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Introducción Materiales y Métodos

Todas las proteínas de la célula tienen Lugar y fecha de observación:


la función de catálisis que consiste en Laboratorio de Biología II de la
proporcionarle mayor o menor Universidad del Magdalena, 06 de
velocidad a las reacciones químicas abril de 2018.
dentro de la célula, además estas
Los materiales usados fueron: Tubos
ayudan en el proceso de metabolismo,
de ensayo, papel absorbente,
adicional a la disminución de energía
peróxido de hidrogeno, ácido acético,
de activación que esta requiere. Las
amoniaco, solución de almidón.
enzimas controlan también la
Hígado fresco licuado en agua.
velocidad con que se da la reacción
para que la energía se libere a una En la primera actividad, se lavaron y
temperatura que no afecte al rotularon 4 tubos de ensayo, al
organismo. Los metabolismos de los primero no se le agregó hígado, al
seres vivos se encuentran bajo las segundo se le agregó 1ml de hígado,
respectivas reacciones provocadas al tercero, 2m y al cuarto, 4ml de
por miles de enzimas. Según lo antes extracto de hígado, luego, se procedió
dicho diríamos que las enzimas a agregar 2ml de peróxido de
cumplen un papel importante en el hidrogeno en cada uno de los tubos.
buen funcionamiento del cuerpo
humano, dado que más que acelerar En una segunda parte, se lavaron y
reacciones en el metabolismo, estas rotularon 5 tubos de ensayo, en los
ayuda y hacen presencia en muchas que se agregó 1ml de extracto de
otras cosas en las que más adelante hígado a cada uno, luego, al primer
irán conociendo. tubo de ensayo no se le aplicó ningún
sustrato, al segundo se le hizo
Lo que puede hacer una enzima o reaccionar con 1ml de peróxido de
provocar es un tema bástate amplio y hidrogeno, al tercero, 2ml, al cuarto
que se vuelve complejo a la hora de 4ml y al quinto 6ml, y se procedió a su
hablar de este, por tal motivo nos observación.
centramos en la observación y los
factores que afectan la estructura de la Para la tercera actividad se lavaron y
proteína, que también se ven rotularon 3 tubos de ensayo, al cual se
reflejados en la función o las le colocaron 2ml de extracto de hígado
actividades de las enzimas, dándonos a cada uno, luego, el primer tubo se
la información necesaria para llegar a puso en baño con hielo por
la deducción de que es lo que aproximadamente 40 minutos, el
sucedería si en el organismo algunas segundo se mantuvo a temperatura
de estas llegaran a fallar o no ambiente y el tercero se colocó en
estuvieran presentes. agua hirviendo por alrededor de 5
minutos, Después de esto, se agregó
2ml de peróxido de hidrogeno a cada
uno de los tubos y posteriormente se
realizó la observación y su respectiva contrastando con el segundo tubo en
reacción. donde al añadir el sustrato subió
rápidamente generando espuma
En la cuarta actividad, se prepararon y
blanquecina, en el tercer tubo, subió
rotularon 3 tubos de ensayos, en el
igual de alto que el primero pero no a
que se agregó 2ml de hígado a cada
la misma velocidad, sino un poco más
uno de los tubos. Al primero se le
lento, por último, el cuarto tubo de
agregó 5 gotas de ácido acético, al
ensayo no subió tan rápido en
segundo se le agregó 5 gotas de
comparación a los otros, generando
Amoniaco y al tercero no se le agregó
burbujas más espesas y con una
nada, se agitaron con fuerza y se
coloración café mucho más oscura
procedió a agregar 2ml de peróxido de
que las otras como se muestra en la
hidrogeno a cada uno.
(fig. 1) que presentaban burbujas
Por último se prepararon cuatro tubos blancas y naranja claro.
de ensayos, al primero y tercero se le
Para la segunda parte, en donde se
agregaron 1 ml de extracto de hígado,
mantuvo constante la cantidad de
y al segundo y cuarto, se le agregaron
extracto de hígado, variando esta vez
1ml de saliva, luego se procedió a
el sustrato. Al primer tubo, no se le
agregar 2ml d peróxido de hidrógeno
agrego peróxido de hidrogeno, por
al primer y segundo tubo de ensayo, y
ende no hubo cambio, a diferencia de
después, al tercero y cuarto 2ml de
los tubos 2 y 3, en donde se pudo
solución de almidón, se agitó
notar que a más sustrato más rápido
fuertemente y se le agregaron a estos
reaccionaba la enzima con el
dos últimos mencionados 3 gotas de
peróxido, haciendo que subiera más
Lugol y se agitó, procediendo a su
en menor cantidad de tiempo. El tubo
observación.
de ensayo 4, reacciono rápidamente,
Resultados generando espuma de coloración
blanca hasta por fuera del mismo, pero
El procedimiento realizado en el no derramándose, la cual bajaba
laboratorio, mediante la reacción de la lentamente después de un tiempo de
enzima peroxidasa, presente en el haber adicionado el peróxido. En el
hígado cuando actúa con el agua tubo 5, debido a que se agregó una
oxigenada, genera diferentes mayor cantidad de sustrato, la
resultados, que dependen de distintos reacción de la enzima ocurrió con
factores como la temperatura, la mayor rapidez, haciendo que
concentración de protones, la enzima desbordara la espuma blanca del tubo
o el sustrato. En una primera instancia (fig. 2), además del aumento de
se tenía distintas cantidades de temperatura que esta sufrió. Después
extracto de hígado, conservando de unos minutos, se pudo ver que la
constante la cantidad de sustrato mezcla del extracto de hígado con el
(agua oxigenada). A excepción del agua oxigenada era heterogénea, y
primer tubo, el cual no reacciono, estaba dividida en una parte más
quedando física y químicamente igual, oscura y otra más clara, en donde era
menos notable a medida que había ninguna sustancia al hígado,
más peróxido de hidrogeno. quedando de manera neutra, pero al
momento de agregar el peróxido de
En la parte 3, el primer tubo, que
hidrogeno, reacciono rápidamente,
estuvo en hielo por varios minutos, al
provocando gran cantidad de espuma.
momento de adicionarle peróxido de (fig. 4)
hidrógeno, generó pequeñas burbujas
que no subieron tanto como indica la En última instancia, el primer tubo el
(fig. 3.1), a una velocidad relativamente cual contenía extracto de hígado y se
media, mucho menor que la del tubo a le fue agregado peróxido de
temperatura ambiente, el cual hidrogeno, reacciono rápidamente,
reacciono con rapidez, subiendo la haciéndolo subir a gran velocidad,
mezcla a gran velocidad generando además de la aparición de gran
burbujas poco espesas. En el tubo de cantidad de burbujas. En el segundo
ensayo 3, el cual había sido calentado tubo el cual contenía saliva al que se
previamente, adquirió un color le agregó el mismo sustrato del
morado como se muestra en la (fig. 3.2), anterior, no ocurrió nada, no hubo
con aparición de burbujas al mismo reacción, por ende ningún cambio
tiempo que presento efervescencia, físico o químico. En un tercer tubo de
en donde una parte se sedimento, ensayo, el cual tenía extracto de
generando una mezcla heterogénea. hígado y se le adiciono solución de
almidón, no reacciono, es decir, no se
En la cuarta parte del laboratorio, se elevó pero cambió de color, a uno
agregó ácido acético, conocido beige, hubo un cambio químico. En el
comercialmente como vinagre, al último tubo de ensayo, que contenía
primer tubo de ensayo con extracto de saliva y se le agrego solución de
hígado, el cual adquirió una coloración almidón y posteriormente Lugol
café verdoso pero no subió y genero adquirió una coloración morada. (fig. 5)
pocas burbujas, ya que a esta
temperatura las peroxidasas se
desnaturalizan y al momento de
agregar el agua oxigenada no
presentó efervescencia conservando
la misma coloración. En el segundo
tubo de ensayo, al cual se le agrego
Amoniaco al extracto de hígado, una
sustancia básica, esta tomo una
coloración marrón oscura y después
de agregar el peróxido de hidrogeno
reacciono subiendo lentamente, y
después separándose una parte más
oscura y una menos oscura, formando Fig. 1. Reacción de la enzima peroxidasa
una mezcla heterogénea. Para el con la presencia del peróxido de hidrogeno.
tercer tubo de ensayo, no se le agrego
Fig. 2. Reacción de la enzima con diferentes Fig. 5. Reacción de las enzimas
cantidades de peróxido de hidrogeno. peroxidasas y amilasa frente al peroxido de
hidrogeno y el almidón.

Discusión
Tal como se estudió anteriormente, las
enzimas representan un catalizador
biológico de diversos tipos de
reacciones, en las que estas pueden
acelerar o desacelerar una reacción
química sin alterar su resultado final.
Luego de realizadas las actividades
correspondientes a la práctica del
Fig. 3.1, izq. 3.2 der. Enzimas sometidas a tema a tratar, se obtuvieron unas serie
distintas temperaturas. de resultados muy variados, en los
que según las condiciones de
realizado el experimento, unos difieren
muchos de otros.
Primeramente se obtuvieron cuatro
reacciones diferentes, en las que la
cantidad de peróxido de hidrogeno era
constante, y la cantidad de peroxidasa
(extracto de hígado) era
uniformemente creciente. Aquí, al
efectuar esta reacción, se observo que
a medida que el nivel de peroxidasa
aumentaba, la reacción al momento
de encontrarse esta ante peróxido de
Fig. 4. Reacción enzimática sometida a
diferentes pH. hidrogeno, era más lenta y más
concentrada que la anterior. Según
Rodney Boyer, la actividad enzimática
está definida por diferentes factores aumento de la cantidad de sustrato,
experimentales, uno de esos es la hasta alcanzar un óptimo, Es decir a
cantidad de enzimas que interactúan una concentración suficientemente
con el sustrato, al ser esta cantidad alta de sustrato, los sitios catalíticos de
mayor, se esperaría que la reacción la enzima se saturan y la reacción
también lo fuera siempre y cuando alcanza su velocidad maxima, Así
haya suficiente sustrato, esto se como se explica en la ecuación de
evidencia en los resultados obtenidos 𝑽𝒎𝒂𝒙 ⁅𝑺⁆
Michelis-Menten, 𝑽𝒐 = en
al observar que en el último tubo de 𝑲𝒎+ ⁅𝑺⁆

ensayo (en donde la cantidad donde realizaron un experimento


enzimática era mayor a la cantidad de parecido para estudiar las velocidades
sustrato o peróxido de hidrogeno) la de las reacciones, llegando a la misma
reacción fue más tardía a conclusión de que, con
comparación con los tubos a concentraciones relativamente bajas
anteriores, en esta la cantidad de de sustrato, la velocidad inicial de la
sustrato era insuficiente para la reacción aumenta conforme se añade
proporción enzimática que la hacía más sustrato, conocido como un
reaccionar. En esta reacción también efecto de saturación de sustrato. El
hubo aparición de burbujas, las cuales último tubo, aparte de reaccionar
eran más oscuras en el último tubo, en rápidamente, se calentó debido a la
comparación con los otros, esto liberación de energía que ocurre
debido a que junto a la reacción durante la reacción química.
química ocurre un desprendimiento de En estas dos primeras actividades, las
gases que forman una espuma diferentes reacciones después de
blanca6. Es decir, al momento de unos minutos de haber subido,
reaccionar la enzima con el peróxido, bajaron nuevamente, esto se debe a
existe una formación de burbujas que, los complejos que se forman
causadas por el gas oxigeno entre enzima-sustrato son inestables y
producido por la ruptura de H2O2. se descomponen rápidamente, por
Estas burbujas eran más oscuras ya esto la peroxidasa, que es una hemo-
que había mayor cantidad de hígado, enzima que posee espectro de
por ende su coloración fue más fuerte. absorción característico de su grupo
En la segunda actividad, en donde hemo muestra cambios transitorios en
había cinco tubos de ensayo, los sus espectro cuando se mezcla con el
cuales contenían constante la peróxido de hidrogeno.
cantidad de hígado, variando de En el análisis de la tercera actividad,
manera ascendente la proporción de en donde se estudiaron las diferentes
sustrato, se notó que a mayor sustrato reacciones a diferentes temperaturas,
más rápida era la reacción, Esto se se obtuvo que enel tubo de ensayo
debe ya que a una concentración que fue previamente calentado
constante de enzima, la velocidad de reaccionó lentamente, esto debido a
una reacción se incrementa que, la temperatura afecta a todas las
directamente en proporción al
reacciones químicas, aumentando la ionización de los grupos del lugar
velocidad, pero las enzimas, al ser activo y el ácido acético, al ser una
proteínas, se desnaturalizan a sustancia altamente acida, afectó el
elevadas temperaturas, cada enzima pH de la peroxidasa, produciendo que
tiene una temperatura optima a la que esta no reaccionara. Para el segundo
actúa con su máxima eficacia, y esta tubo de ensayo la peroxidasa trabajo
depende del pH, Las enzimas en un Ph neutro en el cual reaccionó
presentan una marcada fragilidad con rapidez, gracias a que esto no
térmica ya que por una elevada afectó a los sitios activos de las
temperatura tienden a la perdida de la enzimas, que están frecuentemente
estructura terciaria alterando los sitios compuestos por grupos ionizantes que
isoterico y alosterico y por ende, al deben estar en la forma iónica
desnaturalizarse con la temperatura, apropiada para mantener la
no reaccionó de la manera a la cual conformación del sitio activo. En el
harían a un temperatura ambiente, tercer tubo, al cual se le hizo
como se realizó en el segundo tubo de reaccionar con amoniaco, una base,
ensayo, en donde, si la enzima se en donde, la peroxidasa, si se
encuentra a una temperatura optima, mantiene activa puede reaccionar
que normalmente esta cerca de la hasta en un pH de 10 a 11 en donde
temperatura normal del organismo del la peroxidasa puede realizar la
que procede, la cual reacciona con actividad enzimática correctamente,
mucha más facilidad, como en este con su pH óptimo.
caso la peroxidasa, que por proceder
Para la última actividad, el primer tubo
de mamífero, la temperatura optima se
al cual se le agrego extracto de hígado
aproxima a 37ºC, Esta reacción
y peróxido de hidrogeno, reaccionó,
también tuvo un cambio de color,
como ya antes se explicó. En el
causado por una respuesta a la
segundo tubo al cual se agregó agua
reacción enzimática. En el caso del
oxigenada a un poco de saliva, esta no
tubo de ensayo, el cual se dejó en
reaccionó, y solo se separó, debido a
hielo por varios minutos, reaccionó,
qué a que la enzima presente en la
pero en una forma mucho más lenta,
saliva, denominada, amilasa, solo
debido a que las enzimas, por la
rompe los enlaces químicos llamados
temperatura, estaban muy rígidas, y
alfa-bonos que se producen en medio
por ende, no reaccionan de la misma
de largas cadenas de moléculas de
manera.
glucosa en almidones complejos, por
En una cuarta actividad, en donde al ende, debido a la ausencia de almidón
primer tubo se le agregó ácido acético, en el peróxido de hidrogeno, esta no
teniendo en cuenta que el pH óptimo reaccionó y solo terminó en una
al cual actúa la peroxidasa es entre 6 mezcla heterogénea. A diferencia del
y 8, no reaccionó, ya que la Tubo de ensayo en el que se agregó
concentración de ion hidrogeno afecta almidón y saliva, en donde reaccionó
a las enzimas, debido a que la cambiando de color, ya qué, la enzima
variación del mismo puede afectar la amilasa actúa sobre el polisacárido
almidón, hidrolizando el enlace O-  Hicks J.2002. Bioquímica.
glicosídico, por lo que el almidón se McGraw Hill. México.109
terminara por transformar en unidades  Tymoczko, J. 2014.Bioquimica:
de glucosa Además de la coloración curso básico. 2da Edición.
que tomó, por el desdoblamiento por Reverté. España. 225
hidrolisis, liberando azucares  Mckee, T. 2003. Bioquimica, la
reductores. Finalmente, en el último base molecular de la vida. 3ra
tubo de ensayo, el cual poseía Edición. Mcgrawhill.. Estados
extracto de hígado con almidón, el Unidos. 186
cual no reaccionó, ya que las enzimas  Robert W. McGILVERY, P.
tienen como principal característica su 1997. Conceptos Bioquímicos.
especificidad, es decir, que solo Reverté. España. 146
pueden catalizar sobre un tipo de  Koolman K. 2004. Bioquímica:
sustrato o una familia de sustratos texto y atlas. 3ra Edición.
relacionados estructuralmente, Editorial medica
catalizando solo una de las posibles panamericana. España. 8
reacciones que ese sustrato puede
experimentar por ende, la peroxidasa
no actuó sobre el almidón, pero si
sobre el peróxido de hidrogeno,
Aunque esta tomo una coloración
beige, pero no como reacción al
almidón, sino al Lugol, que por la
presencia de polisacáridos, tomo este
color.
Bibliografía
 Karp, G. 2009. Biología celular
y molecular. Conceptos y
experimentos. 6ta edición. Mc
Graw Hill. México. 92
 Boyer, R. 2000. Conceptos de
bioquímica, internacional
Thompson editores. Mexico.
152
 Campbell, M. 2004.
Bioquímica. 4ta Edición.
Thomson. México. 102
 Mckee, T. 2003. Bioquimica, la
base molecular de la vida. 3ra
Edición. Mcgrawhill.. Estados
Unidos. 185.