Bioelementos y Macromoléculas.

Instituto de Ciencias Biológicas.

María José Rojas Vergara,

Lisa Andrea Sáez Hormazábal,
José Tomás San Juan Wilson,
Martha Leonor Valdés Kanelos,
Cristian Leonardo Valenzuela Vergara.
Profesor de laboratorio, Olga Contreras.
Ayudantes: Gabriela Avilés y Víctor Luna.

Kinesiología, Universidad de Talca,

Miércoles 13 de Mayo de 2015.

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Introducción

Reserva energética en los seres vivos, roles estructurales, mensajeros, formar

enzimas y defensa son algunas funciones de macromoléculas más comunes.
Estas macromoléculas son unidades repetitivas de moléculas más pequeñas y
éstas cumplen un rol muy importante en nosotros. Algunas de estas son:
carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos (adn-arn).

Durante toda nuestra vida vamos a estar en contacto con estas moléculas
orgánicas de gran tamaño, ya que se encuentran en nuestro cuerpo y también en
todos los alimentos que consumimos, por lo tanto debemos tener en cuenta donde
se encuentran, su composición y su función. En este trabajo se abarcan los antes
ya mencionados carbohidratos, lípidos y proteínas, y las distintas técnicas para
detectarlos.
Reconocer e identificar algunos monómeros y polímeros de carbohidratos,
moléculas lipídicas y proteínas en distintas sustancias son los objetivos de este
trabajo, también conocer características químicas y físicas de estas moléculas y
observar su presencia en distintas soluciones a través de diversas pruebas.
Para comprobar la presencia o ausencia de estas macromoléculas en
ciertas sustancias se utilizan pruebas, como en el caso de los carbohidratos se
ocupa el Test de Molish, para detectar almidón se utiliza el Test de Lugol, por otro
lado el Test de Sudan para los lípidos y finalmente a las proteínas se le aplica el
Test de Biuret. Dicho lo anterior se puede inferir de las distintas pruebas ya
nombradas un proceso a ocurrir basado en nuestros conocimientos previos, como
son en el caso de las pruebas de Molish, que provocara un cambio físico en su
estructura, lo que debería dar como resultado un anillo violeta en las dos
primeras muestras, no así en la tercera (sucralosa) ya que es un azúcar artificial y
no se reconoce como HC. Lo mismo ocurre en la prueba de Lugol la cual cambiara
el color de las muestras ya que ambas poseen ciertas cantidades de almidón en
su composición según lo averiguado, en el caso del reconocimiento de lípidos
ambas muestras deberían dar positivo con el Test de Sudan (agua- aceite y
castaña molida) puesto que las soluciones que se están estudiando, presentan en
sus estructuras lípidos y dichas estructuras se deberían de observar en la célula
adiposa y papa ya que cumplen la función de reservante de lípidos y almidón
respectivamente según sus estructuras. Finalmente en el Test de Biuret debería
de reconocer tanto la albúmina y la leche condensando ya que ambas presentan
uniones de enlaces peptídicos característicos de las proteínas, además de que se
nos da como indicio que la leche condensada pertenece a la proteína de la
lactosa, no así en el almidón ya que como se dijo anteriormente pertenece a los
HC por lo tanto solo tiene uniones de aminoácidos no de enlaces peptídicos, por
esa razón no debería de ser reconocida por el Test de Biuret.
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Materiales y Métodos

Materiales práctico carbohidratos:

 6 tubos de ensayo
 Solución de almidón 0,5%
 Solución de glucosa 0,5 %
 Solución de sucralosa 0,5%
 Solución α-naftol 1%
 Ácido sulfúrico concentrado (H2SO4)**este ácido es un ácido fuerte y
produce
 quemaduras si está en contacto con la piel.
 1 gradilla parta tubos de ensayo
 Agua de fideos
 Solución de Lugol (KI).

Procedimiento:

A.1) Reconocimiento de HC: Test de Molish

Al tubo (1): se le agregó 2 ml de solución de almidón

Al tubo (2): se le agrego 2 ml de solución de glucosa
Al tubo (3): se le agregó 2 ml de solución de sucralosa

Luego, tanto al tubo (1) como al (2) se les agregó 3 gotas de solución alcohólica
de α-naftol al 1%. Agitamos suavemente, luego se dejó el tubo en una gradilla, fue
escurrido 1 ml de H2SO4 por las paredes de cada tubo, teniendo cuidado de no
agitar la mezcla formada.
Luego se observa que en la superficie de separación de los líquidos se forma un
Anillo color violeta.

A-2) Reconocimiento de almidón: Test de Lugol o Yodo

Procedimiento:

Tubo (1): Se le agregó 2 ml de solución de almidón en el tubo

Tubo (2): Se le agregó 2 ml de agua de fideos
Tubo (3): Se le agregó 2 ml de solución de sucralosa

Posteriormente, se le agrego a cada tubo 3 gotas de solución de Lugol,

mezclamos suavemente y observe que ocurre.

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Materiales práctico lípidos:

 Microscopio óptico compuesto

 Porta y cubre-objetos
 9 tubos de ensayo
 9 pipetas de 2 a 5 ml o goteros
 Gradilla para tubos de ensayo
 Una hoja de afeitar nueva
 Solución de Lugol
 Solución de Sudán III
 Glicerina concentrada
 Un trozo pequeño de grasa animal
 Semillas de maravilla o maní
 Aceite de cocina
 Agua destilada
 2 Vasos de precipitados
 2 Morteros
 2 varillas de vidrio

a) Identificación de lípidos mediante el Test de Sudan.

Procedimiento:

Colocamos en el tubo (1) 1 ml de aceite de cocina y 1 ml de agua destilada;

Agregamos 3 gotas de Sudán; Luego fue agitado y anotamos inmediatamente y
los resultados; dejamos reposar el tubo y al cabo de 5 minutos fue observado y los
resultados descritos. Después, se repitió la operación cambiando el reactivo de
Sudán por reactivo de Lugol.

- A un mortero con avellana molida se le agrego una pequeña cantidad

de agua destilada (no más de 5 ml) y se agitó realizando una emulsión lo más
Homogénea posible.
- Se coloca la emulsión preparada en un tubo de ensayo y fue agregada la
solución de Sudán, se agitó fuertemente, y fue observada tras un tiempo.

b) observación de tejido adiposo

Se nos entrego en un porta objetos un trozo de grasa de animal, en el cual se

debía observar el tejido adiposo de este.
Luego se dibujo y rotulo lo observado en el microscopio.

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Materiales práctico Proteínas:

 8 tubos de ensayo
 Solución de albúmina 0,25%
 Solución de almidón 0,5%
 Leche descremada
 Reactivo de Biuret
 ácido acético al 3%
 NaOH al 15%
 ácido sulfúrico concentrado
 1 gradilla parta tubos de ensayo

PROCEDIMIENTO
A) Reconocimiento de proteínas: Test de Biuret

Tubo (1) dispensar 2 ml de solución de albúmina.

Tubo (2) dispensar 2 ml de solución de almidón
Tubo (3) dispensar 2 ml de leche descremada
A cada tubo se le agrega 1 ml de reactivo de Biuret.
Se observa en qué tubo se forma el color violeta o púrpura característico.

B) Desnaturalización de proteínas
B1) Efecto de la temperatura

En un tubo de ensayo se pone 2 ml de solución de albúmina al 0,25%.

Calentamos, suavemente, y flameando por el mechero.

B2) Efecto del pH

En 3 tubos de ensayo se ponen 2 ml de solución de albúmina.

En el tubo 1 se deja escurrir por las paredes del tubo 1 ml de ácido acético 3%
En el tubo 2 se deja escurrir por las paredes del tubo 1 ml de ácido sulfúrico*
Concentrado
En el tubo 3 se deja escurrir por las paredes del tubo 2 ml de hidróxido de sodio
15% (NaOH)

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Resultados

a) Laboratorio de Carbohidratos:
Tabla n° 1

Carbohidratos Test de Molish Solución (1) Solución (2) Resultados

tubo (1) almidón Naftol al 1% H2SO4 Anillo violeta

tubo (2) glucosa Naftol al 1% H2SO4 Anillo violeta

tubo (3) sucralosa Naftol al 1% H2SO4 sin anillo

Test de Lugol solución (1) Resultados

tubo (1) almidón Lugol color rojizo

tubo(2) agua de arroz Lugol color violeta

tubo(2) sucralosa Lugol color amarillo

Observación: En ambos test tanto en el de Lugol como en el de Molish la

sucralosa da negativo, ya que en el primero no se encuentra almidón por lo que da
como resultado un color amarillo y en el segundo al ser un azúcar artificial no se
reconoce propiamente tal como un carbohidrato.

En el test de Lugol, ¿cuál tubo no debió dar una reacción positiva? ¿Por qué?
- La sucralosa, puesto que no tiene presencia de almidón.
Que coloración se produce en el glicógeno si se le aplica solución de Lugol?
- Amarillo, ya que no hay presencia de almidón.

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b) Laboratorio de Lípidos:
Tabla n° 2

Lípidos Test de Solución (1) Resultados

Sudan
Tubo Sudan Aceite de cocina y Color rojizo, se forma dos fases,
(1) agua destilada afinidad con el agua
Tubo Sudan Castaña molida Color rosado
(2)

b) Observación de tejido adiposo y papa

Tejido Adiposo Tejido de Papa

Observaciones: En el tejido adiposo que se observa en la imagen se pueden

identificar ciertas estructuras como son adiposito, membrana celular, citoplasma y
grasa al interior del adiposito lo que nos da a entender que es una célula
reservarte de lípido. Al igual que en el tejido de la papa pero en este caso su
reserva es de almidón por eso se notan estructuras como amiloplastos, citoplasma
y pared celular.

Test de Sudan en aceite y agua destilada. Test de Sudan en castaña molida.

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 c) Laboratorio de Proteínas:
Tabla n° 3

Proteínas Test de Resultados

Sudan ´+
solución
Tubo (1) albúmina (+) color
violeta
Tubo (2) almidón (-) color
celeste
Tubo (3) Leche (+) color
descremada violeta
Albúmina almidón Leche

a) Desnaturalización de proteínas:
Tabla n° 4

Solución Efecto de temperatura

Albúmina Al agregar test de Biuret se vuelve
morado, ocurre desnaturalización.

Solución Efecto del PH

Tubo (1) albúmina + ácido acético (-) color celeste, no hubo
desnaturalización.
Tubo (2) albumina + acido sulfúrico (-) Al agregar el acido se separa la
solución ,ocurre hidrolisi.
Tubo (3) albumina + hidróxido de La solución da (+), ocurre una
sodio hidrolisis parcial.
*Tambíen desnaturalizamos proteínas aumentándole la temperatura.

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Conclusión
-En el primer laboratorio se aprendió a trabajar con 2 distintos métodos para
detectar carbohidratos. El primero fue el test de Lugol, que detecta únicamente
almidones, tiñendo la muestra de color rosado o violeta. El segundo vendría
siendo el test de Molish. Este, a diferencia del test de lugol, detecta todo tipo de
hidratos de carbono. Luego de agregarles lugol, se le adiciona ácido sulfúrico, lo
que deshidrata los carbohidratos y libera un aldehído. Este luego se condensa y
eso logra la la formación de un anillo violeta que significa que fueron identificados.

-En la segunda parte este laboratorio se aprendió a trabajar con un método

llamado test de Sudan para detectar lípidos y fue observado tejido adiposo. El test,
al detectar lípidos, tiñe la muestra de un color rosado. También se utilizó el test de
Lugol para observar las diferencias.

-Antes de observar el tejido adiposo, se le fue agregada una gota de solución de

Sudán y pudimos observar las distintas células que se encontraban.

-En el segundo laboratorio se aprendió como se catalogaban las proteínas según

su constitución química, simple o conjugada. Y se acuerdo a su forma: Fibrosas,
globulares y mixtas.

-En la práctica, aprendimos a reconocer proteínas gracias al test de Biuret. Este al

reconocer los enlaces peptídicos tiñe la muestra de un color purpura o violeta.
También se observó como la acción de la temperatura o el pH son capaces de
desnaturalizar la proteína, pero, estas no rompen el enlace ya que al agregarles la
solución de Biuret esta reconoce los enlaces y la vuelve a teñir.

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Discusiones
(HIDRATOS DE CARBONO)

Los hidratos de carbono constituyen la principal fuente de energía para la célula

(Robertis, 2012, p. 28), gracias a esta descripción de los azúcares nos
interesamos más por conocer características químicas y funciones de estas
macromoléculas.

El test de Molish permite detectar la presencia de hidratos de carbono en una

muestra; está basada en la formación de furfural o derivados de éste a partir de
los carbohidratos para obtener el furfural que se combina con el -naftol sulfonato lo
cual facilita la deteccion de anillos en la estructura gracias a los medios acuosos
utilizados, originando un complejo púrpura o violeta. Esta coloración la pudimos
obtener en dos de las muestras ya que en ellos si había presencia de
carbohidratos, este color era un color violeta y en la muestra formaba un anillo.

El test de Lugol o Yodo es una reacción química usada para determinar la

presencia de otros polisacáridos. Una solución de yodo disuelto en una solución
acuosa de yoduro de potasio - reacciona con almidón que presenta estructura
hélice-alfa produciendo un color violeta.

Gracias a estas definiciones, calificamos como “positivos” los test realizados en el

laboratorio ya que se logró obtener dichas coloraciones. Cuando no las obtuvimos,
claramente es porque en la solución no había presencia de almidón o presentaban
otra estructura diferente de la helice-alfa.

(LÍPIDOS)

Los triglicéridos, los fosfolípidos y los esteroides son los lípidos más difundidos en
la célula (Robertis, 2012, p. 30). Estos también se caracterizan por ser insolubles
en agua y solubles en solventes orgánicos, también estos lípidos son reconocidos
como grasas y a los seres vivos nos traen beneficios y consecuencias malas.
Estos lípidos los pudimos identificar a través del Test de Sudan utilizado
comúnmente para demostrar la presencia mediante la tinción de triglicéridos
(lípidos más abundantes en los seres vivos), aunque también tiñe otros lípidos.

En el laboratorio el color del aceite fue rojo, ya que es grasa.

Los adipositos son inclusiones citoplasmáticas temporales las cuales almacenan

mucha grasa, en el esperimento pudimos ver sus estructuras principales.

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(PROTEÍNAS)

Las proteínas son cadenas de aminoácidos ligados por uniones pepetídicas

(Robertis, 2012, p. 33), estas proteínas tienen múltiples funciones para los seres
vivos y averiguar dónde las podemos encontrar es de nuestro interés. El test que
nos ayudó a distinguir proteínas fue el test de biuret. En nuestras suposiciones
concluimos que la albúmina y la leche tomarían el color violeta característico de
este test ya que ambas muestras presentan proteínas.

En los resultados claramente fue así y la única muestra que no dio positivo fue la
muestra de almidón ya que es un carbohidrato.

En la desnaturalización de proteínas, los únicos factores que dieron positivos

fueron la temperatura (cambió de color) y el hidróxido de sodio (ya que éste es
una base fuerte).

También calificamos este prático como positivo, ya que cumplimos objetivos y las
suposiciones de un principio fueron comprobadas.

 Las macromoléculas son de gran importancia para nosotros y es a bien

conocerlas y descubrir que tan perfecta es la creación de Dios.

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Referencias bibliográficas
 De Robertis, E. (2012). Cap 2 Componentes químicos de la célula. En
Biología Celular y Molecular – 15ª ed. (pp.28-29). Buenos Aires: El Ateneo.
 De Robertis, E. (2012). Cap 2 Componentes químicos de la célula. En
Biología Celular y Molecular – 15ª ed. (pp. 30- 33). Buenos Aires: El
Ateneo.
 Apuntes y guía de trabajos prácticos, Instituto de Biología Vegetal y
Biotecnología. (2015). Capítulos Carbohidratos, Lípidos y Proteínas.

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