Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
La gracia
que tiene esta metodología es que puede tener pequeñas diferencias, en las ….. es que es muy
pequeñas digamos incluso fracción, ¿”péptidos fracción”?, coma sesenta y algo,…. ahora más
adelante lo vamos a ver, esta es una cuestión fantástica porque ustedes pueden tener una proteína
y romperla en péptidos, y poner esos péptidos ahí y determinar el peso molecular, entonces el
sistema le puede detectar el peso molecular de cada uno de los péptidos, pero quizás hay una sola
proteína que dé ese número de péptidos, con esos pesos moleculares. Entonces ustedes pueden,
de esos maravillosos geles que les mostré yo, pueden sacar una muestra, romperla en sus péptidos,
con una enzima proteolítica, analizar eso y saber que proteína es. ¿Por qué? ¡Porque hay una base
de datos de todas proteínas que existen ¿analizadas? con esta metodología! ¡Y toda una base de
datos de todas las proteínas que usteDES SE PUEDAN IMAGINAR, donde ustedes pueden poner lo
que quieran. Es una maravilla que se puede hacer con los computadores. Entonces tienen aquí la
intensidad de lo que el detector al le llega y la relación es masa/carga, y ahí tienen los valores
“18.364”, o sea, en una metodología como la exclusión molecular, o “…” como las llamamos
nosotros, el +/- puede ser 5%, la detección del peso molecular, del valor real, y aquí les dice oiga es
tanto. Entonces cuando la gente habla de proteomica; ustedes pueden tener una mezcla de
proteínas, pueden separarla en un gel de 2 o 3 dimensiones, pueden tener una proteína individual,
porque la sacan de ahí, de los cientos de proteínas, sacan la manchita que les interesa, la digieren
con tripsina, van a tener peptidos, la tripsina rompe donde hay glicina o arginina. Si ustedes saben
la composición de aminoácidos, podrían decir cuántos péptidos van a obtener, si tiene una glicina y
rompen, dos péptidos; si tiene dos glicinas, tres péptidos. O sea siempre la cantidad de lugares de
ruptura más 1. Y si le hacen la espectrometría de masa, ustedes tienen la masa de los peptidos, y si
ustedes van a la base de datos puede confirmar lo que le dije.
Hay otra metodología que aparece en el trabajo que tiene que ver con plasmon resonance. La gracia
de esta metodología es más o menos grande, permite detectar unión de ciertas moléculas en un
film, la radiación que toca este film es reflectada y esto se ve como una manchita que se ve a
distintas intensidades, que se puede transformar en una curva. Entonces va a depender de si está
unido el ligando o no, la curva se desplaza hacia un lado u otro y uno puede determinar uniones…
Proteínas estructurales:
Usando la ecuación, cuando el pH es una unidad superior al pK, que es lo que hago yo, el pH lo
reemplazo por (pK +1), obtengo pK ambos lados lo puedo eliminar porque me va a dar cuociente
igual a 1, entonces 10 elevado a 1, 10 entonces el cuociente va a ser 10, si el cuociente es 10 cuanto
hay del numerador que es lo que se desprotonó, 10 es igual a 10 partido por 1, entonces el
numerador es 10 y el total cuanto es, es el numerador más el denominador, 11, entones 10 partido
por 11, entonces cual es el porcentaje del denominador, el denominador es 1, dividido por el total
cuanto es, 1 partido por 11, y eso va a dar que el numerador es 90 y tantos por ciento y el
denominador el 1 por ciento. Ahora si yo le digo que el pH es igual a la pKa + 2, entonces ahora le
va a dar el cuociente es igual a 10 elevado a 2, 100, cuanto es el numerador, 100 partido por el total,
cuanto es eso, 100 partido 100+1, cuanto es eso, 99 o algo así y el denominador cuanto es, 1 cuanto
es 1 partido 101, casi nada. Y si ustedes siguen le va a dar 3 que es mil, le va a dar 4 que es 10000 y
cada vez va a ser menor. Cuál es la importancia de esto? Que ustedes saben que al tener un pH por
sobre 1 unidad sobre el pK, vamos a estar en más o menos 90 y 10%, 2 y ya vamos a estar casi al
100%. Entonces si yo le doy el pK entonces ustedes inmediatamente saben que a dos unidades va a
estar en un estado u otro estado. Entonces si yo les doy, Y LO VOY A HACER, le vamos a decir los
aminoácidos de un péptido y le voy a decir a tal pH se va a detener en una columna de ¿DAB? o no?
Entonces que van a hacer ustedes, ah aquí tengo una arginina, el ph esta 2 unidades por sobre, la
carga de este péptido es tanto, si se va a retener, si se van a tener que saber eso y yo no le voy a dar
la fórmula de la arginina pero les voy a dar el pK, o incluso podría no darles el pK, porque ustedes
saben que la arginina es alto y el carboxilo es bajo, una alrededor de 10 la otra alrededor de 3,
entonces si yo digo 6, o digo 12 o digo 1 ustedes debería saber la carga.
Esto que esta acá (grafico diapo 3) es como el ejercicio que viene después, tengo dos grupos aquí,
un grupo carboxilo y un grupo amino, entonces hay una curva de titulación, que es titular yo tomó
una base que conozco su concentración y trata de neutralizar todos los protones de una solución, y
como sé que los neutralizo, bueno tengo todo unos indicadores que viran de color cuando cambian
de estado. Entones aquí tiene pH, medido con un pHmetro y yo voy agregando gotitas de base, pero
aquí dice equivalente, entonces no me preocupo de la concentración, Entonces aquí hay un abrupto
cambio [36 min.]