Extracción de metabolitos secundarios

Arreguín, S. Mancera, A. Sierra, K. Salmerón, J.

Departamento de Ingeniería Agroindustrial. Universidad Politécnica de Guanajuato. Av. Universidad

Sur 1001, Comunidad Juan Alonso, Cortázar (38496), Gto, México.

Resumen
El objetivo de este trabajo fue cuantificar los flavonoides totales, flavonoides totales
de la envoltura externa de la cebolla morada(Allium cepa). Las muestras de cebollas
se adquirieron en el mercado municipal de Cortazar Guanajuato. Los extractos
metanólicos se realizaron usando agitación de la cáscara de la cebolla previamente
preparada en una solución. Se emplearon muestras congeladas. Se determinó el
método más eficiente. Se identificó de manera cualitativa la presencia de
flavonoides y se cuantificó por ultravioleta la concentración de flavonoides totales
expresados en quercetina. La cuantificación por ultravioleta permitió obtener
concentraciones reproducibles en promedio de para los extractos congelados.
Palabras clave: flavonoides totales, Allium cepa, quercetina

Summary

The objective of this work was to quantify the total flavonoids, total flavonoids of the
outer envelope of the purple onion. The samples of onions were purchased in the
municipal market of Cortazar Guanajuato. The methanolic extracts were made using
shaking of the onion peel previously prepared in a solution. Frozen samples were
used. The most efficient method was determined. The presence of flavonoids was
qualitatively identified and the concentration of total flavonoids expressed in
quercetin was quantified by ultraviolet. The ultraviolet quantification allowed
reproducible concentrations to be obtained on average for the frozen extracts.
Key words: total flavonoids, Allium cepa, quercetin

INTRODUCCIÓN
Las cebollas y especies relacionadas han sido extensamente usadas desde tiempos
ancestrales en muchas partes del mundo como condimento u hortalizas
saborizantes así como en la medicina tradicional y popular con una amplia gama de
beneficios para la salud (Nile, Park, 2013).En la actualidad, existen numerosos
reportes demostrando las propiedades funcionales y medicinales de esta hortaliza,
la mayoría de dichos efectos biológicos han sido asociados con la presencia de
OSCs y los flavonoides (Griffiths y col.,2002).
Los flavonoides, que poseen un gran número de grupos hidroxilos formando
glicósidos, son polares, por lo que son ligeramente solubles en disolventes polares,
como el metanol, etanol, acetato de etilo o agua. (Miranda, 2001). La actividad
antioxidante de los flavonoides resulta de una combinación de sus propiedades
quelantes de hierro y secuestradoras de especies reactivas del oxígeno (ERO),
además de la inhibición de enzimas, tales como: lipooxigenasa, ciclooxigenasa,
mieloperoxidasa y NADPH oxidasa; evitando así la formación de ERO e
hidroperóxidos orgánicos. También se ha visto que flavonoides como catequina,
epicatequina, epigalocatequina, epicatequina galato y epigalocatequina galato
reducen la producción de radicales libres por inhibición de la xantina oxidasa (XO),
enzima que cataliza la oxidación de hipoxantina y xantina a ácido úrico (Dörner et
al., 2006).

METODOLOGÍA

Preparación de la muestra
Se eligió una cebolla al azar sin tener en cuenta su tamaño y se dejó en
congelación. Pasando las 24 horas de congelación se tomó una muestra de 15 g y
se extrajo con 200 mL de solución acuosa de metanol (50% v/v) conteniendo 0.1 ml
de ácido acético glacial y se dejó reposar durante 13 días con intervalos de 3 días
se sometió a agitación para mejor extracción de sus compuestos.

Reactivos
● Folin-Ciocalteu(1:10)
● Na2CO3
● NaNO3
● AlCl3
● NaOH
● Agua destilada

Determinación de fenoles y flavonoides totales

Estos metabolitos se cuanticaron con cloruro de aluminio en metanol 50 % a 375
nm. Los resultados se expresaron como quercetina en una curva de calibración con
concentraciones de 0 a 7,5 ppm (Ochoa Pacheco, Marín Morán, Rivero Breff, y
Aguilera Saborít, 2013). En un volumen de 50 ml se añadieron: 1 ml de extracto de
muestra extraída y 1 ml del cloruro de aluminio al 5 % en metanol, se agitó y se dejó
reposar por diez minutos. Se enrasó con metanol 50 % v/v y se realizó la medición a
375 nm.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Flavonoides totales

Tabla 1. Flavonoides totales en la cebolla morada a una longitud de onda de 375

nm.
 Repeticiones de la Muestra Longitud de onda 375 nm

1 0.096

2 0.095

ẋ=.0955
Las repeticiones se promediaron y se llevó a los siguientes resultados

y= 0.1407 x + 0 .0044

Donde (y) es la absorbancia ,(x) la concentración

x =(y−0.0044)÷0.1407

x =(0.0955−0.0044)÷0.04651

x =1.1072
Los resultados obtenidos no coinciden con los datos arrojados por otros estudios ,
por lo cual se deduce que se llevó a cabo de manera errónea este análisis , se
podría decir que el error se mantuvo en las operaciones antes de insertar la muestra
al espectrofotómetro.

Se encontraron longitudes de onda de 0.096 y 0.095 para flavonoides totales.

Numerosos estudios han demostrado que el contenido fenólico en frutas y vegetales
puede contribuir significativamente a su capacidad antioxidante. En 2008 Vasco y
otros estimaron el contenido de fenoles totales y la capacidad antioxidante de
diferentes frutas; entre las frutas y hortalizas estudiadas, la cebolla de bulbo
(conocida como cebolla de huevo o cabezona), tanto la roja como la blanca,
mostraron alto contenido de fenoles y alta capacidad antioxidante

Fenoles totales

Tabla 2. Compuestos fenólicos totales en la cebolla morada

Repeticiones de la Muestra Lectura espectrofotométrica a una
longitud de onda de 765 nm

1 0.047

2 0.081

3 0.082

4 0.098
 ẋ = .077

Las repeticiones de la muestra fueron promediadas con la finalidad de lograr

resultados más efectivos y precisos, la razón por la cual no proyectamos una curva
de calibración , es que solo se realizó una muestra con varias repeticiones .

Los resultados obtenidos en los cálculos son :

y= .04651 x + .0325

Donde (y) es la absorbancia ,(x) la concentración

x =(y−.0325)÷.04651

x =(.077−.0325)÷.04651

x =.9567

TFC=(.9567*1*200ml*100)/(15gr)

TFC= 1275.6 mg de acido galico / 100 gr de muestra

Los resultados obtenidos fueron comparados con estudios previamente realizados y

la observación es que nuestro resultado se encuentra por encima de la
concentración dada por la fuente Sandra Zapata. (2014), esto puede deberse a la
edad fenológica de la cebolla en la cual fue tomada la muestra , ya que refleja
mayor concentración la obtenida por el equipo .
Los métodos de Folin-Ciocalteau y de formación del complejo con AlCl3 para
determinar el contenido total de compuestos fenólicos y flavonoides,
respectivamente, son comúnmente usados para analizar plantas y alimentos
(Marquele, 2005). El ensayo Folin-Ciocalteu se utiliza como medida del contenido en
compuestos fenólicos totales en productos vegetales. Se basa en que los
compuestos fenólicos reaccionan con el reactivo de Folin-Ciocalteu, a pH básico,
dando lugar a una coloración azul susceptible de ser determinada
espectrofotométricamente a 765 nm. Este reactivo contiene una mezcla de
wolframato sódico y molibdato sódico en ácido fosfórico y reacciona con los
compuestos fenólicos presentes en la muestra. El ácido fosfomolibdotúngstico
(formado por las dos sales en el medio ácido), de color amarillo, al ser reducido por
los grupos fenólicos da lugar a un complejo de color azul intenso, cuya intensidad es
la que medimos para evaluar el contenido en polifenoles

Conclusión
Los resultados obtenidos en este estudio indican que la variedad de cebolla morada
poseen efectos benéficos potenciales. Las muestras fueron previamente congeladas
y en ellas se obtuvieron concentraciones altas de los metabolitos secundarios. Esto
se debe a que el proceso de congelación empleado fue lento, generando cristales
de hielo grandes, que rompen la pared celular. La ruptura de la pared celular
permite extraer con mayor eficiencia el líquido intracelular (Millán et al., 2007). La
mayoría de frutas y hortalizas presenta un aporte entre intermedio y alto de fenoles
totales y entre moderada y elevada actividad antioxidante, lo que potencializa sus
posibles propiedades nutracéuticas como sus beneficios para la salud. Sería
necesario hacer un estudio más grande incluyendo una mayor cantidad de
muestreos en diferentes cebollas, para poder hacer una comparación de los
resultados obtenidos.

BIBLIOGRAFÍA
Sandra Zapata. (2014). Capacidad atrapadora de radicales oxigeno y fenoles totales
de frutas y hortalizas de Colombia. 13 de enero del 2014, de Escuela de nutrición y
dietética Sitio web: http://www.scielo.org.co/pdf/penh/v16n1/v16n1a3.pdf

Contreras-Calderón J, Calderón-Jaimes L, Guerra-Hernández E, García-Villanova B.

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exotic fruits from Colombia. Food Res Intern. 2010; 44: 2047-53

Griffiths G., Trueman L., Crowther T.; Thomas B., Smith B. (2002). Onions - A global
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Dörner C, Galleguillos M, Adarmes H (2006) ¿Qué son los flavonoides y a qué se

debe su efecto protector? Revista TecnoVet 12(2): 14-18.

Extracción de flavonoides totales de la envoltura externa de cebolla roja (Allium

cepa) / Extraction of total flavonoids of the outer peel of red onion (Allium Cepa.
Available from:
https://www.researchgate.net/publication/312053466_Extraccion_de_flavonoides_tot
ales_de_la_envoltura_externa_de_cebolla_roja_Allium_cepa_Extraction_of_total_fla
vonoids_of_the_outer_peel_of_red_onion_Allium_Cepa [accessed Nov 28 2018]

Marquele FD, di Mambro VM, Georgetti SR, Casagrande R, Valim YM, Fonseca MJ.
Assessment of the antioxidant activities of Brazilian extracts of propolis alone and in
topical pharmaceutical formulations. J Pharmaceut Biomed. 2005; 39 (3-4): 455-462
Miranda M, Cuellar A. Farmacognosia y productos naturales. La Habana. Félix
Varela. 2001. p.109.

Ochoa Pacheco, A., Marín Morán, J., Rivero Breff, D., y Aguilera Saborít, E. M.
(2013). Caracterización física y química de extractos totales de petiveria alliacea
l. con acción antimicrobiana. Revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas, 44(1),
52-59.

Vasco C, Ruales J, Kamal-Eldin A. Total phenolic compounds and antioxidant

capacities of major fruits from Ecuador. Food Chem 2008;111:816-23.

ANEXOS

Imagen 1. Resultados del análisis en el espectrofotómetro a 765 nm.

.

Imagen 2. Resultados del análisis en espectrofotómetro a 375 nm para flavonoides.

Imagen 3.Espectrofotómetro para microplacas Multiskan