Bioquímica General 2011-I

La deshidrogenasa succínica (DHS)

La succinato deshidrogenasa, succionato coenzima Q reductasa o complejo II es
una flavoproteína ligada a la membrana interna mitocondrial que interviene en el ciclo de
Krebs y en la cadena de transporte de electrones y que contiene FAD (flavín-adenín-
dinucleótido) unido covalentemente. Posee un peso molecular de alrededor de 100 kDa, y
contiene una molécula de FAD, ocho átomos de hierro y ocho átomos
de azufre lábiles frente a losácidos. El enzima posee dos subunidades, cuyos pesos
moleculares son 30 kDa y 70 kDa respectivamente. La subunidad mayor de la succinato
deshidrogenasa contiene FAD, cuatro átomos de hierro y cuatro átomos de azufre ácido-
lábiles. La subunidad menor es una ferro-sulfuro-proteína que contiene cuatro átomos de
hierro y cuatro de azufre ácido-lábiles.

La molécula de FAD del enzima, es el aceptor de electrones de la reacción. En

general la función bioquímica del FAD es oxidar los alcanos a alquenos, mientras que el
NAD+ oxida los alcoholes a aldehídos o cetonas. Esto es debido a que la oxidación de un
alcano (como el succinato) a un alqueno (como el fumarato) es
suficiente exergónica como para reducir el FAD a FADH2, pero no para reducir el NAD+ a
NADH. Es poco usual hallar una unión covalente entre el FAD y una proteína; en la
mayoría de los casos, el FAD se encuentra unido a su enzima asociado de forma no
covalente (unión débil y transitoria). por lo que en este caso el FAD actúa como grupo
prostético y no como un coenzima móvil, como lo hace normalmente.

El FADH2 de la succinato
deshidrogenasa, al no poder
desprenderse del enzima, debe
oxidarse nuevamente in situ. El
FADH2 cede sus dos hidrógenos a
la ubiquinona (coenzima Q) que
se reduce a ubiquinol (QH2) y
abandona el enzima, difundiendo
en la bicapa lipídica hasta
alcanzar en siguiente complejo
enzimático de la cadena
respiratoria.

1
 Bioquímica General 2011-I

La succinato deshidrogenasa actúa separando los átomos de hidrógeno que se hallan en

posición trans de los átomos de carbono metilénicos delsuccinato.

Este enzima posee algunas características de un enzima alostérico: es activada por

el succinato, el fosfato, el ATP y el coenzima Q reducido , y es inhibido por el malonato, un
análogo estructural del succinato. ademas el succinato interviene en el colesterol, y se
encuentra a nivel del citoplasma

Características:

 Ubicación: membrana interna de la mitocondria

 Trabaja a pH 7.4
 Estructura:
o Posee 2 subunidades de 30 KDa y 70 KDa (reconoce al sustrato)
o Posee flavo proteínas para ligar la coenzima FAD a quien le cede 2 H+
 Sustrato: succinato o acido succínico
 Modo de acción

In vivo

El aceptor final de electrones es el oxigeno,

como se observa en la figura.

In vitro

El aceptor final de electrones pueden ser colorantes artificiales como el azul de metileno

Azul de metleno (oxidado)  azul

Azul de metileno (reducido) incoloro

 Inhibidor : Malonato

El anión malonato o propanodiato es CH2(COO)22- (ácido malónico menos dos iones

hidrógeno). Los compuestos de malonato incluyen sales y ésteresdel ácido malónico, tales como:

 malonato de dietilo, (C2H5)2(C3H2O4),

 malonato de dimetilo, (CH3)2(C3H2O4),
 malonato de disodio, Na2(C3H2O4).

2
 Bioquímica General 2011-I

El malonato es un inhibidor de la respiración celular, porque se une al sitio activo de

la succinato deshidrogenasa en el ciclo del ácido cítrico, pero no reacciona, compitiendo con
el succinato. En la reacción de fosforilación oxidativa, el malonato es un inhibidor del complejo II
que, nuevamente, contienesuccinato deshidrogenasa.1

Parte experimental
Materiales

 Homogenizado de hígado de ratón (18%) de donde se obtendrá la enzima DHS

 Aceite
 Azul de metileno
 Malonato
 Succinato 0.1 M
 Buffer fosfato pH 7.4
 Agua destilada
 4 tubos de prueba

Procedimiento

Obtención de la enzima DHS

Del ratón (que previamente fue alimentado por más de una semana), se obtiene el
hígado el cual debe ser separado de la vesícula con sumo cuidado para evitar
romperla.

El hígado extraído es triturado en un mortero, primero sin adicionarle nada; luego,

para homogeneizar la mezcla, se le agrega agua destilada.

Preparación de los tubos: Rotulamos cada tubo: 1, 2, 3, B; y luego disponemos de la

siguiente manera:

Tubos
Reactivos B 1 2 3
Succinato 0.1M 0.9 0.9 0.9 0.9
Buffer Fosfato (pH
1 1 1 1
7.4)
Azul de metileno 3 3 3 3
Malonato 0.3M -- -- -- 0.2
Agua destilada 1.6 1.1 1.1 0.9
Deshidrogenasa -- 0.5 0.5 0.5
Aceite si si no si
3
 Bioquímica General 2011-I

Dejar reposar por 40 minutos aproximadamente,

revisándolos cada 5, para observar la
decoloración de los tubos

Resultados

 Tubo B:
Es nuestro tubo blanco, nos sirve para establecer las comparaciones; se
mantiene de color azul lo que demuestra que no se ha reducido.
 Tubo 1:
Este tubo posee la enzima, lo cual haría que se liberasen electrones que
deberían ser captados por el oxigeno mas no por el azul de metileno,
originando que fuese incoloro, pero esto no sucede ya que se agregó una
capa de aceite, impidiendo la presencia de oxígeno en el tubo, lo que hace
que el azul de metileno se vuelva incoloro al captar los electrones.
 Tubo 2:
Al no poseer la capa de aceite, existe una competencia entre el oxigeno y el
azul de metileno por los electrones, esto se evidencia ya que tan solo se
observa una pequeña capa de color azul en la superficie (el oxigeno tomo
los electrones y el azul de metileno no); pero cuando se agita el tubo
rápidamente, todo se vuelve azul ya que el oxigeno que ingresa al realizar
esta acción es ahora quien se lleva los electrones ,pero pasado unos
minutos vuelve a su estado inicial con aquella delgada capas de color azul .
 Tubo 3:
Este tubo posee un inhibidor de la DHS lo que causa que no exista
liberación de electrones ya que no hay reacción, por lo tanto el azul de
metileno no se reducirá.

4
 Bioquímica General 2011-I

Enzimas de oxido reducción

Se llama respiración tisular al intercambio gaseoso que se produce entre la sangre y los
diferentes tejidos del cuerpo. La sangre oxigenada en los pulmones llega a rodear a
las células de los distintos tejidos transportada por los capilares de la arteria aorta. En ese
punto se produce la respiración tisular, que es un proceso de intercambio:

 por un lado, el oxígeno pasa desde la sangre hacia las células por difusión a través de
la membrana celular.
 A su vez, desde éstas pasan hacia la sangre el dióxido de carbono y el vapor de agua de
desecho.
La sangre carboxigenada es transportada de regreso por los capilares venosos hasta
las venas cavas, y de éstas al corazón, para ser enviada nuevamente a los pulmones.
 Respiración tisular
 Consumo de oxigeno en homogenizado de riñón.
 La mayoría de los procesos metabólicos que suceden en los tejidos in vivo pueden
continuar in vitro cortes, homogenizados, preparados de mitocondrias etc.
 Para ver procesos de respiración in vitro se trabaja con homogenizado de riñón al
3% en 𝐾𝐶𝑙 .

REACCTIVOS
Solución potter pH 7.4(ml)
Succinato de K 0.5 M (ml)
Agua destilada (ml)
TUBOS
1 2
3 3
0.3
1 0.7

Se observó que:

Tubo1 Tubo2
El líquido de brodie se desplazo 0.7cm en
5 min lo que quiere decir que la muestra
utilizada no poseía la suficiente enzima
El liquido de brodie no se desplazo
para catalizar la reacción rápidamente;
debido a que no tenia sustrato
sin embargo se pudo demostrar que al
(succinato) es por eso que la enzima no
encontrarse la enzima con su sustrato
trabajo por lo tanto no se formo el
pudo generar sus productos, probándose
producto.
así que todo proceso metabólico como el
de respirar de un tejido in vivo puede
continuar in vitro.
5
Bioquímica General 2011-I

La reacción catalizada es:

𝐾𝑂𝐻 + 𝐶𝑂2  𝐾2 𝐶𝑂3 + 𝐻2 𝑂