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1 Sonia De La Cuadra Álvarez.

2ºAPC- Mñn

CITOLOGÍA GENERAL.
PRÁCTICA 1: CITOLOGÍA DEL ESPUTO.
-Información acerca del esputo.
El esputo es un líquido orgánico de fácil obtención y que suele mostrar, si se hace
correctamente la toma y la extensión de la muestra, se obtiene abundante celularidad. Por ello
no requiere ser sometido a centrifugado, y se puede teñir inmediatamente, cosa que se hace,
generalmente, con la técnica de Papanicolau. La coloración nuclear se realiza mediante la
aplicación de Hematoxilina de Harris, la cual, es un colorante alcohólico basófilo. La tinción
citoplasmática se realiza mediante colorantes alcohólicos los cuales tiñen de manera
diferencial cada tipo celular de la muestra. La diferencia en los tamaños moleculares de los
colorantes determina la tinción diferencial de los citoplasmas según el grado de diferenciación
celular. El Orange G, tiñe los citoplasmas de células maduras bien diferenciadas con
producción de queratina. La eosina posee mayor afinidad electroestática desplazando al
Orange G, por lo que, tiñe los citoplasmas de todas las células, pero finalmente son las
superficiales e intermedias las que poseen coloración eosinófila o acidófila. El verde luz tiñe el
citoplasma de las células menos diferenciadas ya que poseen una matriz permeable quedando
finalmente las células basales y parabasales teñidas de azul (basófilas o cianófilas) La
sensibilidad de la citología en la muestra de esputo para la detección de lesiones malignas
aumenta con el número de muestras examinadas (de un 40% con una sola muestra examinada
hasta un 90% con cinco muestras examinadas). Se recolectan múltiples muestras en varios
días. Se requiere tomar el producto de la tos temprano en la mañana. Se puede inducir la
expectoración con nebulizaciones con solución salina. La especificidad es muy alta, pero
resultados negativos no garantizan la ausencia de malignidad. La sensibilidad de la citología de
esputo también depende de la localización de la lesión; 75 % de los tumores malignos
pulmonares de localización central y solo un 45% de los periféricos son diagnosticados con
este método.

-Proceso realizado.
En primer se realizan enjuagues con agua. Posteriormente se realiza una expectoración
profunda y se arroja el esputo en una placa de Petri. Tomamos las zonas sospechosas con una
torunda y extendemos una capa fina sobre uno o varios portaobjetos. Seguidamente nada más
ser extendidos, se procede a la tinción por el método de Papanicolau:
a. Inmersión durante 1 minuto mínimo en Etanol de 96º.
b. Inmersión en Hematoxilina de Harris durante 5 minutos.
c. Lavado con agua destilada 15 segundos.
d. Tinción con Orange G (Papanicolau OG-6) durante 5 minutos.
e. Lavado con agua destilada 15 segundos.
f. Inmersión en Eosina 1% durante 5 minutos.
g. Lavado con agua destilada 15 segundos.
h. Inmersión en etanol de 96º 15 segundos.
i. Inmersión en etanol de 96º 15 segundos.
j. Inmersión en etanol absoluto 15 segundos.
k. Inmersión en etanol absoluto 15 segundos.
l. Inmersión en Bioclear durante 2 minutos.
Esperamos que se seque bien, y procedemos al montaje de la preparación de distintas
maneras:
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1.Aplicamos solo medio de montaje DPx. (se añade una gota y se coloca un cubre sobre la
preparación; se deja secar unos minutos)
2.Aplicamos solo laca.
3.Aplicamos laca y medio de montaje DPx.
Tras haberlo montado se procede a colocar al microscopio para su valoración y por último se
informa.

-Objetivo.
En la siguiente práctica vamos a realizar una citología del esputo. Se va a obtener una muestra
de esputo, para llevar a cabo la extensión y tinción de la misma mediante el método de
Papanicolau, y finalmente observar la preparación al microscopio. Objetivo. En la siguiente
práctica vamos a realizar una citología del esputo. Se va a obtener una muestra de esputo,
para llevar a cabo la extensión y tinción de la misma mediante el método de Papanicolau, y
finalmente observar la preparación al microscopio.

-Materiales y equipos.
Muestra de esputo, Portaobjetos y cubreobjetos, Microscopio y Reactivos: Etanol absoluto,
Etanol de 960, Hematoxilina de Harris, Orange G (papanicolau OG-6), Eosina 1%, Bioclear
(Xilol), DPx y Laca.

-Resultados y conclusiones.
1. Muestra sólo montada con DPx.
Celularidad/agregación de la muestra Múltiples células.
Relación núcleo/citoplasma Núcleo irregular, citoplasma más claro.
Características nucleares Normal.
Características citoplasmáticas Encontramos normalidad.
Fondo de la preparación Rosado, blanquecino.
Conclusión Visualización normal.

Ilustración 1: (10x) montaje DPx . Ilustración 2: (25x) montaje DPx.


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Ilustración 3: (65x) montaje con DPx.

2. Montaje sólo con laca.


Celularidad/agregación de la muestra Múltiples células
Relación núcleo/citoplasma Se observa en menor proporción
Características nucleares Normal
Características citoplasmáticas Irregular, rosáceo , anaranjado
Fondo de la preparación Blanquecino anaranjado
Conclusión No se observan anomalías.

Ilustración 1: (10x) montaje solo con laca. Ilustración 2: (25x) montaje solo con laca.
4 Sonia De La Cuadra Álvarez.
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Ilustración 3: (65x) montaje solo con laca.

3. Montaje con laca y DPx.


Celularidad/agregación de la muestra Múltiples células.
Relación núcleo/citoplasma Normal , similar a las anteriores.
Características nucleares Redondeado y definido.
Características citoplasmáticas Irregular y de color rosáceo.
Fondo de la preparación Más rosado que las anteriores.
Conclusión Se observa normalidad.
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Montajes con DPX y Laca

*en todas las muestras se encuentran artefactos.