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ÍNDICE

1. INTRODUCCIÓN 2

2. OBJETIVOS 3

3. DESARROLLO TEMÁTICO 4
3.1. Definición 4
3.2. Características generales de los Marcadores Moleculares 4

3.3. Clasificación de los Marcadores moleculares 5

3.3.1. Marcadores morfológicos 5


3.3.2. Marcadores bioquímicos 5
3.3.3. Marcadores de ADN 6
3.4. Ventajas 8
3.5. Aplicaciones de los marcadores de ADN 8

4.CONCLUSIONES 9

5. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 10

6. ANEXOS 11

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1. INTRODUCCIÓN

Cada vez se hace más común que en nuestra vida diaria incorporemos el uso
de términos como gen, ADN, diversidad genética, genoma, marcadores
moleculares, prueba del ADN y otros; dada la importante aplicación que tienen
en la actualidad en diversas áreas (medicina, botánica, conservación,
agricultura, etc.).

Todo comenzó cuando a mediados del siglo pasado los científicos James D.
Watson, Francis Crick y Maurice Wilkins hicieron públicos sus hallazgos sobre
la estructura y función del ácido desoxirribonucleico (ADN), al que identificaron
como la unidad responsable de la transmisión de características de una
generación a la siguiente. Estos estudios dieron origen a lo que hoy conocemos
como biología molecular y provocaron un vertiginoso desarrollo en las ciencias
biológicas, permitiendo, entre otras cosas, que la biotecnología moderna
incluyera la genómica, la ingeniería genética, la proteómica y los marcadores
de ADN.

La aparición de los marcadores moleculares está ayudando a eliminar tanto


los inconvenientes de una selección basada en el análisis exclusivo del
fenotipo, como la identificación de especies y variedades de una forma más
rigurosa y repetitiva.

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2. OBJETIVOS

 Comprender las definiciones de los marcadores moleculares:


morfológico, bioquímico y de DNA.

 Entender de forma sintetizada las características generales de los


marcadores moleculares.

 Conocer la clasificación de los marcadores moleculares.

 Aprender las aplicaciones, ventajas y desventajas de la utilización de los


marcadores moleculares.

 Conocer la diversa utilización de herramientas moleculares


representadas por los diversos tipos de marcadores de ADN.

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3. DESARROLLO TEMÁTICO

3.1. Definición:

Un marcador genético o marcador molecular es un segmento de ADN


situado en un lugar específico del genoma (locus) y cuya herencia genética se
puede rastrear. Puede ser un “gen” o cualquier otra porción de genoma con o
sin función conocida.

Se usan para “marcar” el comportamiento de un gen o la herencia de una


característica particular, como puede ser la presencia o ausencia de la
característica aportada por el MM.

También pueden usarse para el mapeo genético, como el primer paso para
encontrar la posición e identidad de un gen desconocido (suponiendo que se
conocen regiones contiguas que se heredan juntas).

3.2. Características generales de los Marcadores Moleculares:

Los marcadores moleculares pueden ser utilizados para la detección y


caracterización de genotipos a partir de células o tejidos en cualquier estadio
fisiológico, facilitándose así la aplicación de métodos tempranos de selección y
recombinación de los individuos de interés para el mejorador genético.

Los marcadores morfológicos son en su mayoría dominantes o recesivos, sin


embargo, la expresión de los marcadores moleculares es codominante, pueden
detectar un nivel de polimorfismo elevado y tienen como ventajas adicionales
su amplia distribución a lo largo de todo el genoma, su carácter heredable
siguiendo el modelo de Mendel y los nulos o mínimos eventos
de pleiotropía y epistasia que tienen lugar, reduciendo junto a otros factores, la
interacción genotipo-ambiente a su mínima expresión.

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3.3. Clasificación de los Marcadores moleculares:

3.3.1. Marcadores morfológicos

Los marcadores morfológicos fueron el primer tipo de marcadores que el


hombre utilizó. Se consideran marcadores morfológicos a los caracteres de un
individuo que se expresan en un ambiente específico y que el hombre identifica
con un objetivo determinado. Por ejemplo, en los árboles de pino podemos usar
como marcadores morfológicos el peso o tamaño de las semillas, pues se ha
visto que dicha característica se asocia en la mayoría de las poblaciones con la
supervivencia, el crecimiento y la reproducción.

Este tipo de marcadores son muy utilizados para estimar la variación


morfológica existente en una población. Sin embargo, hay varias limitaciones
para su uso, de las que la principal es precisamente que se basan en las
características morfológicas o expresadas en el individuo (fenotipo), las cuales
son fuertemente influidas por el ambiente en que se desarrollan, además de
que generalmente sólo se pueden identificar y medir en individuos completos o
adultos.

3.3.2. Marcadores bioquímicos

Los marcadores bioquímicos incluyen a las proteínas y las isoenzimas o


aloenzimas y constituyen la primera generación de marcadores moleculares.
Las proteínas son los productos primarios de los genes y se forman mediante
los procesos de transcripción y traducción, por lo que se ven menos influidos
por el ambiente.
Las isoenzimas fueron descubiertas por Hunter y Markert en 1957 y son
diferentes variantes moleculares de una misma enzima presentes en una
especie, las cuales desempeñan la misma actividad pero pueden tener
diferentes propiedades.
Las isoenzimas se identifican mediante el proceso denominado
“electroforesis”, que consiste en colocar un extracto proteico del material a
analizar en los pocillos de un soporte (papel de celulosa o un gel hecho de
agarosa o poliacrilamida) que se somete a un campo eléctrico durante varias
horas para que se separen las proteínas de acuerdo con su tamaño o carga
eléctrica.
Una vez concluida la emigración de las proteínas por medio del frente de
corrida denominado Kohlrasusch, el gel es colocado en una solución que
contiene los compuestos químicos necesarios (colorantes) para que se lleve a
cabo una reacción y se puedan observar posteriormente las isoenzimas en
forma de bandas de color en el soporte o gel.
Las diferencias en la movilidad electroforética de las isoenzimas son
resultantes de las diferencias en las secuencias del ADN que codifican tales
enzimas.

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Estos marcadores tienen la ventaja de que la técnica es relativamente barata,
accesible y no destructiva debido a que utiliza pequeñas cantidades de
material. Además, el control genético de la mayoría de las isoenzimas es bien
conocido, por lo que es posible realizar inferencias genéticas a partir de los
patrones de bandas observados en los geles.
Por otro lado, las isoenzimas tienen base genética codominante (es decir,
que en un individuo diploide es posible visualizar la expresión de ambos
alelos); son selectivamente neutrales y están libres de efectos deletéreos
(cuando los alelos tienen efectos negativos que imposibilitan la reproducción
del genotipo que los posee), efectos pleiotrópicos (cuando un gen controla la
expresión de más de un carácter en un individuo) y/o epistáticos (dominancia
de un gen sobre otro).

Desde su descubrimiento, las isoenzimas han jugado un papel importante en


muchas áreas de la biología; sin embargo, su utilización ha sido muy limitada
debido a ciertas desventajas:
 presentan problemas técnicos.
 no permiten cubrir todo el genoma, pues sólo representan una estrecha
fracción del contenido genético.
 únicamente detectan la variación de los genes que codifican para la
expresión de una característica del individuo.
 se dificulta la precisión de los datos obtenidos debido al polimorfismo en
el tejido de las isoenzimas (por ejemplo, el polimorfismo detectado en
una hoja no es el mismo que el que se obtiene usando la semilla del
mismo individuo). También tienen polimorfismo ontogenético, lo cual
implica que los resultados obtenidos serán muy diferentes al trabajar con
material vegetal proveniente de un árbol joven y de otro adulto; además,
las isoenzimas son específicas para determinados sustratos.

3.3.3. Marcadores de ADN

Los marcadores de ADN constituyen la nueva generación de marcadores


moleculares y solucionaron el problema de la carencia de marcadores que
tenían las isoenzimas, pues son capaces de generar una cantidad
virtualmente infinita de marcadores. Existen varias técnicas para identificar
marcadores de ADN, las que se pueden agrupar en tres categorías: las de
hibridación tipo Southern, las de reacción de polimerización en cadena
(PCR) y las que combinan PCR o sus productos de ADN con la hibridación
tipo Southern.

La hibridación consiste en la formación de una molécula de doble cadena


mediante el apareamiento o unión de bases complementarias de dos
moléculas de una sola cadena. La hibridación tipo Southern explora las
variaciones en la longitud o tamaño de los fragmentos de ADN ocasionadas
por la restricción del genoma mediada por una enzima particular
(endonucleasa).

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Esta técnica comprende las siguientes etapas: primero se extrae el ADN
del material que deseamos estudiar; luego se le adicionan enzimas de
restricción (endonucleasas), las cuales cortan el ADN en fragmentos de
diferente longitud; estos fragmentos son separados en geles de agarosa,
para después realizar por capilaridad o al vacío la transferencia de los
fragmentos a una membrana de papel de nitrocelulosa o de nylon
(transferencia tipo Southern). Finalmente, se hibridizan los fragmentos de la
membrana con sondas marcadas (radiactiva o no radiactivamente) para
visualizar y detectar las bandas hibridadas.

Dentro de esta técnica se encuentran los marcadores RFLP (polimorfismo


de la longitud de los fragmentos de restricción) y los VNTR (secuencias
adyacentes que se repi ten en número variable).

La técnica de PCR, o reacción en cadena de la polimerasa, es una


tecnología utilizada para multiplicar (sintetizar) in vitro fragmentos
específicos de ADN con la finalidad de detectar una secuencia o gen de
interés en el genoma del individuo en estudio. Se basa en la amplificación
de fragmentos de ADN a partir de secuencias de nucleótidos denominadas
“cebador” (primer), que son capaces de reconocer una secuencia blanco
para la cual es complementaria.

En forma general, los principales pasos del PCR son los siguientes: se
extrae el ADN del material a analizar, se separa la molécula del ADN en dos
hebras (desnaturalización), se induce el alineamiento o reconocimiento del
cebador con las secuencias blanco complementarias o molde del ADN, y
por medio de la enzima Taq polimerasa se lleva a cabo la extensión o
alargamiento de la molécula iniciadora (cebador).
Este proceso se realiza en un termociclador, que se encarga de realizar
los cambios de temperatura necesarios para que se desarrollen las etapas o
ciclos anteriormente mencionados. Los ciclos se repiten la cantidad de
veces que sea necesario, hasta obtener la cantidad de copias de ADN que
se requieran.

Dentro de esta metodología se encuentran los marcadores llamados


RAPD (ADN polimórfico amplificado al azar), PCR iniciada con
microsatélites (MP-PCR), AFLP (polimorfismo de longitud de fragmentos
amplificados) y DAF (amplificación de huellas del ADN), entre otros.

Finalmente, dentro de las metodologías que combinan la PCR o sus


productos de ADN más la hibridación tipo Southern, están los RAHM y
RAMPO (amplificación aleatoria del polimorfismo de microsatélites).

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3.4. Ventajas

 Son muy ventajosos los marcadores de ADN ya que no son


afectados por el ambiente, están presentes en cualquier estadio del
individuo.
 Permiten una detección temprana, son universales, muy
abundantes, se requiere poca cantidad de ADN para los análisis
 El ADN es muy estable y específico para cada individuo (huella
génica).
 El uso de marcadores moleculares en los análisis genéticos y en el
mejoramiento de las plantas ha tenido una difusión
extremadamente rápida.

3.5. Aplicaciones de los marcadores de ADN


Las principales aplicaciones incluyen la obtención de “huellas genéticas”
(fingerprinting) genómicas de individuos, variedades y poblaciones; el
análisis de la estructura y diversidad genética en poblaciones naturales y
de mejoramiento y bancos de germoplasma; el establecimiento de
relaciones filogenéticas entre diferentes individuos y especies; la
construcción de mapas genéticos de alta cobertura genómica y la
localización de genes de interés económico, mapeo de características de
herencia cuantitativa QTL (Quantitative Trait Loci ) y selección MAS
auxiliada por marcadores (Marker Asisted Selection).

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4. CONCLUSIONES

 Comprendemos las definiciones de la clasificación de los marcadores


moleculares.

 Entendemos de forma sintetizada las características generales de los


marcadores moleculares.

 Podemos clasificar los marcadores moleculares: morfológicos,


bioquímico, de DNA.

 Conocemos la diversa utilización de herramientas moleculares


representadas por los diversos tipos de marcadores de ADN.

 Aprendimos las aplicaciones, ventajas y desventajas de la utilización de


los marcadores moleculares.

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5. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. La ciencia y el hombre [Internet]. [citado 26 de marzo de 2017]. Disponible en:


http://www.uv.mx/cienciahombre/revistae/vol18num1/articulos/moleculares/

2. Agrobiotecnologia.pdf [Internet]. [citado 26 de marzo de 2017]. Disponible en:


http://www.iib.unsam.edu.ar/php/docencia/licenciatura/biotecnologia/2011/Intro
Bio/Agrobiotecnologia.pdf

3. [citado 26 de marzo de 2017]. Disponible en:


http://www.encuentros.uma.es/encuentros49/marcadores.html

4. a1250s17.pdf [Internet]. [citado 26 de marzo de 2017]. Disponible en:


http://www.fao.org/docrep/012/a1250s/a1250s17.pdf

5. Andrade-Torres A. ¿Qué son los marcadores moleculares? [citado 26 de marzo


de 2017]; Disponible en:
http://www.academia.edu/730385/_Qu%C3%A9_son_los_marcadores_molecul
ares

6. Bienvenido al Sitio Web del Centro [Internet]. [citado 26 de marzo de 2017].


Disponible en: http://www.scual.sld.cu/marc_bio1.htm

7. C EC. Introducción a los Marcadores Moleculares [Internet]. [citado 26 de


marzo de 2017]. Disponible en: http://marcadoreseunice.blogspot.com/

8. 8.pdf [Internet]. [citado 26 de marzo de 2017]. Disponible en:


https://eventos.redclara.net/indico/event/224/material/slides/8.pdf

9. Red de Genómica, Pesca y Acuacultura para la Innovación [Internet]. [citado 26


de marzo de 2017]. Disponible en:
http://www.gbcbiotech.com/genomicaypesca/marcadores.html

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6. ANEXOS
MARCADOR GENÉTICO

ANALISIS DE GENOTIPOS DE MICROSATÉLITES MARCADOS CON FLUORESCENCIA

MARCADORES BIOQUIMICOS UTILES EN EL DIAGNOSTICO DE LA E.A

MARCADORES DE ADN

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