ENZIMAS II:

CINÉTICA
ENZIMÁTICA. Km

Dra. Claudia Perla

Ciclo II/2018

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2
Valor del mes: La verdad
Actitud de
mantener en
todo
momento la
veracidad en
las palabras
y acciones.
 Objetivo
Explicar correctamente las
propiedades más importantes de los
catalizadores biológicos y no
biológicos en forma oral o escrita
según clase, laboratorio y discusión
de grupo
 CONTENIDO
 Explicar las propiedades de los catalizadores no biológicos
 Explicar las propiedades de los catalizadores biológicos
 Recordar los modelos enzimáticos: modelo de ajuste inducido y modelo llave-
cerradura
 Definir sitio activo de una enzima
 Identificar los factores que afectan la V de las Reacción enzimática: pH, Tº, [E], [S],
presencia de inhibidores, [cofactores]
 Recordar el efecto de la concentración de S sobre la V de las reacciones
enzimáticas. Km
 Interpretar el efecto de la concentración de enzima sobre la velocidad de las
reacciones enzimáticas. Grafica de la [E] sobre al velocidad de la Rx enzimática
 Analizar el efecto de la variación del pH y T° del medio sobre la velocidad de las
reacciones enzimáticas señalando su pH y T° óptimo. Efectuar la gráfica
 Explicar la Ecuación de Michaelis Menten
sustrato enzima producto
 SITIO CATALÍTICO O CENTRO ACTIVO
o Sitio de la E donde se une el S.
o Sitio donde se efectúa la catálisis, se forma el producto
y se libera de la E
El S se une a la enzima a través de numerosas
interacciones débiles como son: puentes de hidrógeno,
etc.

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 Modelos del complejo
enzima sustrato
Modelo de llave-
cerradura, (Fischer
1894)
Modelo rígido en que la
estructura del sustrato
se acopla al centro
activo perfectamente,
del mismo modo que
una llave encaja en una
cerradura. 8
 Modelos del complejo
enzima sustrato
Modelo Ajuste
inducido, (Daniel
Koshland, 1958 )
Las enzimas son
estructuras flexibles, su
sitio activo podría
cambiar su conformación
estructural por la
interacción con el
sustrato 9
Propiedades especiales de los
catalizadores biológicos

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 • 3- Regulables

• 4- Sensibles a
cambios en el medio
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• 5- Saturables

• 6- No sufren
cambios
irreversibles
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 Características más importantes de
una enzima
1- Especificidad: es la característica más sobresaliente de las
enzimas.
Sustrato: Capacidad de actuar sobre un sustrato o grupo de
sustratos. Ej.:
- Alta especificidad: Glucocinasa
- Especificidad de grupo: Hexocinasa
Reacción:Cada reacción es catalizada por una enzima
específica
2. Eficiencia o poder catalítico
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 Diferentes formas de medir la Actividad
Enzimática (Eficiencia)
1- Número de recambio (Kcat)
 También llamada constante catalítica
 Describe la rapidez con la cual una enzima cataliza
una reacción.
 Kcat = # de moléculas de sustrato transformada
por seg por una molécula de enzima
 Ej.: E1= 1,000 y E2= 100,000
¿Cuál es más eficiente?

Kcat = enzima más Kcat = enzima menos

eficiente eficiente 14
 ENZIMA NÚMERO DE
RECAMBIO
(por MIN)
Anhidrasa Carbónica 600.000
acetilcolinesterasa 25.000
Lactato deshidrogenasa 1,000
Quimiotripsina 100
DNA polimerasa I 15
Lisozima 0.5
Kcat = # de moléculas de sustrato transformada por
unidad de tiempo por una molécula de enzima
 Diferentes formas de medir la Actividad
Enzimática (Cont..)
2- Unidad de Enzima o Unidades Internacionales
• UI = cantidad de enzima requerida para convertir un
micromol de sustrato por minuto (μmol de
sustrato/min)
3- Katal
• Katal= cantidad de enzima requerida para convertir
un mol de sustrato por segundo (mol de
sustrato/seg)
UI ó Katal = enzima UI ó Katal = enzima
mas eficiente menos eficiente
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 Teoría de las colisiones de la
cinética enzimática
 Para que ocurra una reacción química, las especies
químicas reaccionantes (moléculas, iones o átomos)
deben chocar unas con otras.

 La velocidad de una reacción específica depende de:

• El estado físico de los reactivos
• Las concentraciones de los reactivos
• La temperatura utilizada
• El uso de catalizadores
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 Energía de
activación
cantidad necesaria de
energía en calorías,
para llevar a todas las
moléculas de un mol
de una sustancia
desde un estado
dado hasta un
determinado estado
activado
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 ¿Cómo actúan las enzimas?
Enzima

sustrato

• Hacen posibles las reacciones, disminuyendo la

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cantidad de energía de activación que se necesita.
Factores que modifican la velocidad
de las reacciones Enzimáticas

[Cofactores]
[sustrato]
[Enzima]
Presencia
Inhibidores
Cambios en el
pH y T° 21
 1) Efecto del pH y de la temperatura
 Las enzimas tienen un pH y una
temperatura de máxima actividad
catalítica llamados pH y To
óptimos, en estos valores se
transforman la mayor cantidad de
Sustrato
 Cambios mínimos de pH o de To
regulan la actividad de las E .
Cambios drásticos las
desnaturalizan por lo que se dice
que son sensibles al pH y la To 22
 2) Concentración de la Enzima
• A mayor cantidad de enzima, mayor velocidad; hasta
el infinito!... (siempre y cuando el sustrato esté en
exceso y no se termine)

• Reacción de primer orden:

cuando se grafica la V de
una Rx Contra la [E] la
gráfica es una Línea
Recta, es una reacción de
PRIMER ORDEN.

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Modelo de Michaelis-Menten (1913)
Efecto
EFECTOde
DElaLAconcentración
CONCENTRACIÓNde
DESustrato
S

Leonor Michaelis Maud Menten

3) Concentración de sustrato

+ E

Vo = velocidad inicial de la reacción

[S] = concentración de sustrato
Vmax = velocidad máxima cuando la
enzima
está saturada por el sustrato
Km = constante de Michaelis-Menten
(moles /L).
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 Efecto de la concentración de
Sustrato sobre la v de la reacción

 La velocidad de la reacción dependerá INICIALMENTE de [S]

 Pequeños cambios en [S] causan grandes cambios en la
Velocidad…hasta que llegamos a la VELOCIDAD MÁXIMA
cuando la enzima se satura. 26
Las enzimas presentan una cinética que responde al modelo propuesto
por Michaelis-Menten. Según tal modelo, si se mide la velocidad de una
reacción catalizada a una temperatura determinada y a una
concentración constante de enzima, es decir, si se varía la concentración
de sustrato-se obtiene una gráfica como la siguiente:

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 Concepto de Km
Km (Constante de Michaelis) = cantidad de sustrato requerido
para que una enzima alcance la MITAD de su velocidad
máxima ( ½ Vmax).
La Km indica la
Vmax afinidad de una
VELOCIDAD DE REACCIÓN

enzima por su
½
sustrato:
Vmax - a mayor Km menor
afinidad;
-a menor Km mayor
Km [SUSTRATO] es la afinidad
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La Km y la afinidad de una Enzima por
su Sustrato
VELOCIDAD DE REACCIÓN
Sustrato1 Sustrato2 Sustrato3

Km1 Km3 [SUSTRATO]

Km2

Km= MENOS afinidad Km = MÁS afinidad

por el sustrato por el sustrato
• La Rx es de PRIMER ORDEN cuando sólo depende de
un solo reactante. (Gráfica de la velocidad e la reacción
vrs la [E]
• Una Rx es de ORDEN CERO (0) cuando no depende de
ningún reactante y la V de la Rx es constante. (Gráfica
de la velocidad e la reacción vrs la [S]
• La V de la Rx es de ORDEN SUPERIOR cuando
depende de más de dos reactantes.
 Sustrato natural de una enzima

Es la mínima cantidad de sustrato con la cual se alcanza la ½ Vmáx

 Las Enzimas son Saturables
Si todas las enzimas tienen
ocupados todos sus sitios activos,
no importa si le añadimos más
sustrato, la reacción no procederá
más rápido.
SATURACIÓN

…así, la velocidad de una

enzima depende primero del
[sustrato] HASTA SATURAR
TODOS SUS SITIOS
ACTIVOS.
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 Presencia de Cofactores
Al igual que con los SUSTRATOS, la acción enzimática de las
HOLOENZIMAS dependerá de la concentración de
Cofactores, hasta llegar a saturación.
SATURACIÓN
En exceso de
cofacores, la
velocidad no
incrementará, ya que
todos los sitios
activos tienen el
cofactor requerido.
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