ANTICOAGULANTES

Para la realización de la mayor parte de los estudios cuantitativos en sangre

periférica, se requiere el mantenimiento de la sangre en forma incoagulable una vez
que ha sido extraída de los vasos sanguíneos, para ello se hace necesario el empleo
de sustancias cuya función es la de prevenir o impedir la coagulación sanguínea y que
reciben el nombre de ANTICOAGULANTES. Estas sustancias además de impedir la
coagulación, deben mantener la sangre en un estado fisicoquímico lo más próximo al
natural, es decir, en un estado semejante al que presenta en el interior de los vasos
sanguíneos.

El estudio de cada uno de los anticoagulantes se hace necesario, debido a que

no existe un tipo único que sea adecuado para la realización de todos los estudios de
laboratorio, sino que el empleo de los mismos va a estar sujeto al tipo de determinación
que vamos a realizar.

ANTICOAGULANTES USADOS EN HEMATOLOGIA

1) Mezcla doble de oxalatos de Paul y Heller (Mezcla de Wintrobe).
2) Sales de EDTA (Secuestreno o Versenato).
3) Citrato de Sodio 3,8%.
4) Heparina.
5) Oxalato de Sodio 0,1 M (1,34 %).

1) Mezcla doble de oxalatos de Paul y Heller: (Mezcla de Wintrobe). La mezcla se

prepara en una solución acuosa según la siguiente fórmula:
Oxalato de amonio C204 (NH4)2 + H2O.......................... 1,2 g
Oxalato de potasio C2O4K2 + H2O.............................. 0,8 g
Formol............................................................................ 0,5 ml
Agua destilada c.s.p....................................................... 100 ml
0,5 ml de esta solución se pipetea en tubos de ensayo 13 x 100 u otro recipiente
adecuado luego se secan a la estufa a una temperatura de 37 a 40º C, para que el
agua evapore, quedando en el fondo de los tubos, cristales filamentosos blancos
secos, que no producen dilución de la muestra de sangre. Es importante no calentar
demasiado la mezcla al secar los tubos, ya que los oxalatos se descomponen por
encima de una temperatura de 80º C.
Los tubos debidamente tapados se conservan por tiempo indefinido, alcanzando
esta cantidad de anticoagulante para la muestra corriente de 5 ml de sangre, es decir,
que la proporción en que se utiliza este anticoagulante respecto a la muestra de sangre
es 0,1 ml por cada ml de sangre.
Su mecanismo de acción consiste en la remoción de los iones de calcio de la
sangre formando sales insolubles.
Esta mezcla de oxalatos ideada por Paul-Heller, mantiene bien la forma y
tamaño de los glóbulos por algunas horas y casi no da lugar a la hemólisis. El uso de
este anticoagulante es satisfactorio para la mayoría de los exámenes hematológicos
corrientes.

2) Sales EDTA: La sal dipotásica se consigue comercialmente como Versenato

Potásico y la sal sódica (Dihidroacetato sódico de etilendiamina) como Secuestreno.
Las sales sódicas y potásicas de etilendiaminotetracético actúan como anticoagulante
formando sales insolubles de calcio o inhibiendo al factor V (lábil) de la coagulación.
Tanto la sal sódica como la dipotásica pueden ser usadas, pero se recomienda más
ésta última por ser más soluble. Preserva mejor los elementos celulares que los
oxalatos y el citrato. Se usa en una concentración de 1 – 2 mg/ml de sangre. Para su
uso, se prepara una solución EDTA dipotásico o disódico al 1%, de esta solución se
toma 0,5 ml, se colocan en tubos de ensayo y se deja secar. De esta forma, cada tubo
contiene 5 mg de EDTA. También puede ser usado directamente (0,5 ml de la solución
al 1% para 5 ml de sangre).
Otra modalidad sería, preparar una solución de una concentración tal, que una gota de
ella haga incoagulable a 5 ml de sangre:

1 mg de Sal de EDTA hace incoagulable 1 ml de sangre.

X _________________ 5 ml de sangre.
 X = 5 mg de Sal de EDTA

Se desea que 1 gota de la solución haga incoagulable a 5 ml de sangre así, sabiendo

que 1 gota de solución (0,05 ml aprox.) debe contener 5 mg de la solución. ¿Cuál es
la solución que se debe preparar?

0,05 ml solución ____________ 5 mg de EDTA

100 ml solución ____________ X

X = 10.000 mg 10 gr

X= 10 gr

De tal manera, que se debe preparar una solución de EDTA al 10%, tomando 10 gr de
EDTA y disolviéndolos en 100 ml de agua destilada, para que una (1) gota de ella
haga incoagulable a 5 ml de sangre.
Este anticoagulante es ampliamente utilizado en Hematología y Química sanguínea. No
produce cambios detectables en el volumen eritrocitario pudiendo emplearse en el
contaje de glóbulos rojos, en la dosificación de hemoglobina y determinación del
hematocrito, aún después de muchas horas de haberse extraído la sangre. Como
impide que las plaquetas se agreguen o se adhieran a superficies, hace posible realizar
el contaje de plaquetas, conservándolas por horas.

3) Citrato de Sodio 3,8 % (Na3 C6H507):

El citrato soluble actúa como anticoagulante al combinarse con el calcio para formar
sales insolubles de calcio. En el laboratorio se utiliza en pruebas de coagulación en una
proporción de 1 parte de anticoagulante para 9 partes de sangre (1/9) y en la
realización de la V.S.G. por el método de Westergreen, en una proporción de 1 parte
de anticoagulante para 4 partes de sangre (1/4). Es el más recomendado en pruebas
de coagulación porque conserva mejor los factores lábiles V y VIII. Este anticoagulante
debe conservarse en nevera, filtrarse antes de cada uso y desecharse cuando presente
hongos u otras partículas.

4) Heparina:
La heparina es un anticoagulante fisiológico producido por las células cebadas o
mastocitos del tejido conectivo, por lo que existe en diversos órganos, también se
encuentra en la sangre en una concentración de 1 – 2 mg / litro.
La estructura química corresponde a un mucopolisacárido sulfatado: ácido mucoitín
sulfúrico de peso molecular alrededor de 20.000 y formado por unidades de un
tetrasacárido constituido por ácido glucurónico y glucosamina, esterificados con ácido
sulfúrico.
Las heparinas son glicosaminoglicanos sulfatados con fuerte carga negativa,
sintetizadas en cierto tipo de células cebadas, las heparinas son polímeros compuestos
de cadenas de radicales alternantes de D-glucosamina y un ácido hexurónico, bien sea
ácido glucurónico, ó L-idurónico. Las preparaciones comerciales de heparina no
fraccionada, aisladas usualmente de mucosa porcina intestinal o pulmonar bovina, son
una mezcla polidispersa de cadenas de polisacáridos que varían en forma, tamaño,
densidad de carga y peso molecular.
Las heparinas comerciales contienen 2 fracciones principales que se diferencian por su
afinidad por la AT-III.
El principal papel fisiológico de la AT-III es regular las proteasas de serina de la
cascada de coagulación, incluyendo trombina y los factores XIIa, XIa, Xa y IXa.
En el laboratorio la heparina se utiliza en la proporción de 0,1 mg / ml de sangre, lo que
equivale a 10 UI (unidades internacionales) por ml de sangre.
La solución comercial de heparina tiene una concentración de 5.000 UI por ml de
solución ó 50 mg / ml de solución. A partir de esto, se debe calcular cómo diluirla para
que 1 gota de ella (0,05 ml) haga incoagulable a 5 ml de sangre:

Se sabe que: 1 ml de sangre _________ 10 UI de heparina

5 ml de sangre _________ X
 X = 50 UI de heparina

La solución de la cual se dispone es de 5.000 UI /ml de solución

1 ml _____________ 5.000 UI.

0,05 ml _____________ X
(1 gota)

X = 250 UI de heparina

1 gota (0,05 ml) equivale a 250 UI

Se desea que 0,05 ml (1 gota) contenga 50 UI:

0,05 ml (1 gota) ________ 250 UI __________ 5.000 UI/ml

0,05 ml (1 gota) ________ 50 UI __________ X

X = 1.000 UI/ml

La solución a preparar debe contener 1.000 UI/ml para que una gota de ella haga
incoagulable 5 ml de sangre.
Por lo tanto, se debe preparar una solución de 1.000 UI/ml de solución a partir de la de
5.000 UI/ml, así:
Si 5.000 UI _____________ 1 ml de solución
1.000 UI _____________ X

X = 0,2 ml

De tal manera que, deben tomarse 0,2 ml de la solución de 5.000 UI/ml y completarla
hasta 1 ml con agua destilada, ó lo que es lo mismo: tomar 1 ml de la solución de 5.000
UI/ml y completarla hasta 5 ml con agua destilada, en ambos casos, se obtendrá una
solución que contiene 1.000 UI/ml.
La heparina no produce alteración en el volumen de los glóbulos rojos, ni hemólisis de
ellos, por lo que puede utilizarse para el contaje de los mismos, para la dosificación de
hemoglobina, determinación del hematocrito y es el anticoagulante ideal para las
pruebas de fragilidad globular osmótica.
No se puede utilizar en la determinación de grupos sanguíneos, ya que puede producir
grumos finos que dificultarían la interpretación de los resultados, ya que daría una falsa
apariencia de aglutinación.

5) Oxalato de Sodio 0,1 M (1,34 %).

El mecanismo de acción de este anticoagulante consiste en la remoción del calcio
iónico de la sangre formando sales insolubles. Se utiliza en pruebas de coagulación en
una proporción de 1 parte anticoagulante para 9 partes de sangre. Este anticoagulante
no es un buen conservador de los factores lábiles V y VIII de la coagulación.
La solución debe guardarse en nevera para retardar el crecimiento de hongos y filtrarse
antes de cada uso.
Cuando se utilizan los anticoagulantes en el laboratorio es necesario el
conocimiento de las proporciones correctas en que deben ser utilizados con respecto a
la cantidad de sangre a ser extraída y de acuerdo al tipo de análisis que va a ser
realizado. Si se usan concentraciones o proporciones mayores que las indicadas puede
producirse la retracción de los glóbulos rojos por paso de agua desde ellos al plasma,
con la consiguiente disminución del valor del hematocrito. Si los glóbulos rojos sufren
hinchamiento, aumenta el volumen corpuscular medio e incrementa la fragilidad
osmótica.
Es muy importante mezclar bien la sangre con el anticoagulante inmediatamente
después de ser extraída. Si se deja en reposo una vez que se ha mezclado, hay que
mezclar de nuevo antes de realizar cualquier examen, ya que la sangre sedimenta
espontáneamente, y si se toma de la parte superior estará más diluida, caso contrario,
si se toma de la parte inferior estará más concentrada. Esto induce a graves causas de
error en cualquier determinación.
 Actualmente las casas comerciales facilitan tubos con anticoagulantes los cuales
se identifican de acuerdo al color de la tapa del tubo, además estos tubos tienen una
marca que indica el tope para llenarlo de sangre, de manera que la proporción de
anticoagulante y sangre sea la adecuada. A continuación se muestran los diferentes
tipos de tubos comerciales usados con mayor frecuencia:
 BIBLIOGRAFÍA

1.- Cartwright, G.E. (1973). El laboratorio en el Diagnóstico Hematológico.

Cuarta Edición.

2.- Dacie, J.W. Lewis, S.M. (1975). Practical Hematology. Fifth. Edition.

3.- Simmons, A. (1975). Technical Haematology. J.B. Lippincott Company.

4.- Sonnenwirth – Jarett (1983). Métodos Diagnósticos del Laboratorio Clínico.

Tomo I. Primera Edición. Editorial Médica Panamericana.

5.- Pérez R., J. L.; Pérez G., M. Mecanismo de acción de las Heparinas. Revista
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6.- Vives Joan Lluís (2.001). Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología.

2da Edición Editorial Masson S.A