por
ende, debido a la ausencia de almidón
en el peróxido de hidrogeno, esta no
reaccionó y solo terminó en una
mezcla heterogénea. A diferencia del
Tubo de ensayo en el que se agregó
almidón y saliva, en donde reaccionó
cambiando de color, ya qué, la enzima
amilasa actúa sobre el polisacárido
almidón, hidrolizando el enlace O-  Hicks J.2002. Bioquímica.
glicosídico, por lo que el almidón se McGraw Hill. México.109
terminara por transformar en unidades  Tymoczko, J. 2014.Bioquimica:
de glucosa Además de la coloración curso básico. 2da Edición.
que tomó, por el desdoblamiento por Reverté. España. 225
hidrolisis, liberando azucares  Mckee, T. 2003. Bioquimica, la
reductores. Finalmente, en el último base molecular de la vida. 3ra
tubo de ensayo, el cual poseía Edición. Mcgrawhill.. Estados
extracto de hígado con almidón, el Unidos. 186
cual no reaccionó, ya que las enzimas  Robert W. McGILVERY, P.
tienen como principal característica su 1997. Conceptos Bioquímicos.
especificidad, es decir, que solo Reverté. España. 146
pueden catalizar sobre un tipo de  Koolman K. 2004. Bioquímica:
sustrato o una familia de sustratos texto y atlas. 3ra Edición.
relacionados estructuralmente, Editorial medica
catalizando solo una de las posibles panamericana. España. 8
reacciones que ese sustrato puede
experimentar por ende, la peroxidasa
no actuó sobre el almidón, pero si
sobre el peróxido de hidrogeno,
Aunque esta tomo una coloración
beige, pero no como reacción al
almidón, sino al Lugol, que por la
presencia de polisacáridos, tomo este
color.
Bibliografía
 Karp, G. 2009. Biología celular
y molecular. Conceptos y
experimentos. 6ta edición. Mc
Graw Hill. México. 92
 Boyer, R. 2000. Conceptos de
bioquímica, internacional
Thompson editores. Mexico.
152
 Campbell, M. 2004.
Bioquímica. 4ta Edición.
Thomson. México. 102
 Mckee, T. 2003. Bioquimica, la
base molecular de la vida. 3ra
Edición. Mcgrawhill.. Estados
Unidos. 185.